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Date: 27/03/2012 Page: 20/ 22 Introduction Aux Techniques de Luminescence Et Label-Free

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Date : 27/03/2012

Page : 20/ 22
Introduction aux techniques de luminescence et
label-free

Eu#K d2 FL Lumi4#Tb d2
Em. Abs. Abs. Em. Abs.
Intensité

Intensité
500 550 600 650 700 500 550 600 650 700
Longueur d’onde (nm) Longueur d’onde (nm)

Figure 34. Intégrale de recouvrement des couples utilisés en TR-FRET. La surface de


recouvrement est représentée en hachuré. Eu-K : cryptate d’europium ; FL : fluoresceine ; Lumi4-Tb :
cryptate de terbium. Les spectres d’émission des donneurs sont représentés en traits pleins et les
spectres d’absorption des accepteurs en pointillés.

b) LA SELECTIVITE TEMPORELLE

Lors d’un transfert d’énergie entre un donneur possédant une durée de vie de
fluorescence longue (cryptates de terres rares) et un accepteur fluorescent avec une
durée de vie courte (d2, fluoresceine, etc.), ce dernier émettra un signal de
fluorescence présentant une durée de vie apparente similaire à celle du donneur.
Ainsi, l’utilisation des cryptates de terres rares permet de mesurer l’émission de
fluorescence de l’accepteur en temps résolu (intégration du signal généralement
après un délai de 50 µs pendant 400 µs). Cette propriété permet ainsi de distinguer
la fluorescence de l’accepteur engagé dans un FRET (durée de vie longue), des
fluorescences parasites émises par les molécules présentes dans les milieux
biologiques et dont la durée de vie de fluorescence est de l’ordre de la nanoseconde
(Figure 35).

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