Filière Ingénieur :
Industries Agro -Alimentaires
Procédés de séparation
TP N°1
CHROMATGRAPHIE SUR COUCHE
MINCE
(CCM)
Réalisé par : Encadré par :
EL GUENNOUNI Farah Prof M. ELHADI LAMCHARFI
Année académique : 2023-2024
La chromatographie sur couche mince (CCM) est une méthode de séparation et d'analyse des composants
d'un mélange. Elle repose sur la migration différenciée des composants à travers une phase stationnaire sous
l'effet d'un solvant mobile. L'échantillon est déposé sur une plaque recouverte d'une fine couche de matériau
adsorbant, puis le solvant mobile transporte les composants à travers cette phase stationnaire, permettant leur
séparation selon leur affinité pour la phase stationnaire et le solvant. Une fois la migration terminée, les
composants peuvent être visualisés pour leur identification et leur quantification. La CCM est largement
utilisée en chimie analytique, en biochimie et dans d'autres domaines de la recherche scientifique pour séparer,
purifier et analyser les composants des mélanges.
La CCM a 4 champs d’application majeurs :
1)Analyse et détermination du nombre des constituants d’un mélange inconnu
2)On peut suivre la cinétique d’une réaction
3)La CCM permet de déterminer la phase stationner et la phase mobile la plus convenable pour la
chromatographie sur colonne selon les résultats obtenus
4)La CCM peut être utiliser comme détecteur de différentes fractions résultantes de la Chromatographie sur
colonne
Le but de ce TP ;
Était de séparer et d’identifier les acides aminés dans un mélange inconnu en utilisant la CCM. En utilisant
des acides aminées témoins pour identifier le mélange.
Ainsi l’étude du changement de la phase mobile sur la séparation des acides aminés. En utilisant des solvant
différent.
Figure 1 : illustration de la CCM
Figure 2 : Les échantillons utilisées
Préparation des témoins et du mélange :
On prépare 5 tubes, où on met nos échantillons càd Acides aminées ;
Les acides aminés sont dilués à 1% dans l’eau.
Figure 3 : Les échantillons dilués dans les
tubes
Figure 4 : La préparation des échantillons
Préparation de la phase mobile :
Dans ce TP, On prépare un ensemble des phases mobile : qui sont des mélanges
de solvants sélectionnés en fonction de la polarité des composants à séparer, on a
utilisé :
EtOH/NH3 : 8/2, 7/3, 6/4, 5/5
ButOH/NH3 : 8/2, 7/3, 6/4
On sait que la polarité diminue lorsqu’on augmente le nombre des atomes de
carbone. Pour cela on déduit théoriquement que l’éthanol est plus polaire que le
butanol
Figure 5 : La cuve de CCM
On met chaque mélange dans un cuve fermé.
Préparation de la phase stationnaire :
Lors de TP on a utilisé une plaque de silice qui joue le rôle de la phase stationnaire, et
avec un support en aluminium.
• On trace une ligne en bas de cette plaque, s’appelle la ligne de dépôt.
(La ligne de dépôt doit être toujours supérieure au niveau de la phase mobile
Dans la cuve) Figure 6 : La plaque de silice
• On divise cette ligne sur le nombre des analytes +1, les points sont des
Positions de dépôt, dans notre cas on a 5 analytes donc on divise sur 6.
On écrit sur le côté supérieur le nom d’éluant utilisé ainsi son volume.
-il est totalement interdit de toucher la plaque au centre à la main pour ne pas faussé les
résultats.
Figure 7 : Une plaque
préparer
Pour réaliser la chromatographie on utilise des capillaires à diamètre très fine pour
mettre nos acides aminées et le mélange sur la couche mince de silice, puis on le met
dans la cuve de chromatographie et on le ferme le couvercle pour saturer
l’atmosphère de la cuve.
✓ On arrêter la CCM lorsque le front d'éluant est arrivé au haut de la plaque.
✓ On trace au crayon le front de l'éluant.
✓ On sèche la plaque par un Sèche- cheveux
Figure 8 : Les capillaires
Après la fin de la chromatographie on passe à l’étape de révélation :
Pour détecter la présence des taches sur la CCM on peut utiliser 2 types des révélateurs :
Révélateurs Universels :
Le détecteur UV universelle pour les produits possédant des doubles liaisons conjuguées
Le diiode I2, pour les produits possédant une double liaison au moins.
Révélateurs spécifiques :
On trouve la ninhydrine spécifique pour les acides aminés selon
la réaction suivant :
La réaction de la ninhydrine avec une Acide aminée donne
une tache violette ou jaune selon le type de la fonction
amine primaire ou secondaire
Pour les cétones et les Aldéhydes on utilise le 2,4-
dinitrophyénylhydrazine (DNPH)
Pour les halogénures d’alkyle on utile l’argent nitrate
comme révélateur (donne taches jaune, brune ou noire)
Figure 9 : La réaction des AA avec la ninhydrine
Les résultats obtenus :
Pour la phase stationner de ButOH/NH3 :
Les plaques qui sont mises dans des solvants de butanol
ont une mauvaise séparation et un déplacement moins
remarquable, car c’est le solvant le moins polaire
Pour la phase stationner du EtOH/NH3 :
On peut dire que pour les deux plaques de phase mobile
Figure 11 : CCM à ButOH
EtOH/NH3(5/5 ,6/4)
Que la séparation est mauvaise, les taches sont moins
séparées.
Pour les deux plaques EtOH/NH3(8/2 ,7/3), la
séparation est bien significative pour cela on choisir
une nouvelle phase mobile pour obtenir la meilleure
séparation c’est EtOH/NH3(7,5/2,5)
Figure 10 :CCM à EtOH
Conclusion :
Il faut noter que le choix de la phase mobile joue un rôle très important pour faire une
chromatographie sur couche mince et pour choisir une phase mobile adéquate on peut se basant
sur la polarité des deux phases et celle des produits à analyser.
