Étude des examens complémentaires en dermatologie

canine et féline dans l’objectif de créer un support

pédagogique multimédia sur leur réalisation technique
Célia Zanin

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Célia Zanin. Étude des examens complémentaires en dermatologie canine et féline dans l’objectif de
créer un support pédagogique multimédia sur leur réalisation technique. Médecine vétérinaire et santé
animale. 2022. �dumas-03975733�

HAL Id: dumas-03975733

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Année 2022

ÉTUDE DES EXAMENS COMPLÉMENTAIRES EN

DERMATOLOGIE CANINE ET FÉLINE DANS L’OBJECTIF
DE CRÉER UN SUPPORT PÉDAGOGIQUE MULTIMÉDIA
SUR LEUR RÉALISATION TECHNIQUE

THÈSE
pour obtenir le diplôme d’État de
DOCTEUR VÉTÉRINAIRE
présentée et soutenue publiquement devant
la Faculté de Médecine de Créteil (UPEC)
le 3 octobre 2022

par

Célia, Amandine, Chloé ZANIN

sous la direction de
Noëlle COCHET-FAIVRE

JURY
Présidente du jury : Mme Sabine CHAHORY Professeur à l’EnvA
Directrice de thèse : Mme Noëlle COCHET-FAIVRE Maître de Conférences à l’EnvA
Examinateur : M. Bruno POLACK Maître de Conférences à l’EnvA
 Remerciements

A Mme Sabine CHAHORY, Professeur à l’EnvA,

Pour avoir accepté la présidence de mon jury de thèse.
Hommages respectueux.

A Mme Noëlle COCHET-FAIVRE, Maitre de conférences à l’EnvA,

Pour m’avoir donné la chance de travailler sur ce sujet de thèse,
Pour ses précieux conseils, sa disponibilité, sa confiance et sa bienveillance tout au long de
ce travail.
Sincères remerciements.

A M Bruno POLACK, Maitre de conférences à l’EnvA,

Pour avoir accepté d’être l’examinateur de cette thèse, pour ses corrections et ses remarques
avisées.
Sincères remerciements.

A toute l’équipe du service dermatologie du Centre Hospitalier Universitaire Vétérinaire

d’Alfort,
Au Docteur Odile CROSAZ, Praticien Hospitalier Adjoint
Au Docteur Hélène DROPSY, Résidente
Au Docteur Louis HUMEAU, Assistant Hospitalier
Aux Docteurs Amaury BRIAND et Diane KA, Consultants
Pour leur contribution dans la réalisation de ce projet, pour leur aide, pour leur disponibilité et
pour leur participation à la réalisation des vidéos. Sincères remerciements.

A ma mère et mon père,

Pour votre soutien tout au long de ces années, pour m’avoir donné l’opportunité d’obtenir le
métier de mes rêves. Merci pour tout.

A Benjamin,
Pour ton amour et ton soutien au cours de ces deux dernières années.

A mes amis, Emmanuelle, Marion et Rémi,

Pour tous ces moments partagés ensemble, pour avoir été le meilleur groupe de
clinique/coloc/co-poulotte, pour ces merveilleuses années passées à vos côtés.
Table des matières
Liste des figures ............................................................................................................................ 3
Liste des tableaux ......................................................................................................................... 5
Liste des abréviations ................................................................................................................... 7
Introduction ................................................................................................................................... 9
Première partie : Synthèse bibliographiqe sur les examens complémentaires en dermatologie
canine et féline ............................................................................................................................ 11
1. Examens complémentaires à résultats immédiats ................................................................ 11
A. Brossage ........................................................................................................................................... 11
B. Lampe de Wood ................................................................................................................................ 13
C. Epilation en vue de la réalisation d’une trichoscopie ........................................................................ 16
D. Otoscopie et vidéo-otoscopie ............................................................................................................ 25
E. Ecouvillon auriculaire pour la recherche de parasites ...................................................................... 29
F. Test à la cellophane adhésive pour la recherche de parasites et la trichoscopie ............................ 31
G. Raclage cutané ................................................................................................................................. 34
H. Examen cytologique .......................................................................................................................... 39
I. Intradermoréaction ............................................................................................................................ 54
2. Examens complémentaires à résultats différés .................................................................... 62
A. Biopsie............................................................................................................................................... 62
B. Prélèvements pour un examen mycologique et culture fongique ..................................................... 72
C. PCR ................................................................................................................................................... 80
D. Prélèvements pour un examen bactériologique et culture bactériologique ...................................... 81
E. Test sérologique par dosage des IgE spécifiques d’allergènes ....................................................... 88
Deuxième partie : Création du support pédagogique ............................................................... 93
1. Introduction .......................................................................................................................... 93
2. Conception du projet ............................................................................................................ 93
A. Objectifs du projet ............................................................................................................................. 93
B. Choix des supports ........................................................................................................................... 94
3. Réalisation d'un outil pédagogique ....................................................................................... 95
A. Réalisation des vidéos ...................................................................................................................... 95
a. Contenu ...................................................................................................................................................... 95
b. Matériel et tournage des séquences vidéo .................................................................................................. 95
c. Montage ...................................................................................................................................................... 96
d. Enregistrement audio .................................................................................................................................. 96
B. Réalisation des fiches ....................................................................................................................... 97
a. Contenu ...................................................................................................................................................... 97
b. Format......................................................................................................................................................... 97
C. Intégration à EVE .............................................................................................................................. 97
4. Discussion ............................................................................................................................ 98
A. Qualité et utilité du travail produit ...................................................................................................... 98
B. Limites ............................................................................................................................................... 99
C. Perspectives d'évolution ................................................................................................................... 99
Conclusion................................................................................................................................. 101
Liste des références bibliographiques .................................................................................... 103
Annexe 1 : Lien vers la page EVE hébergeant les vidéos ...................................................... 107
Annexe 2 : Fiche brossage ....................................................................................................... 108

Page 1
Annexe 3 : Examen à la lampe de Wood.................................................................................. 110
Annexe 4 : Epilation et Trichoscopie ....................................................................................... 112
Annexe 5 : Raclage cutané ....................................................................................................... 115
Annexe 6 : Test à la cellophane adhésive ............................................................................... 118
Annexe 7 : Calque cutané ......................................................................................................... 121
Annexe 8 : Cytoponction à l’aiguille fine ................................................................................. 126
Annexe 9 : Otoscopie ................................................................................................................ 130
Annexe 10 : Ecouvillon auriculaire .......................................................................................... 133
Annexe 11 : Curetage auriculaire ............................................................................................. 136
Annexe 12 : Biopsies ................................................................................................................ 138
Annexe 13 : Prélèvement pour une culture fongique ............................................................. 143
Annexe 14 : Prélèvement pour une culture bactériologique .................................................. 146
Annexe 15 : Intradermoréaction ............................................................................................... 149

Page 2
Liste des figures
Figure 1 : Aspect microscopique d’une puce adulte (gauche) et d’une déjection de puce (droite)
(Jackson and Marsella, 2012; Neuber and Nuttall, 2017) .............................................................. 12

Figure 2 : Aspect microscopique des poux chez le chien : Trichodectes canis (a) et Linognatus
setosus (b) (obj. x10) (Jackson and Marsella, 2012) ..................................................................... 12

Figure 3 : Technique du papier mouillé : un halo orangé est visible autour des déjections de puce
(Source personnelle) ..................................................................................................................... 13

Figure 4 : Tiges pilaires fluorescentes vert pomme infectées par Microsporum canis chez un chien
(Coyner, 2019; Rhodes and Werner, 2018) ................................................................................... 15

Figure 5 : Epilation d’une touffe de poils avec une pince mousse fine en agrippent les poils à leur
base (Neuber and Nuttall, 2017) .................................................................................................... 18

Figure 6 : Bulbe en phase anagène (obj. x10) (Coyner, 2019)....................................................... 19

Figure 7 : Bulbes en phase télogène (obj. x10) (Coyner, 2019; Jackson and Marsella, 2012) ....... 20

Figure 8 : Aspect microscopique usuel d’une tige pilaire saine ; les trois couches sont visibles..... 21

Figure 9 : Trichorrhexie caractéristique d’une exacerbation du toilettage chez le chat (obj. x10)
(Coyner, 2019) .............................................................................................................................. 21

Figure 10 : Morceau de poils suspect teigneux (obj. x10) (à gauche) et poils teigneux avec des
filaments de dermatophytes dans les tige pilaire (obj. x100) (à droite) (Service de Parasitologie,
ENVA) ........................................................................................................................................... 22

Figure 11 : Poils avec des macromélanosomes déformant la cuticule chez un chien atteint d’alopécie
des robes diluées (obj. x10) (Coyner, 2019) .................................................................................. 23

Figure 12 : Œufs de Demodex adhérents à la tige pilaire (obj. x10) (Jackson and Marsella, 2012)23

Figure 13 : Œufs de Cheyletiella (gauche) et de poux (droite) adhérents à la tige pilaire (Service de
Parasitologie, ENVA ; Neuber and Nuttall, 2017)........................................................................... 24

Figure 14 : Vidéo-otoscope (matériel du CHUVA) ......................................................................... 26

Figure 15 : Schéma du pavillon auriculaire chez le chien (Tobias and Johnston, 2018)................. 27

Figure 16 : Vue transverse de l’anatomie du conduit auditif externe chez le chien (Tobias and
Johnston, 2018)............................................................................................................................. 27

Figure 17 : Membrane tympanique visualisée avec un otoscope chez un chien (gauche) et un chat
(droite) sains ; C, caudal ; R, rostral ; pt, pars tensa ; pf, pars flaccida ; s, septum ; m, manubrium du
marteau ; h, poils (Rhodes and Werner, 2018) .............................................................................. 28

Figure 18 : Aspect microscopique d’Otodectes cynotis (Jackson and Marsella, 2012; Rhodes and
Werner, 2018) ............................................................................................................................... 31

Page 3
Figure 19 : Aspect microscopique de Demodex prélevés avec de la cellophane adhésive (Barillas et
al., 2019) ....................................................................................................................................... 33

Figure 20 : Raclage cutané (Coyner, 2019; Neuber and Nuttall, 2017) .......................................... 35

Figure 21 : Aspect microscopique de Sarcoptes scabiei (gauche) et de Cheyletiella (droite) obtenus

par raclage cutané (Jackson and Marsella, 2012; Rhodes and Werner, 2018) .............................. 38

Figure 22 : Calque par impression (Coyner, 2019) ........................................................................ 42

Figure 23 : Rupture d’une pustule intacte avant la réalisation d’un calque par impression (Coyner,
2019) ............................................................................................................................................. 42

Figure 24 : Prélèvement avec de la cellophane adhésive (Coyner, 2019) ..................................... 43

Figure 25 : Kératinocytes acantholytiques et granulocytes neutrophiles non-dégénérés dans le cas

d’un pemphigus foliacé (Rhodes and Werner, 2018) ..................................................................... 50

Figure 26 : Examen cytologique de Malassezia chez un chien (Jackson and Marsella, 2012; Rhodes
and Werner, 2018) ........................................................................................................................ 51

Figure 27 : Formation d’une bulle après injection en intradermique (Neuber and Nuttall, 2017) .... 57

Figure 28 : Réactions secondaires à l’injection intradermique d’allergènes ; témoin positif (1) et

témoins négatif (2) (Neuber and Nuttall, 2017) .............................................................................. 58

Figure 29 : Résultats d’une IDR chez un chat avec injection de fluorescéine par voie intraveineuse
et lecture à l’aide d’une lampe de Wood (Neuber and Nuttall, 2017) ............................................. 59

Figure 30 : Schéma du positionnement du trépan en fonction de la localisation de la lésion. ........ 66

Figure 31 : Prélèvement au trépan (Coyner, 2019) ........................................................................ 68

Figure 32 : L’échantillon est saisi par le tissu sous-cutané pour éviter les artéfacts d’écrasement
(Coyner, 2019) .............................................................................................................................. 68

Figure 33 : Orientation de l’ellipse lors de biopsie à la lame de scalpel ......................................... 69

Figure 34 : Milieu DTM dans une boîte de Pétri avec changement de couleur du jaune vers le rouge
suite à la pousse de colonie de dermatophytes (Jackson and Marsella, 2012) .............................. 77

Figure 35 : Aspect macroscopique de colonies de Microsporum canis (Rhodes and Werner, 2018)
...................................................................................................................................................... 78

Figure 36 : Test de sensibilité avec des disques de Kirby-Bauer (Neuber and Nuttall, 2017) ........ 86

Figure 37 : Test de sensibilité avec la méthode de la concentration minimale d’inhibition (Neuber

and Nuttall, 2017) .......................................................................................................................... 87

Page 4
Liste des tableaux
Tableau 1 : Techniques de raclage cutané indiquées et lieux de prélèvement en fonction du type de
parasite recherché (Coyner, 2019; Hnilica et al., 2013; Jackson et Marsella, 2012; Miller et al., 2013)
...................................................................................................................................................... 36

Tableau 2 : Techniques de prélèvements pour un examen cytologique en fonction du type de lésion

et matériel nécessaire spécifique à chaque technique (Barillas et al., 2019; Bond et al., 2020;
Guaguère et Prélaud, 2006; Mendelsohn et al., 2006; Miller et al., 2013) ...................................... 40

Tableau 3 : Techniques de prélèvements pour un examen histologique en fonction du type de lésion

(Guaguère et Prélaud, 2006; Jackson et Marsella, 2012; Miller et al., 2013; Neuber et Nuttall, 2017;
Rhodes et Werner, 2018) .............................................................................................................. 66

Page 5
Page 6
Liste des abréviations
ASIS : Allergen-Specific Immunoglobulin E Serology

CCD : Cross-reactive Carbohydrate Determinant

CHUVA : Centre Hospitalier Universitaire d’Alfort

DTM : Dermatophyte Test Medium

ELISA : Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay

ENVA : École Nationale Vétérinaire d’Alfort

EVE : Enseignement et Vie Étudiante

IDR : Intradermoréaction

IgE : Immunoglobuline E

ITC : Irritant Threshold Concentration

LAPVSO : Laboratoire d'Anatomie Pathologique Vétérinaire du Sud-Ouest

PCR : Polymerase Chain Reaction

RAST : Radio Allergo Sorbant Test

TP : Travaux pratiques

Page 7
Page 8
Introduction
La dermatologie représente l’un des principaux motifs de consultation dans la pratique vétérinaire
généraliste des animaux de compagnie soit 29% selon l’étude de Robinson et al., en 2015. Ainsi,
dans sa pratique courante, un vétérinaire est amené régulièrement à explorer des affections
cutanées ou auriculaires à l’aide d’examens dont la plupart peuvent être réalisée en routine avec du
matériel facilement accessible. En effet, la peau étant un organe de surface, les lésions l’inquiétant
sont directement visualisables et facilement caractérisables par le clinicien lors de l’examen clinique
s’il possède de bonnes connaissances en sémiologie cutanée. Cependant, plusieurs dermatoses
différentes peuvent s’exprimer avec des lésions similaires. L’anamnèse, les commémoratifs mais
aussi les examens complémentaires sont donc particulièrement importants dans cette discipline
pour établir le diagnostic adéquat.

Lors des études à l’École Nationale Vétérinaire d’Alfort (ENVA), l’enseignement théorique de la
dermatologie s’effectue principalement lors du premier semestre de 4ème année puis l’enseignement
pratique se réalise lors des rotations cliniques au CHUVA en 4ème, 5ème et 6ème années. Au cours des
consultations, lors de leurs rotations, les étudiants sont amenés à réaliser des examens
complémentaires mais généralement, ils n’ont pas connaissance de comment réaliser ces gestes
techniques avant leurs journées de clinique. De plus, en raison des aléas des consultations, toutes
les techniques d’examens complémentaires ne sont pas systématiquement réalisées voire même
visualisées par les étudiants lors de leurs rotations de clinique.

Cette thèse a donc pour but de compléter l’enseignement théorique de dermatologie en expliquant
la réalisation des techniques d’examens complémentaires à l’aide d’un support multimédia. Ainsi,
les étudiants pourront avoir une première compréhension de ces gestes techniques avant leurs
semaines de pratique au sein du CHUVA mais aussi se servir de cet outil comme moyen de révision
lors de leur pratique future. De courtes vidéos associées à des fiches explicatives ont semblé être
le support idéal pour cet enseignement.

La première partie de cette thèse est une synthèse bibliographique présentant les examens
complémentaires en dermatologie à résultats immédiats ou différés. Plus précisément, leurs
objectifs, leur principe, leurs indications, le matériel nécessaire, leurs techniques de réalisation, leur
interprétation et leurs différents avantages et inconvénients sont décrits. La seconde partie présente
les objectifs de ce projet, le choix du support pédagogique et les différentes étapes de conception
de cet outil multimédia. Cette thèse est accompagnée du support multimédia réalisé dans ce cadre
disponible sur le site internet EVE de l’école.

Page 9
Page 10
Première partie : Synthèse bibliographiqe
sur les examens complémentaires en
dermatologie canine et féline

1. Examens complémentaires à résultats immédiats

A. Brossage

a. Objectif
La technique du brossage a pour objectif de rechercher la présence de parasites externes adultes
ou de formes intermédiaires dans le pelage de l’animal. Les principaux parasites recherchés sont
notamment les puces, les poux et les Cheyletiella.

b. Principe
Le principe de cette technique repose sur l’observation, à l’aide d’une loupe à main, d’une loupe
binoculaire ou d’un microscope, des débris cutanés récoltés suite à un brossage vigoureux du
pelage pour la recherche de parasites superficiels (Bensignor and Germain, 2014).

c. Indications
Le brossage est indiqué en cas de suspicion de parasitisme de surface, en particulier chez les
animaux présentant du prurit, de l’alopécie et des squames (Neuber and Nuttall, 2017).

Cette technique permet la mise en évidence de Cheyletiella spp., de poux (Trichodectes canis,
Linognathus setosus, Felicola subrostratus), de puces (Ctenocephalides felis, Ctenocephalides
canis, …) et rarement d’agents de gale (Sarcoptes scabiei) (Baker and Thomsett, 1990; Guaguère
and Prélaud, 2006).

d. Matériel
- Peigne à puce ou brosse épaisse, une brosse à dents peut aussi être utilisée.
- Essuie-tout blanc et/ou table claire
- Loupe à main ou binoculaire
- Ruban adhésif transparent
- Huile minérale (huile de paraffine) ou chloral-lactophénol
- Lames de microscope et lamelles
- Microscope

(Bexfield, Nick and Lee, 2014; Wilkinson and Harvey, 1994)

e. Techniques
L’animal est placé sur une table blanche ou sur du papier blanc et est tenu par contention douce.
L’ensemble de son pelage est brossé pendant 30 à 60 secondes avec un peigne à dents fines pour
collecter un maximum de débris cutanés (Neuber and Nuttall, 2017; Wilkinson and Harvey, 1994).

Page 11
Les débris cutanés récoltés sur le peigne, la table et/ou l’essuie-tout sont rassemblés et ensuite
observés à l’aide d’une loupe. Si trop de poils sont récoltés, il faut enlever ceux en excès pour faciliter
l’observation des autres débris cutanés (Neuber and Nuttall, 2017).

Les débris cutanés peuvent aussi être examinés au microscope. Pour cela plusieurs techniques sont
possibles :

- Les débris sont placés sur une lame de microscope dans une goutte d’huile de paraffine ou de
chloral-lactophénol puis une lamelle est placée par-dessus.
- Ou les débris sont collectés à l’aide d’un morceau de ruban adhésif, puis celui-ci est placé sur
une lame de microscope.

L’observation au microscope est réalisée à l’objectif x4-10 (Neuber and Nuttall, 2017).

Figure 1 : Aspect microscopique d’une puce adulte (gauche) et d’une déjection de

puce (droite) (Jackson and Marsella, 2012; Neuber and Nuttall, 2017)

Figure 2 : Aspect microscopique des poux chez le chien : Trichodectes canis (a) et
Linognatus setosus (b) (obj. x10) (Jackson and Marsella, 2012)

Si des formes adultes de puces sont présentes, on peut les prélever à l’aide de ruban adhésif ou les
conserver dans de l’éthanol à 70 ° pour faire une diagnose d’espèce et si nécessaire de la biologie
moléculaire (Bruno Polack Unité de Parasitologie, communication personnelle).

Il faut bien nettoyer le peigne ou la brosse entre chaque animal pour ne pas obtenir des résultats
faux-positifs ou transmettre des maladies comme la teigne entre les animaux.

Page 12
 f. Interprétation
Les ectoparasites de surface (poux, Cheyletiella, …) sont plus facilement visualisables sur un fond
noir. Il est possible de voir des lentes de poux accrochées aux poils (Neuber and Nuttall, 2017).

Les excréments de puces sont plus facilement visualisés sur un fond blanc.

La technique du papier mouillé est encore plus efficace : lorsque des déjections de puces sont
humidifiées, elles teintent le papier d’une couleur rouge-brunâtre (sang digéré : hémoglobine) avec
un halo orangé (Jackson and Marsella, 2012).

Figure 3 : Technique du papier mouillé : un halo orangé est visible autour des déjections de
puce (Source personnelle)

g. Avantages
Le brossage est un test facile à réaliser et le résultat est disponible immédiatement.

Il est particulièrement utile pour la détection de puces ou de déjections de puces chez les chats et
les chiens.

h. Inconvénients
Cette technique ne permet pas un échantillonnage direct de la surface cutanée. Des résultats faux
négatifs sont donc fréquents.

B. Lampe de Wood

a. Objectif
Un examen à la lampe de Wood a pour objectif la recherche de poils infectés par des dermatophytes.
Dans la démarche diagnostique d’une dermatophytose, cet examen aide à sélectionner des poils à
examiner directement au microscope (trichoscopie) ou pour ensemencer des milieux de culture
fongique.

Page 13
 b. Principe
La lampe de Wood émet une lumière UV filtrée au travers d’un verre contenant du nickel et émettant
à des longueurs d’ondes entre 320 et 420 nm avec un pic à 365 nm (3650 A) (Guaguère and Prélaud,
2006; Miller et al., 2013; Moriello et al., 2017).

En présence de Microsporum canis dans la tige pilaire (cortex et médulla), une fluorescence vert
pomme apparaît en cas d’exposition du poil à cette lumière.
La fluorescence est due aux métabolites de tryptophane (pigments hydrosolubles de ptéridine)
produits par le champignon. Elle apparaît uniquement lorsque les poils infectés sont en croissance
(pas visible sur les poils infectés in vitro). Il n’y a donc pas de fluorescence des squames, des croûtes
ou sur les cultures de dermatophytes (Hnilica et al., 2013; Miller et al., 2013).

A l’instar de Microsporum canis, d’autres espèces de dermatophytes peuvent engendrer une

fluorescence : Microsporum audouinii (humains, plus rarement chiens, chats, cochons d’Inde, lapins
et singes) ou Trichophyton schoenleinii (humains, plus rarement chiens, chats, hérissons, souris,
bovins, chevaux, lapins, cochons d’Inde) (Carter, 1990; Jackson and Marsella, 2012; Neuber and
Nuttall, 2017).

Cette technique ne peut cependant pas être utilisée en vue d'identifier les espèces de Trichophyton
mentagrophytes, Nannizzia persicolor (anciennement Microsporum persicolor), ou Nannizzia
gypsea. Nannizzia fulva et Nannizzia incurvata (anciennement Microsporum gypseum) (Bensignor
and Germain, 2014; Hnilica et al., 2013; Monod, 2017).

c. Indications
L’examen à la lampe de Wood est l’examen de première intention en mycologie cutanée lorsque la
clinique en est équipée.
Il est indiqué dès qu’une dermatophytose rentre dans le diagnostic différentiel clinique.
Il permet de sélectionner des poils à prélever pour une culture fongique ou un test PCR.
L’examen à la lampe de Wood présente aussi un intérêt dans le suivi de la réponse au traitement
antifongique.

d. Matériel
- Lampe de Wood
- Pièce sombre
- Pinces ou clamp

e. Technique
La stabilité de la longueur d’onde et l’intensité de la lumière sont dépendantes de la température. Il
faut donc laisser chauffer la lampe quelques minutes avant de procéder à l’examen. Ceci n’est pas
nécessaire avec les lampes modernes (Bexfield, Nick and Lee, 2014).

L’examen doit être réalisé dans une pièce sombre. Idéalement, il faut garder l’animal dans son mode
de transport (boite démontable).

Page 14
La lampe est tenue près de la peau (quelques centimètres) et les poils sont exposés à la lumière
pendant 2 à 3 min pour laisser le temps à la fluorescence d’apparaître et à nos yeux de s’adapter à
l’obscurité (Neuber and Nuttall, 2017).

L’ensemble du pelage est ensuite observé.

Pour examiner le pelage, on peut s’aider d’une loupe si nécessaire. La loupe est idéalement intégrée
à la lampe.

f. Interprétation
Le résultat est considéré positif uniquement si la fluorescence apparaît sur un poil et non sur une
croûte ou sur la peau (Jackson and Marsella, 2012).

Une atteinte fongique, liée à l’un des champignons précités, libère une fluorescence vert pomme au
sein des tiges pilaires infectées.

Figure 4 : Tiges pilaires fluorescentes vert pomme infectées par Microsporum canis chez un
chien (Coyner, 2019; Rhodes and Werner, 2018)

Toute suspicion de dermatophytose à la lampe de Wood doit être confirmée secondairement à l'aide
d’un examen direct au microscope et d’une culture fongique (Hnilica et al., 2013).

Les infections récentes sont caractérisées par une fluorescence de l’extrémité proximale du poil.
Dans les infections plus avancées, l’intégralité du poil est fluorescente.

Si le traitement est efficace ou lors de guérison spontanée, la partie proximale des poils n’émet plus
de fluorescence mais celle-ci persiste dans les champignons morts en partie distale de la tige pilaire.
Ainsi les poils vont continuer à émettre une fluorescence longtemps après que les cultures soient
devenues négatives (Miller et al., 2013; Moriello et al., 2017).

La sensibilité et la spécificité de cet examen sont faibles, une fluorescence n’apparaît que
dans 30 à 90% des cas (50% pour la plupart des auteurs) et pour Microsporum canis uniquement
(Bexfield, Nick and Lee, 2014; Jackson and Marsella, 2012; Miller et al., 2013).

Page 15
Cet examen présente, pour la recherche d’une infection à Microsporum canis, en comparaison à la
culture fongique, une valeur prédictive positive de 90 % et une valeur prédictive négative de 94 %
(Moriello et al., 2017).

Les sources de résultats faux positifs sont les croûtes, les squames, les bactéries (Pseudomonas
aeruginosa ou Corynebacterium minutissimum), les Demodex, la kératine, le savon, le pétrole, les
fibres de tapis et des médicaments topiques (Miller et al., 2013; Neuber and Nuttall, 2017).

Cependant, la plupart de ces éléments émettent une fluorescence de couleur différente de celle de
Microsporum canis (Moriello et al., 2017).

Les sources de résultats faux négatifs sont certains médicaments (l’iode détruit la fluorescence),
une dermatophytose due à une autre espèce n’émettant pas de fluorescence à la lampe de Wood
(Microsporum persicolor, Nannizzia gypsea. Nannizzia fulva et Nannizzia incurvata anciennement
Microsporum gypseum, Trichophyton mentagrophytes), un temps d’examen trop court ou une pièce
d’examen insuffisamment sombre (Miller et al., 2013).

g. Avantages
Ce test est rapide, facilement réalisable si la clinique est équipée correctement.
Il possède une haute valeur prédictive positive si une fluorescence est visualisée en partie proximale
des tiges pilaires.

h. Inconvénients
Ce test ne permet que la détection de Microsporum canis.
Beaucoup de faux négatifs sont possibles ainsi que des faux positifs si la fluorescence de croûtes,
squames, etc. est interprétée comme positive.
Une confirmation du diagnostic de dermatophytose, par observation des poils au microscope ou
culture fongique, est toujours nécessaire.

C. Epilation en vue de la réalisation d’une trichoscopie

L’épilation est une technique de prélèvement permettant de conserver le poil dans son intégralité
(du bulbe à la pointe). Elle se réalise en arrachant une touffe de poils à l’aide d’une paire de pince
ou d’un clamp.
La trichoscopie correspond à l’examen des poils au microscope. Les prélèvements pour la
trichoscopie se font par épilation.

a. Objectif
La trichoscopie a pour objectif le diagnostic des dermatophytoses, des différentes causes d’alopécie,
de mettre en évidence des signes indirects de prurit, des œufs de parasites ou des parasites
pilicoles.

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 b. Principe
Les poils sont prélevés par épilation pour préserver leur intégrité puis observés au microscope pour
évaluer leur structure et rechercher d'éventuels agents pathogènes. (Bensignor and Germain, 2014)

c. Indications
La trichoscopie est indiquée en cas de suspicion :

- D’une parasitose : dermatophytose ou démodécie.

Pour la recherche de Demodex, elle est indiquée comme alternative au raclage cutané dans les
cas d’animaux récalcitrants, de prélèvement de sites sensibles souvent difficiles d’accès ou
lorsque la peau trop épaissie empêchant le prélèvement des follicules pileux malgré un raclage
profond.
- D’une alopécie auto-induite.
- D’une alopécie des robes diluées pour évaluer la distribution de la mélanine au sein de la tige
pilaire.
- D’un effluvium anagène ou télogène.
- D’une alopécie d’origine endocrinienne en examinant la racine des poils.

(Miller et al., 2013; Neuber and Nuttall, 2017)

d. Matériel
- Clamps ou pinces. Il est recommandé d’utiliser des clamps courbes de préférence car ils
limitent les risques de pincer la peau (surtout dans les zones difficiles d’accès comme en zone
interdigitée).
- Lame de microscope et lamelles.
- Huile minérale (huile de paraffine).
- Ruban adhésif transparent.
- Lampe de Wood.
- Microscope.

e. Techniques

• Epilation
Les poils sont sélectionnés au sein d’une lésion ou à sa périphérie. L’utilisation d’une lampe de
Wood aide à repérer des poils infectés par des dermatophytes (Baker and Thomsett, 1990).
Une touffe de poils (10-20 poils) est prélevée à sa base avec une paire de pinces ou un clamp.

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Figure 5 : Epilation d’une touffe de poils avec une pince mousse fine en agrippent les poils
à leur base (Neuber and Nuttall, 2017)
Il est aussi possible d’utiliser ses doigts et de tirer d’un coup sec mais la force d’accroche sera
moindre et les poils les plus ancrés (en phase anagène) peuvent rester insérés dans le follicule ce
qui faussera nos résultats (Neuber and Nuttall, 2017).

Les poils sont arrachés dans leur sens de pousse en les serrant fermement et avec une force de
traction homogène. Si l’on ne serre pas assez, on collectera majoritairement des poils en phase
télogène (moins ancrés dans la peau). Trop de pression, en revanche, peut créer des artéfacts
d’écrasement et tirer trop brusquement peut casser les poils en laissant la partie proximale dans le
follicule (Neuber and Nuttall, 2017).

Les poils prélevés sont ensuite placés dans une goutte d’huile de paraffine sur une lame de
microscope puis recouverts d’une lamelle. Les poils doivent être placés parallèlement les uns aux
autres pour faciliter la lecture (Baker and Thomsett, 1990; Neuber and Nuttall, 2017).

En alternative, il est possible d’utiliser du ruban adhésif transparent pour placer les poils sur la lame
de microscope. Mais des bulles peuvent se former et donc diminuer la qualité de la lecture (Bexfield,
Nick and Lee, 2014; Neuber and Nuttall, 2017).

Une étude de Căpitan et al. sur 20 chats en 2018 a montré que la coloration des poils avec un
colorant bleu de Wright modifié n’apportait aucune aide pour faciliter la détection de poils infectés
par un dermatophyte.

• Trichoscopie

La lame de microscope est d’abord observée dans sa totalité à faible grossissement (obj. x4-10). Il
faut alors noter le nombre de poils normaux ou anormaux, leur diamètre, leur longueur, le nombre
de poils primaires et secondaires. Des parasites adhérents aux poils peuvent aussi être visualisés :
Demodex, Lynxacarus radovsky, œufs de poux ou de cheyletielles (Neuber and Nuttall, 2017).
La lame est ensuite examinée à un plus fort grossissement (obj. x40-100) avec une intensité
lumineuse moyenne pour observer individuellement les poils. On commence par le bulbe puis on
remonte progressivement la tige pilaire jusqu’à sa pointe (Guaguère and Prélaud, 2006).

Cet examen rapproché permet d’identifier le stade de croissance et les anomalies du bulbe, de la
tige ou de la pointe, d’évaluer le cortex et la médulla de la tige, de détecter la présence d’œufs, de

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spores, de squames adhérentes à la tige, d’évaluer la distribution des pigments et d’identifier la
présence de macromélanosomes.

f. Interprétation
La trichoscopie permet d’évaluer de nombreuses caractéristiques des poils ayant chacune un rôle
dans l’établissement du diagnostic final.

• Phase de croissance du follicule

Il existe trois phases de croissance du follicule pour lesquelles les poils auront des bulbes d’aspect
différent.
La phase anagène est la phase de croissance. Les poils ont un large bulbe actif, entouré de tissus
de prolifération non kératinisés et sont fermement attachés à la peau. Le bulbe est plus large que le
diamètre de la tige pilaire, il a une surface d’aspect doux/duveteux, il est flexible et parfois pigmenté.
Au microscope, il peut apparaître écrasé ou s’incurvé (Miller et al., 2013).

Figure 6 : Bulbe en phase anagène (obj. x10) (Coyner, 2019)

La phase télogène est la phase de repos et de chute du poil. Les poils sont faiblement attachés à la
peau et donc s’arrachent plus facilement. La partie bulbaire du poil est majoritairement kératinisée,
elle a un aspect sec et est alignée avec le reste de la tige pilaire. Le bulbe a une forme effilée en
pointe comme un petit pinceau fin (Miller et al., 2013).

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 Figure 7 : Bulbes en phase télogène (obj. x10) (Coyner, 2019; Jackson and Marsella, 2012)

La phase catagène (phase d’involution du bulbe pilaire) est rarement observée. Le bulbe est
d’aspect intermédiaire (Miller et al., 2013).

L’évaluation de la phase prépondérante apporte des informations diagnostiques importantes.

En effet, un excès de poils en phase télogène ou une fourrure entièrement composée de poils en
phase télogène est évocatrice d’une affection endocrinienne, métabolique ou d’une carence
nutritionnelle (Miller et al., 2013). Un effluvium télogène (entrée synchrone et massive des poils en
phase télogène) est la conséquence d’un stress organique brutal (fièvre, troubles métaboliques,
gestation, lactation, malnutrition) ou un stress psychologique.

Il faut toutefois être prudent et faire attention aux variations raciales, saisonnières, sexuelles ou selon
l’âge. Pour le moment il n’existe pas de valeurs de référence établies chez le chien sain sur les ratios
de poils en phase anagène et télogène (Coyner, 2019; Neuber and Nuttall, 2017).

• Anomalies du bulbe

Des bulbes étirés et irréguliers sont visibles en cas d’effluvium anagène, lors de fragilité de la tige
pilaire ou lors de traction trop brusque au moment de l’épilation.
L’effluvium anagène est associé à de sévères troubles métaboliques ou d’intoxication qui
endommagent les cellules en division dans le bulbe et interrompent donc la phase de croissance
pilaire. Il est associé à la chimiothérapie chez l’homme.

Les poils « en point d’exclamation » sont associés à l’alopecia areata (ou pelade).

• Manchons folliculaires (comédons)

Les manchons folliculaires sont associés à une hyperkératose folliculaire et peuvent apparaître lors
de démodécie, de dermatophytose, d’endocrinopathie, de dysplasie folliculaire, d’adénite sébacée
granulomateuse ou lors de troubles primaires de la kératinisation (Neuber and Nuttall, 2017).
Il ne faut pas les confondre avec des poils teigneux.

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 • Défauts de la tige pilaire

Les poils sains sont composés de trois couches : la cuticule externe (écailles), le cortex kératinisé
et la médulla interne. Ces trois couches sont plus difficilement discernables pour les poils pigmentés.

Figure 8 : Aspect microscopique usuel d’une tige pilaire saine ; les trois couches sont
visibles

Les extrémités des poils sont évaluées afin de déceler l'existence d'un prurit (surtout chez le chat).
L’extrémité du poil est dans ce cas d’aspect cassé : émoussée, fendue, effilochée ou interrompue
brutalement (Hnilica et al., 2013; Neuber and Nuttall, 2017; Wilkinson and Harvey, 1994).

Figure 9 : Trichorrhexie caractéristique d’une exacerbation du toilettage chez le chat

(obj. x10) (Coyner, 2019)

Des poils cassés peuvent aussi être présents lors de pathologie affaiblissant les poils : anomalies
génétiques, carences, dermatophytose … (Jackson and Marsella, 2012)

Lors de dermatophytose, la tige pilaire est désorganisée et le cortex et la médulla sont difficilement
distinguables. La tige pilaire est épaissie, d’aspect irrégulier et avec une paroi mal définie (Guaguère
and Prélaud, 2006).

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Lors d'envahissement endo-ectothrix, le cortex du poil présente un renflement et des spores
(arthroconidies) et/ou des hyphes sont visibles autour et au sein de la tige pilaire.

Si le poil est cassé, l'extrémité prend une aspect en brosse (Căpitan et al., 2018; Hnilica et al., 2013).

Figure 10 : Morceau de poils suspect teigneux (obj. x10) (à gauche) et poils teigneux avec
des filaments de dermatophytes dans les tige pilaire (obj. x100) (à droite) (Service de
Parasitologie, ENVA)

Ces observations sont hautement spécifiques d’une dermatophytose mais la trichoscopie est moins
sensible que l’examen à la lampe de Wood ou la culture fongique. Néanmoins, cela reste utile pour
confirmer le diagnostic en présence de poils émettant une fluorescence à la lampe de Wood (Neuber
and Nuttall, 2017).

Les valeurs prédictives positives et négatives de la trichoscopie pour une dermatophytose sont de
93% (Moriello et al., 2017).

Des résultats faux-positifs peuvent tout de même exister si des débris cutanés adhérents aux poils
sont confondus avec des éléments fongiques (Căpitan et al., 2018).

L’absence de signe d’infection par des dermatophytes à l’observation microscopique des poils
n’exclut donc pas une dermatophytose. En cas de suspicion d’infection fongique, il faudra donc
toujours réaliser une culture malgré une trichoscopie négative (Miller et al., 2013).

• Pigmentation et macromélanosomes

Des agrégats anormalement grands de mélanine et dispersés de façon irrégulière appelés

macromélanosomes sont visibles chez les animaux à robe diluée.

Si ces macromélanosomes sont trop grands, ils peuvent perturber la croissance des poils et
distordre la tige pilaire provoquant des fractures. Ces anomalie sont rencontrées lors de
génodermatoses comme l’alopécie des robes diluées ou la dysplasie folliculaire des robes noires
(Hnilica et al., 2013).

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 Figure 11 : Poils avec des macromélanosomes déformant la cuticule chez un chien atteint
d’alopécie des robes diluées (obj. x10) (Coyner, 2019)

• Parasites

Des Demodex ou leurs œufs peuvent être visualisés le long de la tige pilaire près du bulbe lors de
trichoscopie.

Figure 12 : Œufs de Demodex adhérents à la tige pilaire (obj. x10) (Jackson and Marsella,
2012)

Les trichogrammes sont assez sensibles et spécifiques pour la recherche de Demodex mais restent
moins sensibles que les raclages cutanés. Ils sont toutefois particulièrement intéressants en cas de
démodécie interdigitée ou en région péri-oculaire, ou comme test de première intention chez des
animaux peu manipulables pour lesquels une sédation serait nécessaire afin de réaliser un raclage
cutané (Jackson and Marsella, 2012; Mueller et al., 2020).

L’étude de Saridomichelakis et al. en 2007 portant sur 67 chiens atteints de démodécie donne une
sensibilité de 85,1% à la trichoscopie pour la détection de Demodex. En revanche, si la trichoscopie
est négative, un raclage cutané profond devra être réalisé pour exclure une démodécie (Mueller et
al., 2020; Saridomichelakis et al., 2007).

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La présence d’œufs attachés à la tige pilaire est diagnostique d’une infestation de poux ou de
cheyletielles (Hnilica et al., 2013). Les œufs de cheyletielles sont petits, operculés et faiblement
attachés à leur base par des fibres soyeuses. Les œufs de poux sont grands, visibles
macroscopiquement, et « cimentés » au poil sur toute leur longueur.

Figure 13 : Œufs de Cheyletiella (gauche) et de poux (droite) adhérents à la tige pilaire

(Service de Parasitologie, ENVA ; Neuber and Nuttall, 2017)

g. Avantages
C’est la méthode la moins coûteuse, la plus simple et la plus rapide pour l’identification de poils
infectés par un dermatophyte. Elle permet de suspecter une infection fongique et ainsi de
commencer le traitement antifongique précocement en attendant les résultats de la culture fongique
(Căpitan et al., 2018).
La trichoscopie est l’unique méthode pour montrer qu'une alopécie chez un chat résulte d'un
traumatisme auto-induit plutôt qu'une affection folliculaire (Wilkinson and Harvey, 1994).

Elle permet également de mettre en évidence des anomalies de la tige pilaire pouvant refléter une
dystrophie folliculaire (Wilkinson and Harvey, 1994).

h. Inconvénients
Ce n'est pas une méthode fiable pour le diagnostiquer ou écarter une infection par des ectoparasites
(poux, cheyletielles).

Elle ne permet pas un diagnostic d’alopécie des robes diluées, d’endocrinopathie ou d’arrêt du cycle.

Cette technique permet de confirmer des infections parasitaires ou fongiques mais en aucun cas de
les exclure.

Enfin, cette méthode ne permet pas d’identifier l’espèce de dermatophyte responsable de l’infection.

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 D. Otoscopie et vidéo-otoscopie

a. Objectif
L’examen otoscopique ou vidéo-otoscopique a pour objectif d’évaluer l’état de la paroi des conduits
auditifs externes et l’intégrité de la membrane tympanique.
Un diagnostic étiologique d’une otite externe peut être établi dans certaines situations : masse
(polype, néoplasie), corps étranger, sténose, hyperplasie glandulaire ...(Rhodes and Werner, 2018)

b. Principe
La lumière et la paroi du conduit auditif externe ainsi que le tympan sont examinés à l’aide d’un
otoscope à main ou d’un vidéo-otoscope.

c. Indications
Cet examen est indiqué comme examen de première intention lors d’une suspicion d’otite.
Il est aussi utilisé pour les suivis de traitements d’otite externe.
L’utilisation d’un otoscope est nécessaire pour la réalisation de biopsies du conduit auditif ou d’une
myringotomie pour effectuer, par exemple, un prélèvement en vue d’un examen bactériologique de
l’oreille moyenne.

d. Matériel
- Otoscope à main ou vidéo-otoscope
- Embouts de longueurs et diamètres différents à adapter en fonction de la taille du conduit
auditif
- Cotons tiges ou écouvillons pour examen cytologique
- Curettes ou cotons tiges pour la recherche de parasites
- Écouvillon stérile et son contenant de transport pour un examen bactériologique

Pour nettoyer l’oreille :

- NaCl 0,9%
- Seringue de 10-20 ml
- Cuvette haricot en inox
- Alcool 70%
- Compresses non tissées ou coton
- Sonde urinaire ou microperfuseur de longueur suffisante pour passer toute la longueur du
canal auditif
- Sonde d’intubation trachéale si l’animal est anesthésié lors du nettoyage de l’oreille.

(Bexfield, Nick and Lee, 2014)

Il existe différents types d’otoscopes : (Neuber and Nuttall, 2017)

o Otoscope ouvert ou chirurgical :

Il donne un bon accès au conduit auditif (retrait de corps étrangers, rinçage du conduit,
prélèvements) mais le champ visuel est réduit. C’est le plus utilisé dans la pratique courante.

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 o Otoscope fermé :

Il donne une bonne visualisation du conduit auditif et permet la réalisation de la tympanométrie. Mais
on aura peu d’accès pour le retrait des corps étrangers, nettoyer le conduit auditif ou réaliser des
prélèvements en profondeur du conduit auditif.

o Vidéo-otoscope :

C’est l’appareil de choix pour la visualisation des structures profondes et superficielles.

La présence d’un canal opérateur dans la plupart des modèles permet le retrait des corps étrangers,
de nettoyer le conduit auditif externe et l’oreille moyenne, de réaliser des prélèvements par aspiration
ou biopsie, des myringotomies et des chirurgies laser.

De plus, il permet d’enregistrer les images, donc de faire le suivi des lésions et de les montrer aux
propriétaires.

Figure 14 : Vidéo-otoscope (matériel du CHUVA)

e. Technique
L’animal est placé debout, assis ou en décubitus latéral. Il faut assurer une bonne contention pour
ne pas léser le conduit auditif si l’animal bouge pendant l’examen.
La tête de l’animal est baissée de façon à être perpendiculaire à l’axe de la colonne vertébrale et
dans l’alignement du corps de l’animal.

Une sédation ou une anesthésie générale sont parfois nécessaires en cas de forte douleur ou si
l’animal est agressif (Bexfield, Nick and Lee, 2014).

Le pavillon auriculaire et le conduit auditif sont d’abord observés à l’œil nu. Puis le conduit auditif est
palpé pour évaluer la douleur, l’épaississement et l’ossification du canal. Il faut noter si du pus ou
du cérumen sont présents et leur aspect.

Un embout de taille adaptée est choisi pour ne pas devoir forcer en passant dans le conduit auditif
(en général pas plus de 5-6mm). Il est important d’utiliser des embouts propres et désinfectés entre
chaque patient.

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Chaque oreille est examinée en commençant par la moins douloureuse.

L’embout de l’otoscope est inséré dans de conduit auditif en visant l’encoche la plus ventrale parmi
les replis de cartilage (notée « intertragic incisure » sur le schéma ci-dessous). Puis le pavillon
auriculaire est tiré latéralement et ventralement pour aligner le conduit auditif et pouvoir passer
l’otoscope dans la partie horizontale du canal afin d’examiner la membrane tympanique.

Figure 15 : Schéma du pavillon auriculaire chez le chien (Tobias and Johnston, 2018)

Figure 16 : Vue transverse de l’anatomie du conduit auditif externe chez le chien (Tobias
and Johnston, 2018)

Si du pus ou du cérumen en quantité significative obstrue le canal auditif ou la membrane

tympanique, il faut nettoyer l’oreille avec du sérum physiologique. Celui-ci est réchauffé puis instillé
dans l’oreille à l’aide d’une seringue (10-20 ml) fixée à une sonde urinaire et est ensuite réaspiré.

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Il est préférable d’utiliser cette technique avec une visualisation otoscopique en passant la sonde
dans le cône de l’otoscope (Bexfield, Nick and Lee, 2014; Neuber and Nuttall, 2017).

Avant d’utiliser des traitements topiques potentiellement ototoxiques pour l’oreille interne, il
est important d’évaluer l’intégrité de la membrane tympanique. Cependant, lors d’une inflammation
importante du conduit auditif, la membrane tympanique est difficilement visualisable. Un vidéo-
otoscope est alors plus sensible pour la visualisation des petites lésions de la membrane
tympanique.

Si aucune lésion n’est observée à l’otoscope ou que la membrane tympanique n’est pas visualisable,
on peut remplir le conduit auditif de liquide physiologique sur un animal anesthésié et intubé. Si des
bulles remontent, cela est en faveur d’une rupture de la membrane tympanique. Si du liquide
s’écoule d’une narine ou de la gueule (associé à de la toux si l’animal est juste sédaté et non intubé)
cela est aussi en faveur d’une rupture de la membrane tympanique (Neuber and Nuttall, 2017).

Un traitement à base de glucocorticoïdes, quelques jours avant l’examen otoscopique, permet de

réduire l’inflammation, d’ouvrir le canal auditif et facilite donc l’examen (Neuber and Nuttall, 2017).

f. Interprétation
La surface du conduit auditif sain est lisse, avec ou sans poil, de couleur rose pâle. La membrane
tympanique est visualisable et apparaît brillante, translucide avec dorsalement la pars flaccida
épaisse, blanche, bien vascularisée et ventralement la pars tensa semi-transparente. Le manubrium
du marteau est visible par transparence comme une structure blanche dorsale et rostrale en forme
de C. Cependant, la membrane tympanique n’est pas visualisable chez 25% des chiens sains
(Neuber and Nuttall, 2017).

Figure 17 : Membrane tympanique visualisée avec un otoscope chez un chien (gauche) et

un chat (droite) sains ; C, caudal ; R, rostral ; pt, pars tensa ; pf, pars flaccida ; s, septum ;
m, manubrium du marteau ; h, poils (Rhodes and Werner, 2018)

Une petite quantité de cérumen jaune ou marron est normale.

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Structures anormales :

- Visualisation d’Otodectes spp., d’un corps étranger, d’une masse.

- Modification de l’alignement du conduit auditif diffuse ou localisée : hyperplasie des glandes
cérumineuses, sténose, débris (Neuber and Nuttall, 2017).

Pour le diagnostic d’une otacariose, l’examen otoscopique a une sensibilité de 66,7% (Combarros
et al., 2019). Les Otodectes sont visualisables grâce à leurs mouvements. Une durée d’observation
minimale de 15 secondes est recommandée.

g. Avantages
Cet examen est rapide et facilement réalisable. Il permet d’orienter le choix des examens
complémentaires à réaliser.

h. Inconvénients
La membrane tympanique peut être difficilement visualisable physiologiquement ou à cause d’une
quantité importante de cérumen ou de remaniements du conduit auditif.
Cet examen ne permet pas d’identifier les germes présents. Pour cela, un examen des sécrétions
au microscope est nécessaire.
Cet examen est parfois très douloureux pour l’animal si l’inflammation est très sévère (otite suppurée
érosive à ulcérative).

E. Ecouvillon auriculaire pour la recherche de parasites

a. Objectif
Les prélèvements auriculaires par écouvillon ont pour but d’objectiver une dérégulation de la flore
bactérienne, fongique ou parasitaire du conduit auditif externe ou de mettre en évidence
d’éventuelles cellules inflammatoires ou néoplasiques.
Dans cette partie nous traiterons de la technique utilisée pour la recherche d’infestation parasitaire.

b. Principe
Le contenu des conduits auditifs externes est prélevé à l’aide d’une curette ou d’un écouvillon puis
observé au microscope pour la recherche de parasites.

c. Indications
Cet examen est indiqué lors d’une suspicion d’otite externe d’origine parasitaire.
Il est aussi utilisé pour les suivis de traitement d’otite externe parasitaire.
Cet examen est utilisé pour l’identification d’une infection à Otodectes cynotis ou Demodex spp.

d. Matériel
- Otoscope à main ou vidéo-otoscope
- Embouts de longueurs et diamètres différents

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 - Curette en plastique de préférence. On peut aussi utiliser un écouvillon (coton-tige), une
spatule fine ou des pinces
- Huile minérale (huile de paraffine)
- Lame de scalpel
- Lames de microscope et lamelles
- Microscope

L’étude de Combarros en 2019 compare trois méthodes de prélèvements pour la mise en évidence
d’Otodectes cynotis chez le chien et le chat. Elle démontre que la technique de la curette a une
sensibilité plus élevée (93,3%) que les écouvillons auriculaires classiques (56,7%) ou l'otoscopie
seule (66,7%) (Combarros et al., 2019).

e. Technique
Le prélèvement est réalisé après un examen otoscopique de l’oreille. Il doit être fait avant d'utiliser
une solution céruminolytique dans l'oreille et avant tout type de nettoyage du canal auditif. (Wilkinson
and Harvey, 1994)

La curette est insérée doucement jusqu’à la jonction entre le canal auditif vertical et horizontal
(Bexfield, Nick and Lee, 2014). On racle doucement la paroi du conduit avec un mouvement vers
l’extérieur pour récupérer des débris. Si un coton-tige est utilisé, celui-ci est imbibé d’huile minérale
avant d’être inséré dans l’oreille (Combarros et al., 2019).

Ceci peut se faire sous contrôle visuel direct en faisant passer les instruments dans l’otoscope ou à
l’aide d’un vidéo-otoscope.

Il faut aussi faire attention à ne pas enfoncer trop profondément la curette ou le coton tige, sinon il y
a un risque de créer un bouchon avec les débris auriculaires juste en amont du tympan (Neuber and
Nuttall, 2017).

Une goutte d'huile minérale est placée sur une lame de microscope. L’échantillon prélevé y est
ensuite déposé en raclant la curette avec le dos d’une lame de scalpel ou en roulant le coton tige
sur la lame de microscope. Le cérumen est ensuite mélangé à l’huile avec la lame de scalpel afin
de dissoudre le cérumen noirâtre dans l'huile et avoir une solution homogène. Une lamelle est placée
par-dessus la préparation et une pression est exercée dessus.

L'ensemble de la lame doit être examiné à faible grossissement et avec le diaphragme fermé pour
l'identification d'acariens. Les Otodectes sont faciles à visualiser avec le condenseur baissé
(Combarros et al., 2019; Hnilica et al., 2013).

f. Interprétation
La première étape est d’apprécier l’aspect macroscopique du cérumen prélevé.
Si l’écouvillon ou la curette ressort pratiquement propre c'est que l'oreille est probablement saine.
S’il ressort chargé d'un exsudat séreux noirâtre, cela peut être en faveur d’une infestation parasitaire.
Si l’exsudat est marron clair ou d'aspect purulent il convient de réaliser un examen cytologique (avec
coloration) à la recherche de bactéries et de levures. Mais généralement l’aspect macroscopique de
l’exsudat auriculaire a peu de valeur diagnostique (Wilkinson and Harvey, 1994).

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 Figure 18 : Aspect microscopique d’Otodectes cynotis (Jackson and Marsella, 2012;
Rhodes and Werner, 2018)

La technique du curetage combinée à l’examen otoscopique montre une sensibilité de 100% pour
le diagnostic d’une infestation à Otodectes cynotis comparée à 86% quand l'examen otoscopique et
l’écouvillon sont associés (Combarros et al., 2019).

g. Avantages
Ce test présente une très bonne sensibilité si l’on combine un prélèvement à la curette avec l’examen
otoscopique et les résultats sont immédiats.

h. Inconvénients
La lecture des lames est parfois difficile à cause des nombreux débris.

F. Test à la cellophane adhésive pour la recherche de parasites et la

trichoscopie

a. Objectif
Le test à la cellophane adhésive a pour objectif de diagnostiquer une infestation parasitaire cutanée
en recherchant la présence d’ectoparasites superficiels (puces, poux, Cheyletiella et Otodectes) ou
folliculaires (Demodex).
Le test à la cellophane adhésive est aussi utilisé pour l’examen cytologique de la surface cutanée.
Ceci sera abordé dans une autre partie.

b. Principe
Un morceau de ruban de cellophane adhésive transparente est utilisé pour prélever les éléments
des couches superficielles de la peau et les observer au microscope : cellules, poils, squames,
ectoparasites, microorganismes (bactéries, levures), grains de pollen, …(Guaguère and Prélaud,
2006; Neuber and Nuttall, 2017; Wilkinson and Harvey, 1994)

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 c. Indications
Cette technique est indiquée pour l’échantillonnage et l’examen de lésions sèches, lichénifiées,
graisseuses, squameuses ou érodées et les surfaces irrégulières ou difficiles d’accès (espace
interdigité) (Coyner, 2019; Neuber and Nuttall, 2017).
Cette technique est peu recommandée pour l’examen de lésions humides (pustules, exsudat,
érosion, ulcère) car le matériel n’adhère pas bien à la cellophane (Neuber and Nuttall, 2017).

Deux études (Pereira et al. 2012 et Barillas et al. 2019) recommandent cette technique
comme une alternative au raclage cutané et à la trichoscopie pour le diagnostic d’une démodécie.
En effet, l’étude de Pereira et al. montre que le nombre de Demodex détecté avec le test à la
cellophane adhésive avec pincement est significativement plus important qu’avec le raclage cutané
profond. L’étude de Barillas ne montre pas de différence significative entre le nombre de Demodex
détectés par ces deux techniques.
De plus, le test à la cellophane est moins traumatique que le raclage en plus d’être non douloureux
permettant ainsi le prélèvement de zones sensibles (péri orbitaire, commissure des lèvres) ou peu
accessibles au raclage (espace interdigité) (Barillas et al., 2019; Pereira et al., 2012).

Cette technique est aussi indiquée pour le suivi thérapeutique des chiens atteints de
démodécie (Barillas et al., 2019).

d. Matériel
- Cellophane adhésive transparente
- Huile minérale (huile de paraffine)
- Lame de microscope
- Microscope

(Bexfield, Nick and Lee, 2014)

e. Technique
Les poils sur la zone d’intérêt sont écartés ou coupés délicatement en faisant attention de ne pas
perturber la surface cutanée (Guaguère and Prélaud, 2006; Neuber and Nuttall, 2017).
Un morceau de cellophane adhésive transparente de 5 cm environ est appliqué sur la peau puis
retiré d'un mouvement sec. Cette opération peut être répétée plusieurs fois pour que les débris
cutanés (cornéocytes superficiels, cellules inflammatoires ou microorganismes) soient bien collés
sur la cellophane et qu’elle ne soit plus adhésive (Bensignor and Germain, 2014; Guaguère and
Prélaud, 2006).
Il faut faire attention à ne toucher avec ses doigts que les extrémités de la partie adhésive du
morceau de cellophane.
Le morceau de ruban adhésif est ensuite étalé sur une lame de microscope face collante vers le bas
(pas besoin de lamelle) et observé avec le condensateur baissé à faible grossissement : objectif
x4 d’abord, puis x10 pour avoir plus de détails.
Une goutte d’huile minérale peut être appliquée entre la lame et la cellophane pour faciliter la lecture
(Bensignor and Germain, 2014).

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Les Cheyletiella et les poux sont de taille suffisamment importante pour être visualisés à l'œil nu et
prélevés à vue sur la peau avec un morceau de cellophane adhésive. La colle empêche alors le
parasite de s'échapper (Hnilica et al., 2013).

Pour la recherche de Demodex, il faut presser la peau entre ses doigts avant ou pendant l’application
de la cellophane adhésive sur la peau pour faire sortir les parasites des follicules pileux (Coyner,
2019; Neuber and Nuttall, 2017).

f. Interprétation
Cette technique a une bonne sensibilité et une bonne spécificité pour le diagnostic de démodécie
canine (non évaluée sur les chats) (Rhodes and Werner, 2018). En effet, une étude a montré une
sensibilité de 100% pour la recherche de Demodex avec le test à la cellophane adhésive avec
pincement contre 90% avec le raclage cutané profond (Pereira et al., 2012).

Pour le diagnostic des parasites de surface (puces, poux, Cheyletiella), la sensibilité est imparfaite.

Cette technique donne des résultats semi-quantitatifs par zone de prélèvement (Wilkinson and
Harvey, 1994).

Figure 19 : Aspect microscopique de Demodex prélevés avec de la cellophane adhésive

(Barillas et al., 2019)

g. Avantages
Cette technique est moins traumatique que le raclage et peut être utilisée dans des zones où un
raclage cutané peut être difficile à réaliser (zone péri-orbitaire, commissure des lèvre, espace
interdigité) (Barillas et al., 2019).
Moins de débris cellulaires sont obtenus avec la cellophane adhésive ce qui facilite la détection des
parasites contrairement au raclage cutané où la présence de sang et de croûtes limite la lecture de
la lame (Pereira et al., 2012).

h. Inconvénients
Le prélèvement est limité à une zone restreinte de la surface cutanée. Cela augmente les risques
de faux négatifs si la densité de parasites est faible (Wilkinson and Harvey, 1994).

Page 33
 G. Raclage cutané

a. Objectif
La technique du raclage cutané a pour but de détecter et d’identifier des ectoparasites cutanés
(Sarcoptes scabiei, Notoedres cati, Cheyletiella yasguri, poux, Demodex, Pelodera) (Guaguère and
Prélaud, 2006).

b. Principe
A l’aide d’une lame de scalpel émoussée, les couches les plus superficielles de la peau (la surface
cutanée, toute l’épaisseur de l’épiderme et les couches superficielles du derme) sont raclées pour
prélever d’éventuels parasites vivant en surface, dans l’épaisseur de l'épiderme ou dans les follicules
pileux (Bensignor and Germain, 2014).

c. Indications
Cette technique est à réaliser dès qu’une infestation par un ectoparasite est suspectée (Miller et al.,
2013).

Elle est indiquée pour confirmer ou écarter une suspicion de démodécie et pour confirmer la
présence de Sarcoptes, cheyletielles et autres ectoparasites. Mais elle n’est pas suffisante pour
écarter ces derniers du diagnostic en raison du risque important de résultats faux négatifs (Miller et
al., 2013).

C’est une technique alternative à l’épilation de poils en vue de la réalisation d’une trichoscopie lors
d’une suspicion de dermatophytose.

Cette technique est aussi utilisée pour les suivis et évaluer la réponse au traitement antiparasitaire.

d. Matériel
- Tondeuse ou ciseaux
- Huile minérale (huile de paraffine ou chloral-lactophénol)
- Lame de scalpel émoussée (n°10, 11 ou 20 ; n°15 pour les raclages de zones difficiles plus
petites) ou curette. Le mieux est d’utiliser une lame de scalpel à usage unique que l’on
émousse en la frottant sur une surface dure (bord de table en métal) (Coyner, 2019)
- Lames de microscope et lamelles
- Microscope

(Bexfield, Nick and Lee, 2014; Neuber and Nuttall, 2017)

e. Techniques
Il est recommandé de réaliser des prélèvements multiples sur des lésions primaires récentes. Les
papules et croûtes en périphérie de la lésion sont les meilleurs sites de prélèvement. Il faut éviter de
prélever des lésions excoriées (Jackson and Marsella, 2012; Neuber and Nuttall, 2017).

Les zones avec des croûtes épaisses et de l'exsudat doivent être évitées car il sera difficile
d'examiner la préparation finale (Wilkinson and Harvey, 1994).

Page 34
Si trop de poils sont présents, la zone de prélèvement peut être tondue délicatement ou les poils
sont coupés avec des ciseaux en faisant attention de ne pas perturber la surface de la peau et les
débris présents (Bensignor and Germain, 2014).

Une goutte d’huile de paraffine ou de chloral-lactophénol est placée sur la zone à prélever et/ou sur
la lame de scalpel (Bensignor and Germain, 2014; Guaguère and Prélaud, 2006).

Un pli de peau est saisi entre le pouce et l’index puis la lame de scalpel est placée
perpendiculairement au pli et est orientée à un angle de 45-90° par rapport à la surface de la peau
(Guaguère and Prélaud, 2006).

La peau est raclée sur environ 1 cm² dans le sens de pousse des poils en appliquant une pression
modérée. Le mouvement doit être rapide et dans un sens unique (Mueller et al., 2020).

A la fin de chaque passage, il faut soulever la lame avec un mouvement de rotation du poignet pour
récupérer le matériel raclé (Neuber and Nuttall, 2017). Le matériel récolté est déposé dans une
goutte d’huile minérale sur une lame de microscope au fur et à mesure. Plusieurs raclages
successifs peuvent être réalisés sur une même zone en déposant le matériel au fur et à mesure sur
la lame de microscope.

Figure 20 : Raclage cutané (Coyner, 2019; Neuber and Nuttall, 2017)

Une ou deux gouttes du milieu de montage peuvent être ajoutées par-dessus le prélèvement à la fin
du raclage et l’ensemble est mélangé avec la lame de scalpel jusqu’à obtenir un milieu homogène.
Une lamelle est alors placée par-dessus en appuyant légèrement pour étaler le prélèvement (Neuber
and Nuttall, 2017).

Il existe deux techniques de raclage en fonction des parasites recherchés :

o Raclage superficiel (épiderme) : pour le diagnostic d'infection à Sarcoptes scabiei, Notoedres

cati, Cheyletiella, Demodex gatoi, Demodex cornei, Trombicula, poux.

o Raclage profond (derme) : pour le diagnostic d'infection à Demodex canis, Demodex injai,
Demodex cati (Hnilica et al., 2013).

Pour cette technique il faut presser la peau pour faire sortir les Demodex des follicules pileux (dans
le derme) et répéter les raclages jusqu’à la rosée sanguine (= saignement des capillaires cutanés).

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Si le raclage n'est pas réalisé jusqu'à la rosée sanguine, les Demodex peuvent rester au fond des
follicules pileux et donner un résultat faussement négatif (Hnilica et al., 2013).

Tableau 1 : Techniques de raclage cutané indiquées et lieux de prélèvement en fonction du

type de parasite recherché (Coyner, 2019; Hnilica et al., 2013; Jackson and Marsella, 2012;
Miller et al., 2013)
Parasite Type de Zones préférentielles Autre
recherché raclage

Demodex spp. Profond Ligne dorsale ou sites Si les prélèvements sont

d'alopécie focale avec des difficilement réalisables (animal
comédons visibles. Certaines agressif ou site difficile
publications suggèrent que d’accès), on peut réaliser un
Demodex gatoi serez plus test à la cellophane adhésive
facilement rencontré en face ou une épilation pour une
externe de l'épaule chez le trichoscopie → si le résultat est
chat. positif un raclage est inutile
mais s’il est négatif on ne peut
Il faut choisir des lésions pas conclure.
primaires (papules
folliculaires, pustules) et éviter
les zones ulcérées.

Sarcoptes Superficiel Les prélèvements doivent être

scabiei multiples et sur une zone
(Sarcoptidé étendue car les sarcoptes sont
canin) en général peu nombreux.

Coudes, jarrets, bords libres

des pavillons auriculaires.

Il faut choisir des zones sans

excoriation mais avec de
l’érythème, des papules ou des
squamo-croûtes.

Notoedres cati Superficiel Tête, face et oreilles, dans des

(Sarcoptidé zones avec des croûtes et des
félin) squames.

Cheyletiella Superficiel Tête, cou, croupe et queue. Les Cheyletiella sont des
spp. parasites plus grands que les
Les raclages doivent être agents de gale et possiblement
larges et superficiels sur des visibles à l’aide d’une loupe.
lésions squameuses.
A l’œil nu, ils ressemblent à des
squames blancs mouvants.

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 Trombicula Très Autour de l’abouchement du Souvent visibles à l’œil nu :
autumnalis superficiel conduit auditif externe ou sur la orange clair, très adhérents à la
(aoutat) face concave du pavillon peau ou au centre d’une
auriculaire. papule, grande taille, 6 pattes
(larve)

Un véritable raclage cutané

n’est pas nécessaire. Il faut
couvrir les parasites visibles
d’huile de paraffine puis se
servir de la lame de scalpel
pour récolter les parasites
emprisonnés dans l’huile.

Dermatophytes Superficiel Dans la zone de croissance

d’une lésion récente en
incluant des poils et des
squames.

Ne pas tondre.

La lame est ensuite observée au microscope à faible grossissement x 4-10 avec une faible
lumière, le diaphragme fermé et le condenseur baissé. Il faut démarrer à une extrémité de la lame
et la traverser verticalement ou horizontalement puis se décaler d’un champ de vision et traverser
la lame dans l’autre sens. Ceci est répété jusqu’à ce que tout l’échantillon soit examiné.

L'examen microscopique doit être réalisé rapidement car les spécimens de parasites, en particulier
les Demodex, se détériorent assez rapidement ce qui rend plus difficile leur identification (nombre
et stade d'évolution) (Mueller et al., 2020).

Il faut noter la proportion d’acariens vivants ou morts ainsi que leur stade d’évolution : œufs, larves,
nymphes ou adultes (Baker and Thomsett, 1990; Miller et al., 2013).

f. Interprétation
Cette technique présente une bonne spécificité mais une sensibilité variable selon l’affection et sa
gravité. En effet, ce test a une bonne sensibilité pour la détection d’une démodécie mais pour la gale
ou les dermatophytoses la sensibilité est moyenne et donc un résultat négatif ne permet pas de les
écarter du diagnostic (Wilkinson and Harvey, 1994).

Des faux-négatifs sont possibles si les prélèvements sont de mauvaise qualité, s’ils ne sont pas
assez nombreux (surtout pour la gale sarcoptique) ou si les zones prélevées sont mal choisies
(Bensignor and Germain, 2014).

Cet examen est, cependant, très spécifique : il n’y a pas de faux positif tant que la diagnose du
parasite est faite correctement.

Page 37
 Pour le diagnostic d’une démodécie, le résultat est positif si plusieurs formes adultes sont
présentes sur un site de prélèvement, si des formes adultes sont présentes dans plusieurs sites ou
si des formes immatures sont présentes (œufs, larve, nymphe).

Attention, chez les Sharpeï, les Demodex peuvent se situer très profondément dans le follicule et
les résultats faux négatifs sont décrits malgré un prélèvement bien réalisé jusqu’à la rosée sanguine.

Des Demodex peuvent être présents chez un chien sain en faible quantité car ils font partie de
l’écosystème de la peau mais il est très rare d’en trouver physiologiquement. Donc si un Demodex
adulte est retrouvé sans signe d’appel pour une démodécie, il ne faut pas surinterpréter (Miller et
al., 2013).

Pour le diagnostic d’une gale, un seul sarcopte visible ou la visualisation de matière fécale de
sarcoptes (marron foncé rond ou ovale) est un diagnostic de certitude. Par contre, en cas de résultat
négatif, on ne peut pas exclure la présence de sarcoptes en raison des nombreux faux négatifs
possibles (Miller et al., 2013).

Figure 21 : Aspect microscopique de Sarcoptes scabiei (gauche) et de Cheyletiella (droite)

obtenus par raclage cutané (Jackson and Marsella, 2012; Rhodes and Werner, 2018)

Si des poils sont présents dans le prélèvement, il est possible de détecter la présence de
dermatophytes (voir partie interprétation d’une trichoscopie).

g. Avantages
Cet examen est relativement facile et rapide. Il permet d’identifier de nombreuses affections
parasitaires (Hnilica et al., 2013).

Cette technique permet de prélever de toutes les couches de l'épiderme et le derme superficiel.

Il n’y a pas de coloration nécessaire et le résultat est immédiatement disponible (Wilkinson and
Harvey, 1994).

h. Inconvénients
C’est une technique traumatique et douloureuse, difficilement réalisable dans des zones sensibles
comme la région périoculaire, la commissure des lèvres et les espaces interdigités.

Cette technique ne permet pas d’exclure une gale en cas de résultat négatif.

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 H. Examen cytologique
Les examens complémentaires cytologiques correspondent aux examens d’observation
microscopique d’étalements de cellules en monocouche après la réalisation d’une coloration à la
clinique ou dans un laboratoire spécialisé. Il existe plusieurs techniques de prélèvements en fonction
de la nature des lésions présentes.

a. Objectifs
Les techniques d’échantillonnages pour la réalisation d’un examen cytologique sont utilisées pour
la détection de bactéries, de levures, de champignons et de cellules inflammatoires ou néoplasiques
dans un but diagnostique et pour le suivi du traitement (Layne and Zabel, 2017).

Elles permettent de distinguer une infection bactérienne d’une contamination bactérienne, de

déterminer la profondeur de l’infection, de déterminer si une pustule contient des bactéries ou est
stérile, de déterminer la présence de levures ou de filaments mycéliens, d’identifier des néoplasies
cutanées ou de mettre en évidence des cellules acantholytiques en cas de pemphigus (Miller et al.,
2013).

Ainsi, les résultats de cet examen permettent d’adapter le choix du traitement ou d’orienter les
examens complémentaires à réaliser secondairement.

b. Principe
Les cellules et les éléments figurés prélevés à partir la surface cutanée, du conduit auditif, de lésions
nodulaires ou de tissus profonds sont étalés en monocouche et colorés à l’aide d’une coloration
rapide Wright modifiée puis observés au microscope (Bensignor and Germain, 2014; Neuber and
Nuttall, 2017).

c. Indications
Cet examen est indiqué lors de dermatoses, pour lesquelles, on souhaite connaître le type d’infiltrat
cellulaire ou savoir si des bactéries, des levures, … sont présentes :

- Lésions exsudatives, ulcératives, fistulisées

- Pustules, vésicules, kystes
- Lésions squameuses ou crouteuses
- Nodules, papules, plaques

(Guaguère and Prélaud, 2006)

Cet examen est aussi utilisé pour l’évaluation rapide d’une masse après excision avant son analyse
histologique.

Cet examen est indiqué pour le suivi d’un traitement antibiotique par des méthodes semi-
quantitatives ou quantitatives (Budach and Mueller, 2012; Udenberg et al., 2014).

d. Matériel et techniques
Les techniques de prélèvement et le matériel utilisés varient en fonction du type de lésion.

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Matériel commun à toutes les techniques :
- Lames de microscope et lamelles
- Kits de coloration rapides (RAL 555 ou Diff Quick)
- Tondeuse ou ciseaux
- Microscope

(Bexfield, Nick and Lee, 2014; Miller et al., 2013)

Tableau 2 : Techniques de prélèvements pour un examen cytologique en fonction du type

de lésion et matériel nécessaire spécifique à chaque technique (Barillas et al., 2019; Bond et
al., 2020; Guaguère and Prélaud, 2006; Mendelsohn et al., 2006; Miller et al., 2013)
Technique Types de lésions Matériel spécifique

Calque par Lésions exsudatives (érosion, ulcère), états Aiguille stérile

impression kérato-séborrhéiques et lésions
croûteuses.

Pour prélever le contenu folliculaire ou pour

échantillonner les cellules sur du matériel
d’exérèse (nodule) après avoir enlevé
l’excès de sang de la surface de coupe en
utilisant une compresse sèche.

Calques de lésions Lésions avec un contenu liquide (pustules, Aiguille stérile

bulleuses vésicules, papules, bulles).

Calques indirects Fistules, sinus de drainage, lésions des Aiguille stérile,

espaces interdigités, buccales, des replis écouvillon stérile
cutanés, du bourrelet unguéal et lésions
superficielles suintantes et croûteuses.
C’est-à-dire les lésions où l’on ne peut pas
appliquer directement la lame de
microscope dessus.

Test à la cellophane Lésions sèches, graisseuses, squameuses, Ruban de cellophane

adhésive lichénifiées, érodées ou sur surfaces adhésive transparente
irrégulières ou difficilement accessible
(espace interdigité, commissure des lèvres)

Raclage cutané Même lésions que pour le calque par Lame de scalpel
impression. émoussée, huile de
paraffine
Recommandé pour la recherche de
leishmanies (présentes surtout dans le
derme).

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 Ecouvillon auriculaire Conduit auditif externe ou oreille moyenne Otoscope ou vidéo-
après myringotomie. otoscope, écouvillon
stérile

Cytoponction à Lésions nodulaires, plaques, masses Aiguilles stériles (20 à 25

l’aiguille fine cutanées, kystes, pustules, vésicules ou gauges), seringues de 2,
bulles, lymphadénopathies, lésions/masses 5 ou 10 ml et gants
profondes (par échoguidage).

• Méthodes de prélèvement
Si trop de poils sont présents, la zone de prélèvement peut être tondue délicatement ou les poils
sont coupés aux ciseaux. Cette technique est réalisable sur animal vigile la plupart du temps.

▪ Calque par impression

La lame de microscope est pressée directement sur la lésion et frottée délicatement en faisant
contre-appui sur la lame avec son doigt. Il faut faire attention de ne pas mettre son doigt en regard
du site de dépôt du prélèvement sur la lame. Ce geste peut être répété plusieurs fois afin de réaliser
plusieurs prélèvements de la lésion en décalant la lame au fur et à mesure pour obtenir une série
d’échantillons sur la même lame de microscope.(Jackson and Marsella, 2012; Neuber and Nuttall,
2017)

Il est parfois nécessaire de débrider doucement la lésion avec le bord de la lame ou une aiguille
stérile pour réaviver la lésion. (Bensignor and Germain, 2014)

Pour les lésions croûteuses, il faut retirer la croûte pour faire un prélèvement sous-crustacé et
appliquer la lame sur la lésion exsudative sous-jacente.(Bensignor and Germain, 2014; Neuber and
Nuttall, 2017; Rhodes and Werner, 2018)

Les dermatose à levures (lors d’état kérato-séborrhéique) peuvent être échantillonnées en

appliquant plusieurs fois une lame sur des lésions lichénifiées (Bensignor and Germain, 2014;
Hnilica et al., 2013).

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 Figure 22 : Calque par impression (Coyner, 2019)

▪ Calque de lésions bulleuses

Pour les lésions avec un contenu liquidien, il faut rompre une lésion intacte avec une aiguille stérile
(21G) ou le coin de la lame de microscope.

Ensuite le contenu de la lésion est déposé sur la lame ou celle-ci est appliquée directement sur la
lésion (calque par impression).

Le prélèvement est ensuite étalé sur la lame de microscope à l’aide d’une autre lame placée
perpendiculairement et à plat sans appliquer trop de pression pour ne pas léser les cellules
(Bensignor and Germain, 2014; Guaguère and Prélaud, 2006; Miller et al., 2013).

Figure 23 : Rupture d’une pustule intacte avant la réalisation d’un calque par impression
(Coyner, 2019)

▪ Calque indirect (écouvillon)

La lésion peut être doucement débridée avant le prélèvement si nécessaire (Neuber and Nuttall,
2017).

Cette fois encore, la technique de prélèvement varie en fonction du type de lésion à prélever :

o Pour une fistule, l’écouvillon est inséré dans la fistule et tourné doucement (mouvement
rotatoire) (Miller et al., 2013).
o Pour les dermatose profondes, la peau autour d’un furoncle intact est pressée pour faire
sortir du contenu puis le collecter avec l’écouvillon (Neuber and Nuttall, 2017).
o Pour les espaces interdigités et les lésions humides, l’écouvillon est frotté sur la surface de
la lésion (Miller et al., 2013).
o Pour les lésions sèches, l’écouvillon est humidifié avec du sérum physiologique stérile pour
minimiser les dommages aux cellules et prélever plus de matériel lors de lésions sèches si
le test à la cellophane adhésive n’est pas privilégié. Puis il est frotté sur la surface de la lésion
(Miller et al., 2013).
o Pour collecter le repli unguéal (repli de peau à la base des griffes), l’écouvillon est inséré
dans le repli unguéal pour le prélever. Pour les animaux de petite taille, il est possible
d’utiliser un cure-dent ou de casser le manche en bois de l’écouvillon pour former une pointe
fine (Bond et al., 2020; Lo and Rosenkrantz, 2016; Mendelsohn et al., 2006).

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L’extrémité de l’écouvillon avec le prélèvement est ensuite roulée sur la lame de microscope pour
étaler les cellules en monocouche (Neuber and Nuttall, 2017).

Attention, l’écouvillon peut déposer des fibres de coton pouvant être confondues avec des hyphes
fongiques (Neuber and Nuttall, 2017).

Il est aussi possible d’utiliser une curette ou une spatule, mais cela peut être plus traumatique. Dans
ce cas, le matériel échantillonné est déposé sur la lame de microscope puis étalé.

▪ Test à la cellophane adhésive

La technique est identique à celle décrite pour la recherche de parasites.

Ce qui diffère, cependant, est la coloration au Diff-Quick ou RAL 555. Attention à ne pas utiliser le
fixateur car cela risque de dissoudre la partie adhésive et nous faire perdre le prélèvement. La
cellophane adhésive est trempée dans le colorant à base d’éosine (10 x 1 seconde) puis dans le
colorant à base de bleu de méthylène (10 x 1 seconde) (Neuber and Nuttall, 2017).

La cellophane est ensuite rincée sous un filet d’eau et collée à une lame de microscope. L’excès
d’eau ou de colorant est essuyé avec du papier absorbant avant observation au microscope
(Guaguère and Prélaud, 2006; Neuber and Nuttall, 2017).

Il existe une alternative en plaçant une goutte du colorant basophile sur une lame de microscope
puis en collant le ruban adhésif avec le prélèvement par-dessus (Neuber and Nuttall, 2017).

Il est inutile d’utiliser une lamelle, c'est la cellophane qui joue ce rôle (Hnilica et al., 2013).

Figure 24 : Prélèvement avec de la cellophane adhésive (Coyner, 2019)

▪ Ecouvillon auriculaire

Contrairement à la technique pour la recherche de parasites, on préfère utiliser un écouvillon plutôt

qu’une curette pour l’examen cytologique.
L’écouvillon est inséré doucement jusqu’à la jonction entre le conduit auditif vertical et horizontal
(Bexfield, Nick and Lee, 2014). Puis il est tourné doucement et frotté sur la paroi du conduit auditif

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pour récupérer des débris. Ceci peut se faire sous contrôle visuel direct en faisant passer les
instruments dans l’otoscope ou à l’aide d’un vidéo-otoscope.

Il est inutile d’enfoncer trop profondément le coton tige, sinon il y a un risque de créer un bouchon
avec les débris auriculaires et de faire mal à l’animal (Neuber and Nuttall, 2017).

Le matériel collecté est ensuite étalé en monocouche sur une lame de microscope en roulant
délicatement l’écouvillon. (Bexfield, Nick and Lee, 2014).

Il faut réaliser des prélèvements dans les deux oreilles et bien les identifier car la nature de
l’inflammation/infection peut varier d’un côté à l’autre chez un même patient (Neuber and Nuttall,
2017). Pour faciliter identification, on peut rouler le coton-tige de l'oreille gauche sur la partie gauche
de la lame et celui de l'oreille droite sur la partie droite ou faire des étalements de formes différentes
(Hnilica et al., 2013).

Les prélèvements de l’oreille moyenne se font en utilisant un otoscope à main ou

préférentiellement un vidéo-otoscope, sous anesthésie générale.

Le conduit auditif externe est nettoyé au préalable puis une myringotomie doit être réalisée si la
membrane tympanique est intacte.

L’écouvillon est inséré à travers la membrane tympanique rompue ou l’incision de myringotomie

dans la cavité de l’oreille moyenne. L’écouvillon peut être protégé des contaminations par le conduit
auditif externe en le plaçant dans une tubulure stérile.

Une technique alternative est de faire passer une tubulure fine jusqu’à l’oreille moyenne, d’injecter
0,5-1 ml de liquide physiologique puis de réaspirer le liquide. Le liquide peut ensuite être mis en
culture pour un examen bactériologique ou centrifugé puis étalé (même méthode que pour un frottis
sanguin) pour un examen cytologique (Neuber and Nuttall, 2017).

▪ Cytoponction à l’aiguille fine

Les poids présents sur la zone à prélever sont tondus. Une sédation est rarement nécessaire.

Il faut ensuite réaliser une désinfection chirurgicale ou appliquer de l’alcool sur le site de prélèvement
(Hnilica et al., 2013; Jackson and Marsella, 2012).

Pour les petites lésions contenant du liquide (pustules, vésicules), il faut utiliser une aiguille de 22-
23 gauges et une seringue de 2-3 ml et aspirer le contenu de la lésion (Rhodes and Werner, 2018).

Pour les masses, la lésion est immobilisée entre de pouce et l’index puis une aiguille (21-25 gauges)
est insérée en son centre avec l’autre main. Les lésions solides, indurées peuvent nécessiter
l’utilisation d’une aiguille de 18 gauges (Miller et al., 2013).

Des mouvements de va-et-vient sont ensuite réalisés en réorientant à chaque fois l’aiguille sans la
sortir de la masse. L’aiguille peut être montée ou non sur une seringue (Miller et al., 2013; Neuber
and Nuttall, 2017).

Cette technique est sans pression négative ce qui limite le risque de dilution accidentelle de
l'échantillon par une contamination sanguine, elle est idéale pour les masses molles ou les tumeurs
très vascularisées (Bensignor and Germain, 2014; Hnilica et al., 2013).

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L’aiguille est ensuite montée sur une seringue de 5-10 ml remplie d’air et le matériel contenu dans
l’aiguille est expulsé sur une lame de microscope.

Les aiguilles larges permettent de collecter plus de cellules mais sont plus traumatiques et le risque
de contamination sanguine est majoré (rend plus difficile la lecture de la lame) (Neuber and Nuttall,
2017).

Si aucun matériel n’est obtenu (nodule ferme peu exfoliatif), on utilise une technique à
pression négative.

L’aiguille est montée sur une seringue de 5-10 ml puis insérée dans la masse comme
précédemment.

Le prélèvement se fait par aspiration en tirant sur le piston de la seringue. Puis le piston est relâché,
l’aiguille est réorientée dans une autre direction et on aspire à nouveau. Ce geste est répété 3-4 fois.

Cette technique peut endommager les cellules et augmente les risques de contamination sanguine
(Bexfield, Nick and Lee, 2014). Il faut arrêter si du sang apparaît dans la garde de l'aiguille car cela
dilue l'échantillon cellulaire et rend la lame difficile à interpréter (Hnilica et al., 2013; Jackson and
Marsella, 2012; Miller et al., 2013; Rhodes and Werner, 2018).

Il existe une alternative à cette technique par succion continue. Après avoir inséré l’aiguille dans la
masse, le piston est tiré jusqu’à la moitié ou les ¾ de la seringue (2-3 ml de vide). Puis le vide est
maintenu pendant que des aller-retours sont faits avec l’aiguille en la redirigeant plusieurs fois. Il ne
faut pas faire sortir l’aiguille de la masse. Le piston est relâché avant de sortir l’aiguille de la masse.

L’aiguille est ensuite retirée de la seringue, puis la seringue est remplie d’air et l’aiguille est remontée
dessus. Il est aussi possible d’utiliser une seringue contenant déjà 0,5 ml d’air avant le prélèvement
pour pouvoir directement expulser l’échantillon sur la lame sans avoir à démonter l’aiguille. Enfin le
contenu de l’aiguille est expulsé sur une lame de microscope comme précédemment.

Le prélèvement est ensuite étalé sur la lame de microscope à l’aide d’une autre lame ou de
l’aiguille (Bexfield, Nick and Lee, 2014; Neuber and Nuttall, 2017).

Il existe deux techniques d’étalement du prélèvement :

o Par écrasement :

Le prélèvement est déposé au centre de la lame et une deuxième lame d’étalement est placée
perpendiculairement et à plat sur la première. Il ne faut pas exercer trop de pression vers le bas pour
ne pas rompre les cellules.

La lame d’étalement est glissée rapidement et en douceur jusqu’à l’extrémité de la première lame
(Bexfield, Nick and Lee, 2014; Neuber and Nuttall, 2017).

o Pour les échantillons très fluides ou le sang (technique du frottis) :

On utilise une lame d’étalement avec un coin manquant pour éviter que les cellules ne sortent de la
lame.

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Le prélèvement est déposé près d’une extrémité de la lame. La lame d’étalement est tenue entre le
pouce et le majeur et l’index est placé sur le dessus de la lame. La lame d’étalement est positionnée
devant le prélèvement selon un angle de 30° environ et est glissée vers l’arrière (vers le prélèvement)
jusqu’à ce qu’elle touche le prélèvement et qu’il se répande sur l’arrête de la lame. La lame
d’étalement est ensuite avancée vers l’avant rapidement et en douceur.

Aux deux tiers de la lame, la lame d’étalement est relevée brusquement pour concentrer les cellules
à la fin de l’étalement (Bexfield, Nick and Lee, 2014).

Excepté, pour le test à la cellophane adhésive, l’étalement sèche à l’air libre puis est coloré
(Guaguère and Prélaud, 2006; Miller et al., 2013; Neuber and Nuttall, 2017).

Pour les prélèvements très gras, cireux ou de peau sèche collectés par calque ou écouvillon (cutané
ou auriculaire), il est possible de les fixer par la chaleur en utilisant un sèche-cheveux ou en passant
la lame par-dessus la flamme d’un briquet pendant 2 à 5 secondes. Il faut essuyer la suie qui pourrait
se former sur le dessous de la lame. La fixation par la chaleur doit être brève pour ne pas altérer
l'échantillon (Miller et al., 2013; Rhodes and Werner, 2018). Cette technique est sujet à controverse
selon les auteurs (Mendelsohn et al., 2006). En effet, plusieurs études montrent qu’il n’y a pas de
différence dans les résultats en cas de fixation avec ou sans chaleur (Griffin et al., 2007; Toma et
al., 2006).

• Coloration
Les colorations de choix sont les colorations de Wright modifiées (Diff-Quick ou RAL 555) et le bleu
de méthylène.

La coloration Diff-Quick est la plus utilisée. C’est une coloration Romanovsky facile et rapide. Elle
donne moins de détails nucléaires que les colorations supravitales comme le bleu de méthylène
nouveau mais permet une meilleure différenciation des structures cytoplasmiques et des
organismes. Elle est recommandée pour l’étude de lésions non néoplasiques.

Si l’on suspecte une lésion néoplasique, il faut faire deux lames, une pour chaque coloration : Diff-
Quick et bleu de méthylène nouveau.

Le processus de coloration doit être doux pour éviter de déloger le matériel de la lame de
microscope. Celle-ci est plongée dans chaque pot de fixateur/colorant une seule fois et y est
maintenue 10 secondes. La lame est rincée sous un mince filet d’eau à basse pression sur la face
opposée à celle où se trouve le prélèvement. (Rhodes and Werner, 2018).

La lame sèche ensuite à l’air libre.

Plusieurs études montrent qu’il n’y a pas de différence dans les résultats de l’examen cytologique
avec la technique de la cellophane adhésive et les calques en fonction de la méthode de coloration :
coloration complète (Diff-Quick ou RAL555) ou utilisation du dernier pot de colorant uniquement.
Une coloration avec un passage unique dans le pot de colorant basophile est donc possible pour
gagner du temps sans perdre en valeur diagnostique (Deschamps and Bensignor, 2010; Layne and
Zabel, 2017).
Il est aussi possible de faire une coloration de Gram en cas d’infection bactérienne pour obtenir des
informations sur la nature des bactéries présentes. Mais elle est rarement réalisée en pratique car

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c’est une technique longue et le résultat a souvent peu d'influence sur le choix thérapeutique
(Mendelsohn et al., 2006).

Il existe d’autres colorations mais elles ne sont pas applicables en clinique (technique longue et
produits souvent toxiques) :

- Coloration May-Grünwald-Giemsa : elle donne une meilleure qualité de coloration que les
colorations rapides (Bensignor and Germain, 2014; Guaguère and Prélaud, 2006).
- Coloration de Wright : elle permet une coloration spécifique du cytoplasme, du noyau et des
micro-organismes. Mais la coloration des noyaux et nucléoles est moins nette qu’avec les
colorations supra-vitales.
- Colorations supra-vitales (Papanicolaou, hémalun-éosine, bleu de méthylène nouveau) :
elles donnent d’excellents détails du noyau et des nucléoles, une bonne visualisation de
l’architecture cellulaire, des granules cytoplasmiques et des éléments fongiques ; mais elles
colorent mal les structures cytoplasmiques et la visualisation des bactéries est difficile
(Guaguère and Prélaud, 2006).
- Coloration rouge Soudan III : c’est une coloration spécifique des lipides (Guaguère and
Prélaud, 2006).
- Coloration Ziehl-Neelsen : elle colore les mycobactéries en rouge. Elle est surtout utilisée
pour les examens histologiques (Guaguère and Prélaud, 2006).
- Bleu de Toluidine 1% : il permet de visualiser les granules des mastocytes en les colorant en
violet mais il est surtout utilisé pour les examens histologiques (Baker and Thomsett, 1990).

Pour mettre en évidence une mycose, les colorations à utiliser sont la coloration Diff-Quick (bleu-
violet pâle), l’acide périodique Schiff ou l’encre de Chine (souligne la capsule des levures,
recommandé pour l’identification de Cryptococcus neoformans) (Miller et al., 2013).

Si l’on veut envoyer une lame pour une analyse en laboratoire, il faut contacter le laboratoire
au préalable pour savoir si des conditions spéciales d’envoi sont nécessaires. Il est conseiller de
réaliser au moins deux lames : une pour nous et une ou plus pour le laboratoire (Neuber and Nuttall,
2017).

L’échantillon peut être fixé de façon permanente en appliquant une petite quantité de milieu de
montage (par exemple le milieu Permount) avec une lamelle (Rhodes and Werner, 2018).

• Observation au microscope
L’examen microscopique des lames se fait d’abord à faible grossissement (obj. x4-10), forte
luminosité, condenseur haut et diaphragme ouvert pour localiser les zones d’intérêt : zones avec la
plus haute concentration de cellules inflammatoires, de filet de chromatine ou de kératinocytes
(Bajwa, 2017; Gortel, 2013).

Puis la lame est observée à fort grossissement (obj. x40-100) pour identifier les types cellulaires
ainsi que les organismes bactériens et fongiques (Coyner, 2019; Guaguère and Prélaud, 2006;
Rhodes and Werner, 2018).

Il est important d’évaluer plusieurs zones de la lame car les cellules et les organismes visualisés
peuvent varier entre les différentes parties d’une lame (Bajwa, 2017).

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 e. Interprétation
L'examen microscopique permet de différencier les lésions néoplasiques ou non néoplasiques,
d'identifier la présence d’agents pathogènes et d'identifier les différents types cellulaires présents
dans la lésion.

Il est courant qu’un diagnostic ne puisse pas être posé à la suite d’un examen cytologique, il est
toutefois important de savoir différentier une lésion inflammatoire d’une lésion néoplasique.

Avant d'analyser la préparation, il faut évaluer sa qualité et la représentativité de l'échantillon.

Les principaux défauts des étalements sont une densité excessive (cellules superposées), une
dilution excessive, un excès d'écrasement (lyse cellulaire), un défaut de séchage ou de coloration
(perte de netteté, noyaux pâles) et l’utilisation de lames mal dégraissées (Bensignor and Germain,
2014).

Les défauts de préparation ou de représentativité sont à l’origine de résultats faussement négatifs.

• Eléments physiologiques
Il est normal, chez un animal sain de retrouver des squames (kératinocytes anguleux et anucléés),
quelques kératinocytes nucléés, de la cire dans les conduits auditifs, des débris de surface. On
trouve aussi des granules de mélanine, des granules de kératohyaline (surtout dans les
kératinocytes nucléés venant de la couche granuleuse de l’épiderme ; rose ou violet et de forme
irrégulière), des précipitations de colorant (amorphes et granuleux et souvent violet foncé ou noir),
du pollen, des spores de champignons saprophytes et des bactéries buccales (Conchiformibius) ou
commensales (bacilles) lors de prélèvements labiaux ou des coussinets (Coyner, 2019; Miller et al.,
2013; Rhodes and Werner, 2018).

Sur une peau saine, on doit retrouver moins d'un type de microorganisme (levure, cocci ou bacille)
par champ d'observation à l'huile à immersion et normalement aucune cellule inflammatoire ne doit
être visible (Coyner, 2019).

• Types de lésions
Un prélèvement est considéré comme anormal quand on retrouve :

- Trois levures ou plus par champ à l'objectif x100 chez les chiens et les chats (sauf chez les
races prédisposées comme le Basset Hound ou le chat Sphynx).
- Cinq coques ou plus par champ à l'objectif x100 ou plus d’un bacille.
- Des cellules inflammatoires.

Ces chiffres sont des indications à relativiser selon les signes cliniques, la localisation, la race …

Les lésions néoplasiques sont caractérisées par un type cellulaire majoritaire associé ou non
à la présence d’hématies, de neutrophiles ou d’autres cellules inflammatoires (Neuber and Nuttall,
2017).

Ainsi, on retrouve des tumeurs des cellules épithéliales (adénome, carcinome, adénocarcinome),
mésenchymateuses ou rondes (mastocytome, lymphome, histiocytome cutané bénin, sarcome

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histiocytaire localisé ou disséminé, plasmocytome cutané, tumeur vénérienne transmissible,
mélanome) et des lipomes (Neuber and Nuttall, 2017).

Les signes de malignité sont un noyau de taille augmentée et pâle, des variations de la
forme/taille/couleur du noyau et du cytoplasme, des nucléoles multiples ou larges, un cytoplasme
basophile et granuleux, des figures de mitoses multiples et anormales, des cellules multinucléées
et/ou géantes, des anaplasies. Il faut qu’au moins trois de ces critères soient présents sur la lame
pour parler de malignité (Neuber and Nuttall, 2017).

Lors de lésions non néoplasiques, il faut pouvoir reconnaître les principaux types cellulaires
cutanés et/ou sanguins :

o Cellules épithéliales : kératinocytes, kératinocytes acantholytiques.

o Cellules des tissus de soutien : fibroblastes, myofibroblastes, cellules mésenchymateuses
o Cellules sanguines et inflammatoires : hématies, polynucléaires neutrophiles ou
éosinophiles, lymphocytes, macrophages, mastocytes, fibroblastes parfois.

(Bensignor and Germain, 2014; Neuber and Nuttall, 2017)

Les lésions inflammatoires sont caractérisées par des populations hétérogènes de cellules
habituellement présentes dans le tissu cutané : granulocytes neutrophiles ou éosinophiles, cellules
lymphoïdes, macrophages, mastocytes, cellules épithéliales et fibroblastes. Mais il existe des pièges
comme une tumeur surinfectée. (Bensignor and Germain, 2014)

Les lésions inflammatoires cutanées sont classées en fonction du type cellulaire prédominant :

o La présence de neutrophiles dégénérés ou toxiques est caractéristique d’une lésion

suppurée. Si des bactéries intracellulaires sont présentes c’est un signe d’infection.
o Les lésions pyogranulomateuses (neutrophiles dégénérés, monocytes et macrophages
activés) peuvent être présentes lors d’infection bactérienne, de mycobactériose, d’infection
fongique ou de syndrome pyogranulomateux stérile idiopathique.
o Les lésions granulomateuses sont caractérisées par un grand nombre de macrophages.
o Les neutrophiles non dégénérés sont le signe d’une inflammation stérile (réaction
dysimmunitaire).
o Les lésions éosinophiliques sont présentes lors de parasitisme, d’allergie (hypersensibilité),
de complexe de granulome éosinophilique, de réaction à un corps étranger (kératine libre et
tige pilaire en cas de furonculose), de mastocytomes, ou d’infection fongique.
o Les cellules géantes polynucléées sont présentes lors d’infection fongique ou de réaction à
un corps étranger.
o Des kératinocytes acantholytiques.
o Plasmocytaire (plasmocytes).

(Bensignor and Germain, 2014)

Globalement, des neutrophiles ou des éosinophiles peuvent être présents lors d’infection cutanée,
d’un ectoparasite, de pemphigus ou d’une maladie allergique sous-jacente (Barillas et al., 2019).

Les cellules acantholytiques évoquent un pemphigus mais également une infection à germes
susceptibles de provoquer une acantholyse (certaines souches de staphylocoques, certains

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dermatophytes comme Trichophyton mentagrophytes) (Coyner, 2019). Pour le diagnostic d’un
pemphigus, une biopsie est nécessaire avec analyse histologique après la réalisation d’une
antibiothérapie et d’une culture fongique (Coyner, 2019; Neuber and Nuttall, 2017). Lors de
l'aspiration de pustules ou de vésicules (Tzank test), si l'on identifie des kératinocytes
acantholytiques entourés de neutrophiles cela est hautement suggestif d'un pemphigus foliacé
(Wilkinson and Harvey, 1994).

Figure 25 : Kératinocytes acantholytiques et granulocytes neutrophiles non-dégénérés

dans le cas d’un pemphigus foliacé (Rhodes and Werner, 2018)

• Agents pathogènes
Si une lésion inflammatoire est identifiée, il faut rechercher la présence de microorganismes. Des
organismes intracellulaires phagocytés par des neutrophiles ou des macrophages confirment un
processus infectieux (pyodermite). Les organismes extra-cellulaires peuvent aussi être tout
simplement des contaminants (flore commensale ou contaminants environnementaux) (Barillas et
al., 2019; Neuber et Nuttall, 2017).

Si des bactéries sont présentes, leur identification se fait alors seulement sur leur
morphologie : bacille ou coque.

Il est possible d’utiliser une coloration de Gram pour savoir si les bactéries sont Gram positives ou
négatives. Mais l’identification exacte de l’espèce de bactérie est impossible, pour cela il faut réaliser
une culture (Miller et al., 2013; Neuber and Nuttall, 2017).

L'identification de coques à l'intérieur de neutrophiles dans un prélèvement provenant d'une pustule

aspirée à l'aiguille est caractéristique d'une pyodermite superficielle (Wilkinson and Harvey, 1994).

Lors d’un examen cytologique de la surface cutanée, l’absence de germes (cocci, bacilles) permet
d’exclure une infection avec ce type de germe. Cependant, lors lésions profondes, l’absence de
germe ne permet pas de conclure. En effet, contrairement aux infections superficielles, lors de
pyodermites profondes, il est difficile de visualiser des bactéries à la cytologie. Il faut donc bien
observer tout le prélèvement à la recherche de bactéries intracellulaires et ne pas conclure trop vite
à un résultat négatif. Il ne faut pas hésiter à envoyer un échantillon pour une culture (Neuber and
Nuttall, 2017).

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Lors de dysbiose bactérienne (fréquente lors de dermatite atopique), de nombreuses bactéries de
différents types sont présentes avec peu de cellules inflammatoires (Barillas et al., 2019; Neuber
and Nuttall, 2017).

Les mycobactéries ne se colorent pas au Diff-quick, mais elles sont souvent associées à une
inflammation pyogranulomateuse et des petites vacuoles transparentes sont visibles dans les
macrophages.

Il faut faire attention à ne pas confondre avec des bactéries avec : (Neuber and Nuttall, 2017)

o Granules de mélanine : dans ou hors des kératinocytes ; typiquement ronds ou ovales avec
une coloration vert marron.
o Granules de kératohyaline : surtout dans les kératinocytes nucléés venant de la couche
granuleuse de l’épiderme, rose ou violet et de forme irrégulière.
o Précipitations de colorant : amorphes et granuleux et souvent violet foncé ou noir.
o Pollen.

Les Malassezia ont la forme d’empreinte de pas, de couleur bleu-violet. Elles sont visibles
surtout à l’objectif x100. Elles sont souvent regroupées autour d’amas de squames sur la lame. Il
faut donc bien observer l’intégralité de la lame pour ne pas rater le diagnostic (Neuber and Nuttall,
2017).

L’espèce majoritairement retrouvée chez le chien est Malassezia pachydermatis, mais d’autres
espèces peuvent être présentes. L’identification exacte se fera donc par culture et analyse génétique
(Neuber and Nuttall, 2017).

Des Malassezia sont présentes chez la plupart des animaux sains, mais il est toutefois difficile de
visualiser des levures à l’examen cytologique mais moins d’une ou deux sur 1 cm² de la surface de
la lame de microscope est normal. Selon les auteurs, la présence de plus de 2 à 10 levures par
champs à fort grossissement (obj. x100) est significatif d’une dermatite à Malassezia (Neuber and
Nuttall, 2017).

Les Malassezia sont souvent associées à une dysbiose bactérienne et une faible quantité de cellules
inflammatoires (Neuber and Nuttall, 2017).

Figure 26 : Examen cytologique de Malassezia chez un chien (Jackson and Marsella, 2012;
Rhodes and Werner, 2018)

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 Les dermatophytes sont rarement visibles sur les prélèvements cytologiques. Parfois
quelque spores ou des hyphes sont visibles sur les calques par impression ou lors de raclage cutané
(Neuber and Nuttall, 2017).

On peut aussi visualiser des spores ou des macroconidies (souvent contaminants

environnementaux) (Neuber and Nuttall, 2017).

• Particularités de l’écouvillon auriculaire

Une prolifération microbienne est présente dans la plupart des otites érythématocérumineuses. Il
est alors important de bien identifier la nature du pathogène en cause. Par ordre d’importance
décroissante, on observe les Malassezia spp., puis les coques (Staphylococcus
pseudointermedius), puis les bacilles. Les infections mixtes sont aussi fréquentes (Neuber and
Nuttall, 2017).

Lors d’otite suppurée, l’exsudat est neutrophilique et est souvent associé à une infection par des
bacilles Gram - (Pseudomonas spp., Escherichia coli, Proteus spp.) mais aussi parfois à des
staphylocoques et plus rarement à des Malassezia. Dans les cas d’infections sévères les cellules
inflammatoires montrent des signes de dégénération (Neuber and Nuttall, 2017).

La présence de neutrophiles sans bactérie peut indiquer une réaction d’hypersensibilité aux
médicaments appliqués dans le canal auriculaire (néomycine, propylène glycol) , mais aussi une
toxidermie, une tumeur de la bulle tympanique ou de la région proximale du conduit auditif externe
(Neuber and Nuttall, 2017).

Lors de processus inflammatoire, le renouvellement des cellules est accéléré et on trouvera

beaucoup plus de kératinocytes anucléés ou nucléés sur la lame. Une grande quantité de cellules
épithéliales avec possiblement quelques bactéries peut aussi indiquer un trouble de la kératinisation
(Neuber and Nuttall, 2017).

• Sensibilité et spécificité
La sensibilité et la spécificité de l’examen cytologique varient de faibles à élevées en fonction des
compétences du clinicien faisant le prélèvement et de la personne l’interprétant.

La plupart des techniques de cytologie ne permettent l’échantillonage que d’une toute petite quantité
de tissu et sont donc souvent non-diagnostiques par un manque de représentativité. Il faut donc être
prudent et ne pas surinterpréter des résultats négatifs (Neuber and Nuttall, 2017).

L’examen cytologique par le test à la cellophane adhésive est la technique la plus efficace pour
l'identification des dermatites à Malassezia comparée au calque par impression ou à l’écouvillon. Il
est cependant moins fiable et moins quantitatif que la mise en culture (par impression directe ou par
cellophane adhésive) sur milieu de Sabouraud mais c’est une technique rapide et facile d'emploi
(Barillas et al., 2019; Hnilica et al., 2013; Layne and Zabel, 2017; Omodo-Eluk et al., 2003).

Le calque par impression est plus efficace pour la détection de granulocytes neutrophiles que le test
à la cellophane adhésive selon Layne et Zabel.

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Certaines études montrent que l’examen cytologique auriculaire par écouvillon est plus sensible
dans la détection d’infections bactériennes ou de levuroses que la culture bactérienne ou fongique
(Neuber and Nuttall, 2017).

f. Avantages
L’examen cytologique cutané est simple, peu cher, rapide et très fréquemment utilisé par les
praticiens généralistes et les spécialistes (Layne and Zabel, 2017).

Les résultats sont immédiats.

L’examen cytologique permet le suivi du traitement antibactérien et antifongique (Barillas et al.,

2019).

Il aide à prendre des décisions thérapeutiques basées sur l'identification d'acariens, de coques, de
bacilles et de levures et à sélectionner des sites où une culture bactérienne devrait être réalisée
(Wilkinson and Harvey, 1994).

Le test à la cellophane adhésive et les calques cutanés sont utiles pour le diagnostic de dysbiose
cutanée. Ils permettent de mettre en évidence une infection.

Ce sont des techniques peu invasives et non douloureuses. Le test à la cellophane adhésive est
facilement réalisé sur de multiples zones du corps même face à un animal récalcitrant (Rhodes and
Werner, 2018).

L'aspiration de pustule et de vésicules permet de faire la différence entre une affection stérile (ex.
pemphigus foliacé) ou infectée.

Le prélèvement de nodules et de masses par aspiration peut être diagnostique et apporte des
informations utiles en particulier pour la planification de chirurgie d’exérèse.

g. Inconvénients
Cette technique permet l’identification du type cellulaire majoritairement présent dans la lésion mais
ne donne pas d’informations sur la structure et l’organisation cellulaire de la masse. (Jackson and
Marsella, 2012; Neuber and Nuttall, 2017).

Lors de cytoponction, l'échantillonnage par aspiration ne permet de prélever que de très petits
volumes de tissu. C’est un examen d’orientation qui est parfois diagnostique. Ainsi, en cas de
suspicion de maladie auto-immune ou néoplasique, le clinicien doit toujours envoyer des
prélèvements pour un examen histologique (Wilkinson et Harvey, 1994; Neuber et Nuttall, 2017).

Le test à la cellophane adhésive et les calques cutanés ne permettent d’échantillonner que la surface
de la peau.

Les échantillons prélevés à l’aide de cellophane sont plus difficiles à lire qu’un calque par impression
car de nombreux éléments figurés non spécifiques y adhèrent et il y a des modifications de l’aspect
des cellules dont les polynucléaires.

Une dérégulation de la flore objectivée par un examen cytologique ne permet pas d’établir à elle
seule un diagnostic définitif, l’examen clinique reste primordial.

C’est un examen semi-quantitatif et qualitatif mais qui ne permet pas d’identifier précisément les
germes et ne préjuge pas de la réponse thérapeutique (résistance ou non).

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 I. Intradermoréaction

a. Objectif
Le but de l’intradermoréaction (IDR) est de détecter la présence d’une réaction d’hypersensibilité
aux allergènes médiée par les IgE et d’identifier les allergènes en vue de réaliser une
immunothérapie spécifique d’allergène chez un animal diagnostiqué allergique ou un animal
atopique présentant une exacerbation des signes lors de changement de lieu ou de saison (Coyner,
2019; Foster and Foil, 2003; Jackson and Marsella, 2012).

b. Principe
Les tests allergologiques intradermiques permettent d’évaluer in situ le siège de la réaction
d’hypersensibilité (Hnilica et al., 2013).

Le principe est de mettre en évidence une réaction d'hypersensibilité immédiate ou retardée vis à
vis d’allergènes injectés dans le derme. En effet, la réaction des IgE aux allergènes est responsable
d’une dégranulation mastocytaire et du relargage de médiateurs de l’inflammation (Bensignor and
Germain, 2014; Neuber and Nuttall, 2017).

c. Indications
Les tests allergologiques sont indiqués chez les animaux atopiques dont l’anamnèse et les signes
cliniques font suspecter l’influence de facteurs environnementaux (aéroallergènes) dans le
déclenchement de la dermatose (aspect saisonnier ou influence du lieu).

Ceux-ci peuvent être effectués grâce à des IDR ou un dosage des IgE spécifiques d’allergènes.
(Coyner, 2019; Hensel et al., 2015).

Ces tests ne permettent pas de diagnostiquer une dermatite atopique. Ce diagnostic se fait à partir
des signes cliniques, de l’anamnèse et après avoir exclu les autres causes de prurit.

L’allergie alimentaire, l'hypersensibilité hormonale, l’hypersensibilité bactérienne sont de fausses

indications (Bensignor and Germain, 2014).

L’IDR doit être réalisée et interprétée par un praticien expérimenté, en général des vétérinaires
spécialisés en dermatologie (Neuber and Nuttall, 2017).

d. Matériel
- Tondeuse
- Solutions d’allergènes et solutions témoins
- Aiguilles serties à insuline ou aiguille de 25-27 gauge avec seringue de 1 ml
- Marqueur
- Fluorescéine 10%
- Cathéter veineux
- Lampe de Wood

Pour les tests intradermiques standards, deux témoins sont utilisés, le premier est l’excipient
seul c'est-à-dire une solution saline tamponnée au phosphate à 0,9 % (témoin négatif) et l'autre est

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une solution de sulfate d'histamine à 1/10000ème soit 0,1mg/ml (témoin positif) (Baker and Thomsett,
1990).

En médecine vétérinaire, il n'y a pas de standardisation des solutions d’allergènes utilisées ni de

leur concentration ce qui est un inconvénient important. On utilise des solutions de test préfabriquées
dont la durée de conservation est limitée à quelques mois voir quelques semaines (Baker and
Thomsett, 1990; Hillier and DeBoer, 2001; Neuber and Nuttall, 2017).

Les unités utilisées sont le poids/volume (p/v) ou les unités d'azote protéique/millilitre (PNU/ml). Ces
deux méthodes sont de mauvais indicateurs de la teneur en allergènes et la gamme des principaux
niveaux d'allergènes peut varier de plus de 100 fois dans les extraits non standardisés (Baker and
Thomsett, 1990; Hillier and DeBoer, 2001).

En principe, les extraits d'allergènes doivent être utilisés à la concentration la plus élevée ne
provoquant pas de réaction par irritation (Irritant Threshold Concentration ITC) à l’origine d’une
réaction faussement positive chez au moins 90% des individus sains. Mais ces concentrations n’ont
pas été déterminées chez le chien ou le chat (Hensel et al., 2004; Hillier and DeBoer, 2001).

Les concentrations habituellement recommandées sont de 1000 PNU/ml pour les pollens, les
insectes et les moisissures, de 1 :50000 p/v (250 PNU/ml) pour les acariens, de 1000 PNU/ml pour
les insectes de 1:1000 p/v pour les puces et de 250-500 PNU/ml pour les poils de bovin, la laine, les
plumes et la soie (Hensel et al., 2015, 2004; Hillier and DeBoer, 2001).

Cependant, plusieurs études récentes démontrent que ces concentrations sont insuffisantes et trop
éloignées des ITC réelles pour le chien et le chat. Mais aucune valeur de référence n’a encore été
établie (Austel et al., 2006; Bauer et al., 2010; Hensel et al., 2004; Layne, 2019; Scholz et al., 2017).

Il ne faut pas tester des mélanges d’allergènes sauf s’il existe des réactions croisées (ex.
graminées), car la concentration de chaque allergène peut être insuffisante pour déclencher une
réaction positive (Foster and Foil, 2003; Neuber and Nuttall, 2017).

Les extraits alimentaires donnent de bonnes réactions intradermiques uniquement en cas

d'anaphylaxie mais pas en cas d'allergie alimentaire au sens large (Baker and Thomsett, 1990). En
effet, deux études ont documenté les mauvaises performances de l'IDR pour le diagnostic des
réactions indésirables cutanées aux aliments. La sensibilité de l'IDR était de 10,3 à 33 % et sa
spécificité était de 50,5 à 95,6 % (Hillier and DeBoer, 2001; Jeffers et al., 1991; Kunkle and Horner,
1992).

e. Techniques

• Sélections des allergènes

Les allergènes à tester sont sélectionnés en fonction de l’anamnèse, de la saison des poussées de
prurit et de la région où vit l’animal. Il ne faut pas oublier le rôle important joué par Dermatophagoides
farinae en allergologie canine (80% des chiens atopiques sont sensibilisés à cet acarien) (Foster
and Foil, 2003).

Il est intéressant de connaître les calendriers polliniques de la région pour le choix des allergènes et
l'interprétation des tests. Les allergènes à utiliser quelle que soit la saison sont les extraits d'acariens

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et d’insectes, les moisissures, les pollens d’arbres, de graminées et d’herbacées (Bexfield, Nick and
Lee, 2014; Hillier and DeBoer, 2001).

• Conservation des allergènes

Les solutions d’allergènes sont conservées au froid (+4°C) pour éviter les phénomènes de
dénaturation et de contamination. Les allergènes doivent être retirés du réfrigérateur avant l'IDR
suffisamment longtemps pour atteindre la température ambiante (environ 15 min).

Il n’est pas possible d’utiliser de l’histamine comme témoin de conservation des allergènes car elle
se dégrade beaucoup plus lentement que les protéines (Bensignor and Germain, 2014; Hillier and
DeBoer, 2001).

• Précaution avant la réalisation des IDR

Récemment, l’article de Bruet et al. (2022) met en place des lignes directrices pour l’utilisation des
médicaments antiprurigineux chez le chien à partir d’une revue de la littérature publiée de 1990 à
2021. Il propose des temps optimaux d’éviction avec de réaliser une IDR ou des tests sérologiques
(ASIS) :

- Antihistaminiques : 7 à 10 jours avant IDR.

- Glucocorticoïdes topiques (ex. acéponate d’hydrocortisone) : 2 semaines avant IDR.
- Glucocorticoïdes systémiques (ex. prednisolone) : 2 semaines avant IDR.
- Ciclosporine, oclacitinib, lokivetmab : pas d’arrêt nécessaire avant IDR.

Olivry et al. (2013) recommandent dans leurs recommandations publiées en 2013, d’arrêter les
glucocorticoïdes injectables à longue durée d’action (ex. acétate de méthylprednisolone) 28 jours
avant la réalisation d’une IDR (Olivry et al., 2013).

Il faut faire attention au choix des molécules si l’on fait une sédation car certaines peuvent modifier
la réactivité cutanée et doivent être évitées : kétamine, diazépam, oxymorphone, acépromazine,
propofol (Hillier and DeBoer, 2001; Neuber and Nuttall, 2017).

Les temps d’attente sont plus longs pour les animaux présentant des signes d’hypercorticisme
iatrogénique (Neuber and Nuttall, 2017).

Si la peau est très lésionnelle ou que les traitements médicamenteux ne peuvent être suspendus,
les tests sérologiques seront préférés aux IDR.

• Réalisation des IDR

L'animal est placé en décubitus latéral et est tondu sur le thorax en région ventrolatérale
préférentiellement au niveau d’une zone non pigmentée et non lésionnelle. En cas de stress ou
d'anxiété, les animaux doivent être sédatés (limite la libération de cortisol) (Bauer et al., 2010; Hnilica
et al., 2013).

Il faut éviter tout traumatisme sur la zone tondue. Il est déconseillé de nettoyer avec de l'alcool car
cela peut perturber la surface de la peau et l’irriter. La peau atopique peut réagir avec un érythème
ou de l’œdème si elle est trop vigoureusement frottée (Baker and Thomsett, 1990).

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Des seringues à insuline à aiguille sertie ou des seringues de 0,3-1 ml avec des aiguilles de 25 ou
27 gauges à renouveler après chaque test sont utilisées (Bensignor and Germain, 2014; Neuber
and Nuttall, 2017).

Les sites d'injection sont marqués à l'aide d'un marqueur indélébile ; les différents points sont
espacés d'environ 2 à 3 cm.

Le volume injecté est d'environ 0,05 à 0,1 ml par voie intradermique stricte à chaque point (Baker
and Thomsett, 1990). Pour injecter en intradermique, il faut bien tendre la peau avec les doigts et
insérer l’aiguille parallèlement à l’épiderme de façon très superficielle biseau de l’aiguille vers le
haut. On doit sentir une résistance lors de l’injection. Une papule œdémateuse apparaît lors de
l’injection (Hillier and DeBoer, 2001; Neuber and Nuttall, 2017).

Figure 27 : Formation d’une bulle après injection en intradermique (Neuber and Nuttall,
2017)

Il est préférable d'imposer le minimum de contention au patient pour limiter le stress.

• Lecture des IDR

La lecture se fait 20 min après injection puis éventuellement 48 h plus tard. Une lecture à 16h est
possible pour mettre en évidence les réactions semi-retardées mettant en jeu des éosinophiles et
des neutrophiles. (Baker and Thomsett, 1990; Bensignor and Germain, 2014; Neuber and Nuttall,
2017)

On évalue alors la taille de la papule, sa turgescence, l’intensité et la taille de l’érythème et

l’épaisseur du rebord. (Hnilica et al., 2013; Neuber and Nuttall, 2017).

Il existe plusieurs méthodes de lecture.

L’évaluation objective :

- Pour le témoin négatif : moins de 5 mm et absence d'érythème.

- Pour le témoin positif : plus de 10 millimètres et présence d’érythème. S’il n’y a pas de
réaction au niveau du témoin positif, le test est invalidé et il faudra le refaire plus tard.

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 - Réaction positive : plaque ortiée dont le diamètre est supérieur à la moyenne de ceux des
témoins positifs et négatifs. Cette règle n’est pas absolue, c’est l'expérience du clinicien qui
permet le plus souvent de trancher (Bauer et al., 2010; Bensignor and Germain, 2014).

L’évaluation subjective :

On évalue l'intensité et/ou la taille de l'érythème, la turgescence et/ou la formation de papule. Le

témoin positif reçoit une note de 4 et le témoin négatif de 0. Les autres sites sont notés entre 0 et 4
et ceux ayant une note de 2 ou plus sont considérés positifs (Hillier and DeBoer, 2001; Neuber and
Nuttall, 2017).

Aucune différence significative n'a été observée lorsque les deux méthodes ont été comparées l'une
à l'autre (Hensel et al., 2015).

Les résultats fortement positifs sont comparables à une piqûre de guêpe, marqués par la présence
d'un bord franc en périphérie de la zone réactionnelle. Une réaction négative peut présenter une
petite tuméfaction résultant du volume de produit injecté mais l’érythème et le bord franc
caractéristique à la palpation sont absents (Hnilica et al., 2013).

(1) (2)

Figure 28 : Réactions secondaires à l’injection intradermique d’allergènes ; témoin positif

(1) et témoins négatif (2) (Neuber and Nuttall, 2017)

A 48 heures, les réactions retardées à l'extrait de puce peuvent apparaître sous forme de croûtes,
de nodule ou d’une simple induration cutanée (Bensignor and Germain, 2014).

Chez le chat, les réactions intradermiques sont peu marquées et disparaissent rapidement. Les
premiers sites injectés doivent donc être évalués dès que l’on finit d’injecter les derniers. Pour pallier
cela, il est possible injecter de la fluorescéine 10 % en intraveineux à 4,4-5mg/kg. Cela permet de
mettre en évidence les sites positifs qui réagissent à la lumière UV (Neuber and Nuttall, 2017).

L’étude de Kadoya-Minegishi montre l’efficacité du protocole suivant. Après avoir sédaté le chat
avec de la médétomidine (0,05 mg/kg), la zone latérale du thorax est tondue et les sites d’injection
sont marqués à 2 cm d’écart les uns des autres. De la fluorescéine en solution à la dose de 5 mg/kg
est injectée par voie intraveineuse. Puis les solutions allergènes et les témoins (histamine à la
concentration de 0,1 mg/ml) sont injectés en intradermique selon un volume de 0,05 ml.

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Le diamètre de chaque site est ensuite mesuré sous la lumière d’une lampe de Wood 15 minutes
après l’injection de fluorescéine. Un site est considéré positif si son diamètre est égal ou supérieur
au diamètre moyen des sites témoins. La présence d’une fluorescence seule n’est pas suffisante
pour considérer le site comme positif.

Figure 29 : Résultats d’une IDR chez un chat avec injection de fluorescéine par voie
intraveineuse et lecture à l’aide d’une lampe de Wood (Neuber and Nuttall, 2017)

Peu d’effets secondaires à l’injection de fluorescéine en intraveineux sont rapportés, mais cette
technique est rarement utilisée.

• Effets indésirables
Chez le chien, les réactions systémiques sont rares, cependant, elles peuvent mettre la vie de
l’animal en danger et doivent être traitées en urgence. Un prurit et une inflammation au site du test
cutané peuvent survenir et doivent être traités avec des compresses froides, des glucocorticoïdes
oraux, topiques intraveineux à courte durée d'action. Une urticaire locale et généralisée peut
également survenir et est traitée avec des antihistaminiques systémiques et des
glucocorticoïdes. Le choc anaphylactique et le collapsus sont des conséquences rares de l'IDR,
mais nécessitent un traitement immédiat et intensif (Hillier and DeBoer, 2001).

f. Interprétation
Ce test, avec le test sérologique des IgE spécifiques d’allergènes, donne des indications sur les
allergènes environnementaux impliqués dans l’hypersensibilité mais ils ne permettent pas de
confirmer le diagnostic de dermatose allergique (Jackson and Marsella, 2012; Neuber and Nuttall,
2017).

Il faut être prudent dans l'interprétation de ces tests car 30 à 50% des animaux sans signes cliniques
peuvent montrer des réactions positives aux intradermoréactions sans pour autant présenter une
sensibilisation allergique. Il peut aussi y avoir des résultats faux positifs pour des raisons techniques.
Ainsi, si l’animal présente des résultats positifs pour certains allergènes, il faut toujours les mettre
en corrélation avec l’anamnèse et les signes cliniques. Si cela correspond, une désensibilisation à
ces allergènes est alors conseillée mais elle n’est pas toujours efficace.

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Les facteurs pouvant causer des résultats faux positifs sont :

- Des solutions de test irritantes ou trop concentrées

- Des solutions d’allergènes contaminées
- Une sécrétion d’histamine non-immunologique
- Une mauvaise technique opératoire (placement traumatique de l’aiguille, aiguille émoussée,
injection d’un trop grand volume, injection d’air)
- Le dermographisme (= dégranulation des mastocytes due à la pression)
- Une sensibilisation aux aéroallergènes sans allergie associée

(Bensignor and Germain, 2014; Foster and Foil, 2003)

Les facteurs pouvant causer des résultats faux négatifs sont :

- Une sélection incorrecte des allergènes,

- Une administration récente de médicaments (glucocorticoïdes, antihistaminiques),
- Du stress au moment de l’induction
- Un animal trop jeune (moins d'un an)
- Des allergènes périmés ou en concentration insuffisante,
- Une maladie systémique
- Une erreur technique (injection sous-cutanée)
- Une réaction aux aéroallergènes non médiée par les IgE

(Bensignor and Germain, 2014; Foster and Foil, 2003; Layne, 2019)

La sensibilité est de 80% pour les puces et les aéroallergènes et la spécificité est de 60% pour les
puces et 80% pour les aéroallergènes. Dans tous les cas, il faut corréler les résultats des tests avec
l’enquête allergologique (Bensignor and Germain, 2014).

La technique de l’intradermoréaction et son interprétation deviennent plus facile avec l’expérience

du praticien, c’est pour cela qu’il veut mieux référer à un vétérinaire spécialiste en dermatologie
(Foster and Foil, 2003).

Le taux moyen de réponse à une désensibilisation fondée sur un dépistage sérologique des
allergènes s'élève à 60% (55 à 60% des chiens traités montrent une bonne voire une excellente
réponse au traitement). En revanche si la désensibilisation est fondée sur des tests allergologiques
intradermiques environ 68% (50 à 86%) des chiens traités présente une réponse bonne à excellente.
Le test allergologique idéal comprendrait donc certainement à la fois des informations issues du
dépistage sérologique et des tests intradermiques, offrant ainsi une représentation plus exhaustive
du statut allergique du chien. Ainsi, certains vétérinaires dermatologues commencent à soumettre
les animaux suspects d’atopie aux deux types de test (Hnilica et al., 2013).

g. Avantages
La première lecture donne des résultats immédiatement.

h. Inconvénients
Les allergènes doivent être frais et stockés au réfrigérateur. Les allergènes périmés ou dénaturés
sont une cause fréquente de résultats faux négatif.

Ce test est très sensible aux glucocorticoïdes et aux antihistaminiques.

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Ce test ne permet pas de faire la distinction entre un chien allergique et un chien sain (Baumann et
al., 2021). C’est pourquoi il ne doit être réalisé qu’après avoir diagnostiqué une dermatite allergique.

i. Techniques alternatives
Il existe des techniques alternatives à celles de l’intradermoréaction :

• Prick test

Une goutte de solution allergène est placée sur la peau tondue et une injection intradermique est
réalisée à l'aide d'un stylet (disponible auprès des fabriquant des solutions allergènes), injectant
ainsi la solution dans le derme. Les résultats sont lus à 20 minutes, 1 heure et 24 heures post
injection et les sites sont comparés aux témoins de la même manière qu’une intradermoréaction
(Baker and Thomsett, 1990).

C’est une technique facilement réalisable sans sédation mais elle n’est pas très hygiénique. Une
lancette différente doit être utilisée à chaque inoculation et entre les différents animaux (Neuber and
Nuttall, 2017).

• Test de frottement

Une goutte de solution allergisante est placée sur une peau tondue et un raclage superficiel de 0,5
cm de longueur est fait à travers. La lecture des résultats se fait de la même façon que pour le prick
test (Baker and Thomsett, 1990).

• Patch test

Cette technique est recommandée pour les suspicions d’allergie de contact ou d’allergie alimentaire
(Baker and Thomsett, 1990; Neuber and Nuttall, 2017).

Le matériel suspect est appliqué sur la peau pendant 48h puis la peau est examinée à la recherche
d’érythème, d’œdème et d’induration. Les sites de test doivent être examinés quotidiennement
pendant 3 jours. Pour distinguer une irritation d’une allergie, on réalise une biopsie des sites positifs
(Baker and Thomsett, 1990; Foster and Foil, 2003).

En médecine humaine, on utilise des contenants spéciaux (chambres de Finn) pour les allergènes
qui peuvent aussi être utilisés en médecine vétérinaire (Foster and Foil, 2003).

Les poils doivent être tondus le jour d’avant et les échantillons sont fixés contre la peau avec des
bandages. Une chambre vide est utilisée comme témoin négatif (Baker and Thomsett, 1990; Neuber
and Nuttall, 2017).

On peut aussi utiliser des patchs ouverts. La solution d’allergène est alors directement appliquée
sur la peau. Le site est observé pour une réaction immédiate, une réaction tardive et une réaction
retardée. Ceci est utilisé en cas de suspicion de réaction allergique aux nettoyants d’oreille,
shampoings ou médicaments topiques (Neuber and Nuttall, 2017).

C'est une technique peu réalisée car la procédure est difficile à mettre en place et les dermatites de
contact sont moins souvent rapportées, plus difficiles à diagnostiquer ou plus faciles à prendre en
charge par un test d’éviction (Foster and Foil, 2003).

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Pour les patchs testant les allergènes alimentaires, les études montrent une haute valeur prédictive
négative mais une valeur prédictive positive basse, les résultats positifs ne sont donc pas fiables.
Ce test peut être utilisé pour identifier quelle protéine utiliser pour un régime d’éviction mais pas pour
le diagnostic d’une allergie alimentaire. Il est difficile à mettre en place et long (Neuber and Nuttall,
2017).

2. Examens complémentaires à résultats différés

A. Biopsie

a. Objectif
Les biopsies représentent une technique de prélèvement permettant d’obtenir un échantillon afin de
réaliser un examen histologique ou immunologique, une mise en culture microbiologique
(bactérienne ou fongique) ou une PCR (Wilkinson and Harvey, 1994).

Les biopsies permettent de :

- Mettre en évidence un changement histopathologique pouvant confirmer le diagnostic
clinique,
- Obtenir des informations permettant l'établissement d'un pronostic,
- Obtenir des informations permettant la mise en place d'un traitement et pour évaluer son
efficacité (ex. néoplasie),
- Aider au diagnostic en apportant des prélèvements non contaminés pour une culture dans
le cas d'infection profonde,
- …

(Baker and Thomsett, 1990)

Ici nous parlerons de la technique pour réaliser une biopsie et des conditions de stockage et d’envoi
pour un examen histologique.

b. Principe
Un échantillon de tissu cutané est prélevé à l’aide d’un trépan ou par excision avec une lame de
scalpel puis est envoyé dans un laboratoire spécialisé (Bensignor and Germain, 2014).

c. Indications
La réalisation de biopsies est recommandée lorsque :
- L’examen dermatologique seul ne permet pas d’établir un diagnostic de certitude.
- Lors de diagnostic différentiel pouvant être résolu par un examen histopathologique.
- Pour la réalisation d’autres examens complémentaires (culture microbiologiques, PCR, …).
- En présence de lésions atypiques sans diagnostic.
- En l’absence de réponse au traitement mis en place.
- En cas de suspicion de phénomène néoplasique : avant exérèse chirurgicale pour une prise
en charge adéquate (marges) ou si l’exérèse chirurgicale est impossible.

(Guaguère and Prélaud, 2006; Miller et al., 2013)

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Si un examen histopathologique est nécessaire, les prélèvements doivent être réalisés rapidement
après l’apparition des premières lésions cutanées et avant l’instauration d’un traitement susceptible
de modifier le cours de la maladie et l’aspect des lésions. Ceci permet d’éviter le développement de
lésions secondaires non spécifiques qui peuvent masquer ou tromper le diagnostic. Ceci permet
aussi la mise en place rapide d’un traitement spécifique et donc de réduire le risque de séquelles
permanentes (cicatrices, alopécie), la souffrance de l’animal et les coûts additionnels au propriétaire
(Jackson and Marsella, 2012; Miller et al., 2013).

Les biopsies sont risquées en cas de coagulopathie connue ou suspectée et d’historique de déficit
de cicatrisation (Bexfield, Nick and Lee, 2014).

d. Matériel
Le matériel nécessaire comprend dans la majorité des cas :

- Anesthésique local : lidocaïne 2 %

- Aiguilles stériles et seringues de 2-5 ml
- Trépans (4, 6 et 8 mm de diamètre)
- Lame de scalpel n°11, 10 ou 22
- Pinces fines mousses
- Ciseaux courbes de Metzenbaum
- Compresses stériles
- Gants stériles
- Pots à bouchon étanche vissable contenant du formol 10 %
- Abaisse-langue en bois (spatule), morceaux de carte 10x10mm
- Matériel de suture (fils, porte aiguille, agrafes)
- Matériel d'expédition et formulaire d'anamnèse

(Bexfield, Nick and Lee, 2014; Miller et al., 2013)

En général, les trépans de 6 millimètres permettent d'obtenir les meilleurs échantillons, ceux de 4
millimètres sont réservées pour des sites difficiles d'accès (près de l'œil, sur le pavillon auriculaire,
sur le museau ou les coussinets de chat ou petit chien). Il faut utiliser des trépans neufs et bien
aiguisés, car les lames émoussées ont tendance à déchirer et déformer les tissus et ainsi créer des
artéfacts (Coyner, 2019; Miller et al., 2013).

Pour l’exploration d’une alopécie non inflammatoire, l’utilisation d’un trépan de 8mm de diamètre est
recommandée avec au minimum 3 biopsies pour augmenter le nombre de follicules pileux à
analyser.

e. Techniques

• Choix du site de prélèvement

Il est aussi important de réaliser la biopsie dans des zones représentatives de la maladie et non
dans les zones de complications secondaires (Miller et al., 2013). Pour cela, le clinicien doit prélever
des lésions primaires (macule, papule, pustule, vésicule, bulle, pétéchie, nodule, tumeur) dans des
sites non excoriés ou fibrosés (Coyner, 2019; Miller et al., 2013; Neuber and Nuttall, 2017).

Parfois, les lésions dites secondaires (croûte, alopécie, squame, ulcère, érosion) peuvent apporter
des informations supplémentaires non négligeables même si leur intérêt diagnostique est

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généralement plus limité (par exemple, lors de pemphigus foliacé, il faut penser à joindre au
prélèvement des croûtes car elles ont tendance à se détacher) (Coyner, 2019; Hnilica et al., 2013;
Miller et al., 2013).

Le choix des lésions varie selon les affections, dans certains cas il est préférable de prendre des
échantillons représentant différents stades de développement de la maladie.

Les lésions à éviter lors de biopsies sont les excoriations ou les zones lichénifiées (Coyner, 2019).

La lésion d'intérêt doit être placée au centre du prélèvement en cas de prélèvement au

trépan. Si le prélèvement se fait à la lame de scalpel, il peut être réalisé à cheval de la zone lésée.
Si une lésion de taille importante présente un centre d'aspect différent de ses marges, les deux
doivent être biopsiés (Coyner, 2019).

Dans la pratique, le nombre de biopsies pouvant être réalisées est limité à 3 ou 5 échantillons. Il faut
donc faire attention aux lésions que l’on décide de sélectionner et quels échantillons sont capables
de donner les meilleurs résultats (Miller et al., 2013).

• Préparation
Les traitements anti-inflammatoires (surtout glucocorticoïdes) ou immunosuppresseurs
(ciclosporine, oclacitinib …) peuvent affecter l’interprétation histopathologique de nombreuses
dermatoses. Ils devraient être arrêtés au moins 2 à 3 semaines avant la biopsie pour les traitements
oraux ou topiques, ou 6 à 8 semaines pour les stéroïdes injectables longue durée.

Les infections secondaires (pyodermites bactériennes) provoquent aussi des changements

histopathologiques pouvant fausser le diagnostic. La réalisation d’un examen cytologique des
lésions superficielles croûteuses est donc recommandée avant la biopsie pour évaluer si une
infection est présente. Il est nécessaire de traiter les infections bactériennes secondaires avec un
traitement antibiotique approprié pendant 2 à 3 semaines avant de réaliser les biopsies (Coyner,
2019; Jackson and Marsella, 2012; Miller et al., 2013).

Le plus souvent les biopsies sont réalisées rapidement et facilement avec une simple anesthésie
locale et une bonne contention. Une anesthésie générale peut être nécessaire pour les sites
sensibles (face, coussinets) où l’anesthésie locale est difficile ou si l’animal est trop récalcitrant
(Bexfield, Nick and Lee, 2014; Jackson and Marsella, 2012; Miller et al., 2013).

L’anesthésie locale se fait sans adrénaline pour éviter des changements artéfactuels dans la
vascularisation du tissu prélevé (ex. masque la présence d’éosinophiles circulants) et la
dégranulation des mastocytes (Henfrey et al., 1991; Jackson and Marsella, 2012).

Contrairement à l’avis de certains auteurs, en cas de suspicion de maladie touchant le tissu sous-
cutané profond ou le tissu adipeux, l’injection de lidocaïne dans le tissu sous-cutané n’empêche pas
l’établissement d’un diagnostic précis (communication avec LAPVSO).

L'injection de lidocaïne peut être douloureuse dans ce cas, on peut ajouter du bicarbonate de sodium
8,4 % à un ratio de 10 pour 1 (lidocaïne /bicarbonate) pour réduire la douleur (Miller et al., 2013).

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La lidocaïne inhibe la croissance de certaines bactéries Gram positives (Staphylocoque coagulase
positive) ou Gram négatives (Pseudomonas), certaines mycobactéries et des champignons. Il en
est de même pour le bicarbonate de sodium et l’adrénaline. Ainsi, si l'on veut réaliser une culture à
partir de l'échantillon de biopsie il est préférable d'utiliser une anesthésie en bloc, régionale ou
générale (Hnilica et al., 2013; Miller et al., 2013).

Il ne faut pas dépasser une dose totale de lidocaïne supérieure à 5 mg/kg pour les chiens ou 2,5
mg/kg pour les chats. Des crises convulsives peuvent arriver si des doses supérieures sont utilisées
surtout lorsque la lidocaïne est injectée proche de la tête. La lidocaïne (lidocaïne 2%= 20 mg/ml)
peut être diluée avec du liquide physiologique pour les petits animaux (Coyner, 2019; Miller et al.,
2013).

Il faut faire particulièrement attention si l’on utilise de la lidocaïne près des extrémités chez les
patients présentant des problèmes de circulation sanguine, une maladie cardiovasculaire, de
l'hypertension ou chez les patients recevant des phénothiazines, des bloqueurs des récepteurs
alpha-adrénergiques, des inhibiteurs d’oxydase monoamine (amitraze) ou des anti-dépresseurs
tricycliques. (Miller et al., 2013)

Il faut aussi faire attention à la quantité totale de lidocaïne injectée sur les chatons et les chiots car
cela peut conduire à une dépression myocardique, des trémulations musculaires, une neurotoxicité
et la mort. Des crises convulsives peuvent arriver si des doses trop fortes sont utilisées surtout
lorsque la lidocaïne est injectée en région céphalique. (Miller et al., 2013)

Le site de biopsie ne doit être ni tondu ni désinfecté pour ne pas abîmer la surface cutanée
et fausser le diagnostic. Si les poils sont trop longs et gène la réalisation du prélèvement, il est
possible de les couper délicatement aux ciseaux sans toucher la surface cutanée. Une tonte et une
désinfection chirurgicale sont réalisés uniquement lors d’exérèse de nodule tumoral ou de recherche
d’une infection profonde.

Le site de prélèvement peut être marqué au feutre avec un cercle ou un point associé à une ligne
montrant le sens de pousse des poils.

Le site lésionnel est ensuite anesthésié avec une quantité de lidocaïne (1-2%) appropriée
soit 0,5 à 1 ml injecté en sous-cutanée avec une aiguille de 25 gauge. L’aiguille est insérée dans la
peau en dehors du site de prélèvement puis réorientée de manière à injecté l’anesthésique local
dans le tissu sous-cutané se situant en regard de la lésion (Miller et al., 2013; Neuber and Nuttall,
2017).

La biopsie est réalisée 10-15 minutes après l'injection d'anesthésique.

Il faut se laver les mains de façon stérile et utiliser des instruments et des gants stériles pour
minimiser les risques de contamination (Neuber and Nuttall, 2017).

• Méthodes de prélèvement
Il existe plusieurs techniques de biopsie en fonction du type de lésion à prélever.

Page 65
Tableau 3 : Techniques de prélèvements pour un examen histologique en fonction du type
de lésion (Guaguère and Prélaud, 2006; Jackson and Marsella, 2012; Miller et al., 2013;
Neuber and Nuttall, 2017; Rhodes and Werner, 2018)
Technique Indications Particularités

Biopsie au Prélèvements rapides, dans des sites - Si le trépan est trop petit, le prélèvement
trépan multiples, sur les pattes ou le museau obtenu peut ne contenir que 3 ou 4
et pour de petites lésions. follicules et est donc difficilement
interprétable histopathologiquement.
Cette méthode est inappropriée pour
les masses ou pour prélever les - La biopsie au trépan ne peut être
jonctions entre une lésion et la peau envisagée que si tout le prélèvement
saine. Il est donc important de réaliser biopsié est identique ou si la lésion
plusieurs prélèvements certains avec d’intérêt est centrée. En effets les coupes
des lésions et d’autre avec de la peau histologiques peuvent passer à côté de la
saine. lésion lors de prélèvement non orientés
comme ceux au trépan (prélèvement
circulaire).

Trait d’incision au trépan

Sens de la coupe histologique

Lésion non comprise dans la coupe

histologique

Lésion centrée comprise dans la

coupe histologique

Figure 30 : Schéma du
positionnement du trépan en fonction
de la localisation de la lésion.
Biopsie à Lésions de grande taille, vésicules, Les prélèvements sont plus grands qu’au
la lame de bulles, pustules (abimées par la trépan et plus délicats à obtenir.
scalpel rotation du biopsie punch), ulcérations
ou lors de suspicion de maladie Il est important de veiller à ne pas écraser
atteignant le tissu adipeux sous-cutané l’échantillon avec la pince lors du
comme les vascularites ou prélèvement.
panniculites (les trépans n'arrivent pas
à prélever assez profond, ils ne

Page 66
 permettent de prélever que la partie
superficielle du tissu sous-cutané).

Prélèvements dans des sites où les

trépans ronds pourraient déformer la
peau : museau, coussinets, paupières,
oreilles. Les prélèvements en pointe à
la lame de scalpel sont plus faciles à
fermer que les prélèvements
circulaires aux biopsies punch.

Cette technique permet de retirer des

nodules, masses, bulles dans leur
intégralité ou le faire des prélèvements
comprenant la jonction entre tissu sain
et tissu lésé.

Double Alternative à la biopsie à la lame de

punch scalpel pour prélever les tissus sous-
cutanés profonds.

Biopsie En cas de masse visible dans le

auriculaire conduit auditif, pour planifier une
chirurgie et obtenir un pronostic.

▪ Biopsie au trépan

La peau autour du site à prélever est tendue avec les doigts ou un pli de peau est réalisé de manière
à protéger les tissus sous-jacents. Le trépan est positionné perpendiculairement à la peau (Rhodes
and Werner, 2018).

Le trépan est pressé fermement contre la peau et enfoncé avec un mouvement de rotation dans une
direction unique. Il ne faut pas changer de direction pour éviter de provoquer des lésions
artéfactuelles du tissu. Il ne faut pas non plus tourner trop fortement car cela va exercer une force
de déchirement sur les tissus et les distordre (Wilkinson and Harvey, 1994).

Toute l'épaisseur de la peau doit être prélevée. Il faut arrêter de tourner et d'enfoncer le trépan
lorsque la résistance s'estompe. Le trépan est alors retiré délicatement. L’échantillon reste attaché
au tissu adipeux sous-cutané à sa base (Baker and Thomsett, 1990; Hnilica et al., 2013).

Une pince fine mousse ou une aiguille est utilisée pour soulever le prélèvement et la base est coupée
avec des ciseaux de Metzenbaum ou une lame de scalpel. Il ne faut pas attraper le prélèvement
directement car cela peut créer des artéfacts d’écrasement et des infiltrats inflammatoires, il faut le
tenir par l’hypoderme. Il faut aussi faire attention si des croûtes sont présentes de ne pas les
détacher (Coyner, 2019; Miller et al., 2013; Rhodes and Werner, 2018).

L’échantillon est tamponné sur une compresse pour éponger le sang puis placé rapidement dans
du formol 10 %.

La plaie est ensuite désinfectée puis fermée avec un point de suture (fil de nylon 3-0 avec des points
simples ou en croix) ou des agrafes (Coyner, 2019).

Page 67
 Figure 31 : Prélèvement au trépan (Coyner, 2019)

Figure 32 : L’échantillon est saisi par le tissu sous-cutané pour éviter les artéfacts
d’écrasement (Coyner, 2019)

▪ Technique « double-punch »

Un trépan de large diamètre est utilisé pour prélever l’épiderme et le derme et un trépan de plus petit
diamètre est utilisé ensuite pour prélever les tissus plus profond sur le même site (par exemple :
biopsie de coussinet, rechercher de lésions vasculaires ou de panniculite adipeuse) (Neuber and
Nuttall, 2017).

▪ Biopsie à la lame de scalpel

L’excision à la lame de scalpel se fait en réalisant une incision en forme d’ellipse autour de la lésion.
C’est une incision en côte de melon (Guaguère and Prélaud, 2006).

Il faut faire attention à l’orientation de l’ellipse car lors du traitement du prélèvement par le laboratoire,
l’échantillon est coupé en 2 longitudinalement et la deuxième moitié n’est pas étudiée. La lésion doit
donc se trouver à une extrémité de l’ellipse et le tissu sain à l’autre. Pour aider à un traitement correct
du prélèvement, on peut dessiner une ligne allant de la lésion vers le tissu sain avec une explication
sur le document accompagnant l’échantillon pour que la résection se face parallèlement à cette ligne
(Jackson and Marsella, 2012).

Page 68
 Zone saine Incision en côte de melon

Zone lésée Sens de la coupe histologique

Figure 33 : Orientation de l’ellipse lors de biopsie à la lame de scalpel

La lésion est prélevée entièrement ou le prélèvement est effectué à la jonction peau lésée/peau
saine dans le grand axe de la lésion.

Une fois l’incision réalisée la technique est identique à celle avec un trépan (Bensignor and Germain,
2014).

▪ Biopsie auriculaire

La biopsie se fait sous anesthésie générale avec une bonne valence analgésique et selon la
localisation de la lésion, une biopsie au trépan de 4 mm ou une biopsie par excision peut être réalisée
(Neuber and Nuttall, 2017).

▪ Biopsie de griffes

Si la griffe est molle, on utilise un trépan de 8 millimètres pour récolter un échantillon de la portion
latérale de la griffe ou de sa base. Cette technique ne fonctionne que si la griffe est suffisamment
molle pour être sectionnée (Hnilica et al., 2013).

Lorsque la griffe est dure (état normal), il faut amputer la troisième phalange. On propose le plus
souvent de retirer un ergot afin de limiter l'impact de l'amputation diagnostique (Hnilica et al., 2013).

• Envoi des prélèvements

La plupart du temps, le fixateur de choix est le formol 10 % (phosphate-buffered formalin = 100 ml
de formaldhéhyde 40 %, 900 ml d’eau, 4 g de phosphate de sodium, monobasique monohydraté et
6,5 g de phosphate de sodium dibasique anhydre) (Miller et al., 2013).

Il faut au moins un volume de formol dix fois supérieur au volume de l'échantillon pour permettre
une fixation rapide. Le prélèvement doit être placé dans le formol dans les 2 minutes suivant son
excision car les changements artéfactuels se développent rapidement à l'air libre (autolyse) (Miller
et al., 2013). Le formol ne pénètre rapidement que dans un centimètre de tissu. C'est pour cela que
les échantillons supérieurs à un centimètre doivent idéalement être recoupés en segments de 1 cm
pour permettre une fixation rapide (grand nodule ou tumeur).

Page 69
La fixation au formol peut provoquer une contraction du tissu. Ceci ne pose pas de problème pour
les biopsies de 4 millimètres, mais pour les échantillons de taille supérieure ou les excisions
elliptiques, les échantillons doivent être placés sur une surface plane dure comme une spatule en
bois (abaisse-langue) ou un morceau de plastique pour minimiser les artefacts dus à la contraction
du tissu. L'échantillon est pressé doucement à plat pendant 30 à 60 secondes sur la surface avec le
tissu sous-cutané orienté vers le bas pour faciliter son adhérence. De plus, cette technique permet
d'avoir une bonne orientation anatomique de l’échantillon et évite les potentiels artéfacts associés à
l’enroulement et incurvation de l'échantillon. Le sens de pousse des poils peut-être indiqué sur le
support pour permettre aux techniciens du laboratoire de couper l’échantillon dans le sens souhaité
(Bensignor and Germain, 2014; Jackson and Marsella, 2012; Miller et al., 2013; Neuber and Nuttall,
2017).

Il existe des alternatives sans formol pour certaines techniques spéciales de laboratoire, pour
cela il faut consulter le laboratoire au préalable.

Si on veut faire de l’immunofluorescence, la fixation se fait préférentiellement dans un milieu de

Michel ou par congélation dans l’azote liquide. Mais les colorations immunohistochimiques peuvent
aussi se faire sur les tissus fixés au formol (Jackson and Marsella, 2012).

Les échantillons pour une culture bactérienne ou fongique doivent être mis dans un pot stérile avec
2-3 gouttes de solution saline (sérum physiologique) stérile (mycologie) ou dans un milieu de
transport spécifique (bactériologie) pour prévenir la dessiccation durant le transport ; aucune fixation
n’est nécessaire.

Pour la biologie moléculaire (PCR), les prélèvements sont placés dans du liquide physiologique et
expédiés immédiatement (Bexfield, Nick and Lee, 2014; Guaguère and Prélaud, 2006; Jackson and
Marsella, 2012).

Les pots doivent avoir un bouchon étanche et peuvent être scellés avec du ruban adhésif
pour prévenir les fuites. Chaque pot est identifié avec le nom du propriétaire, de l’animal et le site
de biopsie (Miller et al., 2013; Neuber and Nuttall, 2017).

Lorsque l'on envoie plusieurs échantillons dans un même pot, il peut être judicieux de marquer les
échantillons avec différentes couleurs d'encre en faisant correspondre chaque couleur à une
localisation précise (Miller et al., 2013).

Il faut éviter la congélation, par exemple lorsque les échantillons sont envoyés pendant l'hiver. La
congélation peut être évitée en ajoutant de l'alcool 95% (10% du volume de formol) ou en attendant
au moins 12h de fixation avant d'exposer les échantillons au froid (Baker and Thomsett, 1990; Miller
et al., 2013; Rhodes and Werner, 2018).

Pour l’envoi au laboratoire, il est indispensable d’envoyer des informations complètes et

correctes sur l'animal : ses commémoratifs, son anamnèse ainsi qu'une description détaillée des
lésions et de leur distribution, du site de biopsie, des autres symptômes, les résultats d'autres tests
pertinents, les traitements déjà réalisés ou en cours ainsi que notre diagnostic différentiel ; on peut
même envoyer des photos des lésions au laboratoire (Coyner, 2019).

Page 70
La principale cause d'erreur lors de l'envoi de biopsie cutanée à un laboratoire spécialiste est de ne
pas renseigner de manière correcte les informations concernant l'historique, l'apparence clinique ou
d'autres informations pertinentes relatives à l’échantillon.

• Complications
Les complications lors de biopsies cutanées sont rares. Mais il faut faire attention lors de biopsies
sur des patients présentant des troubles de la coagulation ou prenant des traitements comme de
l'aspirine ou des anti-coagulants. Si possible la prise de ce type de traitement doit être arrêtée 3
jours avant et 3 jours après les biopsies (à adapter en fonction des molécules utilisées et de leur
demi-vie) (Bexfield, Nick and Lee, 2014; Miller et al., 2013).

f. Interprétation
L’examen histopathologique combine les compétences de deux personnes : le vétérinaire praticien
pour le choix des prélèvements, leur réalisation et leur envoi au laboratoire et l’histopathologiste qui
traite le prélèvement, l’examine et interprète les résultats (Miller et al., 2013).

Si le praticien choisit correctement le site de prélèvement et informe le dermatopathologiste en lui

donnant toutes les informations nécessaires (historique, hypothèse diagnostique, clinique), la
biopsie cutanée peut apporter un maximum d'informations en un temps très court (Hnilica et al.,
2013).

Un rapport d’examen histologique est composé de 5 parties :

1) La description des changements histologiques visualisés dans l’épiderme, le derme puis les
annexes.
2) Un résumé de l’historique du patient selon les informations qui ont été fournies par le praticien
demandant l’examen. Il faut alors faire attention qu’aucune n’erreur n’a été commise car cela
peut influencer l’interprétation de l’examen.
3) Le diagnostic morphologique des « patterns » histologiques.
4) Le diagnostic clinique ou étiologique si possible avec identification de la maladie ou de l’agent
pathogène (bactérie, parasite, champignon) en cause.
5) Une mise en corrélation des observation histologiques avec la clinique décrite par le
praticien.

(Neuber and Nuttall, 2017; Rhodes and Werner, 2018)

Un diagnostic étiologique n’est pas toujours possible, mais l'histopathologiste doit être capable
de les classer les lésions en différentes catégories :

- Tumeur,
- Infection (cellulite, folliculite),
- Processus à médiation immune (maladie auto-immune, vascularites, accident médicamenteux),
- Troubles de type endocrinien (hypothyroïdie, syndrome de Cushing, dysplasie folliculaire),
- Troubles de la kératinisation (séborrhée primaire, adénite sébacée, ichtyose),
- Dermatite périvasculaire = dermatose inflammatoire comprenant toutes les causes
d’inflammation (dermatite atopique, dermatose parasitaire …) (Hnilica et al., 2013).

Page 71
Il faut toujours mettre en relation les résultats de l’examen histopathologique avec l’anamnèse et la
clinique de la maladie (Miller et al., 2013).

Si les résultats histopathologiques ne coïncident pas avec la clinique, il faut s’interroger sur :

- La représentativité des échantillons envoyés : échantillons de lésion active, échantillons

multiples, si la lésion est petite elle a pu ne pas être examinée par le laboratoire, préparation
chirurgicale du site (arrache les croûtes, pustules, vésicules)
- Les lésions primaires étaient-elles détériorées (désinfection, mauvaise
manipulation/technique) ou masquées (infection secondaire, excoriation) ?
- Est-ce que les lésions ont été correctement identifiées et interprétées en clinique ? Le
diagnostic différentiel était-il approprié ? La description des lésions et leur répartition était-
elle correctement faite ?

Dans ces cas, il ne faut pas hésiter à appeler le laboratoire pour discuter avec l’histopathologiste
des résultats ou même refaire un examen histologique des échantillons selon une coupe différente
ou avec une coloration différente (Neuber and Nuttall, 2017).

g. Avantages
Un certain nombre de maladies cutanées peuvent être diagnostiquées grâce à l’association de
l’examen clinique et de l’examen histopathologique. Le diagnostic est d'autant plus facilité si l’on est
en possession d’échantillons représentatifs de l'ensemble des différentes étapes de développement
des lésions (Miller et al., 2013).

Les changements histopathologiques ne sont pas toujours pathognomoniques, néanmoins, ils

permettent tout de même d’orienter le diagnostic et d’exclure de nombreuses maladies du diagnostic
différentiel (Jackson and Marsella, 2012).

h. Inconvénients
L’échantillon ne concerne qu’une toute petite partie de la peau.

L’examen histologique est inutile et non approprié dans certaines dermatoses comme la dermatite
atopique.

Un diagnostic de certitude n'est pas toujours obtenu, il faut avoir de bonnes connaissances en
histopathologie cutanée pour établir le diagnostic.

C’est un examen invasif, nécessitant une anesthésie locale a minima et les résultats sont retardés
dans le temps.

B. Prélèvements pour un examen mycologique et culture fongique

a. Objectif
La culture fongique a pour but d’isoler les agents pathogènes fongiques comme les dermatophytes,
agents de teignes, et de les identifier (genre et espèce) (Guaguère and Prélaud, 2006).

Page 72
 b. Principe
En fonction du type de lésion, différentes techniques permettent de prélever des poils, des débris
cutanés ou des échantillons de tissu pour les mettre en culture et ensuite identifier les champignons
pathogènes (levures, dermatophytes, infection profonde) et éventuellement évaluer leur sensibilité
aux antifongiques.
Il existe d’autres tests diagnostiques pour les mycoses : PCR, test antigénique, sérologie.

c. Indications
La réalisation d’un prélèvement pour une culture fongique est recommandée en cas de :
- Test à la lampe de Wood positif.
- Suspicion d’une dermatophytose.
- Suspicion d’une mycose sous cutanée ou d’un autre organe.
- Suivi du traitement : il est possible d’utiliser le nombre de colonies obtenu dans une boîte de
Pétri comme méthode de suivi semi-quantitative. Un animal est considéré guéri après deux
à trois cultures fongiques négatives (Moriello et al., 2017).
- Dermatophytose diagnostiquée chez les propriétaires ou un autre animal du foyer.

La culture fongique de dermatophyte peut se faire en clinique pour la recherche de dermatophytes

mais il est conseillé de toujours envoyer parallèlement un échantillon dans un laboratoire vétérinaire
spécialisé pour confirmer nos résultats, pour l’identification du champignon et pour la culture d’autres
espèces fongiques potentiellement dangereuses (Miller et al., 2013).

d. Matériel
- Lampe de Wood
- Clamps ou pinces
- Carré de moquette stérile (environ 5x5 cm)
- Brosse à dent stérile à bord plat
- Matériel d’envoi

Si l’on réalise une mise en culture à la clinique :

- Kit de culture DTM (Dermatophyte Test Medium) ou boîte de Pétri avec milieu de Sabouraud
associé à un antibiotique et un antifongique
- Etuve/incubateur
- Lame de microscope
- Ruban de cellophane adhésive transparente
- Bleu lactique
- Microscope

e. Techniques
Comme expliqué précédemment, il existe plusieurs méthodes de prélèvement en fonction du type
de lésion à prélever ou du type d’infection que l’on suspecte.

Page 73
 • Méthodes de prélèvement
▪ Epilation

Une lampe de Wood est utilisée pour mettre en évidence des poils émettant une fluorescence (voir
technique dans partie correspondante). Si des poils sont positifs, ils sont arrachés avec un clamp
ou une pince.

Il est aussi possible de prélever à la pince des poils et des squames en marge d’une lésion (sur son
front d’avancement) sans avoir recourt à la lampe de Wood. Pour cela il faut choisir une lésion
récemment formée ou en cours d’extension et chez un animal n’ayant pas reçu de traitement médical
récemment. On sélectionne alors des poils cassés ou mal formés associés à de l’inflammation, des
croûtes ou des squames. Si possible, il faut aussi prélever des poils au centre de la lésion.

(Bexfield, Nick and Lee, 2014; Coyner, 2019; Miller et al., 2013; Neuber and Nuttall, 2017)

▪ Carré de moquette

En alternative ou en complément de l’épilation ou si le test à la lampe de Wood est négatif, on utilise

la technique du carré de moquette.

Le pelage de l’animal est brossé avec un carré de moquette stérile pour récupérer des poils et des
débris de kératine. Il faut insister sur les zones suspectes, alopéciques et/ou squameuses. Les
spores, les poils et les squames se fixent sur le carré de moquette par électrostatisme.

Le carré de moquette est ensuite appliqué et tapoté sur le milieu de culture d’une boite de Pétri. Les
poils et les débris cutanés qui sont pris dans la moquette peuvent être enlevés avec une pince ou
un clamp stérile puis placés à la surface du milieu de culture.

Cette technique est plus sensible que celle de l’épilation car l’ensemble de la fourrure est prélevé.
Mais les résultats de la culture ne sont pas directement liés à une lésion en particulier (Coyner, 2019;
Neuber and Nuttall, 2017).

Cette technique est particulièrement efficace pour la détection de Microsporum canis chez les chats
cliniquement asymptomatiques ou chez les animaux où les lésions ont régressé suite au traitement
antifongique : la moquette est appliquée sur l’entièreté du corps, en se concentrant spécifiquement
sur les zones où étaient présentes les lésions et, en particulier, chez le chat, sur la tête, les oreilles
et les pattes (Coyner, 2019).

▪ Brosse à dents de McKenzie

Cette technique est identique à celle de la moquette. On utilise cette fois-ci une brosse à dents stérile
à bord plat.

Ces deux techniques de brossage (carré de moquette et brosse à dents de McKenzie) sont les
méthodes de prélèvement les plus utilisées. Elles sont simples, atraumatiques, peu coûteuses et
rapides.

L’envoi de ce type de prélèvement à un laboratoire est facile et les spores de champignons se

conservent bien.

Page 74
 ▪ Cellophane adhésive

C’est une technique alternative efficace à la moquette ou à la brosse à dents de McKenzie lorsque
des lésions sont visibles (Moriello et al., 2017). La technique de prélèvement est identique à celle
utilisée pour la recherche de parasite ou l’examen cytologique.

Le morceau de cellophane adhésive est ensuite placé sur le milieu de culture face collante vers le
bas.

Cette méthode de prélèvement est n’envisagée que si l’on souhaite réaliser la culture mycologique
à la clinique car la qualité du prélèvement est de moindre qualité que celle du carré de moquette et
l’envoi plus difficile.

▪ Raclage cutané

Un raclage cutané superficiel peut être réalisé lorsque l’on suspecte une dermatophytose et plus
particulièrement une infection à Trichophyton spp. avec des lésions étendues ou dans tous les cas
de suspicion d’infection à Nannizzia persicolor (anciennement Microsporum persicolor). Les hyphes
sont alors uniquement présents dans la couche cornée (Miller et al., 2013).

La technique de raclage est identique à celle pour la recherche de parasites.

▪ Prélèvement des griffes

Les griffes peuvent être mises en culture en sectionnant une partie de la griffe atteinte puis en raclant
sa surface avec une lame de scalpel stérile (racler la partie concave de la griffe) afin de former de
petites particules qui sont déposées sur le milieu de culture. Les dermatophytes se développent au
sein de la kératine de l'ongle et peuvent être à l'origine d'une onychodystrophie caractéristique
(Hnilica et al., 2013).

Avant de réaliser des prélèvements au niveau des griffes et des coussinets, il faut nettoyer avec de
l’alcool 70% pour éliminer les contaminants environnementaux (Miller et al., 2013).

▪ Biopsie

En cas de suspicion d’une mycose sous-cutanée ou profonde, la biopsie au trépan est la méthode
de choix pour le prélèvement (voir technique précédemment décrite) (Miller et al., 2013).

Les échantillons sont prélevés aux marges et au centre d’une lésion ainsi que dans toute lésion avec
un aspect suspect puis ils sont envoyés à un laboratoire d’analyse spécialisé.

Les biopsies sont placées dans un pot stérile avec du sérum physiologique et envoyées à un
laboratoire spécialisé dans les 12 à 24h. Il ne faut pas utiliser de formol. Une réfrigération est
possible pour préserver l’échantillon sauf en cas de suspicion d’Aspergillus spp et de Zygomycetes
(Miller et al., 2013).

• Envoi du prélèvement
Lors de l’envoi du prélèvement au laboratoire, il ne faut pas le placer dans un contenant hermétique
car cela favorise la croissance de moisissures et de bactéries contaminantes ce qui peut fausser la

Page 75
culture et l’isolement. Pour l’envoi au laboratoire, il vaut donc mieux mettre l’échantillon dans une
enveloppe ou dans un flacon avec le bouchon peu fermé (Miller et al., 2013).

Lors d’un prélèvement à l’aide d’un carré de moquette, celui-ci est replacé dans son emballage
d’origine de manière stérile. Lors d’un prélèvement avec une brosse à dents, celle-ci est placée de
préférence dans un tube à essai.

Certaines espèces fongiques à l'origine d'infections profondes et/ou de cellulites (blastomycoses,

pythiose, histoplasmose, coccidioïdomycose) représentent un danger zoonotique lorsqu'elles sont
mises en culture. Ainsi lorsqu'on suspecte ce type d'infection, les échantillons doivent être envoyés
à des laboratoires de mycologie spécialisés avec un emballage adapté (Hnilica et al., 2013). Il ne
faut pas poster le prélèvement la veille d'un week-end et le laboratoire doit être prévenu en avance.

Lorsqu’un dermatophyte est suspecté les conditions d'envoi sont moins importantes (Bensignor and
Germain, 2014).

• Mise en culture
Il est généralement recommandé de demander systématique une mise en culture par un laboratoire
spécialisé lors d’une suspicion d’une infection fongique. Dans ce cas, le milieu de culture privilégié
par les laboratoires est le milieu de Sabouraud auquel sont ajoutés des antibiotiques (gentamicine,
chloramphénicol) et parfois un antifongique (cycloheximide aussi appelé actidione) lors de la
recherche de dermatophytes. Ceux-ci inhibent la croissance de bactéries ou de champignons
contaminants à croissance rapide ce qui permet aux champignons pathogènes de grandir plus
librement (Baker and Thomsett, 1990).

Le milieu de Sabouraud est constitué de gélose, de glucose (dextrose) et de peptones. C’est le

milieu donnant les meilleurs résultats pour la culture fongique (morphologie des colonies,
changement de couleur) et pour la croissance de bactéries filamenteuses (Nocardia).

Cependant, il est aussi possible pour le praticien de réaliser une culture dans sa clinique à
l’aide du milieu de culture DTM (Dermatophyte Test Medium) sous forme de boîte de Pétri ou de kit
en tube la plupart du temps. Le milieu DTM a pour base une gélose de Sabouraud à laquelle sont
ajoutés de la cycloheximide, de la gentamicine, de la chlorotétracycline (antifongiques et
antibiotiques) et du rouge de phénol (indicateur de pH) (Jackson and Marsella, 2012; Miller et al.,
2013; Neuber and Nuttall, 2017).

Lors de leur croissance, les dermatophytes commencent par consommer les protéines du milieu et
relarguent des métabolites alcalins. Le milieu DTM passe alors du jaune au rouge, après environ 7-
10 jours d’incubation. Puis quand toutes les protéines du milieu sont consommées, les
dermatophytes vont consommer les carbohydrates et relarguer des métabolites acides. Le milieu
redevient jaune. Le virage de couleur se fait avant ou concomitant la pousse du dermatophyte sauf
pour Nannizzia persicolor (anciennement Microsporum persicolor) dont les colonies commencent à
pousser quelques jours avant le changement de couleur du milieu (Guaguère and Prélaud, 2006).

Page 76
Figure 34 : Milieu DTM dans une boîte de Pétri avec changement de couleur du jaune vers le
rouge suite à la pousse de colonie de dermatophytes (Jackson and Marsella, 2012)

La plupart des autres espèces de champignons commencent par consommer les carbohydrates (le
milieu reste jaune) puis les protéines. Le milieu ne devient donc rouge qu’après une incubation
prolongée soit environ 10-14 jours (Jackson and Marsella, 2012; Miller et al., 2013). Les
changements de couleurs tardifs, c’est-à-dire après 2 à 4 semaines, sont donc à associer avec la
pousse de champignons saprophytes (Aspergillus spp., Mucor spp., …) ou de bactéries (Guaguère
and Prélaud, 2006).

Les milieux DTM sont incubés à une température comprise entre 25 et 30°C et doivent être examinés
quotidiennement pendant les 10 premiers jours d’incubation pour la détection de dermatophytes
(Miller et al., 2013).

D’après certains fabricants de milieu DTM, l'incubation peut se faire à la lumière alors que d'autres
recommandent une incubation dans l'obscurité pour éviter une inhibition de la croissance des
champignons liée aux lumières UV (Rhodes and Werner, 2018).

L’inhalation de champignons non dermatophytes est à risque pour l’homme, la manipulation doit
donc se faire sous PSM (Poste de Sécurité Microbiologique).

• Observation au microscope
Lorsque des colonies ont poussé sur le milieu de culture, les macroconidies sont collectées à l’aide
d’un morceau de cellophane adhésive transparente sur la surface de la colonie. Le ruban adhésif
est ensuite placé sur une lame de microscope par-dessus quelques gouttes de bleu lactique. La
lame est observée au grossissement x10-40 pour la caractérisation des macroconidies (Coyner,
2019).

Pour ces étapes des gants doivent être portés pour éviter la transmission de spores de
dermatophytes sur les mains (Coyner, 2019).

Il est recommandé d’envoyé le prélèvement ou des milieux de culture incubés à un laboratoire pour
l’identification (Miller et al., 2013).

Page 77
 f. Interprétation
En laboratoire, l’identification passe par l’examen macroscopique et microscopique de la culture :
caractérisation des organes de fructification (macroconidies et microconidies) et des ornementations
par la technique du drapeau de Roth (Guaguère and Prélaud, 2006).

Lors de l’observation macroscopique des colonies (aspect de la culture au recto et au verso), la

morphologie macroscopique de la colonie fongique est le premier détail important à observer pour
déterminer si un dermatophyte est présent (Coyner, 2019; Guaguère and Prélaud, 2006).

Figure 35 : Aspect macroscopique de colonies de Microsporum canis (Rhodes and Werner,

2018)

Lors de la réalisation d’une culture sur milieu DTM à la clinique, l’interprétation correcte
repose sur un changement de couleur vers le rouge avant ou concomitant à la pousse d’une colonie
micellaire (la première) dans les 10 premiers jours de culture. Les faux positifs arrivent surtout quand
les cultures ne sont pas vérifiées assez fréquemment (croissance de champignons saprophytes)
(Miller et al., 2013).

Cependant, l'observation du seul changement de coloration est insuffisante. En effet, elle indique
dans 20 % des cas environ, la pousse de champignons contaminants (Aspergillus, Penicillium,
Alternaria, etc.). Il est donc nécessaire d'observer le moment du changement de la coloration (virage
en 2 à 13 jours (moyenne 6 j) pour les dermatophytes et en 4 à 14 jours (moyenne 9 j) pour les
contaminants) et de rechercher une éventuelle coloration de la colonie (coloration noirâtre
caractéristique de certains contaminants). Malheureusement, la coloration du milieu peut masquer
la coloration naturelle de certaines cultures de dermatophytes (Chermette and Bussiéras, 1993).

Une observation microscopique de la colonie suspecte est aussi très importante car certains
champignons contaminants peuvent mimer des colonies de dermatophytes et induire un
changement de couleur précoce du milieu DTM vers le rouge (Bensignor and Germain, 2014;
Chermette and Bussiéras, 1993; Coyner, 2019; Miller et al., 2013). Pour cela, il est recommandé
d’envoyer un échantillon dans un laboratoire spécialisé en mycologie.

L’étude de Kaufmann et al. montre que la mise en culture sur milieu DTM en clinique est possible
avec un risque d’erreur de seulement 3 % comparé aux résultats de cultures réalisées en laboratoire
spécialisé. Cependant, pour cela l’examen doit comprendre une évaluation macroscopique et
microscopique des colonies cultivées sinon le risque d’erreur est de 19,4 % (Kaufmann et al., 2016).

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L’étude de Guillot et al. (2001) et al. montre que la rapidité du changement de couleur du milieu DTM
est dépendante de la température d’incubation et du nombres de poils infectés déposé sur le milieu
de culture. Ainsi, si la température d’incubation est trop basse (entre 18 et 21°C) et que la quantité
de poils inoculés est faible, le virage de couleur apparaîtra entre 6 et 10 jours post-incubation contre
3 à 5 jours lors d’une incubation à une température constante de 24 à 27 °C avec une grande
quantité de poils inoculée. Des résultats faussement négatifs sont donc possibles si la température
d’incubation est trop faible ou inconstante (incubation à température ambiante par exemple) ou la
quantité d’inoculum est insuffisante.

Ainsi, plusieurs études s’accordent à dire que la culture sur milieu DTM pour l’identification d’une
dermatophytose par changement de couleur du milieu manque de spécificité et de sensibilité.
(Carroll, 1974; Crozier, 1977)

La culture fongique en laboratoire est considérée comme le « gold standard » pour

diagnostiquer une dermatophytose. Cependant, des faux positifs et des faux négatifs sont possibles
si les échantillons ne sont pas envoyés dans un laboratoire spécialisé ou si des erreurs ont été
commises lors de l’échantillonnage, notamment si l'on envoie uniquement des poils épilés (faux
négatifs).

Lors de la réalisation du prélèvement par une technique de brossage (moquette ou brosse à dent
de McKenzie), des résultats faux négatifs sont possibles si les lésions ne sont pas prélevées
méticuleusement ou si l'échantillon n'est pas correctement inoculé à la surface du milieu de culture.
Cela arrive principalement lorsque le laboratoire n'est pas familier avec la méthode d'inoculation des
boîtes de Pétri et récupère de manière aléatoire les poils arrachés sur la brosse ou la moquette
(Moriello et al., 2017).

Des faux positifs sont aussi possibles car cette technique est très sensible et peut donc détecter des
animaux porteurs mécaniques (Moriello et al., 2017).

Pour le suivi des traitements antifongiques, un animal est considéré guéri après deux à trois cultures
fongiques négatives. Une culture fongique négative chez un chat sans lésion visible et associée à
un examen à la lampe de Wood négatif est aussi compatible avec une guérison (Moriello et al.,
2017).

De plus en plus, l’identification à laboratoire des agents pathogènes fongiques se réalise par
la spectrométrie de masse MALDI-TOF en complément de l'observation au microscope des
colonies.

Pour les champignons, il existe des tests de sensibilité aux antifongiques (antifongigramme)
disponibles dans des laboratoires spécialisés (Neuber and Nuttall, 2017).

g. Avantages
La culture de dermatophytes est simple et facile en utilisant le milieu DTM.

Un diagnostic de certitude est possible par examen des colonies au microscope, surtout si cet
examen est réalisé dans un laboratoire spécialisé.

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Une culture mycologique envoyée en laboratoire spécialisé par la technique du carré de moquette
(identification du champignon et évaluation du nombre de colonies) permet un diagnostic et un suivi
semi-quantitatif de la réponse au traitement antifongique (si le prélèvement est réalisé dans les
mêmes conditions).

h. Inconvénients
Lors de culture sur milieu DTM, les boîtes de Pétri doivent être examinées quotidiennement car le
changement de couleur advient sur une petite période de temps, ce qui peut être difficilement
réalisable si la culture est faite à la clinique (Wilkinson and Harvey, 1994). Du matériel spécifique tel
une étuve est nécessaire.

Des résultats faux positifs et négatifs sur milieu DTM sont fréquents.

Pour conclure, une culture et une identification en laboratoire spécialisé sont préférables plutôt que
la mise en culture sur milieu DTM à la clinique vétérinaire pour limiter les erreurs d’identification du
genre et de l’espèce du dermatophyte en cause.

C. PCR

a. Objectif
Le test PCR est un examen complémentaire pour la recherche et l’identification d’agents de
dermatophytose.

b. Principe
C’est une technique d’amplification de l'ADN de dermatophyte au sein d'un échantillon cutanée
(Hnilica et al., 2013). C’est un test rapide.

c. Indications
La réalisation d’un test PCR est recommandée en cas de :
- Test à la lampe de Wood positif.
- Suspicion clinique d’une dermatophytose.
- Dermatophytose diagnostiqué chez les propriétaires ou un autre animal du foyer.

d. Matériel
- Lampe de Wood
- Clamps ou pinces
- Carré de moquette
- Brosse à dents stérile à bord plat
- Matériel d’envoi

e. Technique
Les échantillons sont obtenus depuis des lésions en utilisant une brosse à dents stérile ou une
moquette et en collectant des squames et des croûtes. Les squames cutanées peuvent être
obtenues à l’aide d'une lame de raclage ou des pinces.

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L’envoie des prélèvements réalisés avec un carré de moquette ou une brosse à dents stérile se fait
selon les même modalités décrites dans la partie précédente. Si des croûtes ou des squames sont
envoyés, il faut utiliser une boîte de prélèvement stérile (Coyner, 2019).

f. Interprétation
La PCR pour la recherche de dermatophytes est sensible mais non spécifique (Rhodes and Werner,
2018).

Ce test ne nécessite que très peu d’ADN dans l’échantillon pour donner un résultat positif. Cela en
fait un examen peu fiable pour le diagnostic des dermatophytoses car une toute petite quantité
d’ADN d’un contaminant peut mener à un résultat faussement positif. En effet, l’ADN des
dermatophytes est ubiquitaire et peut être retrouvé dans la terre par exemple. Un animal positif à la
PCR peut donc avoir de l’ADN contaminant présent dans son pelage sans pour autant être infecté.

Comme la PCR est très sensible, les résultats négatifs sont rares mais peuvent arriver si trop peu
de matériel est envoyé pour l'analyse. Il est important d'envoyer des poils avec des racines intactes
(Moriello et al., 2017).

Comme le test PCR permet d’identifier en réalité l’ADN de champignons, il ne fait pas de
discrimination entre les champignons viables ou non. A cause de cela il peut y avoir des
discordances entre les résultats PCR et les résultats de la culture fongique quand de l'ADN de
champignons morts est détecté par la PCR si le traitement mis en place est efficace alors que la
culture reviendra négative (Moriello et al., 2017).

Idéalement les deux tests devraient être réalisés en concomitance pour un diagnostic optimal des
dermatophytoses, puis des cultures devraient être réalisées toutes les une à deux semaines pour
déterminer le bon moment pour arrêter le traitement (Coyner, 2019).

g. Avantages
Les résultats sont obtenus plus rapidement qu’avec une culture fongique.
Cet examen est très sensible.

h. Inconvénients
Ce test est peu spécifique, de nombreux faux positifs sont possibles : champignons
environnementaux, champignons morts.
Les PCR fongiques sont interprétées comme positives ou négatives. Donc, au contraire des cultures
où la quantité de colonies de dermatophytes peut être suivie pour évaluer l'efficacité du traitement,
la PCR ne permet pas de déterminer le nombre de spores de dermatophytes présents (Coyner,
2019).

D. Prélèvements pour un examen bactériologique et culture bactériologique

a. Objectif
La culture bactérienne a pour but d’isoler et d’identifier des agents pathogènes bactériens et de
tester leur sensibilité aux traitements antibiotiques.

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 b. Principe
En fonction du type de lésion, différentes techniques (écouvillon, biopsie) sont utilisées pour prélever
des échantillons cutanés, les mettre en culture et ensuite identifier les pathogènes bactériens et
tester leur sensibilité aux antibiotiques (Bensignor and Germain, 2014).

c. Indications
La réalisation d’un prélèvement pour une culture bactérienne est recommandée en cas de :
- Observation à l’examen cytologique de bacilles (qui sont souvent plus résistants aux
antibiotiques). En effet, la présence de bacilles lors d’un examen cytologique cutané peut
indiquer la présence de bactéries Gram négatives potentiellement résistantes à de nombreux
antibiotiques utilisés en pratique courante en dermatologie (Barillas et al., 2019)
- Suspicion d’une résistance microbienne : plaie ne cicatrisant pas, infections post-
opératoires, infections nosocomiales, infections ne répondant pas aux traitements
antibiotiques empiriques et où des bactéries sont présentes malgré la thérapie en cours,
traitement antibiotique dans les derniers 3 mois (surtout si le spectre d’action antibiotique
était large).
- Suivi d’infection à des germes multirésistants.
- Infection sévère mettant en jeu la survie de l’animal et pour laquelle le choix l’antibiotique
utilisé doit être ciblé dès le départ.
- Pour confirmer le diagnostic quand le traitement est coûteux et/ou a d’importants effets
secondaires.
- Toute lésion d’aspect comparable à une cellulite profonde, en particulier celles présentant
des trajets fistuleux, ou une pyodermite profonde.
- Périonyxis, otite suppurée bactérienne.
- Nodules lorsqu’une cause infectieuse est incluse dans le diagnostic différentiel.

(Coyner, 2019; Guaguère and Prélaud, 2006; Hnilica et al., 2013; Neuber and Nuttall, 2017)

d. Matériel
- Tondeuse
- Aiguille stérile (21G)
- Seringues
- Pour culture bactérienne aérobique : écouvillon stérile et milieu de transport bactérien
- Pour culture anaérobique : matériels de biopsie et milieu de transport anaérobique pour
écouvillon
- Sérum physiologique

(Bexfield, Nick and Lee, 2014)

e. Techniques
• Préparation
Si une antibiothérapie orale ou topique est déjà mise en place, il est préférable d'arrêter le traitement
pendant au moins 48 à 72 heures avant le prélèvement (= après 5 demi-vies de la dernière dose).
Cependant, si de nombreuses bactéries sont présentes à l'examen cytologique malgré la présence
d'un traitement antibiotique le report de la culture n'est pas systématiquement nécessaire. Des
techniques d’enrichissement du milieu de culture ou une mise en culture plus longue peuvent être

Page 82
entreprises. Mais il existe malgré tout un risque de culture négative (Bensignor and Germain, 2014;
Coyner, 2019; Neuber and Nuttall, 2017).

Il est très important de bien choisir les lésions à prélever. Les lésions suintantes, excoriées, ou avec
beaucoup de croûtes peuvent être contaminées par des bactéries de l’environnement (milieu
extérieur et microbiote) et donc les cultures seront difficiles à interpréter (Miller et al., 2013).

Il faut choisir des lésions primaires intactes : pustules, nodules, furoncles, pourtour des collerettes
épidermiques et des ulcères. En cas d’otite suppurée ou si des bacilles sont observés à l’examen
cytologique auriculaire, du cérumen peut être soumis pour une culture.

Il ne faut pas désinfecter les lésions avant de réaliser le prélèvement. Cela peut conduire à des
cultures faussement négatives.

• Méthodes de prélèvement
▪ Ecouvillon cutané

En cas de lésion superficielle, la culture en milieu aérobique est la seule nécessaire.

Un échantillon peut être prélevé en frottant directement l’écouvillon sur la surface de la peau mais il
y a de forts risques de contamination par des microorganismes environnementaux.

Si des pustules sont présentes, il faut prélever le contenu d’une pustule intacte avec une aiguille
stérile (aspiration à l’aiguille fine). Le pus dans l’aiguille est ensuite transféré sur le bout d’un
écouvillon stérile. L’écouvillon peut aussi être directement placé sur une pustule rompue avec une
aiguille stérile pour absorber son contenu (Jackson and Marsella, 2012; Miller et al., 2013).

On procède de même en présence de croûtes. La croûte est retirée puis on utilise un écouvillon pour
prélever les exsudats présents en-dessous de la croûte (Coyner, 2019).

Pour les papules, on ponctionne leur surface avec une aiguille stérile pour récupérer quelques
gouttes d’exsudat séreux (Miller et al., 2013).

Si seulement une petite quantité d’exsudat est présente, il ne faut pas tenir l’écouvillon à la verticale
lors du prélèvement mais sur le côté. En effet, au laboratoire les bactériologistes roulent l’écouvillon
sur le côté pour réaliser la mise en culture. Cela permet d'éviter les résultats faussement négatifs.
(Wilkinson and Harvey, 1994)

En cas de lésion sèche, il faut humidifier l’écouvillon avec du sérum physiologique stérile pour gratter
le pourtour des collerettes épidermiques ou pour vigoureusement gratter des zones squameuses
(Coyner, 2019).

Pour les lésions très suintantes, l’exsudat purulent superficiel doit être retiré et la plaie est nettoyée
avec du sérum physiologique sans conservateur. En pressant la lésion, on peut ensuite extraire de
l’exsudat frais que l'on récolte à l'aide d'un écouvillon avant de l'envoyer à un laboratoire de
microbiologie. Cette méthode de nettoyage aide à réduire le nombre d'agents contaminants dans
l'échantillon (Hnilica et al., 2013).

Pour les fistules ou furoncles, la peau est d'abord nettoyée avec du sérum physiologique ou de
l'alcool puis séchée à l'air libre. Puis le contenu de la lésion est aspiré à l’aiguille fine ou extériorisé
en pressant avec les doigts, puis prélevé avec un écouvillon (Miller et al., 2013).

Page 83
 ▪ Ecouvillon auriculaire

La culture bactérienne est recommandée lors d’infections persistantes de l’oreille. Pour cela on
réalise un écouvillon auriculaire (Rhodes and Werner, 2018).

La technique de prélèvement est identique à celle pour un examen cytologique. Les échantillons
pour la culture doivent être réalisés idéalement avant ceux pour la cytologie et toujours avant de
nettoyer l’oreille.

Lors du prélèvement de la partie horizontale du canal auditif, pour éviter les contaminations par la
partie verticale, on peut protéger l’extrémité de l’écouvillon avec un morceau de tubulure inséré dans
la partie verticale du canal.

Lors d’une suspicion d’otite moyenne, un prélèvement est réalisé après myringotomie ou
directement si la membrane tympanique est déchirée. La technique de prélèvement est à nouveau
identique à celle utilisée pour l’examen cytologique.

Il est aussi possible d’insérer un cathéter à travers la membrane tympanique pour échantillonner du
liquide dans la bulle tympanique mais les contaminations de l'échantillon par l'oreille externe sont
possibles en cas d’otite externe dont les germes diffèrent de ceux présents dans l’oreille moyenne
(peu fréquent).

L’écouvillon est ensuite placé dans un milieu de transport adapté avant de l’envoyer au laboratoire
(Bexfield, Nick and Lee, 2014).

▪ Biopsie

Les biopsies sont utilisées lors de suspicion d’infection profonde lors de lésions comme des plaques,
des nodules, des fistules ou une cellulite.
Dans les lésions profondes (diffuses ou nodulaires), les bactéries sont souvent anaérobiques. Pour
cette raison, il est préférable de réaliser une biopsie et de l’envoyer dans un milieu de transport
anaérobique (fourni par le laboratoire). Il est aussi possible d’utiliser des écouvillons placés dans
des milieux de transport spéciaux pour organismes anaérobiques. L’échantillon doit être délivré dans
les heures suivantes au laboratoire (Coyner, 2019; Jackson and Marsella, 2012).

La technique de biopsie est identique à celle utilisée pour l’examen histologique. La plaie doit
être préparée chirurgicalement et rincée abondamment avec du sérum physiologique, cela évite
qu’un désinfectant ne détruise les agents pathogènes au moment de l'excision (Hnilica et al., 2013).
Si de l’alcool est appliqué, il faut bien attendre qu’il est fini de s’évaporer avant de réaliser la biopsie
pour éviter les faux-négatifs (Neuber and Nuttall, 2017).

Il est recommandé d’utiliser une anesthésie en bloc ou générale car la lidocaïne peut inhiber la
croissance des bactéries (Coyner, 2019).

Une fois que l'échantillon cutané a été récolté, il doit être placé sur un écouvillon pour culture
bactérienne ou dans un récipient stérile (avec quelques gouttes de sérum physiologique sans
conservateur), réfrigéré et expédié (Coyner, 2019; Hnilica et al., 2013).

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Pour réduire les risques de contamination et cantonner la culture au derme et au tissu sous-cutané,
l’épiderme de l’échantillon peut être excisé avec une lame de scalpel stérile (Wilkinson and Harvey,
1994).

Il ne faut pas exposer l’échantillon à du formol ou à des vapeurs de formol (Neuber and Nuttall,
2017).

• Envoi du prélèvement
Il faut envoyer les échantillons à un laboratoire de référence expérimenté dans la culture,
l'identification bactérienne et dans les antibiogrammes en médecine vétérinaire (Rhodes and
Werner, 2018).

Il faut bien identifier le prélèvement et joindre les commémoratifs à l’envoi.

Les prélèvements peuvent être envoyés par courrier à condition d'utiliser un milieu de transport
adapté et de ne pas poster le prélèvement la veille d'un week-end (Bensignor and Germain, 2014).
Il faut également faire attention à ce que les échantillons ne gèlent pas car cela peut réduire la
précision du résultat de la culture (Hnilica et al., 2013).

En cas de suspicion de bactéries inhabituelles ou zoonotiques (mycobactéries, pseudomycétome

bactérien, actinomycose, actinobacillose, nocardiose), lors de l’envoi des échantillons au laboratoire
(calques cutanés et biopsies), il faut contacter le laboratoire au préalable car un milieu de transport
spécial et une incubation peuvent être nécessaires (Guaguère and Prélaud, 2006; Jackson and
Marsella, 2012; Wilkinson and Harvey, 1994).

Des tests PCR sont disponibles pour certaines espèces de mycobactéries (Hnilica et al., 2013).

En cas de granulome, des cultures fongiques et mycobactériennes doivent être effectuées en

parallèle de la culture bactérienne (Jackson and Marsella, 2012).

f. Interprétation
Une culture positive à partir d’échantillons de la surface cutanée ne prouve pas que la bactérie mise
en évidence est pathogène, il faut associer cela avec un examen cytologique : signes d’inflammation,
bactéries intracellulaires.

Il est important de toujours réaliser un examen cytologique cutané au moment de la culture pour
pouvoir interpréter les résultats de la culture et ne pas passer à côté du diagnostic. Par exemple si
des coques et des bacilles sont vus à l’examen cytologique, mais qu’uniquement des coques sont
présents dans la culture, cela indique que la culture doit être réexaminée par le laboratoire ou refaite.
Si uniquement des levures sont visibles à l’examen cytologique de la peau ou des oreilles alors la
culture bactérienne n'est pas indiquée (Coyner, 2019).

De plus, l’examen cytologique nous apporte des informations semi-quantitatives contrairement à la

culture qui est uniquement qualitative. Cela nous permet également de savoir s’il y a de la
phagocytose ou non (infection versus contamination) et les relations des microorganismes avec les
cellules cutanées. Ces informations sont primordiales pour l’interprétation des résultats de la culture.

Il est aussi important de mettre en relation les résultats de la culture avec l’historique du patient et
la clinique.

Page 85
Les staphylocoques coagulase positive peuvent être isolés dans quasiment tous les cas de
pyodermite canine. En cas d'infection mixte , avec différentes bactéries montrant différentes
résistances aux antibactériens, il faut choisir l'antibiotique indiqué contre Staphylococcus
intermedius (Wilkinson and Harvey, 1994).

Il existe plusieurs tests de sensibilité aux antibiotiques.

Les disques de Kirby-Bauer donnent comme résultats : résistant, sensible ou intermédiaire. C’est la
méthode la plus utilisée pour les tests de sensibilité. Des disques saturés en une solution antibiotique
sont placés sur une boite de Pétri pour déterminer la zone d’inhibition (ZI) de croissance. Plus cette
zone est grande, plus la bactérie est sensible à l’antibiotique présent dans le disque. Les ZI sont
comparées à des valeurs de références pour déterminer si la bactérie est sensible, intermédiaire ou
résistante. Ce test ne donne pas d’information sur la concentration exacte d’antibiotique nécessaire
pour inhiber la croissance bactérienne (Neuber and Nuttall, 2017).

Figure 36 : Test de sensibilité avec des disques de Kirby-Bauer (Neuber and Nuttall, 2017)

Le test de la concentration minimale d’inhibition (MIC) est préférable car il donne une indication sur
le degré de résistance aux antibiotiques en fonction de la concentration et cette résistance peut être
dépassée en modulant les doses. La MIC est la concentration d’antibiotique la plus basse permettant
d’inhiber complètement la croissance bactérienne. Une bande de papier imprégnée d’une solution
d’antibiotique dont la concentration décroît tout au long de la bande est placée sur une boite de Pétri.
Cela produit une ZI elliptique, la MIC est lue là où la ZI touche la bande de papier. Plus la MIC est
basse, plus la bactérie est sensible à l’antibiotique. Les MIC sont comparées à des valeurs de
référence pour déterminer si la bactérie est sensible, intermédiaire ou résistante (Neuber and Nuttall,
2017).

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 Figure 37 : Test de sensibilité avec la méthode de la concentration minimale
d’inhibition (Neuber and Nuttall, 2017)
Les résultats d’un antibiogramme ne peuvent être utilisés pour la prescription d’un antibiotique
critique que s’il a été réalisé selon les normes AFNOR NF U47-107 (diffusion en milieu gélosé) ou
NF U47-106 (dilution en milieu gélosé). La référence à la norme AFNOR doit figurer sur le résultat
de l’antibiogramme.
Il existe un dispositif commercial Vitek ® 2 utilisé par certains laboratoires pour la réalisation
d’antibiogramme ne répondant aux normes AFNOR précitées mais pour lequel le Laboratoire
National de Référence (LNR) a validé certains couples antibiotiques/espèces bactériennes. Ainsi, la
prescription d’antibiotique critique à partir d’antibiogramme réalisé par ce dispositif n’est possible
que pour les quelques couples validés par le LNR (Note de service DGAL/SDSPA/2020-426 du
06/07/2020).

Les principales causes d’échec des cultures bactériennes sont :

- Sites d’échantillonnage non représentatifs.

- Traitement antibiotique récent : faux négatif.
- Désinfection préalable : faux négatif.
- Contamination : faux-positif.
- Mauvais traitement des échantillons au laboratoire.
- Erreur dans l’interprétation des tests de sensibilité.

(Neuber and Nuttall, 2017)

g. Avantages
La culture bactérienne permet d’identifier la ou les bactéries impliquées, apporte des informations
sur la sensibilité aux antibiotiques des bactéries isolées.

h. Inconvénients
La qualité des résultats dépend fortement de la qualité des prélèvements (Wilkinson and Harvey,
1994).

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Des résultats faux négatifs et faux positifs sont possibles.

Cet examen à lui seul ne permet pas de faire la différence entre une infection bactérienne ou une
simple contamination. Il doit être systématique couplé avec un examen cytologique pour augmenter
la sensibilité et la spécificité des résultats.

E. Test sérologique par dosage des IgE spécifiques d’allergènes

a. Objectif
L’objectif des tests allergologiques sériques est de détecter la présence d’une réaction
d’hypersensibilité aux allergènes médiée par les IgE et d’identifier les allergènes en vue de réaliser
une immunothérapie spécifique d’allergène chez un animal diagnostiqué allergique ou un animal
atopique présentant une exacerbation des signes lors de changement de lieu ou de saison (Coyner,
2019; Foster and Foil, 2003; Jackson and Marsella, 2012).

b. Principe
Les anticorps IgE spécifiques d’allergènes circulants dans de sang sont mesurés grâce à des tests
ELISA et RAST (Radio-Allergo Sorbant Test). Les principes de ces tests sont similaires. Le sérum
du patient est ajouté dans un puits contenant des antigènes (en phase liquide ou solide) puis une
enzyme spécifique ou de l’antisérum d’IgE canine radiomarqué est ajouté (Foster and Foil, 2003;
Neuber and Nuttall, 2017).

c. Indications
Les tests allergologiques sont indiqués chez les animaux présentant une dermatite allergique ou
une dermatite atopique dont l’anamnèse et les signes cliniques font suspecter l’influence de facteurs
environnementaux (aéroallergènes) dans le déclenchement des lésions.

Ceux-ci peuvent être effectués par une IDR ou un dosage des IgE spécifiques d’allergènes. (Coyner,
2019; Hensel et al., 2015).

Ces tests ne permettent pas de diagnostiquer une dermatite atopique. Ce diagnostic se fait à partir
des signes cliniques, de l’anamnèse et après avoir exclu les autres causes de prurit.

L’allergie alimentaire, l'hypersensibilité hormonale, l’hypersensibilité bactérienne sont de fausses

indications (Bensignor and Germain, 2014).

d. Technique
Il est recommandé de réaliser le dosage immédiatement après une poussée. En effet, les taux d’IgE
spécifiques d’allergènes diminueraient en dehors des périodes à risque.
Le prélèvement se fait par prise de sang (plasma ou sérum).
En général, il n'est pas utile d'interrompre un traitement en cours comme cela est le cas lors de la
réalisation de tests cutanés classiques (IDR). Néanmoins cet examen mesurant une composante de
la réponse immunitaire, une médication anti-inflammatoire pourrait en altérer les résultats. (Hnilica
et al., 2013)

Page 88
Récemment, l’article de Bruet et al. (2022) met en place des lignes directrices pour l’utilisation des
médicaments antiprurigineux chez le chien à partir d’une revue de la littérature publiée de 1990 à
2021. Il propose des temps optimaux d’éviction avec de réaliser une IDR ou des tests sérologiques :

- Antihistaminiques : pas d’arrêt nécessaire avant un dosage des IgE sériques spécifiques
d’allergènes.
- Glucocorticoïdes topiques (ex. acéponate d’hydrocortisone) : pas d’arrêt nécessaire avant
un dosage des IgE sériques spécifiques d’allergènes.
- Glucocorticoïdes systémiques (ex. prednisolone) : pas d’arrêt nécessaire avant un dosage
des IgE sériques spécifiques d’allergènes.
- Ciclosporine, oclacitinib, lokivetmab : pas d’arrêt nécessaire avant un dosage des IgE
sériques spécifiques d’allergènes.

Cependant, dans son étude de 2021, Canning met en évidence une diminution significative de la
concentration en IgE lors de traitement avec du lokivetmab (dépendant du temps de traitement) et
de la ciclosporine (dépendant de la dose). Leur arrêt est donc recommandé avant la réalisation d’un
un dosage des IgE sériques spécifiques d’allergènes (Canning et al., 2021).

Olivry et al. (2013) recommandent aussi d’arrêter les glucocorticoïdes injectables à longue durée
d’action (ex. acétate de méthylprednisolone) 28 jours avant la réalisation d’un ASIS.

Le choix des allergènes testés se fait en fonction de l’anamnèse et de l’examen clinique (Neuber
and Nuttall, 2017).

e. Interprétation
L’interprétation de ce test repose sur l’anamnèse et l’examen clinique.

Les tests allergologiques sérologiques ont une sensibilité variable en fonction des laboratoires. Dans
certains laboratoires, le seuil de positivité est bas, donnant des résultats non spécifiques mais très
sensibles.

Les différences entre laboratoires reposent sur :

- Le seuil de positivité choisi

- La source des allergènes
- La méthode de détection (RAST, ELISA)
- L’utilisation d’une phase solide ou liquide pour les tests
- Les anticorps de détection (monoclonaux, polyclonaux, oligoclonaux ou recombinant FcεRIα)

(Neuber and Nuttall, 2017)

L’étude de Baumann et al. en 2021 montre aussi un manque de reproductibilité entre les résultats
de tests sérologiques réalisés au sein d’un même laboratoire (Baumann et al., 2021).

Plusieurs études mettent en évidence un manque de corrélation entre les résultats des
dosages des IgE sériques spécifiques d’allergènes et les IDR (DeBoer and Hillier, 2001; Foster et
al., 2003).

Page 89
En effet, des résultats faux positifs sont possibles à cause de la présence d’IgE sériques spécifiques
des CCD (Cross reactive Carbohydrate Determinant) expliquant un défaut de corrélation entre les
résultats des intradermoréactions et des tests allergologiques sériques.

Les CCD sont définis comme des portions de carbohydrates des glycoprotéines des molécules
fréquentes de la surface cellulaire de nombreuses plantes et espèces d'insectes. Les mammifères
reconnaissent les CCD comme antigènes étrangers et peuvent développer une réponse immune
humorale.
Levy, Piccione et DeBoer montrent que des IgE anti-CCD ont été détectés chez 16,8 à 24% des
chiens atopiques testés et chez 13,1% des chiens sains testés. Ils concluent que ces IgE anti-CCD
pourraient affecter les résultats des tests sérologiques par des résultats faux positifs alors que les
CDD n’ont pas de conséquence clinique car ils sont aussi retrouvés chez des chiens sains (Levy
and DeBoer, 2018; Piccione and DeBoer, 2019).

Guedon en 2019 a montré que la concordance entre l’IDR et le dosage des IgE sériques spécifiques
d’allergènes était bonne chez les chiens négatifs aux IgE anti-CDD mais mauvaise chez les chiens
positifs. La concordance des tests était améliorée par le blocage des IgE anti-CDD. Ce résultat est
renforcé par l’étude de Lee et al. en 2020 qui montre que l’inhibition de la réactivité antigénique aux
CCD pourrait altérer de façon importante les résultats des profils de réactivité in vitro utilisés pour la
sélection des allergènes à inclure dans une immunothérapie. Guedon conclue que la
polysensibilisation apparente des tests sériques est associée aux IgE anti-CCD (Gedon et al., 2019;
Lee et al., 2020).

Ces résultats sont nuancés en 2021 par l’étude de Canning qui montre une corrélation inchangée
entre les dosage des IgE sériques spécifiques d’allergènes et les IDR après inhibition des IgE anti-
CCD (Canning et al., 2021).

Il existe quelques publications sur l’utilité des tests sérologiques pour les allergies
alimentaires. Une étude montre une faible sensibilité et une haute spécificité pour le test cutané
(IDR) et la sérologie (ELISA). Les valeurs prédictives positives et négatives pour les deux tests
n’étaient pas correctes. Les auteurs ont conclu qu’il n’est pas possible de remplacer le régime
d’éviction pour le diagnostic d’allergies alimentaires chez le chien (Hillier and DeBoer, 2001; Jeffers
et al., 1991).

f. Avantages
Bien que l'IDR soit considérée comme la méthode de diagnostic de référence pour les
dermatologues, le dosage des IgE sériques spécifiques d’allergènes présente plusieurs avantages
par rapport à l'IDR, tels que : une absence de risques pour le patient (pas de sédation nécessaire),
moins traumatique (une unique prise de sang nécessaire), plus facile et plus rapide à réaliser
(Hensel et al., 2015).

Ce test est moins sensible aux médicaments que les tests intradermiques (pas d’arrêt préconisé des
antihistaminiques, des corticoïdes par voie systémique et topique, …) (Wilkinson and Harvey, 1994).

g. Inconvénients
Ce test présente tout de même une sensibilité à certains médicaments (lokivetmab, ciclosporine)
(Canning et al., 2021).

Page 90
Il doit être utilisé uniquement pour le choix des allergènes lors d’une immunothérapie et non pour
diagnostiquer une dermatite atopique.

Le taux des IgE est fluctuant dans le sang et peut être bas en dehors de la saison allergique (test à
faire lors des poussées de prurit). Les résultats peuvent aussi être influencés par l’âge de l’animal
(DeBoer and Hillier, 2001).

Le dosage des IgE sériques spécifiques d’allergènes ne mesure que les IgE circulantes spécifiques
à l'allergène, ne prend pas en compte les autres voies allergiques et montre souvent des réactions
positives chez les chiens non allergiques (Hensel et al., 2015).

Les résultats ne sont pas disponibles immédiatement (Wilkinson and Harvey, 1994).

Page 91
Page 92
Deuxième partie : Création du support
pédagogique

1. Introduction
L'enseignement théorique de la dermatologie est dispensé au premier semestre de 4ème année à
l’ENVA. Il comprend 12 cours magistraux (21h), un cours de travaux pratiques (2h), deux cours de
travaux dirigés (4h) ainsi que deux cours de révision (2h). Les examens complémentaires sont
évoqués au cours des cours magistraux comme moyen diagnostique des différentes dermatoses
présentées et lors du TP qui enseigne leurs indications en fonction du type de lésions ou de
l’affection recherchée ainsi que la méthode d'observation au microscope et son interprétation.
Cette formation théorique est complétée par un enseignement pratique en 4ème, 5ème et 6ème année.
Les étudiants de 4ème année réalisent quatre demi-journées au sein du service de consultation de
dermatologie et les étudiants de 5ème et 6ème année réalisent une rotation d'une semaine au sein de
ce même service. Au cours de ces journées de clinique, les étudiants assistent aux consultations de
dermatologie, réalisent le recueil de l'anamnèse ainsi qu’un examen clinique général et
dermatologique et apprennent à réaliser les gestes techniques les plus courants pour les examens
complémentaires en dermatologie.
Les étudiants ont comme support pédagogique à leur disposition les diaporamas numériques
correspondant à l'ensemble des cours dispensés dans l’UC de dermatologie en 4ème année ainsi
que les thèses soutenues disponibles en ligne et un site internet expliquant la sémiologie
dermatologique appelé Smartsémio réalisé dans le cadre de la soutenance d'une thèse vétérinaire
par Alizée LARRONDO en 2021.

2. Conception du projet

A. Objectifs du projet
Les méthodes de réalisation des examens complémentaires dermatologiques ne sont que
brièvement abordées lors de l'enseignement théorique en 4ème année et, généralement, les
étudiants ne savent pas comment réaliser ces gestes techniques avant leurs journées de clinique.
Ce projet a donc pour but de compléter l'enseignement théorique en créant un support multimédia
permettant aux étudiants d’appréhender les techniques de réalisation des examens
complémentaires en dermatologie vétérinaire avant les semaines de pratique au sein du CHUVA.
Cet outil a aussi pour objectif de servir de moyen de révision rapide aux étudiants qui auraient besoin
d’aide pour réaliser ou interpréter un examen complémentaire au moment de leurs rotations
cliniques, lors de leurs gardes ou dans leur pratique future.

Page 93
 B. Choix des supports
Cet outil pédagogique sera utilisé en autonomie par les étudiants et ainsi un support multimédia
nous a semblé le plus adapté pour leur permettre un accès facile avec des informations explicites et
concises.
La vidéo associée à une description audio est rapidement apparue comme le support de choix afin
de présenter les techniques d’examens complémentaires. En effet, les vidéos permettent d’optimiser
l’apprentissage des gestes techniques comme le montrent de nombreuses études.

D’après Peraya (1993), l’audiovisuel garantit une meilleure mémorisation et facilite l’apprentissage
comme le rappelle l’expression « un bon schéma vaut mieux qu’un long discours ». (Peraya, 1993)
Plusieurs études comme celles de Hansen et al. (2011), Jang et Kim (2014) ou Prabhu et al. (2019)
confirment l'impact positif global des vidéos sur l'apprentissage des compétences cliniques par les
étudiants de médecine et sur leur assurance dans la réalisation de gestes techniques. Jang et Kim
recommandent aux professeurs d'intégrer ces ressources d'apprentissage dans leur enseignement
et d'utiliser des appareils mobiles pour un accès pratique afin d'aider les étudiants à utiliser plus
efficacement ces ressources. De plus, leur étude montre que les étudiants ont une perception
positive des vidéos et qu'ils les utilisent de diverses manières pour soutenir leur auto-apprentissage
des compétences cliniques (Hansen et al., 2011; Jang and Kim, 2014; Prabhu et al., 2019).

La bibliographie sur le sujet (Srinivasa et al., 2020) apporte des preuves solides de l’intérêt de la
mise à disposition de vidéos pour renforcer l’apprentissage de gestes techniques chez les étudiants
de profession médicotechnique, en améliorant la qualité du geste acquis et sa mémorisation sur le
long terme.

L’étude de Allavena et al. (2017) montre que les outils audio-visuels ont aussi leur utilité dans
l’enseignement chez les étudiants vétérinaires en améliorant leurs compétences techniques.
Les étudiants vétérinaires ont généralement une opinion positive des vidéos pour leur facilité
d'utilisation, leur accessibilité, en particulier pour un usage domestique et pour l’apprentissage en
autonomie, et la possibilité de faire des pauses et de revenir en arrière permettant aux élèves de
visualiser le matériel à leur propre rythme et de répéter les points difficiles (Allavena et al., 2017).
De plus, d’après Mayer (2008), les supports multimédias permettent notamment de stimuler la
mémoire à long-terme. Une autre étude montre qu’un support associant différents médias comme
du texte, des vidéos et de l’audio, augmente significativement les performances chirurgicales
(Mayer, 2008; Pape-Koehler et al., 2013).
Dans cette approche multimédia, nous avons décidé d’accompagner les vidéos de fiches techniques
plus complètes afin d’apporter un support papier à cet enseignement et d’approfondir le contenu des
vidéos.

Page 94
 3. Réalisation d'un outil pédagogique

A. Réalisation des vidéos

a. Contenu
L’objectif des vidéos est de faire la démonstration des gestes techniques des examens
complémentaires tels qu’ils sont enseignés à l’ENVA.
Dans un souci de clarté et d’efficacité, le contenu des vidéos a été restreint à la réalisation du geste
technique uniquement laissant la description du matériel nécessaire ou de l’interprétation de chaque
examen aux fiches techniques accompagnant les vidéos.
Pour la même raison, nous avons limité de nombres de variantes de chaque geste technique
présenté dans les vidéos. En effet, en fonction du type de lésion ou des affections recherchées, la
technique de prélèvement de certains examens varie. Mais présenter toutes ces variantes aurait
conduit à des vidéos trop longues et moins compréhensibles pour le spectateur. Nous avons fait le
choix de présenter les techniques préférées au CHUVA car cela permet aux étudiants de se focaliser
sur des gestes qu’ils auront l’occasion d’appliquer par la suite lors de leurs rotations cliniques et
évite la confusion entre plusieurs méthodes.
Ces variantes sont, cependant, décrites dans les fiches techniques accompagnant les vidéos.
Par ailleurs, des vidéos illustrent une technique de prélèvement pouvant être utilisée pour plusieurs
examens complémentaires de natures différentes. Par exemple, le prélèvement avec de la
cellophane adhésive est présenté dans une unique vidéo pour la recherche de parasite et pour la
réalisation d’un examen cytologique car le geste technique de prélèvement est identique.
Parmi les examens complémentaires présentés dans la partie bibliographique de cette thèse seul le
dosage des IgE spécifiques d’allergène n’a pas été présenté par une vidéo. En effet, cet examen ne
nécessite pas de geste technique spécifique à la dermatologie pour être réalisé.

b. Matériel et tournage des séquences vidéo

Les vidéos ont été réalisées au sein du service de consultation de dermatologie du CHUVA.
Pour la réalisation des vidéos, il était nécessaire que l’opérateur soit familier des gestes effectués
afin qu’ils soient sûrs et correctement réalisés. Les gestes doivent être complètement
compréhensibles par les personnes qui regarderont les vidéos. Ainsi, les gestes techniques filmés
ont été réalisés soit par les cliniciens du service de dermatologie en priorité soit par des internes ou
des étudiants de cinquième ou sixième année préalablement formés pour les gestes simples (par
exemple les colorations).
La contention des animaux était réalisée par des étudiants ou les propriétaires des animaux.
Pour des raisons de droit à l’image, aucune personne n’est identifiable sur les vidéos. Une
autorisation orale a été demandée à tous les propriétaires avant de filmer.
Pour des raisons éthiques, les prélèvements filmés n’ont pas été réalisés dans le seul but de cette
thèse mais étaient nécessaires à des fins médicales. Le temps consacré à l’enregistrement des
vidéos a donc été long car il fallait que l’affection des animaux implique la réalisation des
prélèvements souhaités, être disponible au moment où les prélèvements allaient être réalisés, et
cela sans empiéter sur le temps nécessaire aux consultations.

Page 95
Les films ont été réalisés avec la fonction vidéo d’un téléphone Samsung® A52 5G.
En raison du contexte de tournage, il n’était pas possible de filmer plusieurs fois un examen sur un
même animal si les plans n’étaient pas corrects à la première prise. J’ai donc, si possible, filmé
plusieurs fois chaque examen complémentaire sur différents animaux afin de pouvoir sélectionner
les meilleurs plans possibles et pour que les vidéos soient les plus représentatives de la technique
démontrée.

c. Montage
Le montage vidéo consiste en la sélection de séquences vidéo, leur découpage et leur assemblage
associé à des textes et/ou des sons dans le but de créer une vidéo dynamique avec une suite logique
suscitant l’intérêt du public et permettant la compréhension du sujet qu’elle présente.
N’ayant que peu de notions dans le montage vidéo, je me suis concentrée sur la création de vidéos
simples et agréables à regarder sans surcharge d’information. J’ai donc utilisé pour le montage le
logiciel Clipchamp®. Cette application est facile d’utilisation et permet la création de vidéos courtes
avec des fonctions de découpage, d’assemblage de séquences vidéo et d’ajout de sons ou de sous-
titre.
Grâce à ce programme j’ai pu découper des portions des vidéos originelles, que j’ai mis bout à bout
pour créer une suite logique. Ainsi, les séquences ne présentant pas une qualité adéquate ont été
découpées ou éliminées : séquence sans intérêt, mal cadrée, floue, avec une luminosité insuffisante.
J’ai été contrainte de mélanger des séquences de plusieurs vidéos afin de pouvoir présenter les
techniques le plus clairement possible et avec les images les plus représentatives.
Des séquences ont aussi été ralenties ou accélérées pour respectivement permettre une meilleure
compréhension des gestes techniques et éviter des longueurs non nécessaires.
Afin d’avoir un cadrage optimal des gestes techniques, des zooms sur certaines séquences ont été
réalisés à l’aide du logiciel VLC Media Player®. Cependant, un zoom trop grand entraînait une perte
de qualité visuelle importante. Des compromis ont donc dû être réalisés entre le cadrage et la qualité
de l’image vidéo.
J’ai également supprimé l’audio des séquences vidéo enregistrées en consultation pour pouvoir
enregistrer ma voix dans un lieu calme et l’ajouter au montage par la suite.
Chaque vidéo débute par un écran titre présentant la technique présentée et le logo de l’ENVA.
Puis, les gestes techniques sont montrés et un écran de fin conclut la vidéo. L’écran titre et l’écran
de fin ont été créés avec le logiciel Microsoft PowerPoint®.

d. Enregistrement audio
Une voix-off a été enregistrée après le montage des vidéos. L’enregistrement de la voix a été réalisé
à l’aide de l’application Enregistreur vocal de mon smartphone Samsung® A52. Les séquences
d’enregistrement audio ont ensuite été intégrées aux vidéos correspondantes à l’aide du logiciel de
montage précédemment utilisé, puis la durée des vidéos a été ajustée pour correspondre au mieux
avec la voix.
J’ai aussi ajouté des sous-titres s’affichant en bas de la vidéo et ayant pour but de reprendre les
propos énoncés par la voix-off pour permettre à un étudiant qui ne disposerait pas du son de la vidéo
d’avoir accès aux commentaires.

Page 96
 B. Réalisation des fiches

a. Contenu
Une fiche technique par vidéo a été créée. Chaque fiche est constituée de quatre parties décrivant :
- Les objectifs de la technique.
Par exemple, pour le test à la cellophane adhésive : Recherche d’ectoparasites superficiels
(puces, poux, Cheyletiella et Otodectes) et examen cytologique pour la mise en évidence de
cellules et de micro-organismes (levures, bactéries).

- Le principe de la technique.
Par exemple, pour la lampe de Wood : Lampe émettant une lumière UV filtrée au travers de
cobalt ou de nickel à une longueur d’onde de 365 nm. Apparition d’une fluorescence vert pomme
en présence de Microsporum canis (métabolites de tryptophane produits par le champignon)
dans les poils en croissance.

- Le matériel nécessaire à la technique.

- Une description précise de la technique présentée dans la vidéo et des variantes de cette
dernière en fonction des types de lésions ou des agents pathogènes recherchés. Si la technique
demande l’utilisation d’un microscope, les réglages ainsi que la méthode d’observation sont
rappelés.

- Des indications sur la façon d’interpréter les résultats en fonction de la sensibilité et de la

spécificité de l’examen et quelles observations sont considérés comme positives ou
pathologiques. Enfin les avantages et les limites de la technique sont rappelés.

Le contenu des fiches techniques est le résultat d’une synthèse des informations bibliographiques
données dans la première partie de cette thèse adaptée aux pratiques en vigueur au sein du service
de dermatologie du CHUVA.

b. Format
Les fiches techniques font chacune 2 à 5 pages pour les techniques les plus complexes, soit 1 à 3
pages recto-verso. Je n’ai pas voulu dépasser ce format là pour obtenir des fiches concises et
efficaces dans les informations qu’elles apportent. Les fiches ont été réalisées avec comme objectif
leur lisibilité et leur clarté. Ainsi, différentes tailles et couleurs de police ont été utilisées pour mettre
en valeur les différentes parties et les éléments importants.
Sur chaque fiche, une photo décrivant le matériel nécessaire a été ajoutée. Des encadrés soulignent
des conseils d’amélioration pour les gestes techniques.
Les différentes fiches techniques sont disponibles en annexe.

C. Intégration à EVE
Une fois les vidéos réalisées et approuvées, elles ont été exportées du logiciel de montage en format
MP4 afin de pouvoir être intégrées à EVE et être lues sans téléchargement.

Page 97
La page correspondant à la thèse a été créée sur la plateforme EVE dans la section : « Formation
Initiale » > « Thèse d’exercice vétérinaire » > « Thèses multimédia » > « 2022 – ZANIN Célia –
Etude des examens complémentaires en dermatologie canine et féline dans l’objectif de créer un
support pédagogique multimédia sur leur réalisation technique ». Le lien internet est disponible en
Annexe 1.
Un texte explicatif sur les objectifs de cette page informe tout d’abord l’utilisateur. Puis les vidéos et
les fiches techniques correspondantes sont accessibles. Enfin, le manuscrit de cette thèse est
disponible à la fin de cette page EVE. Un lien internet sera inséré sur les pages EVE dédiées à
l’enseignement de la dermatologie pour permettre d’accéder directement au support multimédia.

4. Discussion

A. Qualité et utilité du travail produit

Au total, 14 vidéos ont été réalisées pour une durée vidéo totale de 15 minutes 14 secondes. Le
temps moyen d’une vidéo est de 1 minute 14 secondes.
Les différentes vidéos décrivent les gestes technique du brossage, de l’examen à la lampe de Wood,
de l’épilation pour la réalisation d’une trichoscopie, de l’otoscopie, de l’écouvillon auriculaire pour la
réalisation d’un examen cytologique, du curetage auriculaire pour la recherche de parasites, du test
à la cellophane adhésive, du raclage cutané, du calque par impression, de la cytoponction à l’aiguille
fine, des biopsies, de l’écouvillon pour la réalisation du culture bactérienne, du prélèvement fongique
avec une moquette et de l’intradermoréaction.

Les vidéos réalisées sont volontairement courtes, simples et agréables à regarder permettant une
bonne transmission des gestes enseignés de manière concise. L’apport du support multimédia est
complémentaire à l’apprentissage par la pratique au CHUVA. Cette thèse permet ainsi à l’étudiant
de pouvoir réaliser certains gestes, sans forcément les avoir déjà vus réalisés par un clinicien avant.
Par ailleurs, il permet d’uniformiser l’apprentissage de ces gestes afin que tous le pratiquent de façon
conforme.
De plus, les examens complémentaires réalisés par les étudiants en clinique sont très dépendants
des motifs de consultations et de la clinique des animaux présentés au CHUVA. Ainsi, à cause de
ces aléas, les étudiants n’ont pas toujours l’occasion de réaliser ou même de voir tous les examens
complémentaires lors de leurs semaines de clinique.

L’intérêt du support dématérialisé est qu’il permet un apprentissage à tout moment avec des vidéos
rendues facilement accessibles aux étudiants par leur smartphone ou ordinateur via leur compte
Eve.
D’autre part, la facilité d’accès de cet outil pédagogique permet de se remémorer certains gestes
techniques et de visualiser les vidéos quand ils en ont besoin lors des consultations.

Page 98
 B. Limites
Malgré la bonne résolution de l’objectif du téléphone utilisé pour filmer les vidéos, celles-ci ont été
tournées avec du matériel amateur et leur qualité est donc limitée en comparaison à ce qui aurait
pu être réalisé avec du matériel professionnel.
De plus, lors du tournage des gestes techniques au cours des consultations, du fait de la présence
des propriétaires j’ai essayé d’être la plus discrète possible et d’empiéter le moins possible sur le
temps de la consultation et donc le nombre de prises possibles s’en est retrouvé restreint.
Le rendu final des vidéos semble néanmoins satisfaisant pour permettre une compréhension
correcte du contenu des vidéos et l’apprentissage.
Comme expliqué précédemment, dans un souci de réaliser des vidéos courtes et explicites, nous
avons fait le choix délibéré de ne pas présenter dans celles-ci toutes les modalités de réalisation
possibles de chaque examen complémentaire. Bien que ces variantes soient décrites dans les fiches
explicatives, les étudiants ne disposeront pas de support visuel pour en avoir une bonne
représentation. Ceci pourrait être l’objet d’un travail complémentaire à cette thèse avec le tournage
de vidéos supplémentaires les présentant.

C. Perspectives d'évolution
Des retours après une utilisation de cet outil multimédia sur une plus longue durée au moyen d’une
étude auprès des étudiants et des enseignants permettraient de mieux objectiver la qualité des
vidéos et leur intérêt pédagogique.
Il serait aussi intéressant d’étudier l’impact des vidéos sur l’apprentissage des gestes techniques
par les étudiants à l’aide d’un test d’auto-évaluation disponible sur la page du site EVE à la suite des
vidéos.

Page 99
Page 100
Conclusion
La réalisation d’examens complémentaires est une étape essentielle dans la démarche diagnostique
dermatologique. Ainsi, la maitrise des gestes techniques permettant de réaliser ces examens est
une compétence clinique indispensable pour permettre une prise en charge adéquate d’une affection
dermatologique.

Afin d’aider les étudiants dans l’apprentissage de ces gestes techniques, nous avons élaboré un
support pédagogique multimédia constitué de vidéos avec commentaires audios et des fiches
techniques explicatives associées. Un travail bibliographique a été préalablement effectué afin de
recenser les bonnes pratiques de réalisation des examens complémentaires couramment réalisés
en dermatologie vétérinaire. Les vidéos ont été filmées au sein du CHUVA avec l’aide des cliniciens
du service de dermatologie et des étudiants présents.

L’outil pédagogique comporte 14 vidéos et fiches explicatives décrivant les gestes techniques en
fonction des pratiques en vigueur au CHUVA et de la synthèse des recherches bibliographiques
réalisées en amont. Cet outil se veut facile d’accès et attrayant avec des vidéos de courte durée
expliquant de manière efficace les méthodes de réalisation des examens complémentaires à l’aide
de commentaires audio sous-titrés. Les fiches donnent des explications détaillées des gestes
techniques ainsi que de leurs variantes et apportent des informations supplémentaires aux vidéos
sur l’objectif de l’examen, le principe de la technique, le matériel nécessaire et l’interprétation des
résultats des différents examens. Si l’étudiant souhaite un supplément d’information, il pourra se
reporter à la première partie de ce manuscrit qui offre davantage de détails.

L’objectif pédagogique de ce projet ne sera rempli que lorsque la page du site EVE hébergeant les
vidéos sera ouverte aux étudiants et accessible depuis les pages dédiées à l’enseignement de
dermatologie.

Page 101
Page 102
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Annexe 1 : Lien vers la page EVE
hébergeant les vidéos
[Link]

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Annexe 2 : Fiche brossage

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Annexe 3 : Examen à la lampe de Wood

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Annexe 4 : Épilation et Trichoscopie

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Annexe 5 : Raclage cutané

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Annexe 6 : Test à la cellophane adhésive

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Annexe 7 : Calque cutané

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Annexe 8 : Cytoponction à l’aiguille fine

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Annexe 9 : Otoscopie

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Page 131
Page 132
Annexe 10 : Écouvillon auriculaire

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Page 134
Page 135
Annexe 11 : Curetage auriculaire

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Page 137
Annexe 12 : Biopsies

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Page 141
Page 142
Annexe 13 : Prélèvement pour une culture
fongique

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Page 144
Page 145
Annexe 14 : Prélèvement pour une culture
bactériologique

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Page 147
Page 148
Annexe 15 : Intradermoréaction

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Page 151
Page 152
ÉTUDE DES EXAMENS COMPLÉMENTAIRES EN DERMATOLOGIE
CANINE ET FÉLINE DANS L’OBJECTIF DE CRÉER UN SUPPORT
PÉDAGOGIQUE MULTIMÉDIA SUR LEUR RÉALISATION TECHNIQUE

AUTEUR : Célia ZANIN

RÉSUMÉ :
Les consultations de dermatologie constituent une part non négligeable de la pratique
vétérinaire canine. La maîtrise de certains gestes techniques pour la réalisation d’examens
complémentaires est indispensable pour une exploration correcte des affections
dermatologiques. Pourtant, lors de l’enseignement théorique de la dermatologie à l’ENVA, les
examens complémentaires dermatologiques sont peu abordés.

Cette thèse a pour objectif la création d’un support pédagogique multimédia complémentaire
aux enseignements théoriques sur les techniques de réalisation des examens
complémentaires en dermatologie canine et féline. Ce support est destiné aux étudiants
vétérinaires afin de les aider à mieux appréhender ces gestes techniques avant leurs rotations
cliniques et pour leur servir de moyen de révision lors de leur pratique future. Un format vidéo
associé à des fiches explicatives a été choisi afin d’optimiser l’apprentissage grâce à un
support visuel et audio synthétique et attrayant. Les vidéos à l’aide de commentaires audio
sous-titrés présentent comment chaque geste technique doit être réalisé selon les pratiques
enseignées à l’ENVA. Les fiches accompagnant chaque vidéo décrivent avec plus de précision
la technique présentée et ses variantes selon le type de lésion présent ou la pathologie
suspectée.

Cet outil multimédia est disponible sur une page du site internet de l’Enseignement et de la
Vie Étudiante de l’ENVA accessible à tous les étudiants.

MOTS CLÉS :
DERMATOLOGIE, EXAMEN COMPLEMENTAIRE, TECHNIQUE, MULTIMEDIA, CHIEN,
CHAT

JURY :
Présidente : Pr Sabine CHAHORY
Directrice de thèse : Dr Noëlle COCHET-FAIVRE
Examinateur : Dr Bruno POLACK
STUDY OF COMPLEMENTARY EXAMINATIONS IN CANINE AND
FELINE DERMATOLOGY WITH THE OBJECTIVE OF CREATING
MULTIMEDIA EDUCATIONAL SUPPORT ON THEIR TECHNICAL
REALIZATION

AUTHOR: Célia ZANIN

SUMMARY:
Dermatology consultations represent a significant part of canine veterinary practice. The
mastery of certain technical gestures for carrying out complementary examinations is
indispensable for a correct exploration of dermatological affections. However, during the
theoretical instruction of dermatology at ENVA, complementary dermatological examinations
are rarely discussed.

The aim of this thesis is to create a multimedia educational support about the techniques of
complementary examinations in canine and feline dermatology in addition of the theoretical
lessons. This support is intended for veterinary students in order to help them better
understand these technical gestures before their clinical rotations and to serve as a means of
revision during their future practice. A video format associated with explanatory sheets was
chosen in order to optimize learning through a synthetic and attractive visual and audio
support. The videos with the help of subtitled audio commentaries present how each technical
gesture must be performed according to the practices taught at ENVA. The sheets
accompanying each video describe more precisely the technique presented and its variants
depending on the type of lesion present or the suspected pathology.

This multimedia tool is available on a page of the ENVA teaching website accessible to all
students.

KEYWORDS:
DERMATOLOGY, COMPLEMENTARY EXAM, TECHNIQUE, MULTIMEDIA, DOG, CAT

JURY:
Chairperson: Pr Sabine CHAHORY
Thesis Director: Dr Noëlle COCHET-FAIVRE
Reviewer: Dr Bruno POLACK