Campbell 5ème éd.

, 2020, Chapitre 16, page 349 à 367

chapitre 20 , P.459 à 461.

Campbell 4ème éd., 2012, Chapitre 16, page 357 à 373

chapitre 20 , P. 461, p. 467 à 470.
[Link]
jSoSaaTA
VIDÉO SUR LA RÉPLICATION: Vidéo ERPI ( Pearson)
[Link]
Les objectifs
1. Expliquer les mécanismes de réplication de l’ADN ( Concept 16,1, p.357 à 361) .

2. Décrire le mécanisme de réplication de l ( concept 16.2, p,359 à 368 ).

3. Énumérer les molécules impliquées dans la réplication de l’ADN et identifier leurs

fonctions ( concept 16.2, p,366 à 368 ).

4. Définir la structure du chromosome eucaryote. ( concept 16,3, p, 369 à 372 ).

5. Expliquer le rôle des télomères dans la réplication de l’ADN chez les Eucaryotes. (
concept 16.2, p,359 à 368 ).

6. Expliquer le rôle de la télomérase dans la réplication de l’ADN chez les

Eucaryotes. ( concept 16.2, p,366 à 368 ).

7. Biologie moléculaire: définir l’amplification de l’ADN ( ACP ouPCR), identifier les

applications de la PCR et ses techniques , chapitre 20, ( Voir le laboratoire: le
chromosome PV92):
❑ Enzyme de restriction, Concept 20,1, p. 461à 462..
❑ Dénaturation et hybridation de l’ADN. Concept 20,1, p. 467 à 468
❑ Migration sur gel d’électrophorèse. concept 20,2 p.469 à 471
LES ACIDES NUCLÉIQUES: ADN ET
ARN ( Voir Composition du vivant)
Voir structure de l’ADN dans le powerpoint: Chimie du vivant

Figure 16.7
Rappel sur la structure de l’ADN

 Long polymère bicaténaire formé d’une double chaîne de

nucléotides.

 Les bases sont A,C,G,T, le monosaccharide est le désoxyribose

( ribose ayant perdu un oxygène ).

 Sur une même chaîne les nucléotides s’associent entre eux par une
liaison covalente impliquant un phosphate.

 Les deux chaînes d’ADN s’associent entre elles par des liaisons
hydrogènes reliant deux bases complémentaires ( A – T et G – C ).

 Les 2 brins sont antiparallèles.

 La double chaîne s’enroule autour d’elle et forme une double hélice.

 La réplication
Le concept de la réplication ( Concept 1)
 L’ADN est « un livre de recettes » et chaque « recette » est un fragment
d’ADN appelé gène.

 Le gène renferme l’information nécessaire à la synthèse d’une

polypeptide.

 Ce livre de recettes est identique dans toutes les cellules et à toutes les
générations de la même espèce.

 Pour conserver cette information, la cellule fabrique une copie de son

ADN donnant ainsi naissance à deux copies d’ADN filles identiques entre
elles et à l’ADN parentale ( l’originale ): réplication de l’ADN mère en deux
molécules d’ADN.

 Ces copies sont transmises aux générations suivantes.

La réplication se fait selon un modèle semi-conservatif ( Concept 16.2)
❖ Lors de la réplication, les deux brins de l’ADN mère (molécule de départ), se séparent et
chacun d’eux sert de matrice pour former un nouveau brin qui lui est complémentaire.
❖ Devant chaque base exposée prend place une base complémentaire, avec son désoxyribose
associé et son groupe phosphate. C'est l’appariement des bases complémentaires ( A – T et
G – C ).
La réplication se fait selon un modèle semi-conservatif ( Concept 16.2)

• Au terme de la
réplication,
2 molécules d’ADN filles
sont formées.

• Chacune d’elles se
compose d’un brin
ancien ( brin parental de
la molécule de départ)
et d’un nouveau brin.

• C’est le modèle semi-

conservateur.

(voir l’expérience de
Meselson et Stahl, fig.
16.11
Cette figure sera évaluée à
l’examen soit sous forme
de problème ou de figure à Figure 16.10
compléter)
 La réplication se fait selon un modèle semi-conservatif ( Concept 16.2)
 L’expérience de Meselson et Stahl, a
prouvé que le modèle de la réplication
est semi- conservateur.

 Des cellules cultivées d’abord sur un

milieu contenant de l’azote radioactif
(15N), sont transférées dans un milieu
contenant de l’azote régulier (14N).

 L’azote (15N ou 14N), est incorporé

dans l’ADN des cellules en division. centrifugeuse Procédé de la
centrifugation.
 Après 2 divisions on évalue , après
centrifugation , la répartition de
l’azote (15N ou 14N) dans l’ADN des résultat de la
cellules divisées. centrifugation.

 Voici les résultats possibles de cette

centrifugation :
La réplication se fait selon un modèle semi-conservateur.
Résultats expérimentaux ( Concept 16.2)
 Mécanisme de la réplication ( Concept 16.2)

La réplication est un processus, se déroulant avant chaque division

cellulaire
`Ce processus fait intervenir :
1. un certain nombre d’enzymes et d’autres protéines,
2. une matrice ( brin parental),
3. des dNTP ( desoxyribonucléotide triphosphate).
  Mécanisme de la réplication ( Concept 16.2)
Les étapes de la réplication
Elles sont au nombre de 3 : initiation, élongation et terminaison.

❑ Initiation
 La réplication débute sur des sites spécifiques: les origines de la réplication. À ce
niveau, une enzyme l’hélicase, séparent les deux brins de l’ADN parentale et forme
une ouverture appelée œil de réplication.

 Les deux brins sont maintenus séparés par des protéines fixatrices.

 La séparation des deux brins se poursuit de part et d’autre de l’œil, chaque moitié
de l’œil est appelée fourche de réplication, c’est une région en forme de « Y » où
sont synthétisés les nouveaux brins.

• Un œil de réplication (une origine de réplication) pour les procaryotes versus

plusieurs chez les eucaryotes. 1ÈRE DIFFÉRENCE ENTRE EUCARYOTES ET
PROCARYOTES.

• Œil de réplication + origine de réplication = RÉPLICON

 Mécanisme de la réplication: Initiation

• Un œil de réplication (une origine de réplication) pour les procaryotes versus plusieurs chez les
eucaryotes. 1ÈRE DIFFÉRENCE ENTRE EUCARYOTES ET PROCARYOTES.
• Œil de réplication + origine de réplication = RÉPLICON
 Mécanisme de la réplication: Initiation
 Mécanisme de la réplication: Élongation

 C’est l’étape de la Polymérisation d’un nouveau brin d’ADN (brin fils ou brin nouveau).

 Durant cette étape, chacun des 2 brins, de l’ADN bicaténaire, est utilisé comme modèle (
matrice) pour polymériser ( synthétiser) un nouveau brin, à partir du brin matrice ( brin
parental).

 La synthèse des 2 nouveaux brins ( orientés chacun dans l 2 sens opposés: 3’, 5’ et 5’, 3’ )
nécessite les éléments suivants:
 Éléments nécessaires à la synthèse:

❑ Brin matrice d’ADN (ADN préexistant ou brin parental).

❑ Désoxy-ribonucléotide ou dNTP (base azotée +désoxyribose + groupement phosphate.

❑ Amorce (courts fragments d’ARN).

❑ ADN polymérase + autres enzymes : l’ADN polymérase, hélicase, SSB protéine

(protéines stabilisant le simple brin), la gyrase du groupe des topoisomérases, la
primase et la ligase.
 Mécanisme de la réplication: Élongation

Polymérisation d’un nouveau brin d’ADN (brin fils ou brin nouveau)

❑ Élongation
 Au niveau de la fourche de réplication, l’élongation du nouveau brin se fait par
des enzymes appelées ADN polymérase III ( procaryotes).

 Elle utilise chaque brin parental comme une matrice (modèle), pour diriger la
synthèse d’un nouveau brin, dans le sens

 Le brin parental, de la fourche, est recopié en un

brin continu ou brin directeur orienté dans le sens par l’ ADN polymérase III.

 Le 2éme brin parentale de la fourche, orienté dans le sens sera recopié par
les même enzymes mais sous forme de courts fragments les fragments d’okazaki.
  Mécanisme de la réplication: Élongation
❖ Chez les eucaryotes comme
chez les procaryotes, l’ADN
polymérase allonge le
nouveau brin dans le sens
Sens de polymérisation:’

❖ 2ÈME DIFFÉRENCE ENTRE LES

EUCARYOTES ET LES
PROCARYOTES
▪ Chez les procaryotes il existe 3
ADN polymérases. Les plus
importantes sont : ADN
polymérase III et ADN
polymérase I (plus grande
quantité).

▪ Chez les eucaryotes, il existe

plusieurs types de
polymérases. 4 sont
nécessaires à la réplication.
GR 03 A23, reprendre ici.

L’élongation antiparallèle

primase
 3’
5’
3’ 5’

3ème DIFFÉRENCE ENTRE PROCARYOTES ET

EUCARYOTES: La longueur des fragments
d’okazaki.
1000 à 2000 nucléotides chez E. coli contre
100 à 200 nucléotides chez les eucaryotes.
GR 02 A23, reprendre ici.
Résumé de la réplication

3’

5’

3’

5’

3’
Réplication simultanée des 2 brins d’ADN antiparallèle par 2 ADN
polymérase
Correction et réparation de l’ADN
Télomères et télomérase dans la
réplication de l’ADN chez les
Eucaryotes ( Concept 16.2).

Chez les eucaryotes, l’absence d’une extrémité 3’ libre

(dans le nouveau brin) empêche l’ADN polymérase de
remplacer l’amorce. Pas de fixation possible pour
l’enzyme sur son ADN.

Après plusieurs réplication, l’ADN fille deviendrait de

plus en plus courte et il se perdra plus de nucléotides.

Une enzyme : télomérase, remplit ces vides en ajoutant

des séquences de 6 nucléotides. Ces séquences sont
répétitives.
 Les différents niveaux d’organisation de l’ADN
(Concept 16.3)

 Au moment de la réplication, la double hélice d’ADN est

enroulée autour de protéines histones pour former la
chromatine.

 À la fin de la réplication et au moment où la cellule se prépare

à se diviser, la chromatine se condense et subit un
surenroulement, formant une structure plus courtes : le
chromosome.

 Chaque chromosome se compose de deux chromatides sœurs

(elles sont identiques), liées par un centromère. Une
chromatide est une chromatine surenroulée.
Les différents niveaux d’organisation de l’ADN
Biologie moléculaire
 Campbell 5ème éd., 2020, chapitre 20 , P.459 à
461.

 Campbell, 4 ème ed., 2012, chapitre 20 , P. 461, p. 467 à

470

27
 Biotechnologie: PV92 DU CHROMOSOME 16

PV92 Génétique Grosseur des fragments

Homozygote (+,+) 941 paires de bases

Homozygote (-,-) 641 paires de bases

Hétérozygote (+,-) 941 et 641 paires de bases

• l’allèle (+) représente le segment d’ADN avec séquence ALU et dont la taille est de 941 pb ;
• l’allèle (-) représente le segment d’ADN sans séquence ALU et dont la taille est de 641 pb.
Un individu peut ainsi être homozygote (+/+) ou (- / -) ou encore hétérozygote (+/-).
1- Extraction de l’ADN
 Mélange les follicules pileux avec la Matrice Instagene
 Enzymes + Billes chargées pour l’extraction de l’ADN des
follicules pileux
 Lyse la cellule, sépare et isole l’ADN des membranes,
organites et protéines

 Utilise les blocs chauffants (activation des enzymes)

 2 x 5 minutes à 56’C
 1 X 5 minutes à 100’C

 Centrifugeuse (séparation des constituants, le surnagent = ADN extrait)

 5 minutes
L’amplification en chaîne par polymérase (ACP ou PCR)
Utilisation d’enzyme de restriction
(Campbell, p.461)
 La technique consiste à isoler une
séquence spécifique d’un
fragment d’ADN et de l’amplifier
par la suite.

 La séquence spécifique est

d’abord isolée par des enzymes à
action spécifique: les enzymes de
restriction.

 Le site d’action de ces enzymes

(site de restriction) est une
séquence signal dans la séquence
20.5 mère.

30
2-Amplification de l’ADN (PCR)
• Mélange l’ADN extrait avec Solution maîtresse (Master
Mix)
• Tampons (concentration d’électrolytes donnée, pH
donné et enzymes)
• dNTPs (nucléotides d’ADN)
• Amorces
• Taq polymérase (ADNpolymérase de la bactérie Thermus
aquaticus)
• Les tubes seront déposés dans le thermocycleur pour
l’amplification par PCR
 *
Taq polymérase: une variété d'ADN polymérases thermostables nommée d'après Thermus
aquaticus, une bactérie thermophile
*
 L’amplification en chaîne par polymérase (ACP ou PCR)
Thermocycleur ou appareil PCR

 Cycle 1
 2 minutes
 94’C
 Active la Taq polymérase

 Cycle 2 (répété 40 fois)

 Étape 1 : Dénaturation (1 minute)
 94’C
 Séparation des 2 brins d’ADN

 Étape 2 : Hybridation (1 minute)

 60’C
 Fixation des amorces

 Étape 3 : Élongation (2 minutes)

 72’C
 Taq polymérase ajoute les
nucléotides (élongation des
nouveaux brins)
 Cycle 3
 10 minutes
 72’C
 Finalisation de l’élongation des nouveaux
brins
PCR: Polymérase Chain Reaction
ACP : Amplification en Chaîne par Polymérase

• Permet de produire des milliards de copies d’un gène en moins d’une heure
• N = nombre initial de brin d’ADN
• À chaque tour, le nombre de brin double
• Nous ferons 40 tours
• 240 x N = Nombre final de brin d’ADN

Étudiez la figure du Campbell 20.7 p.461

 3- Électrophorèse sur gel d’agarose

 Gel d’agarose
 Agar (substance gélifiante ) + Eau
 Polymère de galactose qui est difficile à traverser
 L’ADN passe plus ou moins rapidement selon sa masse
moléculaire

 Solution Tampon
 Contient des électrolytes pour le passage du courant)

Étudiez la figure du Campbell 20.6 p.460

Recherche d’un allèle amplifier en présence d’allèles témoins, par la
technique d’électrophorèse sur gel d’agarose
 Électrophorèse
 Technique de séparation de molécules dans un champ électrique.
 Les molécules sont attirées vers l’une des 2 électrodes : cathode (-) et anode ( +) .
 Les fragments d’ADN, en mélange et de tailles différentes, se déplacent sur le gel
d’électrophorèse. Ce dernier joue le rôle d’un tamis moléculaire.
 Les fragments d’ADN sont séparés selon leur taille et leur charge. Les plus légers
migreront plus vite et seront proches de l’électrode qui les a attiré.

Échelle
moléculaire + + - - +- - - + +
X X X -X-

37
 Électrophorèse
 Migration des molécules selon leur charge et leur taille,
sous l’effet d’un champ électrique.
 Les cations (+) migrent vers la cathode (-) et les anions (-)
migrent vers l’anode (+).
 On identifie le fragment amplifié, en comparant sa bande à une des bandes de
l’échelle moléculaire. Des fragments d’ADN de taille connues.

Figure 3 : Séparation des fragments d’ADN par électrophorèse

Légende : Colonne 1 : Échelle moléculaire; Colonnes 2 et 6 : Individus homozygotes dominants;
Colonnes 3, 5 et 8 : Individus homozygotes récessifs; Colonne 4 et 7 : Individus hétérozygotes.
Soit la figure suivante complétez la avec les éléments suivants:

3’

5’
3’

5’