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Merci monsieur le président du jury de me passer la parole.
Mr le président du Jury, honorable membre du jury, chers invités, bonjour. Le
travail soumis à votre appréciation s’intitule Etude chimique de Scoparia dulcis Linn
(Scrophulariaceae) et évaluation des activités antimicrobiennes des extraits et produits
isolés, et vous sera présenté suivant le plan ci-contre :
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En effet, les infections microbiennes demeurent jusqu’à nos jours le problème
majeur dans le secteur de la santé malgré l’avancé fulgurante de la médecine
moderne. On relève surtout chez les populations qui vivent dans des conditions
d’hygiène précaires, de la pauvreté ainsi que de la malnutrition, des maladies
fréquentes telles que le paludisme, le choléra, la tuberculose et j’en passe.
Toutefois, bien que ces maladies sont prises charges, l’on assiste à leur
recrudescence due à la résistance bactérienne.
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Pour pallier à ces problèmes, il serait judicieux de rechercher des nouveaux
principes actifs pouvant améliorer l’état de santé des populations. C’est dans cette
perspective que l’Unité de recherche de Chimie appliquée et environnementale
(URCAPE) a entrepris depuis plusieurs années un vaste programme de recherche sur
l’étude chimique et l’évaluation des activités biologiques des plantes du Cameroun afin
de les valoriser. Dans l’optique d’apporter notre contribution à cette étude, nous nous
sommes focalisés sur étude chimique de Scoparia dulcis Linn (Scrophulariaceae) et
évaluation des activités antimicrobiennes des extraits et produits isolés.
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Le choix porté sur cette plante repose sur son usage en médecine traditionnelle
dans le traitement des diverses maladies et en plus, elle a fait peu d’objet d’étude
chimique au Cameroun à notre connaissance.
Cependant, Scoparia dulcis pourrait avoir des métabolites secondaires dotés
de meilleures activités antimicrobiennes? Eh bien, compte tenu des critères chimio-
taxonomiques et ethnopharmacologiques, elle serait une source potentielle des
métabolites secondaires possédant des activités antimicrobiennes.
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L’objectif de ce travail est de caractériser et d’évaluer les activités
antimicrobiennes des métabolites secondaires issus de cette plante. Les objectifs
secondaires reposent sur :
- la récolte et la préparation des extraits ;
- l’isolement et la caractérisation des métabolites secondaire issus de la plante ;
- l’évaluation des activités antimicrobiennes des extraits et produits isolés
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En générale, le Scoparia dulcis est une plante herbacée vivace et annuelle qui
se retrouve en Amérique du sud, en Europe et en Afrique.
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Elle est utilisée en médecine traditionnelle dans le traitement de diverses
maladies dont quelques-unes sont présentées dans le tableau ci-contre ………..
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Cependant les travaux chimiques et pharmacologiques antérieurs effectués sur
cette plante présentent des diverses propriétés pharmacologiques en fonction des
structures des composés isolés dont certaines sont énumérer dans le tableau ci-
contre.
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Monsieur le président du jury, honorables membres de jury, pour mener à bien
notre travail, Scoparia dulcis a été récolté à Ngwatta identifié par comparaison à un
spécimen enregistré au numéro 702 à l’Herbier National du Cameroun. Après séchage
et broyage, nous avons obtenu 3kg de poudre. Elle a été macérée dans 12,5 l d’éthanol
pendant 24 heures et filtré puis évaporée sous pression réduite pour conduire à 297g
d’extrait brut. La solubilisation différentielle successive dans l’AcOEt et dans le n-
BuOH a conduit respectivement à 65g de la fraction à l’AcOEt et à 65g de la fraction
au n-BuOH.
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56g de la fraction au n-BuOH a été chromatographiée sur colonne de gel de
silice pour conduire à la purification de trois composés indexés SD1, SD2 et SD3.
L’élucidation des structures de ces composés a été faite par interprétation de
leurs données spectroscopiques d’une part et par comparaison sur plaque de CCM
avec un échantillon authentique dans notre unité de recherche, d’autre part.
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Le composé SD2 se présente sous forme de poudre jaune obtenu dans le
mélange AcOEt/MeOH 80:20 et réagit positivement au test de Shinoda et au test de
Molish.
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En effet, son spectre de RMN 1H (figure 2) nous a permis de déterminer les
types de protons portés par les carbones grâce aux signaux qui résonnent entre autre:
à 𝛿 H 6,92 (1H ; s) attribuable au proton éthylénique H-3 caractéristique des flavones;
à 𝛿 H 8,04 (2H ; d ; H-2’/H-6’) et à 𝛿 H 7,17 (2H ; d ; H-3’/H-5’) formant un système de
spin de type AA’BB’ attribuables aux protons du cycle B H-2’/H-6’ et H-3’H-5’
respectivement ; aux protons osidiques allant de 𝛿 H 1,05 à 𝛿 H 3,87 identifiables par
leurs carbones anomériques à 𝛿 H 5,12 ( d ; 7,0 ; H-1’’) et à 𝛿 H 4,56 (d ; 1,5 ; H-1’’’) de
configuration 𝛽 et 𝛼 respectivement aux regard de leurs constantes de couplages
constantes; en outre à 𝛿 H 1,05 (d ; 6,2 ; H-6’’’) et en fin à 𝛿 H 3,86 (3H ; s ; H-4’-OMe) et
à 𝛿 H 3,77 (3H ; s ; H-6-OMe), attribuables aux protons des groupes méthoxyles.
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Son spectre de RMN 13C (figure 3) présente 27 signaux correspondant à 29
atomes de carbones repérés entre autre par leurs signaux : notamment à 𝛿 C 103,3
attribuable au carbone C-3, à 𝛿 C 100,9 et à 𝛿 C 100,8 attribuables aux carbones
anomériques du premier sucre et du deuxième sucre respectivement, également à 𝛿 C
182,9 attribuable au carbonyle.
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Le spectre HSQC (figure 4) a permis de déterminer les corrélations directes
entres les protons et les carbones auxquels ils sont liés. Grâce aux différentes
corrélations, nous avons pu associer : le proton à 𝛿 H 6,92 (1H ; s) au carbone à 𝛿 C
103,3 (C-3), le proton à 𝛿 H 5,12 (1H ; 7,0 ; d ; H-1’’) au carbone à 𝛿 C 100,9 (C-1’’) puis
le proton à 𝛿 H 4,56 (1H ; 7,2 ; H-1’’’) au carbone à 𝛿 C 100,8.
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Le spectre COSY 1H-1H a permis d’établir les couplages scalaires par
l’entremise de carré de corrélation entre les protons résonnant à 𝛿 H 8,04 (2H ; d ; 8,9 ;
H-2’/H-6’) et à 𝛿 H 7,17 (2H ; d ; 8,9 ; H-3’/H-5’) du système du spin de type AA’BB’.
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Cependant, son spectre HMBC (figure 6) nous a permis de reconstituer la
structure de la molécule grâce aux corrélations longues distances établies entre les
protons et les carbones de leurs voisinages. On relève entre autre les corrélations :
entre le proton anomère à 𝛿 H 5,12 (1H ; d ; 7,0 ; H-1’’) et le carbone à 𝛿 C 156,9
confirmant ainsi la fixation du premier sucre sur l’aglycone en C-7, entre le proton
anomère à 𝛿 H 4,56 (1H ; d ; 7,02 ; H-1’’’) et le carbone 𝛿 C 66,4 du premier sucre,
lesquelles jonctions sont de O-glycosylée au regard des déplacements chimiques des
carbones impliqués dans la liaison avec l’hétéroatome.
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La combinaison de toutes ces données spectroscopiques comparées avec
celles de la littérature nous a permis d’identifier le composé SD2 au Pectolinarine 75
(Retno et al. 2016).
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Le composé SD3 est obtenu sous forme de poudre blanche, et est soluble dans
le DMSO. L’interprétation des toutes les données spectroscopiques nous a permis
d’attribuer au composé SD3 la structure 76.
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En effet, son spectre de RMN 1H (figure 7) présente un ensemble des signaux
entre autre : à 𝛿 H 3,61 (2H ; m) et à 𝛿 H 3,39 (2H ; m) attribuables aux protons
diastéréotopiques en position 1 ou 6, à 𝛿 H 3,46 ppm (2H ; dt ; 6,0) attribuable aux
protons H-2 et H-5 puis à 𝛿 H 3,55 ppm (2H ; t ; 7,7) attribuables aux protons à H-3 et
H-4.
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Son spectre RMN 13C (figure 8) présente trois signaux intégrant chacun pour
deux carbones chacun dont celui à 𝛿 C 64,3 attribuable aux carbones C-1 et C-6, à 𝛿 C
71,8 attribuable aux carbones C-2 et C-5 puis à 𝛿 C 70,1 attribuble aux carbones C-3 et
C-4.
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L’interprétation du spectre HSQC (figure 9) nous a permis de coupler les
protons à δH 3,39 (2H ; m ; H-1a/H-6a) et à δH 3,61 (2H ; m ; H-1b/H-6b) aux carbones
à δC 64,3 (C-1/C-6), le proton à 3,46 (2H ; m ; dt ; H-2/H-5) au carbone à δC 71,8 (C-
2/C-5) puis le proton à δH 3,55 (m ; t ; H-3/H-4) au carbone à δC 70,1 (C-3/C-4).
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Le spectre COSY 1H-1H (figure 10) présente des couplages scalaires entre les
protons vicinaux et géminaux, notamment entre les protons à δH 3,39 (m ; H-1a/H-6a),
à 𝛿 H 3,61(m ; H-1b/H-6b).
Diapositive 25
Son spectre HMBC (figure 11) nous a permis d’établir des couplages de longues
distances entre le proton à 𝛿 H 3,55 (m ; H-3/H-4) et les carbones à 𝛿 C 70,1 (C-3/C-4)
et à 𝛿 C 71,8 (C-2/C-5), ce qui nous permis reconstituer la structure ayant un système
d’isochronisme.
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La combinaison de toutes ces données spectroscopiques comparées avec
celles de la littérature nous a permis d’identifier le composé SD3 au mannitol 76.
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Le composé SD1 se présente sous forme de poudre blanche, soluble dans le
DMSO et réagit positivement au test de Liebermann-Buchard. Il a été identifié sur
plaque de CCM par comparaison à un échantillon authentique disponible dans notre
Unité de Recherche au 3-O-𝛽-D-glycopyranoside de 𝛽-sitosterol.
Monsieur le président du jury, honorables membres du jury,
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L’évaluation des activités antimicrobiennes des extraits et des produits isolés
de Scoparia dulcis contre quatre souches bactériennes (Pseudomonas aeruginosa
ATCC 76110, Escherichia coli ATCC 8739, Enterococcus faecalis ATCC 29212,
Staphylococcus aureus ATCC 25923), présente les résultats dans le tableau suivant :
Diapositive 29
D’après l’échelle de classification de Kuete (2010) l’extrait à l’AcOEt se montre
plus actif que les deux autres extraits avec une activité significative de 64µg/ml vis-à-
vis de Pseudomonas aerugina et de Staphylococcus aureus. Quant aux produits
isolés, ils présentent tous deux une activité modérée vis-à-vis des quatre souches
bactériennes testées.
Diapositive 30
En somme, l’étude chimique de Scoparia dulis Linn (Scrophulariaceae) a
conduit à l’isolement et à la caractérisation de trois composés (présenter les
structures).
Diapositive 31
L’évaluation des activités antibactériennes des extraits (EtOH, n-BuOH et
AcOEt) et des produits isolés (Pectolinarine et Mannitol) sur quatre souches
bactériennes a montré l’extrait à l’AcOEt est actif avec une activité significative
(64µg/ml) contre Pseudomonas aeruginosa et Staphylococcus aureus; tandis que
l’activité des produits comparée à celle de ciprofloxacine pris pour référence contre
toutes ces bactéries est modérée, la souche bactérienne la plus sensible vis-à-vis de
ces derniers est le Staphylococcus aureus contre laquelle le Pectolinarine se montre
plus efficace.
Diapositive 32
En perspective, nous envisageons:
- Isoler et caractériser les composés contenus dans les fractions non traitées ;
-Evaluer l’activité biologique de ces derniers ;
-Faire les transformations chimiques en vue d’améliorer les activités
Diapositive 33 (ABSTRACT)
The interest of this work was focused on the chemical study of Scoparia dulcis
Linn (Scrophulariaceae) and evaluation of antimicrobial activities of extracts and
isolated products, plant is used in traditional medicine in the treatment of tuberculosis,
vaginal infection, angina, hemorrhoids...
The successive chromatographies on silica gel column of the extract with n-
butanol of Scoparia dulcis led to the isolation and the characterization of the three
indexed compounds SD1 SD2 and SD3 Compounds SD2 and SD3 were identified to
Pectolinarine and mannitol respectively by interpretation of spectroscopic data in
comparison with literature while compound SD1 was identified by comparison on TLC
plate with an authentic sample available in our Research Unit to β-sitosterol 3-O-β-D-
glucopyranoside.
Diapositive 34
The extracts as well as the isolated compounds were subsequently evaluated
for their antimicrobial activities against the four bacterial strains Pseudomonas
aeruginosa ATCC 76110, Escherichia coli ATCC 8739, Enterococcus faecalis ATCC
29212 and Staphylococcus aureus ATCC 25923. The results obtained show that the
most sensitive strain of these bacteria is Staphylococcus aureus ATCC 25923 on which
Pectolinarine is more effective.
