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TD 01 : Le microscope optique
Le microscope : est un instrument permet d’obtenir une image agrandie d’un objet très petit . La technique
que utilise le microscope est appelés « microscopie » .
Il existe deux type de microscope : - Microscope optique -Microscope électronique
1- Le microscope optique :
Est un instrument qui donne un image agrandie d’un objet très petit par . le transmission ( passage ) des
photons.
Le microscope optique est constitué de :
Base : sur laquelle se repose le microscope .
Potence : c’est un bras qui relie la base au corps du microscope .
Platine : c’est un support fixe contient au centre un trou pour la passage de photon vers l’objet , la platine
renferme un système de fixation pour immobiliser l’échantillon .
Vis de réglage : leurs rotation permet le déplacement vertical ( on haut et on bas ) de platine , dans un
microscope optique on trouve deux vis de réglage :
La vis macrométrique : pour le déplacement rapide
La vis micrométrique : pour le réglage précise .
La source lumineuse : qui peut être une lampe électrique ou un miroir orientable
Le condensateur : il concentre la lumière avant de traverser l’objet
Le tube optique : est un ensemble de lentille à l’extrémité de ce tube on trouve l’oculaire et à l’autre
extrémité l’objectif .
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Remarque :
Pour calculer le grossissement d’un microscope optique on multiple le grossissement de l’oculaire par
celui de l’objectif . GT = Gocu * Gobj
1 Oculaire 9 Condensateur
2 Tube optique 11 Source lumineuse
11 Base
4 Objectif 12 Vis macrométrique
5 Potence 13 Vis micrométrique
6 Platine
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Les conditions d’utilisation d’un microscope optique :
L’épaisseur : pour faire un examen microscopique , les photons doivent traverser l’objet , ce que nécessite
une épaisseur très faible , ce que nécessite de couper l’objet ou de l’étaler sur la lame en verre .
Le contraste : l’observation microscopique nécessite que certaine structure cellulaire doivent absorbe les
photons plus que d’autre , généralement on augmenter le contraste par des colorantes chimique
Les échantillonnes destine a l’observation microscopique on diviser en deux groupes :
Echantillonnes nécessitant les technique des coupe , échantillonnes nécessitant entiers frottis .
Le technique de coup :
- la préparation du coupe pour examen microscopique nécessite les étapes suivant :
1- La fixation :
Elle a comme but de tuer cellules dans un état aussi naturel que possible
La fixation elle peut être physique ou chimique .
La fixation chimique : par des produit chimique comme l’alcool , formol , l’acide acétique .. etc.
La fixation physique : par la congélation avancement de température pour empêcher l’autolyse .
2- Inclusion :
Les coups de quelque micron d’épaisseur ne peuvent être réalise qui si la dureté de l’échantillon doit être
convenable .
Ce qui nécessite de remplacer l’eau inclus dans les échantillonnes ( eau cellulaire ) par la paraffine ( le
milieu d’inclusion )
Ce remplacement n’est pas directement possible , on doit en premier temps déshydrater les échantillon par
une série d’alcool a degrés croissant , puis on remplace l’alcool par le solvant de paraffine .
Puis on remplacer le solvant par la paraffine même , lors que les échantillon doivent imprégné on répare
bloc homogène pour faciliter la dissection .
3- La coupe : la coupe elle ce réalise a l’aide d’un appareil appelé le microtome qui parmi d’avoir des
coups d’un épaisseur de 2 à 10 µm .
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4- La coloration : après les étapes précédentes , il faut augmenter les contraste de coups obtenu ( sur la lame
) on utilisons les colorant lais la plupart du colorant sont des solution aqueuses ce que nécessite de
déparaffiner d’abord les coups réparer par le solvant de paraffine ( xylène ) puis par l’alcool puis on ajout de
colorant .
La préparation de frottis
Déposez une gouttelette de sang près de l'extrémité d'une lame, mettez l'extrémité d'une seconde lame en
contact avec la gouttelette et laissez cette dernière s'incliner également derrière adhérer derrière la lame.
L'angle entre les deux lames doit être de 30 à 40 degrés. Poussez maintenant vers la gauche dans un
mouvement fluide et rapide. Le frottis devrait couvrir près de la moitié de la lame.
Fixation : par ajoute de l’alcool éthylique ou méthylique à 95 % ou bien par la chaleur de bec-benzène
Coloration : à partir du bleu de méthylène et de l’éosine .
