Faculté de médecine

Département de Pharmacie

TP 1 de Biophysique

 2ème année pharmacie

 Groupe : 1B
 Nom et prénom du Quadrinôme : BENDELHOUM Amina
Belhadj Mounia
BENDELHOUM Riad
BENBRAHIM Abdelkader
 Date de remise : 20/11/2023

Note :

Responsable de TP : Dr L. Krim
 PLAN DU COMPTE RENDU :

I. INTRODUCTION.
II. BUT.
III. PRINCIPE.
IV. MANIPULATION :
A. Détermination de la longueur d’onde maximum du
violet cristallisé (VC).
B. Préparations de solutions diluées du VC.
C. Vérification de la loi de Beer-Lambert.
D. Expression des résultats.

ETUDE SPECTROPHOTOMETRIQUE
 DU VIOLET CRISTALLISE

I. INTRODUCTION :
La spectrophotométrie est une méthode d’analyse qui permet de mesurer l’absorption de
la lumière par une substance en fonction de la longueur d’onde.

Un spectrophotomètre est un instrument de laboratoire conçu pour mesurer l’intensité de

la lumière à différentes longueurs d’ondes. Il fonctionne sur le principe fondamental de la loi
de Beer-Lambert, qui établit une relation une relation linéaire entra l’absorbance d’une
substance dans un échantillon et la Concentration de cette substance. Cette technique est
particulièrement puissante car elle permet d’obtenir des informations quantitatives sur la
concentration d’une substance dans une solution, tout en offrant des applications variées
telles que l’analyse des composés chimiques, la détermination de concentration moléculaire
et l’étude des réactions chimiques.

Le spectrophotomètre utilise généralement une source lumineuse, un monochromateur

pour sélectionner une longueur d’onde spécifique, un échantillon à analyser et un détecteur
pour mesurer l’intensité de la lumière transmise ou absorbée. Les résultats obtenus peuvent
être utilisés pour construire des spectres d’absorption, fournissant ainsi une empreinte
caractéristique de la substance analysée.

La spectrophotométrie trouve des applications dans de nombreux domaines de la

recherche scientifique :

MEDECINE : L’analyse spectrophotométrique du sang permet de mesurer la

concentration en oxygène et en CO2.

CHIMIE : Elle est utilisée pour l'étude de la cinétique de réactions chimiques et la

couleur des solutions.
INDUSTRIE ALIMENTAIRE : La spectrophotométrie est utilisée pour évaluer la
qualité des aliments et des boissons

II. BUT :

Le but du TP est de mesurer l’absorption de la lumière de différente longueurs d’onde d’une

substance du violet cristallisé en appliquant la loi de Beer-Lambert, à une série de solutions
de concentrations connues.
III. PRINCIPE :

 Préparation d'échantillons de Violet Cristallisé à différentes concentrations.

 Étalonnage du spectrophotomètre avec des solutions de référence connues.
 Mesure de l'absorbance des échantillons de Violet Cristallisé à différentes longueurs
d'onde.
 Analyse des données pour observer comment l'absorbance varie en fonction de la
concentration et de la longueur d'onde.

IV. MANIPULATION :

A. Détermination de la longueur d’onde maximum du violet cristallisé (VC) :

-A l’aide du colorimètre, on mesure l’absorbance de de la solution VC à différente , on
commence par  la plus élevé, puis on diminue progressivement jusqu’à ce qu’on trouve  à
laquelle l’absorbance est maximale, les résultats sont dans le tableaux suivant :
(nm) 430 470 490 520 540 580 600
A 0.05 0.20 0.13 0.37 0.40 0.42 0.19
-On conclue que la longueur d’onde  maximale est : 580nm car elle correspond à
l’absorption maximale de la solution.
-La courbe de l’absorbance de la solution en fonction de  : A=f ()

0.45

0.4

0.35

0.3
Absorbance

0.25

0.2

0.15

0.1

0.05

0
420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620

longueur d'onde

-La couleur que nous percevons est le résultat de la lumière qui est réfléchie ou transmise
par un objet. La solution VC présente une absorbance qui varie entre 5% pour =430nm
jusqu’à 19% pour =600nm avec un pic de 40% pour =580nm, alors que pour 400nm il n’y a
pas d’absorbance, ce qui explique sa couleur violette.
 B. Préparations de solutions diluées du VC :
-A partir d’une solution mère du VC de concentration C1 (6mg/L), on réalise à l’aide de fioles
et de pipettes jaugées, des solutions diluées de concentration connues C1/2, C1/4, C1/6,
C1/8 et C1/10. On calcule les volumes de ces concentrations :
1/ C1/2 sachant que nombre de mole solution mère= nbr de mole solution fille : CVf =CVm

Cm Vf 50
Vf =Cm Vm =Vm Vm= =25 mL
2 2 2
50 50
2/ C1/4 Vm= =12.5 mL 4/ C1/8 Vm= =6.25 mL
4 8
50 50
3/ C1/6 Vm= =8.22 mL 5/ C1/10 Vm= =5 mL
6 10

C. Vérification de la loi de Beer-Lambert :

-On mesure l’absorbance de chacune des solutions préparées à la longueur d’onde maximale
580nm. On obtient les résultats suivants :
C (mg/L) C1 C1/2 C1/4 C1/6 C1/8 C1/10
A 0.23 0.09 0.04 0.04 0.04 0.03

-La courbe de variation de l’absorbance A en fonction des différentes C de la solution du VC

A=f (C):

0.25

0.2

0.15
Absenrbance

0.1

0.05

0
C1 C1/2 C1/4 C1/6 C1/8 C1/10

Concentration (mg/L)
-Détermination d’une concentration inconnue : la solution contient les mêmes espèces, on
mesure son absorbance en utilisant le colorimètre et on obtient : A=0.19
A partir de la courbe, on conclue que sa concentration est : C=5.75 mg/L
-Vérification de la loi de Beer-Lambert : on mesure l’absorbance d’une solution de
C=120mg/L, on trouve A= 1.87, on mesure ensuite l’absorbance d’une cuve noire et on
trouve : A=1.88. En comparent les 2 résultats, on conclue que : La loi de Beer-Lambert n’est
pas valable pour la solution très concentré, car la solution peut devenir opaque, ce qui
signifie que la lumière ne peut pas la traverser efficacement. Dans ce cas, la loi de Beer-
Lambert qui suppose une absorption proportionnelle à la concentration devient moins
applicable car la transmission de la lumière à travers la solution n'est plus linéaire par
rapport à la concentration.
-Le coefficient d’absorption linéique molaire : selon la formule A=εlC et : l=1 cm
∆A 0.09−0.04
A=f ( C ) A=εC ε = ε= =0.033
∆C 3−1.5

D. Expression des résultats :

1. Le violet de cristal, ou cristal violet, est un composé chimique organique appartenant

à la famille des triarylméthanes. Ses propriétés physico-chimiques incluent :
 Aspect physique : Le violet de cristal se présente généralement sous forme de
cristaux solides ou de poudre cristalline.
 Solubilité : Il est soluble dans des solvants organiques tels que l'alcool, l'éthanol,
et le chloroforme, mais moins soluble dans l'eau.
 Stabilité : Il peut être relativement stable dans des conditions normales, mais
peut se dégrader en présence de lumière ou sous l'influence d'agents oxydants.
 Réactivité : Le violet de cristal est un colorant cationique utilisé dans diverses
applications, notamment en microbiologie comme colorant pour les cellules
bactériennes, et en chimie comme indicateur coloré.
 Propriétés colorantes : Il présente une couleur violette intense, d'où son nom, et
est largement utilisé comme colorant dans divers domaines scientifiques et
industriels.
 Structure moléculaire : Sa structure chimique est complexe, avec des atomes de
carbone, d'hydrogène et d'azote formant un système d'anneaux aromatiques

2. L’intérêt de déterminer la longueur d’onde maximum d’absorption du violet

cristallisé :
 Identification précise : La longueur d'onde maximale d'absorption est unique au
violet cristallisé, aidant à son identification spécifique.
 Vérification de présence : Cette mesure confirme ou infirme la présence du violet
cristallisé dans un échantillon, assurant une analyse fiable.
  Quantification exacte : En utilisant cette longueur d'onde, on peut précisément
mesurer la concentration du violet cristallisé dans une solution, crucial pour des
mesures précises.
 Optimisation du détecteur : Connaître cette valeur aide à ajuster les paramètres
pour détecter efficacement le violet cristallisé avec précision.


3. Un chromophore :
Un chromophore est une partie d'une molécule organique ou inorganique responsable
de sa couleur. C'est une région de la molécule qui absorbe la lumière visible, ce qui induit
la perception de la couleur par l'œil humain. Les chromophores tirent leur capacité à
absorber la lumière de la présence de liaisons doubles, de groupes fonctionnels
spécifiques ou de structures conjuguées qui permettent des transitions électroniques.
Ces transitions électroniques absorbent des longueurs d'onde spécifiques de la lumière
visible, donnant ainsi à la substance sa couleur caractéristique.
4. Les longueurs d’onde maximum d’absorption pur d’autres chromophore :
 ADN : l’ADN absorbe la lumière ultraviolette a une longueur d’onde d’environ
260nm. Cette caractéristique est souvent utilisée pour mesurer sa concentration
dans une solution.
 L’hémoglobine : la longueur d’onde maximale se situe autour de 414nm.
 L’insuline : elle se situe dans la gamme des ultraviolets aux alentours de 280nm.

5. Définition d’une :
 Lumière monochromatique :
La lumière monochromatique est composée dd'une seule couleur ou d'une seule longueur
d'onde spécifique. Cela signifie qu'elle est pure et n'inclut pas un spectre complet de
couleurs, mais plutôt une teinte unique.
 Lumière polychromatique :
La lumière polychromatique est composée de multiples couleurs ou longueurs d'onde
variées. Contrairement à la lumière monochromatique, elle contient un spectre étendu de
couleurs visibles.
6. Schéma des couleurs correspondantes aux longueurs d’onde visible :