A.
Service de biochimie
Dosage de l’urée et de la créatinine
En effet les dosages permettent d’évaluer la fonction rénale en mesurant les niveaux
d’urée et de créatinine dans le sang. Les niveaux d’urée et de créatinine dans le sang
augmentent en cas de dysfonctionnement rénal. Ils sont donc utilisés pour
diagnostiquer et surveiller les maladies rénales.
Mode opératoire
Le dosage de la créatinine au spectrophotomètre est une méthode couramment utilisée
en biochimie clinique pour évaluer la fonction rénale. Voici un mode opératoire général
pour cette analyse :
- Spectrophotomètre - Tubes à essai - Pipettes - Réactifs (par exemple, réactif de Jaffé)
- Échantillons de sérum ou de plasma - Solution de référence de créatinine
Étapes du Dosage
Préparation des Échantillons :
- Prélevez du sérum ou du plasma dans des tubes à essai propres.
- Si nécessaire, diluez les échantillons avec une solution tampon appropriée.
Préparation des Réactifs :
- Préparez le réactif de Jaffé selon les instructions du fabricant. Cela peut inclure le
mélange de certains réactifs chimiques.
Ajout des Réactifs :
- Dans un tube à essai, ajoutez une quantité précise de réactif de Jaffé à l'échantillon de
sérum ou de plasma.
- Incubez le mélange à température ambiante pendant un temps déterminé
(généralement de 15 à 30 minutes) pour permettre la réaction chimique.
Mesure de l'Absorbance :
- À l'aide du spectrophotomètre, mesurez l'absorbance du mélange à la longueur d'onde
appropriée (habituellement autour de 520 nm, selon le protocole utilisé).
- Assurez-vous de calibrer le spectrophotomètre avec un blanc (solution sans créatinine)
avant de réaliser les mesures.
Établissement de la Courbe de Calibration :
- Préparez une série de solutions standards de créatinine à des concentrations connues.
- Mesurez l'absorbance de ces standards pour établir une courbe de calibration.
Calcul des Résultats :
- Utilisez la courbe de calibration pour déterminer la concentration de créatinine dans
l'échantillon en fonction de son absorbance mesurée.
- Exprimez les résultats en mg/dL ou µmol/L, selon les normes de votre laboratoire.
Précautions :
- Assurez-vous que tous les réactifs sont frais et correctement préparés.
- Évitez la contamination croisée entre les échantillons.
- Suivez les protocoles de sécurité, notamment en ce qui concerne le maniement des
échantillons biologiques et des produits chimiques.
Les niveaux de créatinine peuvent varier en fonction de plusieurs facteurs, y compris
l'âge, le sexe, et la masse musculaire. Une élévation des niveaux de créatinine peut
indiquer une altération de la fonction rénale.
Ce mode opératoire peut varier en fonction des équipements et des réactifs utilisés, est
donc essentiel de se référer aux protocoles spécifiques de votre laboratoire. Valeurs de
référence: Urée: 15 à 45 mg/dL; créatinine: 0,5 à 1,5 mg/dL.
Dosage de glycémie
Le dosage de la glycémie au spectrophotomètre est une méthode utilisée pour mesurer
la concentration de glucose dans le sang. Voici un mode opératoire général pour cette
analyse :
Matériel Nécessaire :
- Spectrophotomètre - Tubes à essai - Pipettes - Réactifs (par exemple, réactif de
glucose oxydase) - Échantillons de sérum ou de plasma - Solution de référence de
glucose
Étapes du Dosage :
Préparation des Échantillons :
- Prélevez des échantillons de sang et séparez le sérum ou le plasma.
- Diluez les échantillons si nécessaire, selon les recommandations du protocole.
Préparation des Réactifs :
- Préparez le réactif de glucose oxydase selon les instructions du fabricant.
- Assurez-vous que les réactifs sont frais et correctement stockés.
Ajout des Réactifs :
- Dans un tube à essai, ajoutez une quantité précise de réactif de glucose oxydase à
l'échantillon de sérum ou de plasma.
- Incubez le mélange à température ambiante ou à 37 °C pendant un temps déterminé
(généralement de 10 à 30 minutes) pour permettre la réaction chimique.
Mesure de l'Absorbance :
- À l'aide du spectrophotomètre, mesurez l'absorbance du mélange à la longueur
d'onde appropriée (généralement autour de 500-540 nm, selon le protocole utilisé).
- Calibrez le spectrophotomètre avec un blanc avant de réaliser les mesures.
Établissement de la Courbe de Calibration :
- Préparez une série de solutions standards de glucose à des concentrations connues.
- Mesurez l'absorbance de ces standards pour établir une courbe de calibration.
Calcul des Résultats :
- Utilisez la courbe de calibration pour déterminer la concentration de glucose dans
l'échantillon en fonction de son absorbance mesurée.
- Exprimez les résultats en mg/dL ou mmol/L, selon les normes de votre laboratoire.
Valeur normal : 70 à 110mg) dL
Précautions
- Manipulez les échantillons biologiques et les réactifs avec précaution, en respectant
les protocoles de sécurité.
- Évitez la contamination croisée entre les échantillons.
- Assurez-vous que tous les réactifs sont à température ambiante avant utilisation. Les
transaminases sont des enzymes du foie,du coeur et de muscle , elles passant dans le
sérum en cas de cytolyse hépatite ou musculaire.
Les ASAT (Aspartate Aminotransférase) et ALAT (Alanine Aminotransférase) sont des
enzymes hépatiques importantes pour évaluer la santé du foie. Voici un mode
opératoire général pour leur dosage :
~Précaution du patient
Demander au patient de jeûner pendant au moins 8 heures avant la prise de sang.
Interprétation des résultats
~Valeurs normales : Généralement, les valeurs normales pour les ASAT se situent entre
10 et 40 U/L et pour les ALAT entre 7 et 56 U/L, mais cela peut varier selon les
laboratoires.
B. En service de bactériologie
A. GeneXpert
Le GeneXpert est une méthode de diagnostic moléculaire utilisée pour la détection
rapide de la tuberculose et de la résistance à la rifampicine. Cette technique utilise la
DCR (réaction en chaîne par polymérase) pour amplifier l’ADN des bactéries
(Mycobacterium tuberculosis) présentes dans un échantillon.
Il est utilisé pour diagnostiquer rapidement la tuberculose et détecter la résistance à
certains antibiotiques, notamment la rifampicine. L’échantillon (expectorations ou
autres) est introduit dans la cartouche GeneXpert, qui est placée dans l’appareil pour
analyse. Ce test est révolutionnaire dans le diagnostic rapide de la tuberculose,
b. ECBU (Examen cytobactériologique des urines)
L’ECBU est un examen permettant de détecter la présence de bactéries et de leucocytes
dans les urines, pour diagnostiquer une infection urinaire. Les urines sont mises en
culture pour isoler et identifier les bactéries, et une analyse microscopique permet de
détecter des globules blancs ou des bactéries. Il est utilisé pour diagnostiquer les
infections urinaires et choisir un traitement antibiotique approprié. Un échantillon
d’urine est collecté, centrifugé, et le culot est examiné au microscope. Les urines sont
également ensemencées sur des milieux de culture. Critique personnelle: La rapidité de
la mise en culture est essentielle pour un diagnostic précis et un traitement efficace des
infections urinaires.
C. Copro-Culture
La copro-culture est l’analyse bactériologique des selles pour identifier les bactéries
pathogènes responsables d’infections intestinales. Les selles sont ensemencées sur
des milieux de culture sélectifs pour isoler les bactéries pathogènes comme
(Salmonella et Shigella) Cet examen est utilisé pour diagnostiquer les gastro entérites
bactériennes.
IV. REMARQUE GÉNÉRAL
-On nous a pas laisser beaucoup de temps pour travailler y a eu plus d'observation que
la pratique - y avait pas assez de réactif - on préparer rarement les milieux de culture -
Manque de suivi au stagiaire.
V. RECOMMANDATIONS
- Qu'il puisse avoir les réactifs suffisant pour les analyses - Travailler en collaboration en
ayant le respect de son prochain et aussi de stagiaires - Augmenter les mesures de
protection pour tout les techniciens.
VI. CONCLUSION
Le stage en L3 à l'hôpital général de Kinshasa a duré qu'un mois, cependant j'ai acquis
une expérience professionnelle je me suis appliquer pour des connaissances théoriques
et pratiques au laboratoire en développant de nouvelles compétences techniques pour
poursuivre ma carrière en biologie médicale.
