NOM ET PRENOM :

➢ OUALKADI Soufian
➢ SALLAMI Fatima
➢ AOURAGH Sokayna
GROUPE : 1
N° DE TRINOME : 7
MODULE : CHROMATOGRAPHIE SMC S6

❖ MANIPULATION 2 :
Simulations de chromatogrammes en
Chromatographie Liquide Haute
Performance

Visualisation l’influence des différents

facteurs pour réaliser la mise au point des
LE BUT
conditions optimales de la séparation d'un
mélange de conservateurs alimentaires par HPLC
 ➢ COMPTE RENDU :
1) Puis que que la phase stationnaire depend des groupes 𝐶18 (apolaire) et on sait que
les composés apolaire migrent lentement par la phase stationnaire (plus retunu)
Donc Butylparaben est le plus apolaire (plus retunu) par la phase stationnaire de plus
la partie d’Ester la chaine Carbonnique le plus grande par aport à methylparaben

D’o𝑢́ : 𝝁 𝒃𝒖𝒕𝒚𝒍 < 𝝁 𝒑𝒓𝒐𝒑𝒚𝒍 < 𝝁 𝒆𝒕𝒉𝒚𝒍 < 𝝁 𝒎𝒆𝒕𝒉𝒚𝒍

2)

Figure 1 : composition de PM à 20%

Figure 2 : composition de PM à 30%

Figure 3 : composition de PM à 40%

On peut diduire que le temps de retentions change en fonction de la phase mobile lorsque on
change la composition de la phase mobile tell que quand nous augement la composition de
temps de retentions diminuer
3) Le pourcentage recommande pour avoir une séparation plus rapide 40%

Lorq’on augment la langeur de colonne , le facteur de resolution 𝑅𝑆 augment , donc on obtient

une bonne séparation .
4) avec 𝑡0 = 1,74 𝑚𝑖𝑛
 Compound 𝑡𝑟(𝑚𝑖𝑛) 𝐾′ 𝑙𝑜𝑔(𝐾′) 𝑙𝑜𝑔(𝑃)
Methylparaben 3,4 0,95 −0,022 1,8
Ethyparaben 6,6 2,81 0,45 2,4
Propylbaraben 14,59 7,36 0,87 2,9
butylparaben 30,18 16,29 1,21 3,4

Figure 4: Le graphique log(K')=f(log P) à 30% d'acétonitrile

1,4
1,21
1,2

1
0,87

0,8

0,6
0,45

0,4

0,2
-0,022
0
1,8 2,4 2,9 3,4
-0,2
𝑙𝑜𝑔(P)

❖ 𝑅𝑒𝑐𝑟é𝑎𝑡𝑖𝑜𝑛 𝑒𝑡 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑙𝑢́𝑠𝑖𝑜𝑛 ∶
On a la courbe on fonction linéaire , ont conclure donc que log(K’) est proportionnalité à
log(P).
5)
𝐾′ 𝐿𝑜𝑔 𝐾′
Methyl Ethyl Propyl Buthyl Methyl Ethyl Propyl Buthyl
paraben paraben paraben paraben paraben paraben paraben paraben
0,2 3,86 10,46 26,59 55,98 0,58 1,02 1,42 1,74
0,3 0,95 2,81 7,39 16,29 -0,022 0,44 0,86 1,21
0,4 0,23 0,76 2,04 4,74 -0,63 -0,12 0,31 0,67
0,5 0,06 0,2 0,56 1,38 -1,22 -0,7 -0,25 0,14
 4,5

3,86
4

3,5
Figure 5: Le graphique
3
de K’ en fonction de 𝝋
2,5 de Methylparaben
K'

1,5
0,95
1

0,5 0,23
0,06
0
0,2 0,3 0,4 0,5

12

10,46

10

Figure 6: Le graphique
de K’ en fonction de 𝝋
K'

6
de Ethylparaben

4
2,81

0,76
0,2
0
0,2 0,3 0,4 0,5
 30

26,59

25

20

Figure 7: Le graphique
K'

15
de K’ en fonction de 𝝋
de Propylparaben
10
7,36

5
2,04
0,56
0
0,2 0,3 0,4 0,5

60
55,98

50

40

Figure 8: Le graphique
K'

30 de K’ en fonction de 𝝋
de Buthylparaben
20
16,29

10
4,74
1,38

0
0,2 0,3 0,4 0,5
 0,8
0,58
0,6

0,4

0,2
-0,022
0 Figure 9: Le graphique
0,2 0,3 0,4 0,5 de log K’ en fonction
log K'

-0,2
de 𝝋 de Methylparaben
-0,4
-0,63
-0,6

-0,8

-1
-1,22
-1,2

-1,4

1,2

1,02
1

0,8

0,6
0,44 Figure 10: Le
0,4 graphique de log K’ en
fonction de 𝝋 de
log K'

0,2 Ethylparaben

0
0,2 0,3 -0,12
0,4 0,5

-0,2

-0,4

-0,6
-0,7

-0,8
 1,6
1,42
1,4

1,2

1
0,86 Figure 11: Le
0,8
graphique de log K’ en
fonction de 𝝋 de
log K'

0,6 Propylparaben

0,4 0,31

0,2

0
0,2 0,3 0,4 0,5

-0,2 -0,25

-0,4

1,8 1,74

1,6

1,4
1,21
1,2 Figure 12: Le
log K'

graphique de K’ en
1
fonction de 𝝋 de
0,8
Buthylparaben
0,67

0,6

0,4

0,2 0,14

0
0,2 0,3 0,4 0,5
 6) a)
• Calculons la sélectivité :
′ ′
𝐾(𝐵) 𝑡𝑅(𝐵)
On sait que : 𝛼 = ′ = ′
𝐾(𝐴) 𝑡𝑅(𝐴)
′
𝑡𝑅(𝐵) 𝑡𝑅(𝐵) −𝑡0 𝑡0 27,43−1,74 1,74
𝛼= ′ = × = ×
𝑡𝑅(𝐴) 𝑡0 𝑡𝑅(𝐴) −𝑡0 1,74 5,61−1,74

𝛼 = 6,6 3

• Calculons la résolution :
𝑡𝑅(𝐵) −𝑡𝑅(𝐴)
On sait que : 𝑅𝑆 =2×
𝜔(𝐵)+𝜔(𝐴)

27,43 − 5,61
𝑅𝑆 = 2 ×
0,538 + 0,129
𝑅𝑆 = 65,42

b) Les deux choses nécessaires pour la bonne séparation sont :

• La résolution (ou pourcentage).
• Le temp de rétention.
7)
𝐿
𝐻= 𝑎𝑣𝑒𝑐 𝐿 = 150 𝑚𝑚
𝑁
𝐶𝑜𝑚𝑝𝑜𝑢́𝑛𝑑 𝐿𝑖𝑑𝑜𝑐𝑎𝑖𝑛𝑒
𝐷é𝑏𝑖𝑡(ml/min) 𝑡𝑟 (min) 𝐾′ 𝑁 𝐻(mm)
1 64,23 35,8 14217 0,01
2 32,12 35,8 10397 0,014
3 21,41 35,8 8029 0,018
4 16,06 35,8 6500 0,023
5 10,71 35,8 5056 0,029

➢ Le temp de rétention diminue lors que on augment le débit , et le facteur de

rétention reste constante
 Figure 13: Le graphe de H(𝜇m) en fonction du
débit
0,035
0,029
0,03
𝑯(× 𝟏𝟎𝟑 𝝁𝒎)

0,025 0,023

0,02 0,018
0,014
0,015
0,01
0,01

0,005

0
1 2 3 4 5

Le débit (ml/min)

8)
𝑑𝑃 (𝝁𝒎) N
5 14217
1,7 44286

➢ On remarque que la diminution de la taille de la particule de la colonne, la

valeur de N augement
➢ Le meilleure taille de PS pour ce mélange est 𝑑𝑃 = 1,7𝜇𝑚 , car on sait que
𝐿
𝑁= donc si : N augment on a un bon séparation
𝐻
9)
𝐶𝑜𝑚𝑝𝑜𝑢́𝑛𝑑 𝐿𝑖𝑑𝑜𝑐𝑎𝑖𝑛𝑒 5000 4709
𝐷é𝑏𝑖𝑡(ml/min) N
4500
1 4709
4000
2 3426
3426
3 2633 3500
4 2122
3000
2633
5 1771
N

2500
2122
2000 1771

1500

1000

Figure 14: Le graphe de 500

N en fonction du débit 0
1 2 3 4 5
 10)
❖ Application 1 : analyse HPLC d’amines aromatiques :
o Pic 1 à 𝑡𝑟 = 3,8 correspond à la pic 2 de N.éthylaniline
𝐴
𝐾𝐶 =
𝐶
𝐴 26250
Donc : 𝐶 = = C = 0,75 mg/l
𝐾𝐶 35000

o Pic 2 à 𝑡𝑟 = 5,3 correspond à la pic 3 de [Link]

𝐴
𝐾𝐶 =
𝐶
𝐴 42400
Donc : 𝐶 = = C = 0,74 mg/l
𝐾𝐶 5700

o Pic 3 à 𝑡𝑟 = 6,2 correspond à la pic 4 de N,N-diméthylaniline

𝐴
𝐾𝐶 =
𝐶
𝐴 49600 C = 0,8 mg/l
Donc : 𝐶 = =
𝐾𝐶 62000

o Pic 4 n’est pas trouve

o Pic 5 à 𝑡𝑟 = 9 correspond à la pic 5 de [Link]éthylaniline
𝐴
𝐾𝐶 =
𝐶
𝐴 37500 C = 0,75 mg/l
Donc : 𝐶 = =
𝐾𝐶 50000

❖ Application 2 : analyse HPLC d’antidépresseurs

• Quels sont les deux antidépresseurs présents ?
o Pic 1 à 𝑡𝑟 = 5,16 correspond au pic 6 de MIR
o Pic 2 à 𝑡𝑟 = 9 correspond au pic 10 de PAR
• Quelle masse un comprimé en contient-il ?
𝐴 𝐴
Km = alors 𝑚=
𝑚 Km
𝑚
Avec 𝐶𝑚 = alors m = 𝐶𝑚 × 𝑉 = 20 × 250. 10−3 D’où m= 5mg
𝑉
o Pour pic 1 :
Km = =
𝐴 1381
alors K m = 276,2
𝑚 5

𝐴 1092 m= 3,95 mg
Donc 𝑚 = = D’où
Km 276,2
o Pour pic 2 :
 Km =
𝐴
=
1593
alors K m = 318,6
𝑚 5
𝐴 1328 m= 4,16 mg
Donc 𝑚 = = D’où
Km 318,6