Laboratoire de Microbiologie et Biologie Moléculaire

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Université Mohamed V - Agdal• Faculté des Sciences
Faculté des Sciences - Rabat B.P. 1014 - Rabat - MAROC

Filière SVI - S6
Module de Génétique et Biologie Moléculaire – M21
Elément 2: Biologie Moléculaire – Pr. Bouchra BELKADI

Partie 2:
Expression génétique
Réplication Année universitaire 2009-2010

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 Plan

Introduction : Le Dogme Central

La réplication

I - Généralités de la réplication

II - Réplication continue et réplication discontinue

III – Réplication chez les procaryotes

IV- Fidélité de la réplication : PROOFREADING

V - La réplication et la division cellulaire

VI – La réplication chez les Eucaryotes

 INTRODUCTION
Macromolécules et informations génétiques

Génome: ensemble de gènes

Gène: unité fonctionnelle de l’information génétique.
Composition: acides désoxyribonucléiques (ADN),
séquences de bases puriques (Adénine, Guanine) et
pyrimidiques (Thymine, Cytosine)
Formation de
la liaison
phosphodiester
 Le dogme central

Réplication Transcription Traduction

ADN ARN PROTEINE

Matrice ADN Matrice ADN (brin sens) Matrice ARNm
ADN polymérase III ARN polymérase Ribosomes
Protéines de réplication Facteurs de transcription Facteurs de traduction
dNTP NTP Acides aminés
ATP Mg 2+ ARNt
Mg 2+ Synthases
ATP,GTP, Mg 2+

Le flux de l’information génétique

est unidirectionnel
 ADN
double
brin

ARN
messager

20 aa
possibles

Synthèse des trois types de

macromolécules informationnelles
 Réplication
I- Généralités

• Synthèse de plusieurs molécules d’ADN à partir d’une

molécule parentale initiale afin de transmettre à la
descendance une information génétique conforme.

• Règles d’appariement:
• A T
• C G

• Réplication est semi-conservative

 Première réplication
les molécules "lourdes" distribuées de
façon égale entre les deux molécules filles

Non à la réplication conservative

Deuxième réplication
l'apparition de molécules de deux poids
différents

Expérience de Meselson-Stahl
avec E. Coli
Réplication semi-conservative
la molécule mère donne un de ses brins à
chaque molécule fille, qui est complétée
par une chaîne nouvellement synthétisée.
• Réplication est une réaction rapide:

- Bactéries: 1000 pb/sec/fourche, Chromosome

unique avec 4,4*106pb copié par 2 fourches
(nécessité de 40 min)

- Cellules humaines: 100 pb/sec, le génome humain

fait 3*109 pb , réplique en 8 heures,il faut au
moins 1000 fourches de réplication
Mécanisme de la réplication

Brin en synthèse

3’ OH 5’ P

5’ P 3’ OH
Brin matrice
ADNp III

Réaction asymétrique uniquement dans le sens 5’P-

-->3’OH
 Asymétrie est liée à l’activité de l’ADN polymérase:
 nécessité d’avoir une amorce
 dernier résidus de l’amorce doit être apparié et avoir un
groupement 3’OH libre
 Présence de nucléotides et du magnésium Mg2+ dans le
milieu

•ADNpIII utilise comme amorce un petit ARN de 500

nucléotides synthétisé par une primase.
* In vivo, l’amorce est dégradée plus tard et remplacée
par l’ADN grâce à l’enzyme appelée ADNpI.
 II- Réplication continue et discontinue
• Déroulement de la double hélice
Brin précoce dont la par une Hélicase qui se fixe sur la
synthèse est continue
protéine d’initiation

3 étapes:
- initiation,
- élongation
- terminaison

SSB

•Stabilisation d’ADNs par des

protéines sous forme simple brin
(SSB: Single Strand Binding protein)
Brin tardif dont la
synthèse est empêchant le réappariement
Assemblage d’un primosome Déplacement du primosome

Réplisome contient:
- ADN gyrase supprime les super-enroulements
- Primosome = hélicase/ primase déroulent et amorcent
l’ADN par synthèse d’amorce ARN
 III- Réplication chez les procaryotes:

1- Initiation de la réplication:
 Origine de la réplication Ori C ou Ori V (plasmide)

 Séquence de 300 pb environ formée de séquences

répétitives, flanquée de séq riches en AT, reconnue
spécifiquement par des protéines permettant
l’initiation (dnaA)

 Ouverture de la double hélice et

formation de la fourche de réplication

 Réplication bidirectionnelle à partir

d’une origine de réplication.
 Réplication de l’ADN circulaire: structure thêta
*Pré-initiation : Dénaturation de
l’ADN au niveau de l’OriC

*Initiation: Mise en place des amorces

>>> Deux fourches de réplication

progressent dans 2 directions opposées
accompagné de détorsion de la double
hélice.

*Elongation :Au niveau de chaque

fourche, la synthèse d'ADN est semi-
conservative et semi-discontinue

Dans un système de réplication bidirectionnelle,

chacun des deux brins néosynthétisés est donc
produit pour moitié par synthèse continue et
pour l'autre moitié par synthèse discontinue.
2- Élongation de la réplication:
Les polymérases ont 2 rôles:

1- Incorporation des bases en respectant les

règles de complémentarité >>>> synthèse en
continue d’un nouveau brin précoce (ADN pol
III)

2- Dégradation des amorces ARN grâce à son activité

d’exonucléase 3’->5’ et resynthèse de la partie manquante
pour assurer la fidélité de la réplication (ADN pol I).
 Assemblage de deux fragments sur le brin retardé

Après la synthèse de l’amorce, ADNp III

3’ OH
la primase est remplacée par 5’ P
ADNp III (dnTP). 5’ P
3’ OH

>>> Synthèse jusqu’à atteindre un Amorce d’ARN

ADN précédemment synthétisé.

L’ADN pol I prend alors le relais en

continuant la synthèse de l’ADN
pendant qu’elle enlève l’amorce ARN. ADNp I

3’ OH 5’ P
L’ADN ligase remplace la pol I
après que l’amorce a été enlevée
et soude les deux fragments
ensemble.
Ligase
Comparaison des différentes polymérases

Fonction Type I Type

III ADN pol III rapides, peu
Polymérase 5’->3’ + +
Exonucléase 3’->5’ + + nombreuses et moins
Exonucléase 5’->3’ + - versatiles au niveau de
Matrice amorce: l'exonucléase
Double brin - -
Simple brin + amorce + +
Double brin avec coupure + -
Réplication et
Activités
Vitesse (Kpb/min) 0,67 100 mécanisme
Nombre (molécules/cellule) 400 10 à 20
d'autocorrection

L'ADN pol I étant très présente mais lente et pouvant facilement

exonucléer, elle assurerait donc un rôle de réparateur de l'ADN.
 ADN polymérase I et fragment
de Klenow de la bactérie E. coli

- Domaine N-terminal: activité

exonucléasique orientée de 5'->3'
principalement utilisée dans la
réparation de l'ADN.

- Domaine central: activité

exonucléasique orientée de
3’->5’, activité de correction
d'épreuves (édition).

- Le gros domaine C-terminal

possède l'activité de
polymérisation, orientée de
5'->3'.
3 domaines structuraux et
fonctionnels portés par la
même chaîne polypeptidique
 Changements dans la topologie de l’ADN
au cours de la réplication

 Déroulement de la double hélice par l’Hélicase

 Super enroulement de l’ADN répliqué par les
topoisomérases.

Ce processus joue un rôle important dans la

régulation de la réplication.
- Le relâchement est nécessaire pour la réplication
- Le super-enroulement est nécessaire pour contenir
tout l’ADN dans la cellule.
 Régulation de l’état d’enroulement de l’ADN
Cas du génome circulaire

L’ADN gyrase : topoisomérase

type II: Catalyse le croisement
de brins
- Introduction de super-tours
négatifs dans l’ADN, Mécanisme d'action de la gyrase
sur un ADN circulaire
- Coupure des 2 brins parentaux
- Séparation Gyrase est spécifique et
essentielle à la
Donc retour à l’état relâché d’ADN réplication des bactéries

Topoisomérase de type I: régule l’état d’enroulement

>>> Nécessaire pour contenir tout l’ADN dans la cellule
 Contrôle du taux de surenroulement de l’ADN

L'inhibition de l'activité des enzymes est létale pour les

bactéries d’où l’effet d’un certain nombre d'antibiotiques,
aminocoumarines, les quinolones et les fluoroquinolones.
 Enzymes de la réplication
Enzyme Fonction
ADN polymérase III Principales enzymes de polymérisation
(pol III)

ADN polymérase I (pol I) Excise l’amorce ARN et remplit les trous

Hélicase (dnaB) Déroule la double hélice à la fourche de réplication

Primase (dnaG) Amorce les nouveaux brins d’ADN

Protéines se liant à l’origine Facilite la fusion pour ouvrir le complexe

de réplication (dnaA)

Protéines se liant à l’ADN Empêche le réappariement des brins de l’hélice ouverte

simple brin (Ssb)

ADN ligase (ligA, ligB) Soude les coupures dans l’ADN

Gyrase Réduit les torsades formées par la progression de la fourche

et catalyse le superenroulement de l’ADN répliqué
 Protéines SSB: Hélicase:
stabilisation de l’ADN sens déroulement de Primase: synthèse des ARN
la double hélice primers (ADN sb)

Primosome: complexe
enzymatique de synthèse des
ARN amorces (ADN anti
Synthèse sens)

continue 5’->3’

Synthèse
discontinue 5’->3’

Rétablissement de
l’enroulement par
les topoisomérases
Mécanique de synthèse des deux brins
d'ADN en même temps

 Formation d'une boucle par le

brin à synthèse discontinue, sur un
tour complet

Tour de 180° du fragment

d'Okazaki en cours de synthèse le
plaçant dans la même orientation
que le brin à synthèse continue

Synthèse d'ADN assymétrique et simultanée sur les

deux brins

Complexe enzymatique (ADN polymérase III)

avec deux sites catalytiques liés se déplaçant à la
même vitesse dans une seule et même direction.
ADN-polymérase III holoenzyme

Chez E. coli, la dissymétrie de

fonctionnementde l'ADN-pol III
(réplicase) correspond à une
dissymétrie de composition en 2
complexes enzymatiques formés d’une
dizaine de sous-unités différentes.

l'un assure la synthèse du brin

continu et l'autre la synthèse du
brin discontinu
3- Terminaison de la réplication
 Au niveau d’une séquence TER située à l’opposé de
l’origine de réplication reconnu par la protéine Tus qui
met fin à la réplication

 Rencontre de 2 fourches de réplication (Topoisomérase

type IV assure la ligation)

 Lorsque la réplication d’un chromosome circulaire est

terminée, les 2 molécules obtenues sont reliées
ensemble, comme les maillons d’une chaine.

>>> La séparation se fait

par une topoisomérase
 IV- Réplication et division cellulaire
Modèle de partition des 2 molécules d’ADN entre les 2 cellules
filles:
- ADN reste attachée à une protéine
membranaire Synchronisation
- Les 2 ports d’attachement se séparent avec un système
complexe de
- La membrane se divise en entrainant chacun
régulation
une molécule d’ADN vers une cellule fille.

Protéines d’ancrage

Chromosome

Cellule mère Cellules filles

 Réplication de l’ADN et division cellulaire
Une cellule peut se diviser en un temps plus court que le temps de
réplication de l’ADN
Expérimentalement, on peut provoquer la partition

inégale chez les bactéries en utilisant des mutants.

Séparer la division cellulaire de la réplication :

 en empêchant la division cellulaire, on obtient des

cellules avec plusieurs chromosomes (les minicells)

 en empêchant la réplication, on obtient des bactéries

sans chromosome, des sacs à protéines (maxicells)
V- Fidélité de la réplication de l’ADN: Correction des
erreurs d’élongation PROOFREADING

C’est la correction d’une absence de complémentarité

entre les nucléotides de 2 brins d’ADN

Taux de mutation faible de 10-8 à 10-11 erreurs/paire de bases insérées

grâce à:
 Règles d’appariement des bases sur le modèle du brin matriciel
 Activité correctrice des enzymes Pol I et III
Activité exonucléasique 3’ 5’ (enlever un nucléotide mal
apparié et remplacer par le bon nucléotide)

 Existence d’un système multi enzymatique comprenant une

endonucléases associée à une exonucléase bidirectionnelle (3’5’ et
5’3’), à une ligase et à une ADN pol III.
 Correction d'épreuves (édition)

Mésappariement Elimination du Reprise de

mésappariement l’élongation

La polymérase se réassocie
Arrêt de
au modèle-amorce corrigé
l’élongation

L'extrémité 3'-OH du brin naissant se

positionne correctement dans le site
catalytique de l'enzyme
 Génétique des procaryotes et des eucaryotes
Différences dues
- à la présence d’un noyau chez les eucaryotes
- à une organisation différente de l’ADN
(introns et exons) Eucaryote
Gène X
Procaryote ADN Exon 1 Intron 1 Exon 2 Intron 2 Exon 3

Transcription

Gène A Gène B Exon 1 Intron 1 Exon 2 Intron 2 Exon 3

Transcrit Iaire
ADN
Transcription Excision des introns

ARNm Gène A ARN Gène B ARN Exon 1 Exon 2 Exon 3

maturé
Traduction Transport dans
protéine le cytoplasme
ARNm
A B
Traduction
Protéine X

- ADN circulaire dans le ADN linéaire individualisé sous forme de

cytoplasme chromosomes dans le noyau
- Toutes les régions d’ADN Séparation spatiale de la transcription et
sont codantes la traduction, ARNm passe dans le
cytoplasme
 VI- Réplication chez les eucaryotes:
Même système que celui des procaryotes avec le brin
avancé et le brin retardé >>> Mais, quelques différences
•ADN plus long

• Plusieurs origines de réplication activées de

manière synchronisée et progressant à la même
vitesse (50 nucléotides/s)

• Plusieurs polymérases agissant simultanément tout en ayant des

fonctions différentes:
α: synthèse de l’amorce, élongation et réparation de l’ADN;
β: réparation de l’ADN,
Υ: réplication de l’ADN mitochondriale …
δ: Elongation des brins plus réparation de l’ADN
ε: Réparation et remplacement de l’ARN au niveau du brin retardé
(Similaire à Pol )
• L’ADN est intégré dans la chromatine associée aux
histones.
Donc, au moment de la réplication, il y a production
d’histones >>>> duplication de la masse d’histones aussi.

Structure complexe des

chromosomes (chromatine
et protéines histones)

Structures complexes discoïdes autour desquelles est

entouré l’ADN : nucléosomes constituent une barrière
ralentissant la polymérase (faible vitesse de progression
de la fourche de réplication)
Synthèse d’ADN uniquement pendant
la phase S du cycle cellulaire
 Division cellulaire chez les eucaryotes

Parent 1 Parent 2

Fécondation Fusion des gamètes

Brassage des chromosomes

Mitoses

Organisme diploïde

Cycle sexuel chez Méiose Recombinaison méiotique

les eucaryotes