Université de Sétif 1

Faculté de médecine
Département de pharmacie
PLAN
Laboratoire de chimie analytique

Introduction

Définitions
Méthodes d’extraction Traitement des mélanges
hétérogènes
Traitement des mélanges
Dr. Ounnoughi. C homogènes

Année universitaire 2023-2024

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INTRODUCTION
Corps

Corps gras
Alcaloïdes Purs Mélanges
Hétérosides
Hormones
Antibiotiques Simple Composé Homogènes Hétérogènes

Corps simples Corps composés

H2, O2, N2, O3, SO2, H2SO4, HCl,
Fe, Na H2O, CH4 …

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 Classification des méthodes de séparation

Tableau 1: dénomination des mélanges de phases Mélange hétérogène

Phases en présence Nom

Solide dispersé dans gaz fumée Mélange Mélange Mélange Mélange
liquide – liquide liquide – solide Gaz – liquide Solide - solide
Liquide dispersé dans gaz brouillard
✓ Variation de T° ✓ Filtration ✓ Filtration ✓ Criblage et tamisage
Solide dispersé dans liquide suspension ou pH ✓ Centrifugation ✓ Aimantation
✓ Décantation ✓ Décantation
Liquide dispersé dans liquide immiscible émulsion

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Classification des méthodes de séparation

Mélange homogène SEPARATION DES CONSTITUANTS D’UN

MELANGE HETEROGENE
Changement
Rupture de phase Transfert de phase d’état

✓ Séparation mécanique ✓ Extraction ✓ Distillation

01 Décantation
✓ Concentration
✓ Précipitation
✓ Adsorption
✓ Chromatographie
✓ Électrophorèse
✓ Sublimation
✓ Cristallisation et
recristallisation
02 Filtration
03 Centrifugation
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 1. Décantation
1.1 Décantation solide-liquide « Sédimentation »
Un procédé mécanique permettant de séparer :
- soit une phase solide de matières en suspension dans un liquide de masse • Résultante de la force de pesanteur de la force d’Archimède et des
forces de diffusion.
volumique moindre ; • La séparation se fait par transvasement ou par aspiration du liquide
- soit deux phases liquides non miscibles de densités différentes. surnageant

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1.1 Décantation solide-liquide « Sédimentation » 1.1 Décantation solide-liquide « Sédimentation »

• Il est possible d'agir sur plusieurs paramètres pour augmenter la vitesse de

sédimentation
P : Force de pesanteur (attraction des particules vers le bas)
➢ diamètre des particules, en utilisant des floculants ou des coagulants.
A : Force d’Archimède (maintien des particules en suspension)
f : Forces de diffusion (répartition des particules dans tout le volume) ➢ différence de densité.
Si : P > A + f , en pratique il y a séparation ➢ viscosité du fluide, qui diminue avec l'élévation de la température.

➢ surface de base du bac.

La masse volumique des particules doit être au moins deux fois supérieure à celle du liquide

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1.2 Décantation liquide-liquide « 2 liquides non miscibles » La décantation liquide-liquide se fait simplement dans des ampoules à décanter dont différents
types sont disponibles
- Mise en équilibre des deux phases liquides non miscibles par agitation
- Arrêt de l’agitation pour laisser les deux phases liquides décanter
- Séparation des deux phases par écoulement de la phase la plus lourde.

13 14

1.3 Applications 2. Filtration

• Opération de clarification (prétraitement de la filtration) c’est a dire
qu’on va faire d’abord une décantation puis une filtration Un procédé permettant de séparer une phase continue
(liquide ou gazeuse) et une phase dispersée (solide ou liquide)
• Traitement des eaux : Pour éliminer les particules solides en suspension initialement mélangées.
et les sédiments dans le processus de purification de l’eau.

• Séparation les phases liquides et solides dans les réactions chimiques, le

raffinage des produits chimiques et la purification des solvants. Passage du mélange au travers d’un milieu filtrant « milieu poreux »
adapté aux caractéristiques de la suspension à filtrer

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Les objectifs de la filtration sont :
Matériaux filtrants
Media filtrants: Matériaux poreux caractérisés par leur nature chimique, leur
• Récupération d’un solide (précipitation d’un structure, leur porosité et les dimensions de leurs pores
solide dans l’eau) Préfiltrât
• Purification d’un liquide (eaux usées) Nature chimique
Résidu des fibres
• Récupération et purification (recristallisation ou
d’un solide dans un solvant) Gâteau

Organique Minérale

Filtrat • Produits à base de cellulose Dérivés de la silice

Papier filtre, pâte de cellulose • coton de verre
• coton de verre fritté
• Disques en polymères organiques
polyamide, polysulfones , Dérivés acrylique
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Papier filtre en fibre de cellulose Papier filtre en fibre de verre

Classiquement des filtres en cellulose

• Microfibres borosilicatés
Sous forme de filtres ronds, papier plissé ou sous forme
de cartouche épaisse • Stables jusqu’à 500°C

Taux de rétention entre 2,5 et 50 µm Porosité 0.7- 2.7 μm

Papier filtre pour analyse qualitative Papier filtre pour analyse quantitative :
✓ Résidu en cendres < 0.1% ✓ Teneur en cendres < 0.01%.
• Grande stabilité aux principaux solvants organiques, aux acides et bases (sauf
✓ indiqué pour une filtration rapide ✓ utilisé pour filtration sous vide ou
avant analyse sous pression à HF et aux bases fortes)
• Utilisés sans pliage pour éviter des cassures sur des supports types Buchner
• Teneur en cendres selon la norme DIN 54370 : La teneur en cendres est le résidu déterminé après la combustion
de 10 g de papier filtre à 800°C dans un creuset en platine.
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 Solvant ANP CA CN PC PE GMF NYL PP DpPP PES PTFE PVDF RC
Membranes filtrantes
Acide acétique, 5 % R RL R R R R R R R R R R

• Filtres en surface dont le choix dépend de la suspension à filtrer Acétone R NR NR NR R R R R R NR R NR R

(compatibilité chimique), du domaine d’utilisation, et de la Acétonitrile R NR NR R R R R NR R R R
rétention recherchée. Cyclohexane R NR NR R R R NR NR NR NR R R R
Dioxane R NR NR NR R R R R R RL R RL R
• Le passage de milieux liquides à travers une membrane se fait
Éthanol R R NR R R R R R R R R R R
sous l’action d’un gradient de pression. Filtre Membrane en cellulose
Acétate d’éthyle R NR NR NR R R R R R NR R NR R
Porosité 0.1μm-10 μm Hexane R R R R R R R R R R R R R
Méthanol R R NR R R R R R R R R R R
• Incompatibilités chimiques nombreuses. Pentane R R R R R R R NR NR R R R R
Tétrahydrofurane R NR NR R R RL RL NR R R R
Eau R R R R R R R R R R R R R
Acétate de cellulose, polycarbonate, nitrate de cellulose, polyamide, Nylon,
polyethersulfone (PES), PTFE (Polytetrafluoroéthylene).....etc. ANP = Anopore ; CA = acétate de cellulose ; CN = nitrate de cellulose ; DpPP = filtre en profondeur en polypropylène ; GMF = microfibre de
verre ; NYL = nylon ; PC = polycarbonate ; PE = polyester ; PES = polyéthersulfone ; PP = polypropylène ; PTFE = polytétrafluoroéthylène ;
PVDF = difluorure de polyvinylidène ; RC = cellulose régénérée ;

21 R = résistant ; RL = résistance limitée ; NR = non recommandé. 22

Techniques de filtration
Selon la manière de réaliser le gradient de pression

Filtration par Filtration par Filtration sous

gravité surpression pression réduite

Mélange soumis à la pression Pression appliquée sur la face Création d’une dépression sur
atmosphérique amont de la surface filtrante la face aval du milieu poreux
(pompe à vide)

Filtres seringue
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 Techniques de filtration
En fonction de la taille moyenne des particules à retenir par le filtre:

Méthode Taille des particules a Substances Applications

retenir retenues
Filtration sous vide ou > 1 µm - Préparation des échantillons
sous pression ou filtration liquides ou solides avant analyse.
Fiole de kitasato clarifiante - préfiltre afin de limiter le colmatage
Microfiltration 0,1 à 10 µm Cellules et débris - Clarification
basse pression 0,2 à 2 bar cellulaires - Filtration stérilisante
Ultrafiltration 10 à 100 nm virus, protéines - purification ou concentration des
solutions de macromolécules.
pression jusqu’à 10 bar - Laisse filtrer l’eau, les ions et les
Filtration sous vide sucres
Entonnoir de Büchner
Nanofiltration 1 à 10 nm virus, bactéries - Elimination des petites molécules
pression de 7 à 40 bar protéines, acides (M > 300 g/mol) telles les sucres ou
nucléiques les pesticides d’un échantillon.
Creuset de Gooch Osmose inverse 0,1 à 1 nm Sels, sucres - Purification de l’eau
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Applications 3.Centrifugation
• Dans les dosages volumétriques et surtout gravimétriques
C’est un processus mécanique qui utilise une force centrifuge appliquée à la place
• Dans l’industrie pharmaceutiques (ex: préparations de solutions stériles, de la gravité pour séparer les composants d’un mélange en fonction de la densité
et/ou de la taille des particules
échantillons analytiques, la préfiltration de solutions chargées ou pour la
préparation de molécules complexes particulièrement pures et fonctionnelles.)
On peut séparer
• Biotechnologies (préparation de milieux de cultures, purification et extraction
de matériel génétique, cellulaire,..) - deux phases liquides,
- une phase solide en suspension dans une phase liquide,
• Traitement des eaux (potable, purifiée, stérile, usée) - deux phases liquides contenant une phase solide

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 Force centrifuge
Au cours de la centrifugation, les composés dans le fluide situés à une Une particule de masse m (kg) animée d’un mouvement circulaire de rayon r (m) à
une vitesse angulaire ω (rad/s) est soumise à une force centrifuge
distance r de l'axe de rotation sont soumis à différentes forces

Fc = m ω2 r en newtons

• La force de pesanteur descendante Fp Elle s’exerce radialement vers l’extérieur de l’axe de rotation
• La poussée d'Archimède ascendante Fa
• Une force de friction Fv
• La force centripète F’c
• La force centrifuge Fc

La séparation s'opère par l'action de la force

centrifuge Fc sur les composés
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Appareillage Centrifugeuses de paillasse

• Faibles accélérations (1000 à 3000 g)

Une centrifugeuse est constituée de:
• Petits volumes a 10 ml
• Une chambre de centrifugation dans laquelle sort • Certains modèles sont réfrigérés, d’autres non.
l’axe de rotation
• Moteur Centrifugeuses de sol
• Un rotor contenant un échantillon à analyser
• Des tubes contenants l’échantillon à centrifuger • Accélérations d'environ 20 000 g
• Gros volume 4 ou 6 bouteilles de 250 mL.
• Réfrigérés

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 Ultracentrifugeuse Applications

• Accélérations très élevées (300 000 g)

• Dizaines de tubes de 40ml Centrifugation préparative
• Réfrigérées
Séparations des constituants de mélanges de nature chimique ou biologique

Centrifugation analytique

Microcentrifugeuse Détermination des constantes physiques des macromolécules

• Conçues pour les microvolumes

• Micro tubes de 1,5ml
• Accélérations de l'ordre de 12-15 000 g

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1- Séparation par rupture de phase

SEPARATION DES CONSTITUANTS D’UN
MELANGE HOMOGÈNE Provoquer une hétérogénéité dans le mélange homogène :

• Mélange solide-liquide : provoquer l’apparition d’un solide dans une phase liquide

01 Rupture de phase • Mélange liquide-liquide : provoquer la démixtion en 2 phases liquides.

02 Changement d’état

03 Transfert de phase

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 1- Séparation par rupture de phase 1- Séparation par rupture de phase

a. Cas d’un mélange solide b. Cas d’un mélange liquide Ébullition à pression
ambiante
Augmentation de la
• C’est le plus délicat à séparer de cette manière et il faut faire appel à une
concentration
méthode de transfert de phase préalable Concentration sous-
pression réduite
On peut utiliser la séparation mécanique des cristaux selon leur couleur, leur
fluorescence ou leur forme. Rupture de phase
Modification de la
température
Exemple :
Diminution de la Addition d’un non
Séparation des tartrates par Pasteur
solubilité solvant

Relargage
(démixtion)
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1-1 Augmentation de la concentration 1-1 Augmentation de la concentration

Concentration à la pression atmosphérique Concentration à la pression réduite

• C’est un procédé simple qui consiste à chauffer la solution. • Elle a l’avantage d’opérer a une température plus basse,
• Il nécessite le plus souvent une augmentation importante de la température. ce qui permet d’éviter l’altération des produits
thermolabiles
Inconvénients :
▪ risque d’altération des produits thermolabiles l’opération est souvent réalisée dans un
évaporateur rotatif (ROTAVAP)
▪ risque d’intoxication
▪ risque d’oxydation à l’aire des substances fragiles
Évaporateur rotatif

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 1-2 Diminution de la solubilité ( précipitation)

Par modification de la température

L’augmentation de la température a en général un effet positif sur la solubilité d’un
solide dans un solvant.
Ce n’est pas nécessairement toujours le cas.
Exp : sulfate de sodium et du sulfate de cérium

Évaporateur rotatif 41 Variation de la solubilité en fonction de la température

42

1-2 Diminution de la solubilité ( précipitation) 1-2 Diminution de la solubilité ( précipitation)

Par addition d’un non solvant Par relargage « démixtion »

Si dans une solution, on ajoute un 2 éme solvant miscible au premier mais pas ou peu • C’est une technique qui consiste à séparer une substance en solution de son
solvant en introduisant une autre substance plus soluble qui prend sa place
solvant de la substance dissoute, une précipitation peut avoir lieu.
• Le phénomène est généralement observé avec des solutions aqueuses.
Exp : Solution AAS dans l’alcool, si addition de l’eau, précipitation de AAS
Le composé relargué est généralement organique, le relarguant est un sel minéral

Exemple
séparation des protéines en fonction de leur tendance à précipiter plus ou moins
vite quand on change la force ionique de la solution qui les contient.

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 2- Séparation par changement d’état 2-1 Distillation

Elle met à profit le passage de l’état liquide à

Principe
l’état gazeux d’un mélange liquide en utilisant
Il consiste à faire passer l’un des constituants d’un mélange homogène à l’état de vapeur, les volatilités différentes de ces constituants

→ Distillation, si le mélange initial est un liquide,

Les techniques de distillation sont de 4 types
→ Sublimation, s’il est solide. - La Distillation simple
- L’Hydrodistillation
- La Distillation fractionnée ou La distillation
avec rectification
- La Distillation sous pression réduite

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2-2 Sublimation 2-2 Sublimation

Elle met à profit le passage de l’état solide à l’état gazeux , en abaissant la L’échantillon est chauffé à une température et une pression inferieures au point
pression et en élevant la température triple de l’analyte, ce qui lui permet de se vaporiser sans passer par l’état liquide.

La condensation de la vapeur récupère l’analyte purifié.

Elle permet de séparer les substances volatiles des impuretés non volatiles

EXEMPLE :
La lyophilisation utilise le principe
physique de la sublimation

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 3- Séparation par transfert de phase
Séparation par
transfert de phase
• Elle consiste à transférer sélectivement un composé ou plusieurs composés du
mélange homogène d’une phase à une autre phase (réalisation d’équilibres entre
deux phases).
Extraction
Dissolution fractionnée Adsorption
liquide – liquide
• Ce transfert se base sur des propriétés physicochimiques des composés.

Extraction par Extraction par solvants

solvants miscibles non miscibles

• Osmose • Extraction simple

• Osmose inverse • Extraction répétée
• Dialyse • Extraction à
• Électrodialyse contre courant
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3-1 Dissolution fractionnée 3-2 Adsorption

La dissolution fractionnée est utilisée pour séparer un mélange de solides, dans • Processus au cours duquel des molécules d’un fluide (gaz ou liquide)
lequel l'un est soluble dans un solvant et l'autre ne l'est pas viennent se fixer sur la surface d’un solide.

• La phase constituée des molécules adsorbées est appelée « soluté » ou «

Exemple : adsorbat » et le solide est nommé « adsorbant ».
Mélange de KOH et de CaCO3

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 Tableau – Principaux adsorbants et leur caractéristiques
3-2 Adsorption
Surface spécifique Taille des
Adsorbants Porosité interne Applications
(m²/g) pores (nm)
La fixation sur le solide fait intervenir des forces complexes entre les solutés et l’adsorbant: Rétention des omposés
Charbons actifs 400 à 2 500 1,0 à 4,0 0,4 à 0,8 3 organiques non polaires ou
✓ Forces électrostatique, faiblement polaires

✓ Forces inductives, Tamis moléculaires

300 à 600 0,3 à 0,8 0,35 à 0,5 Adsorbant sélectif
carbonés
✓ Force de dispersion de London;
Séparation sélectivement des
✓ Liaisons hydrogènes, Zéolithes 500 à 800 0,3 à 0,8 0,3 à 0,4
mélanges gazeux ou liquides
✓ Des forces de transfert de charge Fixation des substances
Gels de silice 600 à 800 2,0 à 5,0 0,4 à 0,5 polaires, retient fortement les
composés à caractère basique

Pour que cette adsorption soit séparative il est adsorbe toute les molécules à
Alumines activées 200 à 400 1,0 à 6,0 0,3 à 0,6 l’exception des carbures
nécessaire que cette fixation soit réversible saturés aliphatiques

Adsorbants à base l’élimination des composés

100 à 700 4 ,0 à 20 0,4 à 0,6
de polymère organiques, la purification des
eaux
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Applications pharmaceutiques 3-3 Extraction liquide-liquide

• Analyse chromatographique L’extraction par un solvant présente de nombreux avantages qui rendent son
• Fixations des substances pyrogènes dans une solution destinée à l’usage
parentéral utilisation très générale. s’applique à de très nombreuses substances.

Ce procédé peut être utilisé aussi bien pour l’isolement de quantités

importantes de substance que pour celui de traces infimes.

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 Extraction par un solvant miscible Extraction par un solvant miscible
2- Osmose
1- Procédé par membrane
L’osmose, peu importe le sens qu’on lui donne, se résume à l’échange d’un solvant à travers des
Une membrane peut être définie comme étant une couche mince de matière, membranes semi-perméables.
permettant l’arrêt ou le passage sélectif de substances dissoutes, sous l’action d’une
force motrice de transfert. Tous ces échanges, directs ou indirects, sont gouvernés par la pression osmotique

Les procédés membranaire font partie de nouvelles technologies qui peuvent jouer un
rôle important dans e domaine de la purification

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Extraction par un solvant miscible L’expression de la pression osmotique est donnée par l’équation de Van’t Hoff :
Pression osmotique

ΠV=nRT n: nombre de mole de soluté

Π=RTC C: concentration molaire du soluté

Pour les solution concentrée, il est nécessaire de remplacer la concentration C par l’activité a
Lorsque l’équilibre osmotique est atteint, le niveau de l’eau s’est élevée du côté
concentré et cette colonne crée une pression que l’on appelle la pression osmotique
Π=RTa

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 Extraction par un solvant miscible Extraction par un solvant miscible

C’est le transfert d’un solvant d’une solution diluée

vers une solution concentrée à travers une Transfert opposé à l’osmose naturelle, obtenu en exerçant sur
membrane dite permsélective ( semi-perméable) la solution concentrée une pression supérieure à sa pression
osmotique

Les pressions appliquées en OI sont de l’ordre de 15 à 80 bars, et

Ce phénomène est naturel et ne dépend que de la concentration
souvent au moins égales (voire supérieures) au double de la
pression osmotique pour avoir des débits intéressants.

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Extraction par un solvant miscible

Applications
- L’application la plus célèbre de ce procédé de séparation est le dessalement de l’eau de mer. 3- Dialyse
- la concentration de solutions d’antibiotiques, acides aminés …
- la production d'eau ultrapure dans l'industrie chimique et pharmaceutique. • La dialyse est un procédé de séparation par
membrane des molécules ou des ions en
solution suivant un gradient de concentration.
Osmose inverse: Ph Eur
- Préparation de l’eau pour dilution des solutions concentrées pour hémodialyse.
- Préparation de l’eau purifiée
• Les membranes utilisées laissent filtrer les molécules petites et moyennes
- l’eau hautement purifiée obtenue par osmose inverse à double passage, combinée à d’autres (cristalloïdes) en retenant les plus grosses (macromolécules de structure colloïdale).
techniques appropriées telle l’ultrafiltration et la désionisation

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 Hémodialyse
Applications de la dialyse
C’est une technique d’épuration extrarénale destinée aux insuffisances rénales
• Purification des molécules protéiques, des polypeptides, des peptides, des chroniques (ou parfois aux insuffisances rénales aiguës) au moyen du « rein
enzymes et des hormones. artificiel »
• Débarrasser l’échantillon de sa matrice protéique
• Utilisée comme moyen de séparation dans les techniques FIA (Flux Injection • Dans ce procédé, le sang artériel du patient est pompé au niveau d’un dialyseur
Analysis) par un circuit de circulation extracorporelle.
• Purifier les produits à analyser avant HPLC • Le dialysat circule en continu et à contre-courant afin d’améliorer l’efficacité de la
dialyse. En sortie de dialyseur, le sang retourne dans l’organisme au niveau d’une
voie veineuse.

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Extraction par un solvant miscible

Applications de l’électrodialyse
3- Électrodialyse
• Le terme « électrodialyse » désigne le transfert d’ions à travers des membranes • Déminéralisation (dessalement) ou en minéralisation (augmentation de la teneur en ions de
sous l’effet d’un champ électrique. solutions)
• Utiliser un courant électrique pour accroître le transfert de matière des espèces • Purification du sérum sanguin
chargées par rapport à celui obtenu par une simple dialyse. • Purification des solutions d’enzymes
• Séparation des acides aminées
• Concentrer les métaux en solution

A1, A2 membranes anionique

C1, C2 membranes cationiques

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Merci pour votre attention

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