Chapitre III : Les réacteurs enzymatiques (en mode STR et CSTR)
1/ Introduction 2.3/ Réacteurs à enzyme libre dite aussi non
a/ Définition d’une réaction enzymatique : immobilisée
C’est une réaction biologique catalysée par des substances L’enzyme est en solution avec le mélange réactionnel. Le
particulières appelées « enzymes ». Ce sont des catalyseurs mélange est donc homogène (une seule phase liquide).
biologiques appartenant à la classe des protéines qui sont Le réacteur est soit couplé au module de l’Ultra filtration pour la
récupération de l’enzyme soit n’est pas couplé au module de
des polymères polypeptidiques.
l’Ultra filtration (sans récupération de l’enzyme).
Dans les réactions enzymatiques, le réactif s’appelle le Avec ou sans récupération de l’enzyme, il existe plusieurs
substrat (S). modes de fonctionnement :
b/ les réacteurs enzymatiques : - mode STR
Les réactions enzymatiques sont conduites généralement - mode CSTR.
dans des réacteurs dont le choix du design et de la 2.4/ Réacteurs à enzyme immobilisée dite aussi fixée
configuration est fait en considérant plusieurs paramètres
L’enzyme est fixée sur des billes ou support très dur par liaison
tels que le type de la réaction mise en œuvre, la nature de la
covalente.
molécule d’intérêt, la quantité à produire, la forme de
La réaction enzymatique est hétérogène:
l’enzyme utilisée (libre ou immobilisée) et son coût. - le catalyseur (enzyme) est une phase solide
Différents réacteurs enzymatiques industriels - le substrat est une phase liquide.
existent : Les lois de vitesse sont de la même forme que celles non
I. Réacteurs à enzymes libres quand le coût du catalyseur est immobilisés. La loi cinétique de M-M fait intervenir la limitation
suffisamment faible pour permettre son utilisation unique diffusionnelle.
Dans les bilans de matière, il intervient le phénomène de
II. Réacteurs à enzymes fixée qui permet la récupération et la
diffusion (les 2 lois de Fick) ainsi que le coefficient de THIELE φ
réutilisation du catalyseur quand celui-ci est au contraire
dans les lois cinétiques pour les supports poreux.
coûteux
le catalyseur (enzyme) est une phase solide
2-Modes de fonctionnement des réacteurs enzymatiques le substrat est une phase liquide.
Les lois de vitesse sont de la même forme que celles non
2.1/ Fonctionnements discontinus (ou mode STR): immobilisés. La loi cinétique de M-M fait intervenir la limitation
Dans les bioprocédés, les réactions sont généralement diffusionnelle.
conduites dans des réacteurs fermés où le catalyseur (sous Dans les bilans de matière, il intervient le phénomène de
forme libre ou immobilisée) est mis en contact avec les substrats diffusion (les 2 lois de Fick) ainsi que le coefficient de THIELE φ
dans une cuve fermée agitée pendant un temps donné durant dans les lois cinétiques pour les supports poreux.
lequel le pH et la température sont contrôlés. La récupération Il existe plusieurs modes de fonctionnement :
des produits qui suit chaque cycle de biotransformation se fait, - Mode STR avec dispersion de l’enzyme
généralement, par filtration, par centrifugation ou par - Mode lit fixe (réacteur à écoulement piston)
précipitation. - Mode lit fluidisé (réacteur à écoulement piston).
Inconvénients du discontinu
Malgré sa simplicité, ce type de réacteur comporte plusieurs 3/ Ecriture de la vitesse globale de la réaction dans les
inconvénients inhérents aux réacteurs fermés tels que la différents modes de réacteurs enzymatiques
variabilité de la qualité des produits, le coût de main d’œuvre lié
à la fréquence des démarrages et des arrêts, l’utilisation de le mode de réacteur, la réaction globale (dite élémentaire) s’écrit
grands volumes, la perte des enzymes souvent actives en fin de
cycle (pour les enzymes solubles) et la nécessité d’une étape Cas irrév : Cas rév :
supplémentaire de séparation des enzymes du milieu
de vitesse globale notée v tq :
réactionnel.
III. 2.2/ Fonctionnements continus :
Il existe, par ailleurs, plusieurs types de réacteurs enzymatiques
qui fonctionnent en continu. S : substrat de concentration s.
Parmi les différents modes de réacteurs continus, on distingue : P : produit de concentration p.
- Les réacteurs continus parfaitement agité en mode CSTR E : enzyme de concentration e. Il joue le rôle de catalyseur
- Les réacteurs à lit fixe (e=e0=constant).
- Les réacteurs à lit fluidisé
- Les réacteurs membranaires (REM) Calcul expérimental de v:
Notons que les trois derniers types sont considérés comme étant C’est la pente, à chaque instant, soit de la courbe de disparition de
des réacteurs en fonctionnement piston. S en fonction de t soit de la courbe de production de P en fonction
de t.
4/ Ecriture du bilan de matière En 2ème, formation du produit P (réaction lente mesure la vitesse
Equation de conservation de la matière : globale v) :
Pour le substrat S et le produit P :
Signification de la constante de M-M KM
A partir du mécanisme, écrire la vitesse d’accumulation du
complexe ES :
On appelle :
A t0 :
Sur une longue période (pendant 99% de la cinétique), la
L’écriture des bilans de matière en S et en P pour le mode STR et
concentration en es est constante donc :
le mode CSTR pour des réactions irrév et rév conduit à :
Expression du taux de conversion de S :
on appelle :
1er cas : Si p0 ≠ 0
Expérimentalement : 10-8 M < KM <10-2 M
1. caractéristique d’un couple enzyme-substrat et équivalente à
une concentration molaire
2. dite constante de dissociation du complexe es ou constante
d’équilibre.
2ème cas : Si p0=0 3. plus elle est élevée, plus l’action catalytique est rapide
4. l’inverse signifie l’affinité de E à S
Démonstration de la loi de M-M
Conservation de la matière pour :
5/ Etude de quelques cinétiques enzymatiques 1- le complexe es:
Les plus utilisées en industries: 2- le substrat: s0=s si condition de substrat saturant (b)
A/ Cinétiques homogènes, monosubstrats et irréversibles (sans 3- l’enzyme: e=e0-es (c)
inhibition) Par combinaison de (a), (b) et (c) :
B/ Quelques cinétiques enzymatiques homogènes avec On la remplace dans éq.7:
inhibition
A/ Cinétiques homogènes irréversibles (sans inhibition) :
Décrites par la loi de Michaelis et Menten (M-M)
C’est en 1913 que Michaelis et Menten (M-M) développèrent la
notion de combinaison enzyme - substrat (noté ES) et établirent
la relation fondamentale de la cinétique enzymatique
irréversible qui s’écrit :
Loi qui décrit la cinétique enzymatique en condition de substrat
saturant: S en large excès P/R à E tq: e0<<s0≈s et avec absence
d’inhibition par S. En pratique, le milieu réactionnel qui est un mélange complexe
vmax : vitesse maximale de la cinétique enzymatique. rencontre très souvent une limitation de la cinétique enzymatique
v : vitesse à un instant t égale à la vitesse initiale v 0 (v= v0). par le substrat qui devient non saturant d’où pas en excès P/R à E.
s0: concentration initiale en substrat. Que devient la cinétique de M-M avec limitation en substrat?
KM : constante de Michaelis et Menten (M-M).
Démonstration de la loi de Michaelis et Menten (M-M)
Mécanisme réactionnel de la théorie de M-M:
La réaction élémentaire est en fait décomposée en deux
réactions :
En 1er, formation du complexe ES (réaction rév et rapide):
A1/ Cinétiques enzymatiques homogènes en mode STR Chapitre III (suite): Les réacteurs
Bilan en S : enzymatiques (en mode STR et CSTR)
Or : D’où : RAPPELS
CAS IDEAUX
L’intégration de l’éq. (12) entre s0 et s donnera:
Equation de Michaelis et Menten (M-M) sans inhibition
1- En condition de substrat saturant (S en excès de
En fonction de X si p0=0 concentration constante s0) et en absence d’inhibition par S
2- Avec limitation du substrat (la concentration de S diminue
avec le temps) et en absence d’inhibition par S
CAS REELS
A2/ Cinétiques enzymatiques homogènes en mode CSTR
1- En général, des composés chimiques (effecteurs chimiques)
très variés peuvent intervenir sur les réactions enzymatiques
pour les activer ou au contraire les inhiber.
2- Très souvent, l’activité des enzymes Michaéliennes est
empêchée.
3- Les inhibiteurs (notés I) ont pour effet de diminuer la vitesse de
la réaction chimique, exemples : excès de substrat (fortes
concentrations en S); analogues structuraux de S; complexants
(agents chimiques capables de complexer un métal
indispensable à une protéine enzymatique); blocage des
groupements fonctionnels au niveau du site actif de E,….
B/ Etude de quelques cinétiques enzymatiques avec
inhibition (présence d’inhibiteur I)
Il existe différentes cinétiques d’inhibition, les plus souvent
réversibles et qui tendent donc vers un équilibre avec KI
constante d’équilibre avec inhibition.
1- Inhibition compétitive
2- Inhibition incompétitive
3- Inhibition non compétitive
4- Inhibition non compétitive par excès de S
1- Inhibition compétitive (ou association exclusive):
Par la présence de I, Vmax n’est pas modifié et K’M>KM
donc E moins affine pour S. Il faut augmenter la
Comparaison des réacteurs enzymatiques STR et CSTR : concentration en S pour atteindre Vmax.
Le phénomène peut se traduire par les équations suivantes:
Le réacteur industriel le plus performant sera celui qui
donnera une conversion X pour un temps très court. Si
qCSTR>tSTR, le réacteur agité fermé est le pus performant.
L’équation de M-M avec inhibition compétitive devient Détermination graphique de la nature de l’inhibition
alors:
À partir des données expérimentales (avec I), on trace le
graphe :
K'M : constantede M - M avec inhibition
KM : constantede M - M sans inhibition
Si s→∞ ; vmax (avec inhibition) = vmax (sans inhibition)
2- Inhibition incompétitive : Puis on compare la courbe obtenue à celle sans inhibition (sans I)
Par la présence de I, Vmax et KM sont tous deux modifiés.
L’inhibiteur I ne se fixe qu’une fois que ES est formé.
Le phénomène peut se traduire par les équations suivantes:
3- Inhibition non compétitive
Par la présence de I, Vmax est modifié et KM ne l’est pas.
Le phénomène peut se traduire par les équations suivantes:
4- Inhibition non compétitive par excès de substrat :
A partir d’une certaine concentration en S, v diminue: il y a
inhibition de la cinétique enzymatique par excès de S.
Le phénomène peut se traduire par les équations suivantes:
