Umba et al., 2022 Journal of Animal & Plant Sciences (J.Anim.Plant Sci.
ISSN 2071-7024)
Vol.52 (2) : 9464-9473 https://doi.org/10.35759/JAnmPlSci.v52-2.4
Effets inhibiteurs des extraits des rhizomes de
Zingiber officinale et des extraits de Capsicum
frutescens dans le développement de l’Aspergillus
flavus et la production des aflatoxines
Umba di M’balu Joachim1, Diafuka Nkiambi Jean Jacques Héribert2, Pululu Mfuidi Nitu
Gilbert3, Kindele Ntinunu Edouard4
1 Université Loyola du Congo, B.P. 3724 Kinshasa-Gombe et Université Pédagogique Nationale de Kinshasa, B.P. 8815
Kinshasa-Ngaliema
2 Institut Supérieur Agrovétérinaire Saint Pierre Canisius, B.P. 3724 Kinshasa-Gombe et Paroisse Notre Dame de Fatima-
Matadi, B.P. 29 Matadi-Kongo Central
3 Institut Supérieur Pédagogique de la Gombe, B.P. 256 Kinshasa-Gombe et Université Loyola du Congo, B.P. 3724 Kinshasa-
Gombe
4Institut Supérieur Agrovétérinaire Saint Pierre Canisius, B.P. 3724 Kinshasa-Gombe et Université de Kinshasa, B.P 190,
Kinshasa XI (à titre posthume)
Auteur Correspondant E-mail :
[email protected]Mots-clés : Effets inhibiteurs, Zingiber officinale, Capsicum frutescens, Aspergillus flavus et Aflatoxines,
Keywords : Inhibitory effects, Zingiber officinale, Capsicum frutescens, Aspergillus flavus and Aflatoxins.
Submission 12/03/2022, Publication date 31/05/2022, http://m.elewa.org/Journals/about-japs/
1 RESUME
Selon l’OMS (2018), les aflatoxines sont des substances toxiques produites par certains types
de champignons (moisissures) présents naturellement partout dans le monde ; elles peuvent
contaminer les cultures alimentaires et constituent une menace grave pour les humains et le
bétail. Ce travail se veut une contribution à la valorisation des plantes locales en les proposant
dans l’inhibition dans la production des aflatoxines. Pour ce faire, les extraits de rhizomes de
gingembre et les extraits de piment cultivés dans deux milieux différents (farine de maïs
mélangée avec de l’eau et Czapeck) ont été utilisés pour déterminer leurs effets inhibiteurs
sur ces mycotoxines. Le traitement à l’acide acétique (CH3COOH) qui est un acide
organique (acide éthanoïque) naturellement présent dans le vinaigre présente le meilleur
résultat par rapport au traitement au gingembre et au traitement au piment.
ABSTRACT
According to WHO (2018), aflatoxins are toxic substances produced by certain types of fungi
(molds) that occur naturally all over the world; they can contaminate food crops and pose a
serious threat to humans and livestock. This work is intended as a contribution to the
enhancement of local plants by proposing them in the inhibition in the production of
aflatoxins. To do this, ginger rhizome extracts and chilli extracts grown in two different media
(corn flour mixed with water and Czapeck) were used to determine their inhibitory effects on
these mycotoxins. Acetic acid (CH3COOH) which is an organic acid (ethanoic acid) naturally
present in vinegar treatment has the best result compared to ginger treatment and chilli
treatment.
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2 INTRODUCTION
Les aliments constituent souvent un véhicule de chez l’homme (www.efsa.europa.eu/efsajournal
pathogènes ou de substances nuisibles à la santé. consulté le 13 février 2022 à 13h16). Dans ces
Les agents pathogènes contaminant les denrées régions donc, le phénomène est si important
alimentaires se développent suite à des qu’il exige toujours une attention particulière. Le
négligences lors des manipulations, la développement des aflatoxines dans les denrées
conservation et la commercialisation (Umba et alimentaires, spécialement dans les céréales et
al., 2018). Les moisissures colonisent l’arachide, leurs conséquences sur la santé
régulièrement les denrées et synthétisent des humaine, animale et même sur les économies
mycotoxines qui sont excrétées dans le milieu obligent des études approfondies et une
(Harley et al., 2003 cités par Umba et al., recherche des moyens de lutte efficaces. Parmi
2018).Parmi ces mycotoxines, les aflatoxines les denrées consommées par les populations
sont les plus étudiées à cause de leurs effets congolaises, beaucoup sont souvent
nocifs sur la santé humaine et animale. Les contaminées par l’Aspergillus flavus : c’est le cas de
aflatoxines sont des molécules à structure l’arachide, du manioc, du maïs, de la patate
polycyclique qui seraient associées au douce, du plantain et du riz (Masimango, 1987 ;
métabolisme de la reproduction des Aspergillus Umba et al., 2018 ; Martin et al., 1999).
aflatoxigènes (Martin et al., 1999). Elles peuvent Cependant, la flore de notre pays regorge
être ingérées en consommant les denrées beaucoup d’espèces à partir desquelles il est
contaminées ou en les inhalant lors de leur possible de tirer diverses substances naturelles et
manipulation pendant les différentes moutures en faire plusieurs utilisations notamment dans
en farine (Masimango, 1978 ; Simba, 2006 ; l’industrie pharmaceutique, cosmétique,
Umba et al., 2018). Elles sont des substances alimentaire. Deux espèces ont fait l’objet de cette
toxiques (produites par des moisissures du genre étude, entre autre Zingiber officinale et Capsicum
Aspergillus (A. flavus et A. niger) et sont des frutescens. Ces plantes possèdent diverses vertus
mycotoxines susceptibles de contaminer les thérapeutiques éprouvées ; elles auraient un
denrées alimentaires (Martin et al., 1999). Des pouvoir antiseptique et seraient d’une bénéfique
estimations nationales de l’exposition action antifongique. Notre étude se veut « une
alimentaire aux aflatoxines font apparaître des contribution à la valorisation des plantes
différences entre pays développés et en locales » en les proposant dans l’inhibition dans
développement. Dans les premiers, les la production des aflatoxines. Nous pensons
expositions alimentaires moyennes aux donc utiliser les extraits de rhizomes de
aflatoxines sont généralement inférieures à 1 gingembre et les extraits de piment pour
ng/kg de poids corporel et par jour (un déterminer leurs effets inhibiteurs sur ces
nanogramme correspond à un milliardième de mycotoxines. L’intérêt pour cette étude se
gramme), tandis que pour certains d’Afrique rattache à la fois au besoin de lutter contre des
subsaharienne, ces estimations dépassent 100 toxines, qui de plus en plus endeuillent de
ng/kg de poids corporel et par jour, mais nombreuses familles et causent des pertes dans
reposent souvent sur des données très limitées certains élevages et cultures, et à celui de réaliser
(https://www.who.int/foodsafety/FSDigest_A la lutte avec des moyens financiers très
flatoxins_FR.pdf). En zones équatoriales et modiques. Ceci permettrait ainsi à bon nombre
tropicales, en effet, l’humidité et la chaleur de gens, sinon à tous, d’accéder à des remèdes
permettent une multiplication facile et rapide des que tout le monde peut trouver partout sur
moisissures. Les aflatoxines sont génotoxiques l’étendue du territoire national.
et causent des carcinomes hépatopcellulaires
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3 MATERIEL ET METHODES
3.1 Matériel végétal : deux espèces s’étendra ensuite rapidement jusqu’en Afrique
végétales ont été utilisées dans occidentale grâce aux colons portugais (Butin,
l’expérimentation : 2017). Dans toute l’Afrique, les racines sont très
3.1.1 Zingiber officinale (Photo 1) : est une appréciées comme aphrodisiaque, pour traiter
plante dont l’origine exacte est inconnue, mais de les dysfonctions sexuelles, prévenir l’éjaculation
nombreux pays du continent asiatique l’utilisent précoce et augmenter la production de sperme et
depuis des millénaires à la fois comme aussi lutter contre les hémorroïdes (Bayiha,
condiment et comme plante médicinale (en effet 2011). Le gingembre est une plante dressée
le rhizome de gingembre est très employé dans herbacée persistante, atteignant 1 m de hauteur
la médecine ayurvédique indienne et dans la et poussant à partir d’un rhizome odorant. Elle
médecine traditionnelle chinoise (Butin, 2017). est souvent cultivée comme une plante annuelle
L’implantation du gingembre en Afrique a lieu et sa récolte se fait 9 à 10 mois après la
au XIIIe siècle, grâce au commerce entre les plantation. La plante appartient à la famille de
Arabes avec l’Afrique de l’Est. Sa culture Zingiberaceae (Latham et Konda, 2006).
Photo 1 : Zingiber officinale (Gingembre)
Source : Butin (2017)
3.1.2 Capsicum frutescens : arbuste douleurs de muscles, le lumbago et la sciatique
persistant qui vit environ 2 à 3 ans. Il atteint 1,25 (Latham et Konda, 2006). La plante est
m de haut. Les fruits sont petits, longs de 1 à 2 originaire d’Amérique tropicale et appartient à la
cm ; ils sont verts au début et deviennent rouge famille de Solanaceae
lorsqu’ils sont mûrs (Photo 2). Les feuilles et les (https://fr.wikipedia.org/wiki/
fruits ont des usages médicinaux : ils traitent la Capsicum_frutescens).
polyarthrite rhumatoïde, les entorses, les
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Photo 2 : Capsicumfrutescens (Piment Cayenne)
Source : https://www.exotic-seeds.store/nl/home/rawit-chili-seeds-capsicum-
frutescens.html consulté le 13 février 2022 à 15h11
3.1.3 Milieu de culture : deux milieux de (milieu de Czapeck) et un milieu naturel (farine
culture ont été utilisés : un milieu synthétique de maïs) (Photo 3).
Photo 3 : Farine de maïs (Zeamays) Photo 4 : Champ de maïs (Zeamays)
Source : https://www.gastronomiac.com/ Source : Image personnelle
glossaire_des_produi/farine-de-mais/ consulté
le 13 février 2022 à 15h27
3.1.4 Souche d’Aspergillus flavus : la Type Culture Collection). Cette souche produit
souche utilisée est d’origine américaine, l’aflatoxine B1.
identifiée par le n°10124 de l’ATCC (American
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Tableau 1 : Présentation du milieu Czapeck
Composition Quantité pour 1000 ml d’eau
NaNO3 2g
KH2PO4 1g
KCl 0,5 g
MgSO4 0,5 g
FeSO4 0,01 g
Saccharose 30 g
Extrait de levure 2g
H2O distillée 1000
3.2 Méthodes déjà constitué et auquel il ne manquait que
3.2.1 Préparation du milieu naturel : maïs : l’extrait de levure, nous avons :
Le milieu « maïs » utilisé est liquide. La a) Peser 35 g de différents sels
préparation de ce milieu a connu les étapes b) Mesurer 1000 ml d’eau distillée et pesé 2 g
suivantes : d’extrait de levure
- Maïs préalablement moulu dont la quantité c) Faire le mélange avec les différents sels
utilisé est de 20 g pour 1000 ml d’eau distillée ; d) Homogénéiser et filtré la solution
- 2 g d’extrait de levure ajouté au mélange e) Mettre dans l’autoclave pendant 15’ à 121 °C
(farine de maïs-eau distillée) ; sous une pression inférieure à 2 bars et refroidir.
- Une fois homogénéisée, la solution est filtrée 3.2.3 Préparation de l’inoculum :
et stérilisée à l’autoclave pendant 15 minutes à L’inoculum a été préparé dans le milieu Czapeck
121°C sous une pression inférieure à 2 bars et à 25°C. L’incubation, prévue pour une durée de
- Enfin refroidir la solution 7 jours, s’est prolongée à 14 jours en raison du
3.2.2 Préparation du milieu Czapeck : En très lent développement de la souche dans le
présence d’un En présence d’un milieu presque milieu de culture.
Photo 5 : Développement de la souche d’Aspergillus flavus
A gauche : milieu avec inoculum ; à droite : milieu sans inoculum
3.2.4 Préparation des extraits de plantes : de façon différente pour chacune des plantes
La préparation des extraits des plantes s’est faite utilisées :
a) Gingembre
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Débarrasser le gingembre de l’écorce Pour ce faire, avec une pipette, 5 gouttes de
superficielle et bien nettoyer à l’eau courante de l’inoculum ont été injectées dans chaque flacon
façon à rendre le rhizome tout blanc ; contenant au moins 125 ml du milieu naturel
Peser 20 g pour 100 ml d’eau distillée stérile ; préparé.
Désinfecter avec de l’alcool à 70% pendant 3.4 Traitement : En ce qui concerne le
au moins 5 minutes ; traitement, signalons d’abord que nous avons
utilisé 16 flacons répartis de la façon suivante : 4
Rincer à 3 reprises avec de l’eau distillée
flacons pour les témoins, 4 pour l’acide acétique,
stérile dans un récipient (bocal) aseptique ;
4 pour le gingembre et 4 pour le piment. En
Faire passer au mixeur électronique pour le comparaison avec les travaux antérieurs, Umba
broyage et et all 2020, il ressort de ces travaux que l’acide
Recueillir proprement le produit du broyage acétique freine le développement l’Aspergillus
et filtrer pour obtenir seulement du jus. Flavus et pourrait donc être exploité dans le
b) Piment cadre de la lutte contre ce champignon dans
Débarrasser le piment de son pédoncule et certaines denrées alimentaires Pour notre
bien nettoyer à l’eau courante ; expérience, nous avons utilisé 5 ml d’acide
Peser 20 g pour 100 ml d’eau distillée stérile ; acétique, 5 ml d’extrait de gingembre et 5 ml
Désinfecter avec de l’alcool à 70% pendant d’extrait de piment. L’incubation se faite
au moins 5 minutes ; pendant 9 jours à 25°C.
Rincer à 3 reprises avec de l’eau distillée 3.5 Obtention du poids sec du mycélium
stérile dans un récipient (bocal) aseptique ; - Recueillir la partie surnageant du mycélium
Faire passer au mixeur électronique pour le et la mettre sur papier filtre pesé à l’avance ;
broyage et - Sécher le mycélium à l’étuve ;
Recueillir proprement le produit du broyage - Peser le mycélium et papier après séchage ;
et filtrer pour obtenir seulement du jus. - Faire la différence des poids de la deuxième
3.3 Ensemencement de l’inoculum : pesée (mycélium sec et papier) et de la première
L’ensemencement a été opéré dans un milieu pesée (papier seulement) pour obtenir le poids
stérile (sous hotte à flux laminaire avec flamme). du mycélium
- .
4 RESULTATS
Tableau 2 : Poids sec de mycélium
Poids du mycélium (g)
Traitement Répétitions Total moyenne %
T0 0,12 0,06 0,12 0,11 0,41 0,1025 100
T1 0,20 0,27 0,20 0,16 0,83 0,2075 202,44
T2 0,26 0,17 0,3 0,13 0,86 0,215 209,76
T3 0,15 0,39 0,28 0,25 1,07 0,2675 260,98
Légende : T0 = témoin ;
T1 = traitement à l’acide acétique ;
T2 = Traitement aux extraits de gingembre ;
T3 = Traitement aux extraits de piment
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Le taux d’inhibition a été calculé en considérant autres qui n’ont aucun effet sur la couleur, le
comme équivalent à 100% le développement de développement du mycélium est plus accru.
la souche d’A. flavus dans T0.Comme on peut le Selon les résultats à notre portée, les différences
remarquer à travers ce tableau, les constats entre les divers traitements sont :
suivants ont été observés : - de 0,165 g entre le T3 et le T0, de 0,06 g entre
1. en tenant compte de la moyenne et du le T3 et T1, de 0,0525 g entre le T3 et T2 ;
pourcentage : - de 0,1125 g entre le T2 et T0, de 0,0075 g
faible développement du mycélium dans le entre T2 et T1 ;
témoin non traité (T0) comparativement aux - de 0,1050 g entre le T1 et T0 ;
échantillons traités ; le T2, est par rapport au T3, la meilleure
le T1, soit le traitement à l’acide acétique, indication contre la croissance mycélienne d’A.
présente le meilleur résultat par rapport au T2 flavus.
(traitement au gingembre) et au T3 (traitement au 2. En tenant compte de diverses répétitions :
piment). Cependant, les résultats sont beaucoup Une grande variabilité de la croissance
plus rapprochés entre l’acide acétique et le mycélienne dans les cultures analogues, à
gingembre qu’entre l’acide acétique et le piment ; l’exception de deux cas : dans le T0 et T1, la
dans le T3, malgré la forte influence que le première et la deuxième répétition présentent les
piment a sur la couleur de l’ensemble de la mêmes résultats.
solution (coloration rougeâtre) par rapport aux
Photo 4 : Développement du mycélium dans les différents échantillons
De gauche à droite : Gingembre, témoin non traité, acide acétique et piment
5 DISCUSSION
Au regard des résultats que présentent le tableau croissance mycélienne moins importante que les
2 et des considérations faites en rapport avec le milieux traités. Cette situation peut connaître
même tableau, il y’a lieu de constater que l’acide quelques explications :
acétique a une action inhibitrice plus efficace sur Le milieu naturel utilisé peut avoir une incidence
le développement de mycélium d’A flavus que les dure le développement du champignon et les
plantes antifongiques choisies. Mais, extraits des plantes qui ont servi au traitement
paradoxalement, le témoin T0 a présenté une pourraient eux-mêmes constituer des nutriments
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pour le champignon et favoriser donc son favorisé le développement du champignon, mais
développement. Mais que dire alors du que la synergie de ces facteurs avec la
traitement à l’acide acétique qui n’a pas aussi température est aussi déterminante. S’il est
donné les résultats escomptés ? reconnu des vertus antiseptiques et même
Dans ce cas, si l’on ne peut mettre en cause le antibiotiques aux plantes utilisés pour le
milieu utilisé, on doit s’interroger sur la qualité traitement, mais que dans notre cas elles se
de l’acide acétique utilisé. N’oublions pas, en soient avérées très peu efficaces, on peut se
effet, que c’est de l’acide que nous avons trouvé demander si les doses utilisées sont suffisantes.
déjà dilué sur le marché. On sait que les Nous n’avons pas obtenu des résultats
moisissures se développent à des températures escomptés bien que plusieurs auteurs (Manima
très étalées et que la propension à leur 2004, Umba 2004, Muhuruka 2005, Ivami 2006,
développement augmente avec la température. Khasa 2006, Luyila 2006, Makuba 2007)
Considérant, en ce qui nous concerne, que 25°C affirment que l’acide acétique a une influence sur
constitue une bonne moyenne à une excellente le développement d’Aspergillus Flavus. Malgré
croissance mycélienne, il y’a lieu de croire que les doses utilisées, l’acide acétique était falsifié,
non seulement le milieu et les extraits utilisés ont n’était pas pur.
6 CONCLUSION
Notre étude a porté sur la possibilité d’inhiber la toute recherche visant à mener une lutte
croissance mycélienne d’A. flavus et la antitoxine sur base de ces plantes. En effet, nous
production des aflatoxines en utilisant les plantes avons effectué nos études dans des conditions
locales. Pour ce faire, nous avons choisi de bien particulières, pouvant être améliorés pour
travailler avec le gingembre et le piment, des parvenir à des résultats probants. Parmi ces
plantes auxquelles on reconnaît de nombreuses conditions, on peut retenir les concentrations
vertus médicinales et qui sont très exploités dans des extraits de plantes et les doses. Il est
la tradithérapie. Après avoir évoqué les important de ne pas perdre de vue que l’acide
caractéristiques aussi bien du champignon et de acétique utilisé n’a pas fourni de bons résultats.
ses toxines que des plantes « antifongiques », Tout en considérant donc que les recherches
nous avons expérimenté l’action inhibitrice de peuvent se poursuivre sur les plantes, nous
celles-ci sur le développement du champignon. recommandons l’usage des produits dont la
De ces expériences, il se révèle qu’à ce stade de qualité est éprouvée. Nous espérons cependant,
recherche, nous ne pouvons pas encore en dépit de tout, que ces lignes auront apporté
prétendre lutter contre les aflatoxines avec le leurs contributions au progrès des recherches
gingembre et le piment, leur action sur la qui, si elles s’avéraient concluantes,
croissance mycélienne du champignon qui épargneraient l’humanité de tant des deuils et
produit ces toxines n’étant pas très significatives. d’énormes pertes économiques.
Nous ne pouvons pas aussi, de ce fait, rejeter
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d’aflatoxines) contaminant certains rawit-chili-seeds-capsicum-
produits alimentaires. Projet de thèse de frutescens.html
doctorat en Sciences agronomiques,
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Umba et al., 2022 Journal of Animal & Plant Sciences (J.Anim.Plant Sci. ISSN 2071-7024)
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_produi/farine-de- afety/FSDigest_Aflatoxins_FR.pdf
mais/https://www.justebio.bio/le- www.efsa.europa.eu/efsajournal
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