TD 4
Exercice 1:
Afin d’étudier les besoins nutritionnels de 3 souches A, B et C, on les ensemence sur les 3
milieux suivants.
Milieu 1 = milieu de
base
Composants Quantité
K2HPO4 1g
NO3K 0,5g
MgSO4, 7 H2O 0,2g
CaCl2 0,1g
NaCl 0,1g
Eau distillée 1 litre
On ajoute à ce milieu de base stérilisé à l’autoclave, 1g de glucose
stérile. Milieu 2 : Milieu 1 + 4g d’hydrolysat de caséine
Milieu 3 : Milieu 1 + 4g d’hydrolysat de caséine + 2g
d’extrait de levure Les résultats obtenus après incubation
sont les suivants :
Milieu Milieu Milieu
1 2 3
Souche A + + +
Souche B - + +
Souche C - - +
“-” répresente absence de croissance “+” répresente présence de coissance
1- Indiquer le rôle des constituants des milieux 1, 2 et 3.
2- Déduire des résultats, les besoins nutritionnels des 3 souches A, B et C.
3- Dans certains cas, une vitamine peut être dosée par son effet sur la croissance
d’une bactérie.
a- Quelle caractéristique la bactérie utilisée doit-elle posséder ?
b- Donner le principe du dosage.
c- Quel est l’intérêt d’un tel dosage ?
Exercice 2 :
Analyse des types trophiques des souches I et II à l’aide des milieux de culture A, B et C.
Composition des milieux donnée en g/L
Milieu A
Phosphate d’ammonium 0,2
Phosphate monopotassique 1
Sulfate de magnésium 0,2
Chlorure de calcium 0,1
Chlorure de sodium 5
Milieu B
2
Milieu A + citrate trisodique
Milieu C
Milieu A + les additifs suivants :
Biotine (10-8), Histidine (10-5), Méthionine (2.10-5), Thiamine (10-6), Pyridoxine (10-6),
Acide nicotinique (10-6), Tryptophane (2.10-5), Panthothénate de calcium (10-5),
oligoéléments et glucose (5)
On obtient les résultats suivants après ensemencement et incubation.
Souches/milieux A B C
Souche pure n°I - + +
Souche pure n°II - - +
a- Comment qualifier le milieu A?
b- Certaines bactéries pourraient se développer dans le milieu A à la condition de
les incuber en atmosphère enrichie en CO2. Expliquer pourquoi, et donner leur type
trophique vis-à-vis du carbone.
c- Quel est le type trophique vis-à-vis du carbone et des besoins nutritionnels
spécifiques de la souche I ?
d- Quelle est sa source d’azote ?
e- Pour comparer la croissance sur les milieux B et C, il est recommandé de ne
pas ensemencer le milieu B à partir d’un bouillon ou d’une eau peptonée, mais d’une
colonie sur milieu gélosée : expliquer pourquoi?
f- Qu’apporte le glucose dans le milieu C ?
g- Quel est le type trophique de la souche II vis-à-vis du carbone et par
rapport au métabolisme énergétique ?
h- Définir et expliquer la présence d’oligoéléments ?
i- Les composants additifs du milieu C appartiennent à deux groupes chimiques
distincts.
Lesquels ?
On contamine 5 ml de milieu B avec 10 6 Staphylocoques et 102 bactéries appelées souche n°II
dans l’expérience précédente.
a- Quel est le nombre par ml de bactéries de chaque souche au temps 0 ?
Après 6h d’incubation sans phase de latence, on dénombre séparément 8x108
Staphylocoques/ml et
3.103 souches II/ml.
b- Calculer le temps de génération des deux germes.
c- Comment expliquez-vous ce résultat ?
d- Comment s’appelle ce phénomène ?
e- Comment se manifeste-t-il sur milieu gélosé ?
Exercice 3 :
Lors de l’examen de l’abdomen d’un insecte, vous découvrez un microorganisme de 100
µm de longueur et de 8 µm de largeur. Il n’est pas photosynthétique, ne possède pas de
mitochondrie, ni de noyau, ni de membrane nucléaire.
f- Que pourrait-il être ? Expliquer votre réponse.
Cet organisme croit dans l’air ambiant sur des boites de Pétri contenant de l’agar et une
solution de sels minéraux (une source de N, P, S, K, Mg, Fe et autres oligoéléments).
Certains minéraux sont sous forme oxydée, tandis que d’autres, comme le Fe, sont sous
forme réduite. Si tous les éléments sont fournis sous forme oxydée, l’organisme ne croit pas.
A l’aide de ces informations, répondez aux questions suivantes :
g- Quelle est sa source de carbone la plus probable ?
h- Quelle est sa source d’énergie la plus probable ?
Exercice 4 :
36 colonies bactériennes ont poussé sur un milieu de culture solide ensemencé à partir de 0,1
ml prélevé à partir d’une dilution de 10 -3 d’un échantillon de contenu intestinal. Combien de
cellules par ml estime-t-on dans la culture d’origine ?
Exercice 5 :
En utilisant la formule Nt = N0x2n, calculer le nombre de bactérie dans une mayonnaise
contaminée après inoculation de 4 cellules de Staphylococcus aureus et incubation à
température ambiante pendant 24 heures. Le temps de génération de S. aureus dans ces
conditions est d’une heure.
Exercice 6 :
Une suspension de bactéries de concentration 4x108 bactéries/ml est diluée au 2x10-5. 0,1
ml de la solution diluée est étalée sur une boite de Pétri et incubée une nuit à 37°C.
D- Combien de colonies apparaitront sur la boite ?
On ensemence 4 ml de la solution diluée dans un volume total de 500 ml de milieu de
croissance contenant de l’ampicilline. Le milieu contient combien de cellules?
E- Cette culture est incubée à 37°C pendant 10h. Quelles caractéristiques doivent
posséder les bactéries pour croitre dans ces conditions ?
F- Quelle est la concentration de la culture avant incubation à 37°C ?
G- Si le temps de génération de cette culture est de 30 min, quelle sera la
concentration de cette culture (cellules par ml) au bout des 10h d’incubation à 37°C ?
Exercice 7 :
Déterminez (moyenne), à partir du nombre de colonies dénombrées dans les 3 boîtes
(milieux gélosés) et du schéma de dilution ci-dessous, le nombre de cellules bactériennes
(UFC) présentes dans 500 ml de l’échantillon (détaillez vos calculs).
