Laboratoire de biologie clinique le BON SAMARITAIN Ligne de Page :
conduite :05/1358
Section manuel : Analyse d’échantillon des secrétions Pos pour le diagnostic d’une
vaginales dischage vaginale
Emise par : Tordibaye, BARKA, TSINDA et MASRA 19/04/24
Lue et approuvée par Dr YAMSI Nadia 19/04/24
TITRE : PROCEDURE OPERATOIRE SDANDARDISEE DE PRELEVEMENT VAGINAL ( rédigé
selon la norme ISO 15189)
BUT : DIAGNOSTIQUER UNE CANDIDOSE PAR L’ANALYSE D’UN PRELEVEMENT VAGINAL
INTRODUCTION (Présentation générale) : La mycose vaginale est due à des champions, la
plupart du temps des levures du types candida albains, d’où le nom candidose. Elle
provoque des symptômes gênants tels que des démangeaisons avec inflammation de la
vulve et vagin, des écoulements épais et blanchâtres, des pertes blanches ou pertes jaune
parfois d’odeurs désagréables qui peuvent avoir un aspect mousseux. Le diagnostic repose
sur un examen de prélèvement vaginal qui peut s’accompagner d’examens supplémentaires
en fonction de la gravite.
DOMAINE D’APPLICATION : Laboratoire de la biologie clinique de parasitologie et mycologie
Compétence du personnel : Technicien médico-sanitaire, technicien de laboratoire, les
agents technique de laboratoire (toute personne ayant suivi une formation en technique de
laboratoire).
CONSIGNE DE SECURITE : Laver bien les mains avant et après la manipulation.
Port des équipements de protection individuelle ;
Faut travailler dans un environnement propre et sous hotte de sécurité
microbiologique ou près de bec bunsen;
PROCEDURE PREALABLE A L’EXAMEN :
Phase pre-analyrtique
Accueil de patient : faire assoir le patient, le mettre en confiance, l’expliquer, l’avantage
d’examen et les procédures de prélèvement si possible.
Condition de prélèvement : ne pas avoir faire sa toilette intime a la veille du prélèvement,
absence de menstruation, pas de rapport sexuel, ne pas être sous traitement antifongique.
Matériels de prélèvement : écouvillon, lame, gants, table gynécologique.
Prélèvement et acheminement : la patiente est installée en position gynécologique c’est-à-
dire sur le dos les jambes écartées et positionner dans étriers. Le technicien réalise a l’aide
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de l’écouvillon stérile un prélèvement sur les parois de la cavité vaginale par un balayage de
la moitie inferieure du vagin, du vestibule et de la vulve.
Enregistrement de l’échantillon et le patient ;
Bien s’assurer de l’identité du patient ;
Codifier l’échantillon ;
La date de prélèvement ;
Acheminement dans la salle technique
TRANSPORT ET CONCERVATION : A l’ abri de la poussière et des insectes.
La phase analytique :
MATERIELS ET REACTIFS :
Lamelle;
Pied à coulisse ;
Disques d’antifongique ;
Sérum de mouton ;
Lame ;
Microscope ;
Gants ;
L’eau physiologique ;
Incubateur ;
Milieu de culture (Sabouraud) ;
Antifongique ;
Hotte de sécurité microbiologique ;
Les colorants de Gram (violet de Gentiane, lugol, alcool, fuchsine)
MODE OPERATOIRE :
Le technicien fait dépôt du prélèvement sur une lame propre sur laquelle est déposée une
goutte de sérum physiologique.il faut ensuite déposer une lamelle et lire au microscope a
l’objectif 10X puis 40X.
La culture se fait sous la hotte de sécurité par ensemencement en strie sur le milieu
Sabouraud + chloramphénicol +actidione puis mise en incubation 37oC pendant 24 à 48H.
Coloration de Gram :
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Principe : la coloration permet de mettre en évidence, les propriétés de la paroi bactérienne
et d’utiliser ses propriétés pour les distinguer et les classer
Prélever les colonies levuriformes ,étaler sur une lame porte-objet, laisser sécher, couvrir de
violet de Gentiane pendant une 1mn,rincer a l’eau de robinet et égoutter, ajouter de lugol
pendant 1mn,decolorer a l’alcool pendant 20s et rincer, ajouter de la fuchsine 1 mn. Laisser
sécher puis lire au microscope à l’objectif a immersion en plus cela, il faut faire le test de fi
lamentation pour l’identification de l’espèce de Candida.
Le test de blastese ou de filamentation (principe) : un bouillon de blastese (sérum de
mouton) est ensemencé à partir d’une colonie suspecte dans un tube à hémolyse. Après 3H
d’incubation a 370C, on effectue un montage d’état frais entre lame et lamelle afin de
rechercher le tube germinatif caractéristique de candida albicans
Antifongigramme :
Apres identification, procéder à l’Antifongigramme qui consistera à disposer les disques
d’antifongique ( fluconazole, itraconazole, amphotericine B, ketoconazole et le muconazole )
a la surface le milieu de culture ( Sabouraud ) préalablement ensemencer par inondation ou
écouvillonnage par la suspension ,levure + eau physiologique. Le montage est ensuite
incuber a 370C pendant 24H.l’interpretation se fait le lendemain.
Interprétation :
Etat frais : On reconnaitra des levures ovoïdes parfois à bourgeonnement mesurant de 3-6
µm sur 6-10 µm. on pourra également observer la présence des pseudofilaments.
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Etat colore au Gram :.
Les candida sont les Gram positifs c’est –à- dire violet foncé
.
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Culture : On aura des colonies blanches, crémeuses, luisantes
Antifongigramme : le technicien se sert du pied à coulisse pour mesurer les diamètres des
zones d’inhibition croissance des souches des levures les classe en sensibles, intermédiaires
ou résistantes.
Phase post-analytique :
Validation technique :
Le technicien doit consigner les résultats dans le cahier de paillasse en notant le code du
patient, le résultat obtenu, la date et en posant sa signature. Il doit également en se
servant du référentiel comparer ses résultats avec les valeurs de référence pour qualifier
ou quantifier le niveau de gravite de la maladie.
Validation biologique :
Le biologiste ou le responsable de laboratoire se rassure de la conformité et de la
fiabilité des réactifs et matériels, il se rassure que la méthode d’analyse soit correcte,
que les résultats notes soient concordants aux renseignements cliniques
et faire le compte rendu des résultats ;
Gestion des déchets : à la fin de manipulation les déchets sont tries comme suit :
Les déchets ménagers : carton, plastique jetés dans la poubelle noire ;
Les déchets tranchants : lame dans le même conteneur de recyclage
Les déchets infectieux : le gant, écouvillon dans la poubelle jaune
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Désinfecter la paillasse ;
Ranger les matériels de travail ;
Vider la poubelle.
CONTROLE QUALITE DE L’ANALYSE PARASITOLOGIGUE DU SANG
CONTROLE INTERNE DE QUALITE DE L’ANALYSE PARASITOLOGIQUE DU SANG
1. Phase pré-analytique :
Le technicien doit se rassurer du bon accueil du patient et
l’enregistrement de toutes ses informations
Il doit s’assurer que le bulletin du patient contient toutes les
directives à suivre et que les conditions de prélèvement ont été
respectées
2. Phase analytique :
Le biologiste doit s’assurer :
Que les étapes d’analyse ont été respectées, les matériels sont
conformes ;
De la compétence du technicien manipulateur ;
Que l’examen a été répété.
3. Phase post-analytique
Validation technique/analytique ;
Le technicien qui a effectué l’analyse doit s’assurer d’avoir
enregistré les résultats, les avoir vérifié et de les soumettre au
biologiste.
Validation biologique :
Biologiste ou responsable de labo doit confirmer la qualité de son
matériel, ses réactifs ;
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les résultats obtenus sont fiables et bien enregistrés permettant
leur traçabilité ;
le biologiste doit s’assurer que les déchets ont été bien traités
CONTROLE QUALITE EXTERNE :
le laboratoire doit collaborer avec une entreprise de qualité externe qui
viendra avec un échantillon de prélèvement vaginal contenant candida
albicans et exécuter le test dans notre laboratoire pour se rassurer qu’on
obtiendra le même résultat ;
Notre laboratoire participera aux campagnes inter laboratoires pour
s’actualiser et effectuer des comparaisons.
évaluation objective des activités et de la performance par une agence,
un organisme ou le personnel en dehors du site de test ;
Echanger les échantillons analyses avec les laboratoires de haut standing
et comparer les résultats obtenus
REFERENCE :
Cours de technique de diagnostique en mycologie master I.
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https://www.infectiologie.org.tn
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