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Serie TD1-Chromatographie D'exclusion

Le document présente quatre exercices sur la chromatographie d'exclusion stérique. Les exercices portent sur le calcul des volumes d'une colonne, la détermination du coefficient de rétention, l'interprétation d'un chromatogramme et l'estimation de la masse moléculaire d'un composé inconnu.

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Le document présente quatre exercices sur la chromatographie d'exclusion stérique. Les exercices portent sur le calcul des volumes d'une colonne, la détermination du coefficient de rétention, l'interprétation d'un chromatogramme et l'estimation de la masse moléculaire d'un composé inconnu.

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Série TD-Chromatographie d’exclusion

Exercice 1:
Une colonne de filtration sur gel a un rayon r de 0.80 cm et une longueur l de 20 cm.
a) Calculer le volume de la colonne.
b) Le volume Vi de la phase mobile en dehors des particules du gel est de 18.1 ml et le
volume total de la phase mobile est de 35.8 ml. Déterminer le coefficient K pour un
soluté élué à 27.4 mL.
Exercice 2:
Une colonne HPLC d’exclusion moléculaire avec résine polystyrène a un diamètre de
7.8 mm et une longueur de 30 cm. La proportion solide des particules du gel occupe
20% du volume, les pores occupent 40% et le volume entre les particules 40%.
a) A quel volume les molécules totalement exclues sortiraient de la colonne ?
b) A quel volume sortiraient les plus petites molécules ?
c) Un mélange de polyethylène glycols de masses moléculaires différentes est
élué entre 23 et 27 mL. Qu’est-ce que cela implique concernant les mécanismes de rétention
de ces solutés dans la colonne ?

Exercice 3:
On chromatographie une solution dans le tetrahydrofuranne (THF) d’un mélange de
polystyrènes de masses moléculaires connues sur une colonne (I.D=7.5mm, L=
300mm) dont le domaine de perméation s’étend de 400 à 30 000 daltons. La phase
éluante est du THF. Son débit est 1mL/min. La détection UV est effectuée à 254nm.
A partir du chromatogramme obtenu reproduit ci-après :
a) Calculer le volume d’exclusion total (volume interstitiel) et le volume des pores de
la colonne utilisée.
b) Calculer le coefficient de diffusion K pour le composé de masse 3250 Da.
c) On observe quelquefois en chromatographie d’exclusion stérique des valeurs de K
supérieures à 1. Interpréter ce phénomène.

Exercice 4 :
Les composés suivants sont séparés par chromatographie d’exclusion stérique.
a) Par quelle méthode peut-on évaluer la masse moléculaire de composés inconnus ?
b) Estimer la masse moléculaire du soluté inconnu.
Composés Vr (mL) Masse moléculaire (Da)

1
Série TD-Chromatographie d’exclusion

Blue Dextran 2000


17.7 2.106
Aldolase
35.6 158000
Catalase
32.3 210000
Ferritin
28.6 440000
Thyroglobulin
25.1 669000
Inconnu
30.3

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