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Date: 27/03/2012 Page: 17/ 22 Introduction Aux Techniques de Luminescence Et Label-Free

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Date : 27/03/2012

Page : 17/ 22
Introduction aux techniques de luminescence et
label-free

Fluorophores classiques((ns)
Cryptates de(terres(rares((µs(– ms)

Intensité(du(signal
0 ms
Durée(de(vie(de(fluorescence

Figure 31. Les durées de vie des fluorophores.

2) LES DONNEURS D’ENERGIE

Les principaux fluorophores donneurs utilisés en TR-FRET sont les cryptates de


terre rare et les chélates de terre rare. Cependant, dans les milieux biologiques, le
complexe formé par le chélate et le lanthanide peut être dissocié en raison d’une
faible stabilité de l’interaction (compétition entre l’ion lanthanide et les ions Mn2+,
Mg2+, Ca2+ ou chélation du lanthanide par de l’EDTA), ce qui peut constituer un
inconvénient majeur. Dans le cas des cryptates de terre rare l’inclusion de l’europium
et du terbium dans une cage tridimensionnelle empêche ces phénomènes de
dissociation conférant au complexe une très haute stabilité.

3) LES ACCEPTEURS D’ENERGIE

Le cryptate d’europium peut être utilisé avec des fluorophores accepteurs d'énergie
émettant dans le rouge comme le d2, DY647, le Cy5 ou l’Alexa647 (voir annexe I) 14.
Le spectre d’émission du cryptate de terbium étant plus étalé que celui du cryptate
d’europium, il peut être utilisé soit avec des accepteurs émettant dans le rouge (d2)
soit émettant dans le vert comme la fluoresceine et les protéines fluorescentes GFP
(Figure 30, 30-32).

14
Le d2 est commercialisé par la société CisBio et l’AlexaFluor647 par Invitrogen.

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