REPUBLIQUE DU BENIN

MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET

DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE (MESRS)
*********
UNIVERSITE D’ABOMEY CALAVI (UAC)
*********
ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY CALAVI (EPAC)
*********
DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE (GBH)
Option : Analyses Biomédicales

RAPPORT DE STAGE DE FIN DE FORMATION

pour l’obtention du diplôme de licence professionnelle

THEME
APPORT DES MILIEUX CHROMOGENIQUES DANS LA
DETECTION PRESOMPTIVE DES ENTEROBACTERIES
PRODUCTRICES DE BETALACTAMASES ET DE
CARBAPENEMASES ISOLEES DES MATERIELS STERILE ET
SURFACES DE SOINS DECONTAMINEES DU CHUD-B/A

Réalisé par :
LASSISSI Kafayatou
Sous la direction de :

Tuteur de stage :
Superviseur :
Mr ALASSSANE
Dr (MC) DOUGNON
Moussa
Victorien Tamègnon
Ingénieur des Travaux en
Maître de Conférence en
Microbiologie
Microbiologie
Enseignant chercheur à l’Ecole
Polytechnique d’Abomey-Calavi

Année Académique : 2022 - 2023

16eme Promotion
Apport des milieux chromogeniques dans la detection presomptive des enterobacteries productrices de
betalactamases et de carbapenemases isolees des materiels sterile et surfaces de soins decontaminees du
CHUD-Borgou/Alibori

REPUBLIQUE DU BENIN

MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE

SCIENTIFIQUE (MESRS)
*********
UNIVERSITE D’ABOMEY CALAVI (UAC)
*********
ECOLE POLYTECHNIQUE D’ABOMEY CALAVI (EPAC)

DIRECTEUR :
Professeur Guy Alain ALITONOU

DIRECTEUR ADJOINT :
Professeur Vincent PRODJINONTO

CHEF DE DEPARTEMENT DE GENIE DE BIOLOGIE HUMAINE (GBH)

Docteur Gatien LOKOSSOU (Maître de Conférence)

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LISTE DES ENSEIGNANTS ET MATIERES

ENSEIGNEES

SOMMAIRE

INTRODUCTION

S ET MATIERES ENSEIGNEES

SOMMAIRE

INTRODUCTION

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DEDICACE

REMERCIEMEN
Je dédie ce travail à ma chère maman ARINLOYE Choukourath. Que Dieu vous

TSDEDICACE
garde et vous accorde longue vie afin que je puisse à mon tour vous combler

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REMERCIEMENTS

▪ A mon défunt père LASSISSI Léhady ,Que la terre vous soit légère
▪ A mon superviseur, le Dr (MC) DOUGNON Victorien, nous vous remercions
vivement de nous avoir fait l’honneur de diriger ce travail. Vous nous avez réservé
HOMMAGESREMER
le meilleur accueil malgré vos obligations professionnelles. Nous saisissons cette
CIEMENTS
occasion pour vous exprimer notre profonde gratitude tout en vous témoignant
notre respect.
Que Dieu vous accorde santé, bonheur et prospérité à vous et à votre famille.
▪ A l’administration et aux enseignants de l’EPAC qui œuvrent pour nous assurer
une formation exemplaire, dans la joie et avec un dévouement total. Merci à vous.
▪ A mon Tuteur de stage , Mr ALASSANE Moussa , nous saisissons cette occasion
pour vous exprimer notre profonde gratitude tout en vous témoignant notre
respect.
▪ A tout le personnel du laboratoire du CHUD-Borgou /Alibori de Parakou pour la
disponibilité et les conseils quotidiens. Recevez par ce travail un hommage et nos
sincères remerciements.
▪ A tout le personnel de l’Unité de Recherche de Microbiologie Appliquée et
Pharmacologie des substances naturelles( URMAPha)
▪ A ma meilleure amie AHOUANMENOU Maroufath, ma sœur d’une autre mère
Merci pour le soutien et l’amour. Que Dieu nous garde
▪ A tous nos amis de la 16eme promotion d’Analyses Biomédicales, merci pour tous
ses moments, que Dieu nous garde.
▪ A tous ceux qui ont participés de près ou de loin à l’élaboration de ce mémoire.

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HOMMAGES

A son Excellence Mr le Président du Jury,

C’est un grand honneur que vous nous faites en acceptant de présider le Jury
de notre soutenance malgré vos multiples occupations. Cher Président du Jury,
LISTE DES SIGLES
c’est par vos observations que nous espérons améliorer la qualité scientifique
ET Hommages !
de ce travail. Respectueux

ABREVIATIONSHO
Aux Honorables Membres du Jury,
Nous sommes très MMAGES
touchés par l’honneur que vous nous faites en acceptant de
siéger dans le Jury de notre soutenance. Vos remarques et suggestions
contribueront à l’amélioration de la qualité scientifique de ce travail. Veuillez
trouver ici, l’expression de notre profonde gratitude et de nos sincères
considérations.

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LISTE DES SIGLES ET ABREVIATIONS

BGN : Bacilles Gram Négatif

BLSE : Bêtalactamase à Spectre Etendu
LISTE DES TABLEAUX
C3G : Céphalosporines de troisième Génération
LISTE DES
SIGLES
CHUD/B ETHospitalier
-A : Centre ABREVIATIONS
Universitaire Départemental de Borgou /Alibori
IAS : Infection Associé aux Soins

MDR : Multi Drug Resistant

MHT : Test de Hodge Modifié
PLP : Protéines Liant Pénicillines
RAM :La résistance aux antimicrobiens
TSA : Trypticase Soja
ADN :Acide Désoxyribo Nucléique
MBL :Métallo β lactamase
CMI :Méthode d’Inactivation du Carbapénème
MHT : Test de Hodge Modifié

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LISTE DES TABLEAUX

TableauI : Liste des consommables utilisées ..................................................... 35

TableauII : Répartition des échantillons collectés par service ......................... 40

LISTE DES FIGURESLISTE

Tableau III : Répartition des différents types de matériels ............................... 41
DES TABLEAUX
Tableau IV : Répartition des différents types de surfaces ................................. 41

Tableau V : Identification présomptive des entérobactéries productrices de

carbapénémases sur CHROMagar BLSE............................................................ 44

Tableau VI : Identification présomptive des entérobactéries productrices de

carbapénémases sur mSuper Carba………………………………………..….45

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LISTE DES FIGURES

Figure1 : Principe de la marche en avant ........................................................... 19

Figure 3 : Mécanisme de résistance aux bêtalactamines.................................... 22
Figure 4 : Milieu CHROMagar BLSE ............................................................... 28
RESUMELISTE DES
Figure 5: Acinetobacter spp .............................................................................. 28
Figure 6 : Echerichia coli .................................................................................. 29
FIGURES
Figure 7 : Bactéries coliformes .......................................................................... 29
Figure 8 : Milieu CHROMagar ........................................................................ 30
Figure 9 : Aspect des colonies sur CHROMagar mSuper CARBA................... 31
Figure 10: Lieux de prélèvements ...................................................................... 35
Figure 11: Aspect des colonies sur CHROMagar mSuper Carba ...................... 37
Figure 12 : Techniques d’identification sur CHROMagar BLSE ...................... 37
Figure 13 : Techniques d’identification sur CHROMagar mSuper CARBA .... 38
Figure 14 : Répartition des échantillons positifs ................................................ 43
Figure 15 : Répartition des échantillons positifs sur mSuper CARBA………..43
Figure 16 : Répartition des échantillons positifs sur CHROMagar BLSE......... 43

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RESUME
L’évaluation périodique de la qualité hygiénique du matériel de soin est essentielle
pour prévenir les infections nosocomiales. La présente étude vise à rechercher les
bactéries productrices de BLSE et de carbapénémases dans les échantillons
d’écouvillons de matériels de soins stériles et surfaces de soins des services de
ABSTRACTRES
Néonatologie et Chirugie du CHUD-B/A. Pour cela, il a été collecté 50 échantillons
dont 20 provenant matérielsUME
stériles ou décontaminés et 30 provenant des surfaces de
soins dans les services de Néonatologie et de Chirugie du CHUD-B/A. Après un pré –
enrichissement des écouvillons, les échantillons ont été ensemencés sur des géloses
mSuper Carba et BLSE. Des colonies isolées ont été sélectionnées puis repiquées afin
d’avoir des cultures pures. Une identification présomptive a été faite en se basant sur
les caractéristiques morphologiques des colonies. Il a été révélé que les matériels
stérilisés sont exempts de bactéries productrices de BLSE et de carbapénémases.
Seulement 10% des matériels désinfectés abritent des bactéries productrices de BLSE
et de carbapénémases. Similairement, les surfaces nettoyées abritent 14%
d’entérobactéries productrices de BLSE et de carbapénémases. Il a été déterminé de
manière présomptive que 60% des entérobactéries productrices de carbapénémases
isolées sur CHROMagr BLSE sont des bactéries du genre Acinetobacter spp suivi de
des bactéries coliformes avec une proportion de 40%. Les surfaces sont les plus
contaminées (80%) suivi des matériels décontaminés (20%). Toutes entérobactéries
productrices de carbapénémases isolées sur mSuper Carba sont des bactéries
coliformes. Les surfaces sont les plus contaminées (75%) suivi des matériels
décontaminés (25%). Ces résultats montrent que les surfaces nettoyées et les matériels
déconaminées sont contaminés par les entérobactéries productrices de BLSE et de
carbapénémases. Il est donc important que l’hygiène soit renforcée dans nos hôpitaux.
Mots clés : Milieux chromogéniques, carbapénemases, BLSE, entérobactéries,
détection présomptive

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ABSTRACT
Periodic assessment of the hygienic quality of healthcare equipment is essential to
prevent nosocomial infections. The present study aims to search for bacteria
SOMMAIREABST
producing ESBLs and carbapenemases in swab samples from sterile care materials
RACT
and care surfaces from the Neonatology and Surgery departments of CHUD-B/A.
For this, 50 samples were collected, including 20 from sterile or decontaminated
materials and 30 from treatment areas in the Neonatology and Surgery departments
of CHUD-B/A. After pre-enrichment of the swabs, the samples were inoculated on
mSuper Carba and ESBL agar. Isolated colonies were selected then subcultured in
order to have pure cultures. A presumptive identification was made based on the
morphological characteristics of the colonies. It has been revealed that sterilized
materials are free of ESBL and carbapenemase-producing bacteria. Only 10% of
disinfected materials harbor ESBL and carbapenemase-producing bacteria.
Similarly, cleaned surfaces harbor 14% of ESBL- and carbapenemase-producing
enterobacteria. It was presumptively determined that 60% of carbapenemase-
producing enterobacteria isolated on CHROMagr ESBL are bacteria of the genus
Acinetobacter spp followed by coliform bacteria with a proportion of 40%. Surfaces
are the most contaminated (80%) followed by decontaminated materials (20%). All
carbapenemase-producing enterobacteria isolated on mSuper Carba are coliform
bacteria. Surfaces are the most contaminated (75%) followed by decontaminated
materials (25%). These results show that cleaned surfaces and deconaminated
materials are contaminated by enterobacteria producing ESBL and carbapenemase.
It is therefore important that hygiene is reinforced in our hospitals.
Keywords: Chromogenic media, carbapenemases, ESBL, enterobacteria,
presumptive detection

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SOMMAIRE

INTRODUCTION ...........................................................................................................................13
OBJECTIFS DE L’ETUDE .............................................................................................................16
INTRODUCTION
SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE ................................................................................................16
CADRES, MATERIEL ET METHODES .......................................................................................32
SOMMAIRE
RESULTATS ET DISCUSSIONS ..................................................................................................39
CONCLUSION ................................................................................................................................48
BIBLIOGRAPHIE ...........................................................................................................................49

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INTRODUCTION

La résistance aux antimicrobiens (RAM) constitue une menace mondiale majeure

aux lourdes conséquences. Elle constitue un problème de santé publique, tant dans les
pays développés que dans les pays en voie de développement. On enregistre
approximativement 700 000 décès chaque année liés aux infections causées par les
bactéries multi-résistantes (Oloufemi et al, 2021) . Il faut noter que dans les pays à
revenu faible et intermédiaire, le potentiel de la RAM à entraîner une augmentation de
la morbidité et de la mortalité peut être plus important, étant donné que la charge de
morbidité bactérienne est plus élevée dans ces pays (Tadesse et al., 2017). Dans la
plupart des pays en développement, il n’existe pas de surveillance efficace de
l’utilisation des antibiotiques ou des schémas de résistance aux antibiotiques (Khardori,
2006). L’automédication a contribué à l’émergence des bactéries résistantes aux
antibiotiques.
Parmi les nombreux facteurs contribuant à la résistance antimicrobienne,
l’hygiène de l’environnement hospitalier est de mise. La dissémination des souches
résistantes dans le milieu hospitalier augmente le risque infectieux à l’hôpital. Les
patients infectés ou porteurs de microorganismes pathogènes admis à l’hôpital sont des
sources d’infections potentielles aussi bien pour d’autres patients que pour les agents
de santé. Des études reportent de plus en plus la contamination des matériels et surfaces
de soin non par des bactéries environnementales mais par des entérobactéries
résistantes. Les surfaces inanimées et les objets médicaux/ménagers (« vecteurs passifs
») ont été identifiés comme réservoirs des bactéries à Gram négatif(Lompo et al.,
2023). Au Bénin, de nombreuses études ont montré que nos hôpitaux font face à un
manque d’hygiène la dissémination des bactéries productrices de BLSE dans
l’environnement hospitalier. Les surfaces ainsi que les objets se trouvant dans

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l'environnement immédiat du patient ont été montrés comme pouvant être contaminées
par des bactéries productrices de BLSE (Ahoyo et al., 2007). Nombreuses sont les
techniques de détection de ces bactéries productrices de Carbapénémases et de BLSE.
Il a été mis au point des méthodes de détection génotypiques et phénotypiques dont la
culture sur des milieux de dépistage des bactéries productrices de BLSE et de
Carbapénémases (Dortet et al , 2014.).
Depuis quelques années, certains fabricants proposent des géloses chromogènes
permettant des identifications rapides présomptives de certaines espèces bactériennes
L’identification repose ainsi sur la mise en évidence d’une activité enzymatique
spécifique des bactéries considérées par transformation d’un substrat incorporé
préalablement dans la gélose en un produit coloré facilement détectable. La coloration
des colonies ou du milieu permet alors de repérer les différentes espèces présentes dans
un échantillon et d’orienter l’identification. La présente étude a eu pour objectif de
rechercher les bactéries productrices de BLSE et de carbapénémases dans les
échantillons d’écouvillons de matériels de soins stériles et surfaces de soins. Il s’est agi
plus spécifiquement de :
• Identifier les échantillons contaminés par les bactéries productrices de
BLSE et de Carbapénémases dans les échantillons d’écouvillons de
matériels de soins stériles et surfaces de soins
• Etudier les caractères culturaux des souches isolées afin d’avoir des
identifications présomptives à l’aide des milieux chromogéniques

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1-OBJECTIFS DE L’ETUDE

1-1OBJECTIF GENERAL

La présente étude a eu pour objectif de rechercher les bactéries productrices de

BLSE et de carbapénémases dans les échantillons d’écouvillons de matériels de soins
stériles et surfaces de soins.

1-2 OBJECTIFS SPECIFIQUES

• Identifier les échantillons contaminés par les bactéries productrices de

BLSE et de Carbapénémases dans les échantillons d’écouvillons de
matériels de soins stériles et surfaces de soins
• Etudier les caractères culturaux des souches isolées afin d’avoir des
identifications présomptives à l’aide des milieux chromogéniques

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SYNTHESE
BIBLIOGRAPHIQUE

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2-1-Hygiène en milieu hospitalier

2-1-1 Les dispositifs médicaux et surfaces de l’environnement hospitalier

En 1968, Spaulding a classé les dispositifs médicaux/chirurgicaux comme

étant : critiques, semi-critiques et non critiques, selon leur potentiel à propager des
infections(William A, et al 2013.). Les dispositifs critiques pénètrent dans des tissus
normalement stériles, le système vasculaire ou les équipements où circule du sang ; par
ex : les instruments chirurgicaux et les cathéters vasculaires. Ces dispositifs doivent
être nettoyés et stérilisés correctement et en toute sécurité avant utilisation.
Les dispositifs semi-critiques entrent en contact avec les muqueuses intactes ou
la peau lésée ; les endoscopes souples à fibres optiques, les sondes vaginales et le
matériel respiratoire thérapeutique en sont des exemples. Ces dispositifs nécessitent un
bon nettoyage et, au minimum, une désinfection de haut niveau avant utilisation.
Les dispositifs non critiques (tels que tensiomètres, les stéthoscopes), qui ne
touchent que la peau intacte, présentent un faible risque de propagation d'infections, à
l'exception de la transmission d'agents pathogènes entre les mains du personnel de
santé. Le nettoyage et essuyage périodique de ces articles avec un détergent neutre ou
avec 70% (volume/volume) d'éthanol en solution aqueuse est généralement suffisant.
La plupart des surfaces environnementales dans les chambres des patients et dans
les établissements de santé sont non critiques et ne nécessitent pas une désinfection de
routine. Toutefois, les surfaces qui sont souvent touchées, en particulier celles de
l’environnement autour du patient, ont besoin d'une décontamination régulière pour
prévenir la transmission de pathogènes par les mains. Les surfaces peuvent donc être
recontaminés après la désinfection (Davies and Davies, 2010).

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2-1-2 Désinfection et stérilisation

2-1-2-1 Définitions

Stérilisation : est tout processus, physique ou chimique, qui tue ou détruit tous les
micro-organismes contaminants d’un matériau, tels que les bactéries, les virus, les
microbes, les spores, y compris les plus résistants comme les endospores, sans tenir
compte de leur type. Le processus rend stérile, voire infertile

Désinfection : est une opération d'élimination volontaire et momentanée de certains

germes, de manière à stopper ou prévenir une infection ou le risque d'infection ou
surinfection par des micro-organismes ou virus pathogènes et/ou indésirables

La désinfection implique d'éliminer ou tuer les micro-organismes ou d’inactiver les

virus pathogènes de milieux, matières ou matériaux contaminés en altérant leur
structure ou en inhibant leur métabolisme ou certaines de leurs fonctions vitales.
Cependant, les surfaces peuvent donc être recontaminés après la désinfection (Davies
and Davies, 2010).

2-1-2-2 Désinfection du matériel médical

La désinfection des instruments a le même but que l'hygiène des mains, son but
est d'éviter la transmission de micro-organismes à travers les dispositifs médicaux. La
stérilisation et la désinfection des instruments médicaux permet de garantir la sécurité
du patient afin de ne pas l'infecter avec de nouvelles bactéries. Elle doit impérativement
se faire sur tout le matériel médical, hors consommables à usage unique stériles. La
désinfection des instruments médicaux se fait grâce à des produits de désinfection
comme par exemple le Désinfectant à froid stéranios qui est un produit permettant la
désinfection à froid de votre matériel avec des étapes très précises à respecter, pour
éliminer les micro-organismes.

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2-1-2-3 Stérilisation et hygiène hospitalière

La stérilisation en milieu médical est utilisée pour la prévention des infections comme
les infections nosocomiales, infections contractées dans un établissement de santé.
C'est un objectif majeur pour les établissements hospitaliers car il doit être dispensé au
malade la meilleure qualité de soins possible. Cela permet de réduire les exo-infections,
qui sont les infections transmises par un dysfonctionnement technique d'un matériel
(filtre à air, autoclave…) destiné à la protection des patients qui, ne remplissant plus
son office, les laisse en contact avec des germes qui ne devraient, en principe, pas faire
l'objet d'une infection, au vu des mesures prises pour les prévenir soit à une erreur
commise dans l'exécution des procédures de traitement du matériel médico-chirurgical.
De plus la stérilisation est utilisée quand certains dispositifs médicaux (instruments
chirurgicaux, endoscopes…) ne peuvent, souvent pour des raisons de coût, bénéficier
d'une approche industrielle : le matériel à usage unique qui améliore le confort du
patient et représente la garantie en matière de qualité et de sécurité sanitaire.

Figure 1 : Principe de la marche en avant

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2-1-3 Contamination des matériels de soins et surfaces par les bactéries

Malgré les procédés d’élimination des microorganismes de l’environnement

hospitalier, il n’est pas rare de constater que les matériels de soins et surfaces de soin
sont contaminés par des bactéries. Il s’agit essentiellement des entérobactéries
comme Escherichia coli , Klebsiella pneumoniae, Citrobacter et des Staphylocoques.
(Johnson et al., 2019).
2-1-3-1 Les entérobactéries
Les entérobactéries sont des bacilles Gram négatif, immobiles ou mobiles par cils
péritriches, aérobies_anaérobies facultatives , fermentant le glucose , dépourvus
d’oxydase et réduisant les nitrates.Ce sont des bactéries qui font parti de la flore
gastro-intestinale.

2-2-RESISTANCE DES BACTERIES AUX ANTIBIOTIQUES

La résistance aux antibiotiques résulte donc d'une évolution par sélection naturelle, les
antibiotiques exerçant une pression sélective très forte, en éliminant les bactéries
sensibles. Les bactéries présentant une mutation leur permettant d'y survivre continuent
à se reproduire, en transmettant à leur descendance leurs gènes de résistance,
produisant rapidement une génération de bactéries pleinement ou majoritairement
résistantes. Par exemple, M. tuberculosis est un pathogène majeur présent dans les pays
en développement et industrialisés et est devenu la version du 20e siècle d'un ancien
pathogène (Davies and Davies, 2010). L'utilisation aveugle et inappropriée
d'antibiotiques chez l'homme et l'animal a résolument entraîné le développement
simultané d'une résistance à plusieurs classes d'antibiotiques, créant une souche
bactérienne très dangereuse de résistance multidrogue (MDR).(Atuanya et al., 2018)

Réalisé par LASSISSI Kafayatou 20

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2-2-1 Résistance des bactéries aux betalactamines

2-2-1-1 Généralités

Les β-lactamines constituent une famille majeure d'antibiotiques très largement utilisés
en clinique. Ces molécules agissent en inhibant la synthèse de la paroi bactérienne par
fixation aux protéines liant les pénicillines (PLP), enzymes impliquées dans la synthèse
du peptidoglycane. Chez les bacilles à Gram négatif (BGN), il existe 3 types de
mécanismes de résistance aux β-lactamines : la faible affinité pour les PLP, les
phénomènes d’imperméabilité et d’efflux, et surtout l’inactivation enzymatique par les
β-lactamase

2-2-1-2 Mécanismes de résistance aux β-lactamines

De manière générale, les entérobactéries utilisent différents mécanismes pour

développer une résistance aux β-lactamines : il peut s’agir de troubles de perméabilité
pour les antibiotiques, ce qui empêche la pénétration de l’antibiotique dans la bactérie,
de systèmes d’efflux qui permettent d’évacuer les antibiotiques qui auraient pénétré
dans la bactérie, ou de modification de la cible bactérienne de l’antibiotique (exemples
: les sites de liaison des pénicillines, les pénicillines binding proteins (PBP) ou les
protéines liant les pénicillines (PLPs), ce qui empêche la synthèse de la paroi de la
bactérie). Mais le plus fréquemment, il s’agit d’enzymes détruisant les β-lactamines,
les β-lactamases

Réalisé par LASSISSI Kafayatou 21

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Figure 3 : Mécanismes de résistance aux bêtalactamines

Les β-lactamases
Les β-lactamases sont des enzymes hydrolysant les β-lactamines en ouvrant le
cycle bêta-lactame et menant à la perte d’un groupement carboxyle, provoquant
l’inactivation de l’antibiotique en question. Il existe 2 catégories de BLSE :
• les « anciennes » BLSE qui dérivent par mutations ponctuelles des pénicillinases
naturelles TEM-1/2 et SHV-1 et
• les « nouvelles » BLSE (notamment les enzymes CTX-M) issues de transferts
plasmidiques à partir de bactéries environnementales. Si jusque dans les années
1990, la majorité des BLSE étaient les enzymes de type TEM/SHV détectées en
milieu hospitalier, on a assisté à partir de 1995 à une explosion des enzymes de
type CTX-M responsables de la majorité des infections à BLSE, tant
hospitalières que communautaires

2-2-2 Résistance aux carbapénèmes

2-2-2-1 Généralités

Les carbapénèmes demeurent les β-lactamines dont le spectre d’activité est le plus
large. Elles sont utilisées pour traiter de nombreuses infections nosocomiales, en

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particulier celles liées aux espèces de bacilles à Gram négatif les plus fréquentes que
sont les entérobactéries Pseudomonas aeruginosa et Acinetobacter baumannii.

L’activité de ces carbapénèmes est liée en particulier à la rapidité de leur pénétration à

travers la paroi externe des bacilles à Gram négatif et à leur stabilité vis-à-vis de la
plupart des β-lactamases naturelles ou acquises, y compris les β-lactamases à spectre
étendu (BLSE) et les céphalosporinases codées par des gènes chromosomiques ou des
gènes plasmidiques . L’émergence de la résistance aux carbapénèmes (imipénème,
méropénème, doripénème, ertapénème) est l’un des problèmes les plus importants posé
par la résistance aux antibiotiques car il existe peu d’alternatives thérapeutiques
possibles.

2-2-2-2 Mécanismes de résistance aux carbapénèmes

Les entérobactéries expriment leur résistance aux carbapénèmes par différents

mécanismes. Parmi ces mécanismes, la production d’une catégorie d’enzymes
dénommée carbapénémases (d’où le nom d’entérobactéries productrices de
carbapénémases), qui leur permet de rendre inactifs les antibiotiques de la classe des
carbapénèmes en plus de ceux d’autres classes. Les gènes responsables de ce
mécanisme sont situés sur un plasmide, c’est-à-dire sur une molécule d’ADN circulaire
qui se réplique indépendamment du chromosome bactérien (Tortora et al., 2012) et qui
est en mesure de se transmettre tant d’un genre bactérien à un autre que d’une espèce
bactérienne à une autre (Bilavsky et al., 2010; Giedraitiene et al., 2011; Tzouvelekis et
al., 2012).
2-2-2-1 Les carbapénémases

Les carbapénèmes sont généralement considérés comme les agents antibactériens

les plus efficaces pour le traitement des infections bactériennes multirésistantes.
Cependant, avec l'utilisation généralisée de ces antibiotiques, la prévalence des
bactéries résistantes aux carbapénèmes a augmenté rapidement. La production

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de carbapénèmases, bêta-lactamase qui peut hydrolyser les carbapénèmes, est un

des mécanismes majeurs de résistance aux carbapénèmes.Selon la classification
d'Ambler, les carbapénèmases peuvent être divisées en classes A, B et D. On
distingue les carbapénèmases de classe A sont des β-lactamases à
sérine(SME,NMC), les carbapénèmases de classe B sont des métallo-β-
lactamases (MBL) et sont constitués des plus puissantes(IMP,VIM,SPM) ,
caractérisées par la nécessité d'ions zinc sur leurs site actif et les carbapénèmases
courantes de classe D , β-lactamases à sérine, comprennent les enzymes de type
OXA.

2-3-Techniques de detection des bacteries resistantes

2-3-1 Détection de la production de BLSE

Pour la détection de la production de BLSE, il y a une méthode phénotypique et une

méthode moléculaire.

Les tests phénotypiques de détection des BLSE sont basés sur les principales
caractéristiques de ces enzymes, à savoir, qu’elles sont capables d’hydrolyser les
pénicillines, les céphalosporines de 1ère , 2ème , 3ème (ex. céfotaxime, ceftazidime)
et de 4ème génération (ex. céfépime) et les monobactames (aztréonam) ; mais elles
sont inhibées par les inhibiteurs de β-lactamases, comme l'acide clavulanique(Drieux
et al., 2008). Les tests de détection des BLSE disponibles sont le test de synergie en
double disque, le test de disque combiné et le E-test BLSE.

❖ E-test BLSE Les E-tests pour la détection phénotypique de la production de BLSE

chez les entérobactéries disponibles sont des bandelettes contenant des gradients de
céfotaxime, ou de céftazidime ou de céfépime, seuls (à une extrémité de la bandelette),

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ou associé l’acide clavulanique (à l'autre extrémité). Le test est considéré comme

positif lorsque la valeur de la CMI de l’antibiotique testé est réduite de plus de trois
fois en présence de l’acide clavulanique(Paul et al., 2017). La détection moléculaire
comprend la technique de PCR suivi d’un séquençage pour identfier les gènes de
résistance, les mutations chromosomiques associés.

2-3-2 Détection de la production de carbapénémases

La détection de la production de carbapénémases se fait par un test phénotypique et ou

un test génotypique.On détécte phénotypiquement la production de carbapénémases
par le test de Hodge modifié,le test Carba NP la méthode d’inactivation des
carbapénèmes et la culture sur milieu chromogène Chromagar mSuper Carba .
En effet,le test de Hodge modifié (MHT) est probablement l'approche la plus connue
pour la détection des carbapénémases.Ce test est basé sur l'inactivation d’un
carbapénème par des souches productrices de carbapénémases, ce qui permet à une
souche indicatrice sensible de prolonger la croissance vers un disque contenant cet
antibiotique, le long de la strie d'inoculum de la souche testée. Le MHT a montré une
excellente sensibilité dans la détection des producteurs de carbapénémases de classe A
et de classe D (entre 93% et 98%), mais une faible sensibilité pour les métallo-β-
lactamases.

Le test Carba NP, développé par Nordmann et Poirel (NP) en 2012, est une méthode
phénotypique permettant la détection des carbapénémases. Il est basé sur l'hydrolyse
in vitro de l'imipenème par un lysat bactérien, qui est détecté par des changements de
valeurs de pH à l'aide de l'indicateur rouge de phénol (rouge à jaune/orange) en 2 h
environ.L'hydrolyse de l'imipenème donne un dérivé carboxylique, qui à son tour
diminue le pH, produisant un changement de couleur résultant d'un indicateur rouge de
phénol du rouge au jaune.Ce test offre un niveau élevé de sensibilité (> 90 %) et
de spécificité (> 90 %) dans la détection de KPC, NDM, VIM, IMP, SPM et SME-type

Réalisé par LASSISSI Kafayatou 25

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carbapénémases dans ces isolats.De nombreuses variantes du test Carba NP ont

depuis été décrites avec des modifications de l'inoculum, des réactifs d'extraction, du
pH de départ, des indicateurs de pH et des temps de lecture, Tijet et ses collègues ont
proposé le test Carba NP-direct qui en plus d’être plus simple et plus rapide il est
plus sensible que Carba NP-CLSI ou il a donné des résultats très prometteurs sur la
plupart des producteurs du type OXA (détection de 38/40 souches d'acinetobacter.spp
avec OXA-like (95 %))

Le CIM a été décrit pour la première fois en 2015 . Ce test est basé sur le principe que
lorsqu'un disque de 10 µg de méropénème (MEM) est incubé pendant 2 h dans une
suspension aqueuse d'un microorganisme producteur de carbapénémase, le
carbapénème du disque est dégradé par la carbapénémase ; en revanche, si le micro-
organisme à tester ne produit pas de carbapénémase, le MEM conserve son activité
antimicrobienne après incubation dans la suspension bactérienne.Le disque est retiré
de la suspension et placé sur une boite de gélose Mueller–Hinton ensemencée avec une
suspension d'un organisme indicateur sensible aux carbapénèmes ; après une nuit
d'incubation, la zone d'inhibition est mesurée pour déterminer si le MEM a été
hydrolysé (croissance de l'organisme indicateur à proximité du disque), ou est toujours
actif (une large zone d'inhibition autour du disque).Les résultats positifs ont montré
l'absence d'une zone d'inhibition et les résultats négatifs sont apparus ＞ 20 mm de
diamètre de zone d'inhibition .

2-4-Milieux chromogènes

2-4-1 Généralités

Les milieux chromogènes sont des milieux de culture qui permettent de mettre en
évidence une enzyme spécifique d’une espèce bactérienne ou fongique ou d’un groupe
d’espèces. Ils utilisent des substrats spécifiques de cet enzyme qui après dégradation
forment des produits colorés. On identifie donc l’espèce par la coloration des colonies.

Réalisé par LASSISSI Kafayatou 26

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2-4-2 Principe des milieux chromogènes

Le principe des milieux chromogènes est qu'un substrat chromogène soit divisé par une
enzyme qui est caractéristique du micro-organisme ciblé en une composante sucre et
un chromogène. En présence d'oxygène, le chromogène forme un dimère qui colore le
bouillon ou la colonie typique. Les substrats chromogènes utilisés dans les milieux
Chromocult® confèrent des couleurs clairement identifiables à différents types de
colonies, permettant une différenciation claire et une identification des micro-
organismes.

2-4-3 CHROMagar BLSE

CHROMagar ESBL est un milieu de culture chromogène sélectif et différentiel, destiné

à être utilisé dans la détection qualitative directe d’une colonisation par des
entérobactéries résistantes aux bêta-lactamases à spectre étendu (BLSE). Il aide à la
prévention et au contrôle des BLSE dans les établissements de santé.
Les BLSE (β-lactamases à spectre étendu) sont des enzymes qui interviennent dans la
résistance aux pénicillines, aux céphalosporines de troisième génération à spectre
étendu (C3G) et aux monobactames. Les entérobactéries productrices de BLSE ont
commencé à apparaître dans les années 1980 et sont aujourd’hui l’une des infections
contractées en milieu hospitalier les plus importantes, Escherichia coli et Klebsiella
spp. étant les principales bactéries, mais d’autres espèces à Gram (-) ont également été
observées. L’émergence d’isolats producteurs de BLSE a des implications cliniques et
thérapeutiques importantes :

Les déterminants de la résistance à la production de BLSE sont transportés sur des

plasmides pouvant être facilement transmis d’un organisme à un autre.

Réalisé par LASSISSI Kafayatou 27

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La propagation de la résistance aux céphalosporines à spectre étendu pourrait

conduire à une prescription accrue de médicaments plus larges et plus coûteux.
Ces isolats résistants peuvent échapper à la détection grâce à des tests de sensibilité
de routine effectués par un laboratoire de microbiologie clinique, ce qui peut
entraîner des effets thérapeutiques indésirables. Par conséquent, la détection précoce
des porteurs de bactéries productrices de BLSE est importante pour minimiser leur
impact et la propagation des infections et personnaliser le traitement thérapeutique du
patient.
CHROMagar ESBL permet de détecter les bactéries productrices de BLSE tout en
inhibant la croissance d’autres bactéries

Figure 4 : Milieu CHROMagar BLSE(“CHROMagarTM ESBL.)

Aspect des colonies sur Chomagar BLSE

Figure 5: Acinetobacter(“CHROMagarTM ESBL,” .)

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Figure 6: Escherichia coli(“CHROMagarTM ESBL,” .)

Figure 7 : Bactéries

Coliformes (Klebsiella, (“CHROMagarTM ESBL,” )

Enterobacter, Citrobacter)

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2-4-4CHROMagar mSuper CARBA

Figure 8 : Milieu CHROMagar mSuper Carba ensemencé

CHROMagar mSuper CARBA est un milieu de culture chromogène sélectif et

différentiel, destiné à être utilisé dans la détection qualitative directe d’une colonisation
par des entérobactéries résistantes aux carbapénèmes (ERC), y compris les producteurs
d’OXA-48. Il aide à la prévention et au contrôle de la CRE dans les établissements de
santé.

Les Enterobacteriaceae résistants aux carbapénèmes (ERC) sont généralement

résistants à tous les bêta-lactamines ainsi qu’à la plupart des autres classes d’agents
antimicrobiens. Les options de traitement pour les patients infectés par des ERC sont
très limitées. Des épidémies de ERC associées aux soins de santé ont été signalées. Les
patients colonisés par des ERC sont considérés comme une source de transmission dans
le cadre des soins de santé. Identifier les patients colonisés par des ERC et placer ces
patients en isolement peut constituer une étape importante dans la prévention de la
transmission ».
CHROMagar a lancé en 2007 le premier milieu chromogène pour la détection des
bactéries résistantes aux carbapénèmes, ciblant en particulier les enzymes KPC. Depuis
lors, de nombreux carbapénémases se sont répandus dans le monde et il était donc
nécessaire de s’attaquer au problème de la détection difficile des carbapémases à faible
concentration.

Réalisé par LASSISSI Kafayatou 30

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Alain Rambach et Patrice Nordmann ont uni leurs efforts pour développer un milieu
chromogène très sensible, CHROMagar mSuperCARBA , la nouvelle génération de
milieux chromogènes qui atteint des performances sans précédent : détection d’une
grande variété de carbapénémases KPC, NDM, VIM, IMP, OXA ... Limite de détection
impressionnante (10 UFC/mL) même pour les carbapénémases faiblement exprimées
comme OXA-48, tout en maintenant un haut niveau de sélectivité.

Aspect des colonies sur CHROMagar mSuper CARBA

1 2 3

Figure 9 : Aspect des colonies sur CHROMagar mSuper CARBA

1 : Escherichia coli 2 :Acinetobacter spp 3 : Bactéries coliformes( Klebsiella,

Enterobacter, Citrobater)

Réalisé par LASSISSI Kafayatou 31

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CADRES, MATERIEL ET
METHODES

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3-1CADRES

3-1-1Cadre Institutionnel

L’école Polytechnique d’Abomey-Calavi est un établissement universitaire

public de formation professionnelle. Elle a été créée le 16 décembre 2002 par
décret. Elle est issue de la transformation de l’ex-Collège Polytechnique
Universitaire (ex-CPU), fruit de la Coopération bénino- canadienne qui avait
ouvert ses portes à ses premiers étudiants en février 1977. L’EPAC est un
établissement d’enseignement technique professionnel de l’Université
d’Abomey-Calavi. L’EPAC offre des formations initiales et des formations
continues organisées en trois cycles et réparties entre deux principaux secteurs
d’étude Biologique et Industriel

3-1-2 Cadre technique

Le présent stage s’est déroulé au Centre Hospitalier Universitaire Départemental

du Borgou-Alibori (CHUD-B/A). C’est un hôpital de troisième niveau selon la
pyramide sanitaire de la République du Bénin. Il est situé à Parakou, troisième ville à
statut particulier au nord-est du pays à 435 km de la capitale économique, Cotonou.
C’est un centre de soins, d’enseignement et de recherche en santé. Créé en 1959, est
implanté dans le quartier Banikanni et est limité : au Nord par la circonscription
scolaire de Parakou non loin de la place Bio-Guerra ; au Sud par la voie passant
devant l’ancien poste du deuxième arrondissement ; à l’Est par la Direction
Départementale de la santé et l’Ecole de Formation Médico-sociale (EFMS) ; et à
l’Ouest par l’école Primaire publique les Montagnes. Il est composé d’une

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administration et de plusieurs services à savoir : la gynécologie, la pédiatrie, la

médecine, la cardiologie, la radiologie, l’ophtalmologie, l’ORL (Ortho Rhino
Laryngologie), la stomatologie, la chirurgie, service des urgences et de la réanimation
et un service de biologie clinique multidisciplinaire où nous avons effectué notre
stage.

3-1-3 Cadre de manipulation

Toutes nos manipulations ont été faites à l’URMAPha. L’Unité de Recherche

en Microbiologie Appliquée et Pharmacologie des Substances Naturelles
(U.R.M.A.Pha) a été créée en 2017 en tant qu’Unité de recherche Trans
facultaire. Elle est constituée d’un accueil, du bureau de Directeur, d’un
laboratoire et d’une salle de travail. Le laboratoire est composé de deux
paillasses de manipulation. Les analyses Biochimiques, hématologiques et
bactériologiques y sont réalisées. Le laboratoire dispose d’un Poste de Sécurité
en Microbiologie, d’un microscope, d’un autoclave, d’un agitateur magnétique,
d’un agitateur vortex, d’un spectrophotomètre et d’un automate d’hématologie.
La vision du laboratoire est d’être une unité nationale d’excellence ou les
scientifiques travaillent ensemble pour trouver des solutions aux problèmes
sanitaires et environnementaux d’importance majeure au Bénin et en Afrique.

3-2 MATERIELS

3-2-1 Matériel biologique

Le matériel biologique était constitué d’écouvillonnage de surfaces inertes, de

matériels stérilisés ou nettoyés

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Figure 10 : Surfaces de prélèvements

3-2-2 Equipements

Des équipements tels que : des réfrigérateurs, des microscopes, un autoclave, des
bouteilles de gaz, de bec bunsen, des éprouvettes graduées, une balance de précision,
une étuve à 37°C, centrifugeuse et des portoirs ont servi pour la réalisation de l’étude.

3-2-3 Consommables et réactifs

Tableau I : Liste des consommables utilisés

Matériel Rôles
Boîtes de pétri Conteneurs des milieux de culture
Anses de platine Ensemencement
Ecouvillons Prélèvement
Gants Protection du manipulateur
Milieu mSuper Carba Détection des bactéries productrices de
Carbapénémases
Milieu CHROMagar BLSE Détection présomptive des bactéries
productrices de BLSE
Bouillon TS Pré enrichissement des bactéries

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3-3 Méthodes

3-3-1 Type d’étude

Il s’est agi d’une étude prospective et descriptive qui a eu lieu du 05 Juin au 25 Août
2023

3-3-2 Collecte des échantillons

Il a été collecté au total 50 échantillons. Avant l’écouvillonnage, il a été ajouté 1ml

d’eau physiologique aux écouvillons dans un champ stérile. Après la stérilisation des
matériels et le nettoyage des matériels et équipements, ils ont été écouvillonnés en deux
exemplaires.

3-3-3 Analyse microbiologique

3-3-3-1 Pré-enrichissement des écouvillons

Les prélèvements ont été enrichis dans 2ml de bouillon TS et ont ensuite été incubé
pendant 6h de temps à l’étuve 37°C.
3-3-3-2 Isolement des bactéries productrices de BLSE et de
Carbapénémases
Les échantillons ont d’abord été mis en pools par lieu de prélèvement.

Les échantillons ont été ensemencés sur les milieux CHROMagar mSuper Carba et
CHROMagar BLSE par la méthode du quadrant et ont été incubés à l’étuve pendant
24h à 37° . Les colonies isolées ont ensuite été repiquées sur ces milieux
chromogéniques pour obtenir des cultures pures.

Réalisé par LASSISSI Kafayatou 36

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Figure 11: Aspect des colonies sur CHROMagar mSuper Carba

3-3-4 Identification présomptive des types de bactéries isolées

L’identification de(s) micro-organisme(s) se fait en fonction de la couleur des colonies

Ensemencement sur BLSE

Incubation pendant 18h-24h

Coloration des colonies

Colonies Colonies Colonies

roses
Bleu_turquoises blanches
blanches

Escherichia coli Klebsiella,Enterobacter, Acinetobacter productrice

de β-lactamase Citrobacter productrice de β-lactamase
de β-lactamase
Figure 12 : Techniques d’identification sur CHROMagar BLSE

Réalisé par LASSISSI Kafayatou 37

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Ensemencement sur Carba

Incubation pendant 18h-24h

Coloration des colonies

Colonies Colonies Colonies

Roses Blanches
Bleu turquoises

Klebsiella, Acinetobacter
Escherichiacoli Enterobacter,
Productricesde Productrices de
Citrobacter Carbapénémase
Carbapénémase Productrices d
Carbapénémase

Figure 13 : Techniques d’identification sur CHROMagar mSuper CARBA

Réalisé par LASSISSI Kafayatou 38

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RESULTATS ET DISCUSSIONS

Réalisé par LASSISSI Kafayatou 39

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4-1- Résultats

Cette étude nous a permis de collecter 50 écouvillons dans les services de Néonatologie
et de chirurgie.

4-1-1 Répartition des échantillons collectés par service

TableauII : Répartition des échantillons collectés par service

SERVICES TYPES NOMBRE Proportions

D’ECHANTILLONS D’ECHANTILLONS

Chirurgie Matériels stériles 04 14%

Matériels décontaminés 04 14%

Surfaces de soins 21 72%

décontaminés
Total 29 100%

Néonatologie Matériels stériles 06 29%

Matériels décontaminés 06 29%

Surfaces de soins 09 42%

décontaminés
Total 21 100%

Réalisé par LASSISSI Kafayatou 40

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4-1-2 Répartition des différents types de matériels

Tableau III : Répartition des différents types de matériels

Catégories de matériels Nombre d’écouvillons PROPORTIONS

Matériels de soins stériles 10 50%
Matériels ou équipements 10 50%
décontaminés
Total 20 100%

4-1-3 Répartition des différents types de surfaces

Tableau IV : Répartition des différents types de surfaces

Catégories de surfaces Nombre d’écouvillons Proportions

Potence 08 27%
Sinks 06 20%
Clenches de porte 04 13%
Lit 06 20%
Robinet 04 13%
Berceau 02 7%
Total 30 100%

Réalisé par LASSISSI Kafayatou 41

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4-1-4 Répartition des échantillons positifs

De l’analyse de cette figure, il ressort que 14% des cultures bactériologiques à partir
de surfaces nettoyées sont positives suivi de 10% à partir des matériels
désinfectés qui ont été positives.

100%
100% 90%
86%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
14%
20% 10%
10% 0%
0%
Matériels stériles Matériels Surfaces nettoyées
décontaminés

Positives Négatives

Figure 14 : Répartition des échantillons positifs

4-1-5 Répartition des échantillons positifs sur mSuper CARBA

De l’analyse de cette figure il ressort que les surfaces de soins sont plus contaminés
par les bactéries productrices de carbapénémases en Chirugie

Réalisé par LASSISSI Kafayatou 42

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75%
80%
70%
60%
50%
40%
25%
30%
20%
10% 0% 0% 0% 0%
0%
Matériels stériles Matériels Surfaces nettoyés
décontaminés

Néonatologie Chirugie

Figure 15 : Répartition des échantillons positifs sur mSuper CARBA

4-1-6 Répartition des échantillons positifs sur CHROMagar BLSE

De l’analyse de cette figure , il ressort que les surfaces de soins sont les plus
contaminés par les entérobactéries productrices de BLSE et qu’il y a plus de
contamination en Chirugie qu’en Néonatologie

60%
60%

50%

40%

30%
20% 20%
20%

10%
0% 0% 0%
0%
Matériels stériles Matériels Surfaces
décontaminés nettoyés

Néonatologie Chirugie

Figure 16: Repartition des échantillons positifs sur CHROMagar BLSE

Réalisé par LASSISSI Kafayatou 43

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4-1-7 Identification présomptive des entérobactéries productrices de

carbapénémases sur CHROMagar BLSE

Tableau V: Identification présomptive des entérobactéries productrices de

carbapénémases sur CHROMagar BLSE

Identification Type d’échantillons Total

présomptive Matériels Matériels Surfaces
stériles décontaminés décontaminées
Acinetobacter 00 01 02 60% (03)
spp
Coliformes 00 00 02 40% (02)
(Enterobacter,
Citrobater,
Klebsiella)

Escherichia coli 00 00 00 0%
Pseudomonas 00 00 00 0%
spp
Total 00% 20%(01) 80% (04) 100% (05)

Réalisé par LASSISSI Kafayatou 44

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Il ressort de l’analyse de ce tableau que 60% des entérobactéries productrices de

carbapénémases isolées sur CHROMagr BLSE sont des bactéries du genre
Acinetobacter spp suivi de 40% qui sont des bactéries coliformes. Les surfaces sont les
plus contaminées (80%) suivi des matériels décontaminés (20%)

4-1-8 Identification présomptive des entérobactéries productrices de

carbapénémases sur mSuper Carba

Tableau VI: Identification présomptive des entérobactéries productrices de

carbapénémases sur mSuper Carba

Identification Type d’échantillons Total

présomptive Matériels Matériels Surfaces
stériles décontaminés décontaminées
Acinetobacter 00 00 00 0%
spp
Coliformes 00 01 03 100% (04)
(Enterobacter,
Citrobater,
Klebsiella)

Escherichia coli 00 00 00 00
Effectif (%) 00% 25%(01) 75% (03) 100% (04)

Il ressort de l’analyse de ce tableau que 100% des entérobactéries productrices de

carbapénémases isolées sur mSuper Carba sont des bactéries coliformes. Les surfaces
sont les plus contaminées (75%) suivi des matériels décontaminés (25%)

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 Apport des milieux chromogeniques dans la detection presomptive des enterobacteries productrices de
betalactamases et de carbapenemases isolees des materiels sterile et surfaces de soins decontaminees du
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4-2 Discussion

L’objectif de notre étude était de rechercher les bactéries productrices de BLSE et de

carbapénémases dans les échantillons d’écouvillons de matériels de soins stériles et
surfaces de soins décontaminés à partir des milieux chromogéniques. Il a été collecté
50 écouvillons de divers matériels stérilisés, matériels ou équipements désinfectés et
de surfaces nettoyées dans les services de Néonatologie et de Chirugie au CHUD-B/A.
Il a été recherché des bactéries productrices de BLSE et de Carbapénémases dans des
échantillons d’écouvillons de surfaces, du matériel médico technique après nettoyage
et stérilisation. Plusieurs études ont été menées dans ce sens pour apprécier l’un ou
l’autre des éléments retenus dans notre étude. C’est le cas (Ahoyo et al., 2007), qui à
travers ces travaux a ressorti l’incidence des souches de Escherichia coli productrices
de BLSE isolées de l’environnement hospitalier. La méthode utilisée pour l’étape de
pré-enrichissement est similaire à la nôtre. Les prélèvements environnementaux ont été
faits à partir d’écouvillon stérile préalablement humidifié avec de l’eau physiologique.
Après écouvillonnage, le milieu est immédiatement plongé dans un tube contenant le
bouillon nutritif TS. Sur la base des milieux chromogènes utilisés, il a été révélé que
les matériels stérilisés sont exempts de bactéries productrices de BLSE et de
carbapénémases. Seulement 10% des matériels désinfectés abritent des bactéries
productrices de BLSE et de carbapénémases. Similairement, les surfaces de soins
désinfectées étaient contaminées à 14% d’entérobactéries productrices de BLSE et de
carbapénémases. Ces faibles proportions pourraient s’expliquer par la haute
décontamination des locaux des services effectuées avant le prélèvement. Ceci permet
d’évaluer l’impact de nouvelles mesures de nettoyage, désinfection et de stérilisation.
Il y a plus de bactéries productrices de BLSE et de Carbapénémases en Chirugie qu’en
Néonatologie. Cependant , des germes ont toutefois été retrouvés .Il a été déterminé de
manière présomptive que 60% des entérobactéries productrices de carbapénémases
isolées sur CHROMagar BLSE sont des bactéries du genre Acinetobacter spp suivi de

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40% qui sont des bactéries coliformes. Les surfaces sont les plus contaminées (80%)
suivi des matériels décontaminés (20%). 100% des entérobactéries productrices de
carbapénémases isolées sur mSuper Carba sont des bactéries coliformes. Les surfaces
sont les plus contaminées (75%) suivi des matériels décontaminés (25%). Il n’y a pas
eu de souches de E.coli isolées productrices de BLSE dans les échantillons de surfaces.
Ces résultats concordent avec les résultats de (Ahoyo et al., 2007) qui ont montré que
les surfaces comme les clenches de portes, les tables d’examens , les chariots de soins
étaient exemptes de E.coli productrices de BLSE.
Cependant, il serait plus judicieux de confirmer les résultats de la culture sur les milieux
chromogènes grâce à des techniques de PCR pour l’isolement des gènes de résistance.

Réalisé par LASSISSI Kafayatou 47

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CONCLUSION

En somme, la résistance anti microbienne est un véritable problème de santé

publique. Malgré les nombreuses actions entreprises par l’OMS, la situation reste
sombre. Parmi les facteurs favorisant l’émergence des bactéries résistantes, figure le
manque d’hygiène dans nos hôpitaux. Il existe un lien étroit entre l’hygiène et la
dissémination des bactéries résistantes. L’hygiène en milieu hospitalier passe par la
stérilisation des matériels de soins et une décontamination adéquate de
l’environnement hospitalier. Les résultats obtenus dans notre étude révèlent que ces
procédés d’élimination des micro-organismes sont plus ou moins efficaces dans les
services de Néonatologie et de Chirugie du CHUD-B/A.

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TABLE DES MATIERES

LISTE DES ENSEIGNANTS ET MATIERES ENSEIGNEES................................. 3

DEDICACE ................................................................................................................. 4
REMERCIEMENTS ................................................................................................... 5
HOMMAGES .............................................................................................................. 6
LISTE DES SIGLES ET ABREVIATIONS .............................................................. 7
LISTE DES TABLEAUX ........................................................................................... 8
LISTE DES FIGURES ................................................................................................ 9
RESUME ................................................................................................................... 10
ABSTRACT .............................................................................................................. 11
SOMMAIRE.............................................................................................................. 12
INTRODUCTION ..................................................................................................... 13
SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE ......................................................................... 16
1-1-Hygiène en milieu hospitalier .......................................................................... 17
1-1-1 Les dispositifs médicaux et surfaces de l’environnement hospitalier ....... 17
1-1-2 Désinfection et stérilisation ....................................................................... 18
1-1-2-1 Définitions .............................................................................................. 18
1-2-RESISTANCE DES BACTERIES AUX ANTIBIOTIQUES ........................... 20
1-2-1 Résistance des bactéries aux betalactamines ............................................. 21
1-2-1-1 Généralités.............................................................................................. 21
1-2-1-2 Mécanismes de résistance aux β-lactamines .......................................... 21
1-2-2 Résistance aux carbapénèmes ................................................................... 22
1-2-2-1 Généralités.............................................................................................. 22
1-2-2-2 Mécanismes de résistance aux carbapénèmes ....................................... 23
1-3-Techniques de detection des bacteries resistantes ........................................... 24
1-3-1 Détection de la production de BLSE ......................................................... 24
1-3-2 Détection de la production de carbapénémases ........................................ 25

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1-4-Milieux chromogènes ...................................................................................... 26

1-4-1 Généralités ................................................................................................ 26
1-4-2 Principe des milieux chromogènes ............................................................ 27
1-4-3 CHROMagar BLSE ................................................................................... 27
1-4-4CHROMagar mSuper CARBA .................................................................. 30
CADRES, MATERIEL ET METHODES ................................................................ 32
2-1CADRES ........................................................................................................... 33
2-1-1Cadre Institutionnel .................................................................................... 33
2-1-2Cadre technique .......................................................................................... 33
2-1-3 Cadre de manipulation .................................................................................. 34
2-2 MATERIELS ................................................................................................... 34
2-2-1 Matériel biologique ................................................................................... 34
2-2-2 Equipements .............................................................................................. 35
2-2-3 Consommables et réactifs .......................................................................... 35
2-3 Méthodes .......................................................................................................... 36
2-3-1 Type d’étude .............................................................................................. 36
2-3-2 Collecte des échantillons ........................................................................... 36
2-3-3 Analyse microbiologique .......................................................................... 36
2-3-4 Identification présomptive des types de bactéries isolées ......................... 37
RESULTATS ET DISCUSSIONS............................................................................ 39
3-1- Résultats.......................................................................................................... 40
3-1-1 Répartition des échantillons collectés par service ..................................... 40
3-1-2 Répartition des différents types de matériels ............................................ 41
3-1-3 Répartition des différents types de surfaces .............................................. 41
3-1-4 Répartition des échantillons positifs ......................................................... 42
3-1-5 Répartition des échantillons positifs sur mSuper CARBA ....................... 42
Figure 15 : Répartition des échantillons positifs sur mSuper CARBA .................... 43
3-1-6 Répartition des échantillons positifs sur CHROMagar BLSE ................. 43
3-1-7 Identification présomptive des entérobactéries productrices de
carbapénémases sur CHROMagar BLSE ........................................................... 44

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3-2 Discussion ........................................................................................................ 46

CONCLUSION ......................................................................................................... 48
BIBLIOGRAPHIE .................................................................................................... 52

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