Hématologie biologique (Pr Marc Zandecki) Faculté de Médecine – CHU 49000 Angers France

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Coloration de Perls

1. Technique et interprétation générale

Met en évidence les complexes insolubles contenant du fer: hémosidérine, granules de
Pappenheimer, mitochondries surchargées en fer. La ferritine et l’hémoglobine ne sont pas
révélés par cette méthode
La technique : voir en fin de chapitre

2. Résultats et interprétation
Le fer insoluble apparaît en bleu-vert (ferrocyanure ferrique).
Faible grossissement (X10) : pour apprécier le fer des « réserves », dans les macrophages
(grumeaux de moelle, régions bien étalées des frottis)
Fort grossissement (X63 ou X100) : pour apprécier le fer dans les érythroblastes (et dans les
hématies éventuellement)

Fer des réserves ou fer macrophagique

Une semi quantification est possible avec un peu d’expérience, mais en pratique il faut savoir
avant tout séparer :
- fer des réserves absent ou à l’état de traces
- fer des réserves en quantité normale ou augmentée

Quelques exemples :

Grumeaux de moelle sur frottis coloré au Grumeau de moelle au faible X : absence de

MGG (en bas) et Perls (en haut) fer ( = pas de coloration verte)

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Grumeau de moelle au grossissement Grumeau de moelle au grossissement moyen :

intermédiaire : absence de fer (= pas de fer en quantité normale
coloration verte)

Grumeau de moelle au faible grossissement: Grumeau de moelle au grossissement

fer en quantité normale intermédiaire : fer en quantité augmentée

Grumeau de moelle au grossissement Grumeau de moelle au grossissement moyen :

moyen : fer en quantité augmentée fer en quantité augmentée ; la coloration verte
dessine plus ou moins les histiocytes

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Grumeau de moelle au grossissement moyen : fer en quantité très augmentée

Grumeau de moelle au grossissement Même image au plus fort grossissement : les

moyen : fer en quantité très augmentée ; les histiocytes sont très surchargés en fer
histiocytes sont très riches en fer (coloration verte intense qui remplit la totalité
du cytoplasme)
(voir également en fin de document : « quelques images complémentaires »

Remarque: il faut impérativement voir les macrophages (fort grossissement) ou les deviner au
sein des grumeaux de moelle, et dans les situations de doute (= frottis partiellement dilués) on
signalera que «l’appréciation de la richesse en fer macrophagique est impossible »

Fer des érythroblastes

Sidéroblaste = érythroblaste dont le cytoplasme contient un ou plusieurs grains bleu-vert

Sidéroblaste « en couronne » ou « en anneau » (ring cell pour les anglo-saxons) = présence
de granules de fer collées autour du noyau et sur au moins 1/3 du pourtour
Pour le décompte : on regarde chaque érythroblaste (un peu plus difficile de repérer les
érythroblastes immatures que les matures), et on compte le nombre de grains bleu-vert ; on
dénombre 100 érythroblastes comme suit :

Valeurs normales
Erythroblastes sans grain 60 – 90 %
Erythroblastes (sidéroblastes) avec 1-3 grains* (sidéroblaste type I) 10 – 40 %
Erythroblastes (sidéroblastes) avec > 3 grains* (sidéroblaste type II) 0
Erythroblastes (sidéroblastes) en couronne 0

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* Pour certains auteurs le seuil est de 5 grains et non de trois (l’interprétation générale est par
ailleurs identique), et le % d’érythroblastes avec 1-3 grains et de 10-30% ou de 10-50%
On mentionne la présence de sidérocytes quand on les observe.

Coloration de Perls :quelques exemples d’érythroblastes et de sidéroblastes

Erythroblaste sans granule Erythroblaste sans Erythroblaste sans granule 2 érythroblastes sans
de fer granule de fer de fer granule de fer

3 érythroblastes sans Erythroblaste avec 1 Erythroblaste avec 1 Erythroblaste avec 2

granule de fer granule de fer granule de fer (sidéroblaste granules de fer
(sidéroblaste type I) type I) (sidéroblaste type I)

Erythroblaste avec plus de Erythroblaste avec plus Erythroblaste avec plus de Erythroblaste avec
3 granules de fer de 3 granules de fer 3 granules de fer nombreux granules de
(sidéroblaste type II) (sidéroblaste type II) (sidéroblaste type II) fer qui s’organisent +/-
près du noyau
(sidéroblaste type II)

Erythroblaste avec Erythroblaste avec Sidéroblaste « en Sidéroblaste « en

nombreux granules de fer nombreux granules de fer couronne » couronne »
qui s’organisent +/- près qui s’organisent +/- près
du noyau (sidéroblaste du noyau (sidéroblaste
type II) type II presque en
couronne)

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Sidéroblaste « en Sidéroblaste « en Sidéroblaste « en Sidéroblaste « en

couronne » couronne » couronne » couronne »

Sidéroblaste « en Sidérocyte (hématie Sidérocyte (hématie

couronne » contenant des grains de contenant des grains de
fer) fer)

Interprétation générale des résultats

Problèmes de lecture:
- Les précipités de colorant ne doivent pas être interprétés comme du fer macrophagique
(formes polyédriques et non arrondies)
- Les érythroblastes sans grains sont plus difficiles à repérer, surtout les plus immatures
- Les lymphocytes ne doivent pas être confondus avec les érythroblastes matures
- Le sidéroblaste en « couronne » n’est pas toujours aisé à définir, surtout qu’il y a souvent
association à un excès de sidéroblastes à plus de 3 grains.
- A l’état normal, le nombre de sidérocytes est très faible dans la moelle et ils sont absents du
sang.

Anémies inflammatoires (anémies des maladies chroniques ; voir document correspondant) et

tous les états inflammatoires chroniques: fer macrophagique normal ou augmenté, et peu ou
pas de sidéroblastes (souvent 0%)

Anémie par carence martiale: absence de fer dans les macrophages et dans les érythroblastes

Anémies sidéroblastiques primitives ou secondaires (voir les documents se rapportant aux

syndromes myélodysplasiques et aux anémies sidéroblstiques): présence d’un nombre
variable de sidéroblastes en couronne (au moins 15% pour évoquer une Anémie Réfractaire
Sidéroblastique Idiopathique ou ARSI)

Anémies en pathologie générale: toutes les dysérythropoïèses (sauf la carence martiale)

peuvent s’accompagner d’une petite augmentation du nombre de sidéroblastes avec > 3
grains, sans apparition de couronnes
De nombreux médicaments entraînent une dysérythropoïèse (pas uniquement les
chimiothérapies) avec excès de sidéroblastes > 3 grains
Le fer macrophagique est augmenté dans les thalassémies, toutes les grandes
dysérythropoïèses, les syndromes myélodysplasiques…(en général en parallèle de la
ferritinémie)

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Quelques images complémentaires :

Histiocyte de la moelle d’un patient en rémission Même patient que précédemment (MGG)
d’une LAM (MGG)

Coloration de Perls montrant une surcharge en fer Coloration de Perls montrant une surcharge en fer
majeure (même patient que précédemment) majeure (même patient que précédemment)

Ilot érythroblastique (MGG) Ilot érythroblastique (Perls ; même patient)

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Lors de l’aspiration puis de l’étalement de la moelle, Des fragments d’histiocytes peuvent rester adhérents
les îlots érythroblastiques sont souvent rompus, mais aux érythroblastes (MGG), après rupture des îlots
des fragments d’histiocytes peuvent rester adhérents érythroblastiques
aux érythroblastes (MGG)

Dans les grands états inflammatoires ou les surcharges Ces fragments cytoplasmiques ne doivent pas être
en fer, la coloration de Perls visualise ces fragments confondus avec du fer intra érythroblastique
cytoplasmiques

Histiocyte au cours d’une ARSI (MGG) Histiocyte après coloration de Perls (même patient que
précédemment) : surcharge ferrique nette

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Histiocyte au cours d’une ARSI : MGG Histiocyte surchargé en fer (même patiente que l’image
précédente)

Histiocyte « inflammatoire » au cours d’un myélome Après coloration de Perls la surcharge en fer est
multiple (MGG) manifeste (même patient que précédemment)

3. Aspects techniques
- Frottis de sang ou de moelle séchés à l’air [des étalements vieux de plusieurs années
conservés à température ordinaire (ou congelés) sont utilisables. On peut également « laver »
des frottis de moelle colorés au MGG (placer les lames dans une fiole remplie d’eau du
robinet, et laisser couler un fin filet d’eau le temps de la décoloration complète, soit une à 24
heures: les lames sont utilisables telles que, car déjà fixées par le méthanol du MGG)
- Fixer 10 minutes avec du méthanol absolu, puis sécher à l’air sans rincer.
- Recouvrir les lames ou les immerger dans un mélange préparé extemporanément:
HCl 1N = 10ml, eau distillée = 40 ml, solution de ferrocyanure de potassium à 2% = 50 ml.
Incuber le flacon avec couvercle posé, non fermé, 20 minutes à 37°C
- Rincer à l’eau courante puis sécher à l’air
- On peut contre-colorer les noyaux avec de l’éosine diluée ou de l’hématoxyline (quelques
minutes maximum), ou 20 minutes avec une solution de nuclear fast red (sulfate d’alumine =
5g, eau distillée = 100 ml ; après dissolution ajouter 0.2 g de nuclear fast red)
Rincer à l’eau distillée et sécher à l’air. La coloration résiste à l’huile à immersion et aux
solvants des résines de montage

NB: toujours mettre dans le bain de coloration une lame témoin « positive »
(M Zandecki, juin 2005)

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