Le spectrophotomètre.
I. Description de l'appareil.
Quel que soit le spectrophotomètre utilisé, le principe de fonctionnement est le même. La lumière blanche
émise par la source est décomposée par un prisme ou un réseau. Une fente permet de sélectionner une gamme
très étroite de longueurs d'onde. La lumière sélectionnée traverse une cuve dans laquelle est placée la solution à
analyser (échantillon). Un détecteur permet de mesurer l'intensité lumineuse à la sortie de la cuve.
Un spectrophotomètre comporte :
• un monochromateur composé d'un réseau et
d'une fente qui permet de n'envoyer vers
l'échantillon qu'un intervalle de longueurs
d'onde très étroit ∆λ, (de l'ordre du nanomètre)
autour d'une longueur d'onde λ. On peut faire
varier la longueur d'onde λ. dans des domaines
déterminés;
• un miroir qui permet d'envoyer le faisceau
incident sur l'échantillon ;
• un détecteur qui mesure l'intensité lumineuse transmise par l'échantillon.
II. Précautions d'utilisation.
Pour que la diminution de l'intensité lumineuse ne provienne que de l'espèce colorée à étudier, il faut éliminer
toutes les autres causes d'absorption : réflexion sur les parois de la cuve, absorption de la cuve, du solvant, des
autres espèces contenues dans la solution...
En vue de s'affranchir de tous ces paramètres, on réalise une opération appelée réglage du zéro.
Elle est effectuée avec une cuve contenant le solvant et les espèces autres que celle à étudier ; cette solution
s'appelle un « blanc ». Cette cuve est placée dans l'appareil et une touche permet de régler la valeur de 1'
absorbance à zéro et d'afficher zéro sur le spectrophotomètre.
Ce réglage doit être effectué chaque fois que la longueur d'onde de la lumière sélectionnée change.
III. Titrage à l'aide d'un spectrophotomètre.
Le spectrophotomètre peut être utilisé pour titrer une solution colorée. Cette méthode de titrage est non
destructive ; elle nécessite un étalonnage et un réglage de zéro.
1. Mode opératoire.
a. Recherche du maximum d'absorption.
On cherche à déterminer la longueur d'onde λmax pour laquelle on obtient un
maximum d'absorption. Pour cela, il faut tracer le spectre d'absorption de la
solution contenant le soluté à titrer, c'est-à-dire la représentation graphique A =f
(λ).C’est cette longueur d’onde que l'on choisit pour réaliser le titrage.
b. Courbe d'étalonnage.
Il faut préparer une série de solutions (contenant le soluté à titrer), de
concentrations différentes, se placer à la longueur d'onde λmax, faire le zéro,
puis mesurer 1'absorbance de chaque solution. On trace alors la représenta-
tion graphique A = f(c).
Si la loi de Beer-Lambert est bien respectée, on obtient une droite passant par l’origine.
c. Concentration de la solution à titrer.
Pour effectuer le titrage d'une solution inconnue S, on place la cuve contenant la solution à titrer dans le
spectrophotomètre et on relève la valeur de l' absorbance As.
À l'aide de la courbe d'étalonnage, on peut déterminer la concentration cs de la solution.
2. Application à la cinétique chimique.
Le spectrophotomètre peut être également utilisé pour suivre la cinétique de certaines réactions lentes. Il faut
pour cela que la réaction fasse intervenir un réactif ou un produit coloré en solution.
Il faut réaliser plusieurs opérations successives :
• trouver la longueur d'onde λmax correspondant au maximum d'absorption du réactif ou du produit dont
on suit l'évolution
• se placer à la valeur λmax faire l'étalonnage et tracer la droite A = k×c
• placer le mélange réactionnel dans une cuve et relever les valeurs de l'absorbance en fonction du
temps
• utiliser la droite A = k×c pour déterminer les valeurs des concentrations en fonction du temps.
• déduire de la concentration, la valeur de l'avancement x de la réaction en fonction du temps.
• tracer la représentation graphique x = f (t).
L'ordinateur permet de faire rapidement les calculs et de tracer directement la courbe x = f (t)
