République algérienne démocratique et populaire

Ministère de l'Enseignement Supérieur et de la recherche

scientifique
Université Constantine 1
Faculté des sciences de la nature et de la vie
Département de biologie animale
Mémoire présenté en vu de l’obtention du diplôme de mestre
Domaine : science de la nature et de la vie
Filière : biologie animale
Spécialité : Toxicologie et santé

Thème : Evaluation de l'activité antioxydante et

anti inflammatoire de la plante médicinal
algérienne Inula .viscosa

Présenté et soutenu par :

Deghdak Hala Le : 23/06/2014

Zaiter Rahma

Jury dévaluation :

 PRESIDENT DU JURY :Menade .A Professeur à L’UMCI

 Rapporteur : Ihoual safia Maitre Assistante à L’UMCI
 Examinateurs : Amrani Amel Maitre conférence à L’UMCI

Bouldjaje Radouane Maitre Assistant à L’UMCI

Année universitaire

2013/2014
 Remerciemements
Nos vifs remerciements :
A notre encadreur Melle Ihoual.S Maître assistante a Université
Mentouri Constantine à la faculté des sciences de la natur qui a dirigé
Nos travaux.
Et pour l’honneur qu’elle nous fait en acceptant de présider le jury
De cette thèse,
Monsieur MENADE. A, maître de conférences à l’Université Mentouri
de Constantine,
A nos enseignants de notre spécialité toxicologie et santé
Monsieur LALAOUI .K, professeur à l’UniversitéMentouri
de Constantine,
Monsieur Bouldjaje .R, maîtreassistant à l’Université Mentouri
de Constantine,
Mme Amrani .A, maître assistante à l’Université Mentouri
De Constantine,
Mes remerciements s’adressent aussi à tout le presonnel du
département de Biologie animale de l’Université de mentouri
Constantine,
A toutes perssones qui a participé de prés ou de loin,directement ou
Indirectement à la réalisation de ce travail.
ZaiterRahma
Deghdak Hala
 Sommaire
Liste d’abréviation

Liste de figure

Liste de tableau

Introduction générale

Chapitre I : revue bibliographique

I-Radicaux libres et stress oxydatif ………………………………………………….(1)

I-1-Radicaux libres …………………………………………………………………..(1)

I-2-Principale sources des ROS …………………..…………………………………(2)

I-2-1-Sources exogénes des ROS…………………………………………………… (2)

I-2-2-Sources endogénes des ROS…………………………………………………. (2)

I-3-Nature des radicaux libres …………………………………………………….(4)

I-3-1-Espèces réactives dérivées de l’oxygène(ERO) ……………………………(4)

II-Stess oxydatif ……………………………………………………………………(5)

II-1-Stress oxydant et ces conséquences biologiques ………………………………(6)

II-1-1-Les lipides ……………………………………………………………….(7)

a-L’initiation …………………………………………………………………(8)

b-La propagation…………………………………………………………… (8)

c-La terminaison……………………………………………………………. (8)

II-1-2-Les proteines…………………………………………………………… (8)

II-1-3-Les acides nucléique ……………………………………………………(8)

II-1-4-Systèmes de defenses antioxydants…………………………………….. (9)

a-Antioxidantsendogénes………………………………………………….. (10)

b-Antioxidants d’origine végétale………………………………………….. (11)

b-1-Tocophérols ………………………………………………………….(11)

b-2-Caroténoïdes………………………………………………………… (11)

III-Les composés phénoliques……………………………………………………… (13)

III-1-Définition………………………………………………………………….. (13)
 III-2-Les produits naturels des naturels des plantes et leurs activité biologique…. (13)

a)Les flavonoïdes……………………………………………………………. .(14)

b)Les tanins ………………………………………………………………….. (14)

c)Les terpènes ……………………………………………………………….. (14)

d)Lessaponosides……………………………………………………………..(15)

e)Les coumarines…………………………………………………………… .(15)

f)Les alcaloïdes……………………………………………………………… (15)

III-3-Les effets biologiques des polyphénols……………………………………... (15)

IV-Les flavonoïdes…………………………………………………………………… (16)

IV-1-Définition…………………………………………………………………… (16)

IV-2-Classification………………………………………………………………… (16)

a)Les flavonïdeshétérosides …………………………………………………....(18)

b)Lesflavonoïdes aglycones…………………………………………………… (18)

IV-3-Biosynthése des flavonoïdes…………………………………………………. (19)

IV-4- Effets biologiques et pharmacologiques des flavonoïdes… …………………(19)

IV-5- Activité antioxydante des flavonoïdes ……………………………………….(19)

IV-5-1- Piégeage direct de radicaux libres ………………………………………(20)

IV.5.2. Chélation des ions métalliques………………………………………………… (21)

IV-5-3- Inhibition enzymatique………………………………………………………. (22)

a-Inhibition de la xanthine oxydase………………………………………. (22)

[Link]été des flavonoïdes……………………………………………………….. (23)

IV.6.1-Propriétés anti-inflammatoires des flavonoïdes et effets sur le système

Immunitaire………………………………………………………………………….. (23)

IV-6-2- Propriétés antivirales et antibactériennes……………………………………. (24)

IV-6-3- Propriétés pro-oxydantes des flavonoïdes…………………………………… (25)

VI-6-4- D’AUTRES EFFETS BIOLOGIQUES ………………………………. (26)

V- La plante médicinale inulaviscosa………………………………………………………… (26)

V-1-Définition………………………………………………………………………... (26)

V-2- Répartition géographique………………………………………………………. (26)

V-3- Description de la plante………………………………………………………… (26)

V-4- Place dans la systématique……………………………………………………….. (27)

V-5- Principaux constituants…………………………………………………………. (29)

V-6- Propriétés / indications…………………………………………………………. (29)

V-7-Formes d’utilisation et dosage……………………………………………………(29)

V-8- Utilisation en médecine traditionnelle……………………………………………. (29)

VI- L’inflammation……………………………………………………………………. (30)

VI-1- L’inflammation aigue………………………………………………………….... (31)

VI-1-1- Phase vasculaire ……………………………………………………………….(31)

VI-1-2- Phase cellulaire………………………………………………………………. (32)

VI-1-3- Phase de résolution…………………………………………………….. (33)

VI-2- L’inflammation chronique…………………………………...………………….. (34)
VI-3- Médiateurs solubles et cellulaires de l'inflammation …………………………… (35).

VI-3-1- Médiateurs solubles ………………………………………………………….. (35)

VI-3-2- Médiateurs cellulaires de l'inflammation aiguë……………………………… (35)

VI-4- Anti-inflammatoire…………………………………………………………….. (36)

VI-4-1- Anti-inflammatoire non stéroïdiens……………………………………. (36)

VI-4-2- Anti-inflammatoires stéroïdiens………………………………………. (37)

VI-4-3- Anti-inflammatoires d’origine végétale………………………………. (38)

chapitreII : Matériel et Méthodes

I-Matériel ……………………………………………………………………………..(40)

I-1-Matériel biologique(Echantillonnage) ………………………………………….. (40)

I-1-1-Matériel végétal …………………………………………………………… ….40 )

 I-1-2-Réactifs chimiques et instrumentations ………………………………………(40)

II-Méthodes …………………………………………………………………………… (41)

II-1- Préparation de l’extrait végétale………………………………………………… (41)

II-1-1- Préparation de l’extrait total aqueux ……………………………………….. (41)

II-2- Screening phytochimique de l’extrait végétale ………………………………….. (41)

II-2-1- Mise en évidence des tanins … ……………………………………… (41)

II-2-2- Mise en évidence des saponosides ……………………………………… (41)

II-2-3- Mise en évidence des flavonoïde……………………………………………. (42)

II-2-4- Mise en évidence des composés réducteurs………………………………… (42)

II-2-5- Mise en évidence des alcaloïde…………………………………………….. (42)

II-3- Dosage des flavonoïdes …………………………………………………………. (42)

II-4- Dosage des polyphénols totaux…………………………………………………. (42)

II-5-DPPH (effet scavenger) ………………………………………………………. (43)

II-6-Activité Anti-inflammatoire ……………………………………………………. (44)

Chapitre III : Résultats et Discussion

I-Le rendement de l’extrait………………………………………………………………. (45)

II- Tests de mise en évidence de certains composés Phytochimiques …………………..(45)

III. Dosage des polyphénoles et des flavonoïdes ………………………………………. (46)

III-1-Dosagedes flavonoïdes …………………………………………………………. (47)

III-2-Dosage des composés phénoliques totaux………………………………………… (49)

III-3-Tests,invitro,de l’activité antioxydante ………………………………………….. (51)
III-3-1- Détermination de l’activité anti-radicalaire de l’extait aqueux par la méthode de
DPPH (effet scavenger) ………………………………………………………(51)
VI-Activité anti-inflammatoire in vitro …………………………………………………. (54)
Conclusion

Résume

Reference Bibliographique
 Liste des abréviations
BHA:Butylhydroxyanizole.

BHT:Butylhydroxytoluène.

BSA : albumine bovine serum.

DPPH : 1,1-diphényl-2-picryl-hydrazyl

mg/g : milligramme par gramme.

g:gramme.

A : Absorption.

UV: Ultra-violet.

I%: pourcentage d’inhibition.

R : rendement.

% : pourcentage.

AGPI : Acide gras poly-insaturé.

.

EA :extrait aqueux.

EAIV : extrait aquexde inulaviscosa.

EQ :Equivalent de quercétine.
EAG :Equivalent d’acide gallique.

SD :Standard deviation.

CI50 : Concentration inhibitrice à 50%.

ERO : Espèces réactives de l’oxygène ou oxygénées .

ROS :Reactiveoxygenspecies.

EAO: espèces réactives de l'oxygène.

NO :Monoxyded’azote.
SOD :Superoxyde dismutase

GPx:Glutathionperoxydase.

GSH :Glutathion réduit.

EQ:Equivalents de quercétine.

GSH-Px: Glutathioneperoxidise.

CAT:Catalase.

H2O2 : Eau Oxygénée ou peroxyde d’hydrogene.

LTB4 :Leukotriene B4.

ICAM :IntercellularAdhesionMolecule
Ils : Interleukines

LT :Leucotriène

PAMPs :Pathogen-associated molecular pattern

PKC :Protéine Kinase C

PMNs :Polymorphonucléairesneutrophiles

PRR :Pattern Recognition Receptors

TNF :Tumor Necrosis Factor

VCAM :Vascular Cell Adhesion Molecule

 Liste des figures
Figure 1:Cibles biologiques et endommagement oxydatifs induits par les EOR……………6

Figure 2:Les trois étapes de la peroxydation lipidique…………………………………..7

Figure 3:Régulation de la production d’espèces reactives de l’oxygène par les systèmes de

défense…………………………………………………………………9

Figure 4:Balance radicaux libres / antioxydants……......................................................10

Figure 5:Effets biologiques des polyphénols…………………………………………..16

Figure 6:Réaction des flavonoïdes avec les EOR……………………………………....20

Figure7:Flavonoïdes et leurs sites proposés pour la chélation des ions métalliques……..….22

Figure 8:Aspect morphologique de la plante inulaviscosa………………………………28

Figure 9:Formation du transsudat et d’exsudat………………………………………...32

Figure 10:Processus de migration des neutrophiles a travers les vaisseaux sanguins………..34

Figure 11:Mécanisme d’action des AINS……………………………………………...37

Figure 12:Mécanisme d’action des glucocorticoïdes……………………………………38

Figure 13:courbes d’étalonnage de la quercétine et rutine……………………………….47

Figure 14 :Teneur en flavonoïdes totaux de [Link]…………………………. …………48

Figure 15 : Courbe d’étallonage de l’acide gallique……………………………………..49

Figure 16 : Quantité des phénols totaux dans l’extraitaqueux d’acide galique……………...50

Figure 17 : Réaction d’un antioxidant avec le radical DPPH……………………………. 51

Figure 18 : Poucentage d’inhibition de BHT…………………………………………...52

Figure 19 : Pourcentage d’inhibition de l’extrait aqueux de [Link]………………………….52

Figure 20 : La concentration d’extrait [Link] de BHT qui inhibent 50 % du radical

DPPH ……………………………………………………………………………….53

Figure 21 : Principauxéléments de l'activité antioxydante des flavonoïdes………………..54

 Liste des tableaux
Tableau 1: Les differentes espèces radicalaires impliquées dans le stress oxydant…………….

Tableau 2: Principales sources des ROS (endogéne et exogéne)…………………………….

Tableau 3:Principaux antioxydants non enzymatiques et sources alimentaires associées

Tableau 4: Principales classes des flavonoïdes……………………………………………

Tableau 5 : Quelques usages traditionnels du inula viscosa……………………….

Tableau 6 : Exemples de plantes médicinales douées d’activités anti-inflammatoires………..

Tableau 7 :Le rendement des extraits de [Link]……………………..

Tableau 8 :Analyse phytochimique préliminaire d’extrait aqueux de [Link]

Tableau 9 : Les concentrations des composés phénolyques….

Tableau 10 :Pourcentage d’inhibition de la dénaturation de BSA à la concentration

de250µg/ml.…………………….
 INTRODUCTION GENERALE

INTRODUCTION GENERALE
L’utilisation des plantes medecinales par l’homme est une pratique antique[1]. De nos jours la
majorité des habitants du globe terrestre utilisent de très nombreuses plantes, compte tenu de
leurs propriétés aromatiques, comme source d’assaisonnement ou comme remède en médecine
traditionnelle. Cependant, cette utilisation ne se base sur aucun critère scientifique, elle tient
compte simplement des observations au cours des siècles.

Actuellement, plusieurs questions sont soulevées concernant la sécurité des produits chimiques
synthétiques utilisés en médecine ou dans l’industrie alimentaire. En effet, la peroxydation des
lipides produites au cours des processus de fabrication et de stockage des aliments sous l’action
des radicaux libres de l’oxygène (ROS) conduit à la perte de la qualité et de la sécurité des
aliments. Les antioxydants de synthèse généralement utilisés en industrie alimentaire pour
retarder l’oxydation des lipides se sont avérés responsables d’effets indésirables. De plus, l’usage
excessif d’agents antibactériens chimiques dans la médication humaine ainsi que dans l’élevage
animal conduit à l’apparition de souches bactériennes résistantes [2].

Les extraits bruts des plantes commencent à avoir beaucoup d’intérêt comme source potentielle
de molécules naturelles bioactives. Ils font l’objet d’étude pour leur éventuelle utilisation comme
alternative pour le traitement des maladies infectieuses et pour la protection des aliments contre
l’[Link] comme des anti-inflammatoires,et des anti-analgésiques.

Ce travail vise à étudier l’activité anti-iflammatoire et antioxydante de l’extraits brut de la Plante

aromatique et medecinale inula viscosa. qui appartiennent respectivement àla famille des
asteraceae. Elle est parmi la famille de plantes la plusutilisée comme source mondiale d’épices et
d’extraits à qualité médicale intéressante.

La sélection de cette plantes’est fondée sur les critères suivants :sont parmiles plus populaires
plantes aromatiques et medicinales utilisées dans le monde entier, leur utilisation fréquente par
nospopulations dans le domaine culinaire et celui de la médecine traditionnelle, à coté du fait
queleurs huiles essentielles sont utilisées dans les industries alimentaires, pharmaceutique
etcosmétique, leur efficacité dans le traitement symptomatique de troubles de l’appareil
digestifsupérieur reconnue traditionnellement, elles représentent récemment un sujet de
recherchescientifique intéressant.

Notre travail sera réparti en de trois parties :

 INTRODUCTION GENERALE

- une partie relative à l’étude bibliographique, de l’introduction,les radicaux libre et stress

oxydatif , la plante, des flavonoïdes,activité anti inflammatoire,et antioxidante des activités
recherchées.

- Une 2eme partie réservée à l’étude expérimentale la Présente des méthodes et les techniques
utilisées pour la réalisation de ce travail.

-Une 3emepartie presente la discussion et résultat obtenu .

CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

[Link] libres et Stress oxydatif

I-1. Radicaux libres

Un radical libre est une molécule ou un atome ayant un ou plusieurs électrons non appariés, ce
qui le rend extrêmement réactif. L'ensemble des radicaux libres et de leurs précurseurs est ouvent
appelé espèces réactives de l'oxygène (EAO)[3].

Les radicaux libres sont électriquement neutres ou chargés (ioniques) et comprennent l'atome
d'hydrogène, le radical hydroxyle, l'anion superoxyde, le peroxyde d'hydrogène (eauoxygénée),
etc.

Les radicaux libres sont des espèces chimiques très instables qui jouent un rôle dans l’action de
certains traitements anticancéreux, de même qu’à l’origine du vieillissement.

Leur structure comprend un électron célibataire qu’ils cherchent à apparier en attaquant et en

endommageant les molécules voisines. L’appellation “ dérivés réactifs de l’oxygène ” n’est pas
restrictive. Elle inclut les radicaux libres de l’oxygène proprement dit, mais aussi certains dérivés
oxygénés réactifs non radicalaires dont la toxicité est importante tel peroxyde d’hydrogène
(H2O2), peroxynitrite (ONOO. ) [4]. (Tableau 1).

Tableau 1 : Les différentes espèces radicalaires imliquées dans le stress Oxydant[5].

Radicaux libres primaires et secondaires Dérivés oxygénés non radicalaires

O2°- =Radical superoxyde. 1/2O2= Oxygènesingulet.

HO2° =Radical perhydroxyle. H2O2 = Peroxded’hydrogène.
OH =Radical hydroxyle. ONOOH =Nitroperoxyde.
RO2° =Radical peroxyle. ONOO- = peroxynitrite.
RO° =Radical alkoxyle.
ROOH =HydroperoxydeOrganique.
NO° = monoxide d’azote.

1
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

I-2 Principales sources des ROS

Les ROS sont produits continuellement a` l'intérieur et à l'extérieur de la cellule eucaryote par
divers mécanismes. On parle donc de sources endogènes et de sources exogènes.

I-2-1 Sources exogènes des ROS

Les radiations X ou gamma peuvent par différents mécanismes faire apparaitre des radicaux
libres en scindant la molécule d’eau en deux radicaux. Les rayonnements UV sont capables de
produire des anions superoxydes ou de l’oxygène singulet après activation de
photosensibilisants.

Une large variété de xenobiotiques (toxines, pesticides, herbicides, etc…) et médicaments

(antibiotiques, anticancéreux, etc...) peuvent contribuer à la production des ROS qui se

Forment comme un des produits de leur métabolisme [6].

I-2-2 Sources endogènes des ROS

Dans la cellules, de nombreux systèmes enzymatiques sont capables de générer des oxydants:

[7]

-Les NAD(P)H oxydases sont des enzymes présentes dans la paroi vasculaire et qui génèrent

O2●- en utilisant NADH ou NADPH comme substrat.

- La xanthine-oxydase joue un rôle important dans la production des ROS (particulièrement

O2●-et H2O2), lors de l’ischémie/ reperfusion.

- Lors du métabolisme de l’acide arachidonique, ce dernier peut être oxydé soit par les

cyclooxygenases, soit par les lipooxygenases (métallo-enzymes à fer), pour former entre autre
des hydroperoxydes qui sont des précurseurs de leucotriènes, puissants médiateurs
del’inflammation. De plus, dans l’organisme, l’oxygène est réduit à 95 % dans les mitochondries
par voieenzymatique en molécule non toxique comme H2O. Cependant, il peut subir une
réduction monoélectronique et former une espèce beaucoup plus réactive comme l’anion
superoxydeO2●-. Cet anion n’est pas le radical le plus délétère, cependant il peut donner

2
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

naissance comme indiquée précédemment à des espèces beaucoup plus réactives comme le
radical hydroxyle.

HO●. Ces ROS mitochondriales pourraient intervenir dans l’oxydation des LDL (Valkoet
al.,2007)[6].(Tableau2).

Tableau 2 : Principales sources des ROS (endogènes et exogène) [8,9].

Sources endogénes Sources exogénes

NADPH oxydases. Tabagisme.

Chaînes respiratoire mitochondriale. Cytokines pro inflammatoires.

Xanthine oxydases. Chémothérapie.

Atherogénèse Radiations ionisantes.

Lipo-oxygénases. Radiations Ultrat Violet.

Phagocytes. Toxiques environnementaux.

Inflammation Champs électriques.

Etat d’ischémie –reperfusion Xénobiotiques prooxydants.

3
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

I-3- Nature des radicaux libres

I-3-1 Espèces réactives dérivées de l’oxygène (ERO)

L’oxygène doit sa grande réactivité à sa structure particulière. En effet, il possède deux

électronscélibataires non appariés sur sa couche orbitale externe. Cette molécule est essentielle
au bon Fonctionnement de l’organisme. [10]

-l'anion superoxyde : O2•-La molécule d'oxygène, mise en présence d'une quantité d’énergie
suffisante, peut acquérir un électron supplémentaire et former ainsi l'anion superoxyde. Cet anion
intervient comme facteur oxydant dans de nombreuses réaction.

-le radical hydroxyle : OH•. Il est très réactif vis-à-vis des structures organiques et joue un rôle
initiateur dans l'auto-oxydation lipidique[11].

-Oxygène singulet:1O2
Lorsque de l’énergie est apportée à l’oxygène, celui-ci passe à l’état singulet qui représente la
forme activée. C’est une forme très énergétique de grande réactivité qui peut oxyder de
nombreuses molécules. Il est formé à partir de l’ion superoxyde selon la réaction suivante

(sous l’action de la lumière)[12]

4
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

II. Stress oxydatif

Le stress oxydatif apparaît donc quand un déséquilibre se forme dans la balance anti/ pro-
oxydants. C’est seulement à ce moment que les ERO vont exercer leur action délétère sur
l’organisme. Les radicaux libres sont responsables de dommages sur toutes les molécules
biologiques comme les lipides, les protéines, les acides nucléiques, ou leshydrates de carbone
[3].

Les mécanismes d’oxydation des composés insaturés biologiques (acides gras, caroténoïdes,
polyphénols…) sont souvent des réactions radicalaires avec l’oxygène moléculaire et présentent

troisphases principales.

Une phase d’initiation qui peut être due à l’intervention d’un radical hydroxyle HO_ qui arrache
un atome d’hydrogène en position

. .
RH + HO →R + H2O

L’arrachement du proton est facilité tant par la chaleur (agitation moléculaire) que par les
rayonnements ou les catalyseurs (métaux tels que Cu, Fe, Co, Mn, Ni…).

•
Une phase de propagation : en présence d’oxygène, il se forme un radical peroxyde (ROO )

qui déstabilise une deuxième molécule d’acide gras polyinsaturés AGPI et conduit à un
hydroperoxyde lipidique (ROOH) et à un nouveau radical, assurant ainsi lapropagation du
processus :

. .
R + O2 → ROO
. .
ROO + RH→ROOH + R

Une phase de terminaison, où se recombinent différents radicaux formés pour aboutir à des
. .
composés stables : R + R →RR
. .
ROO +R →ROOR
. .
ROO + ROO →ROOR + O2

5
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

II.1. Stress oxydant et ces conséquences biologiques

Le stress oxydatif réfère à une perturbation dans la balance métabolique cellulaire durant a
quelle, la génération d’oxydants accable le système de défenses antioxydantes, que ce soit par
uneaugmentation de la production d’oxydants et/ou par une diminution des défenses
antioxydantes [11]. Ce déséquilibre peut avoir diverses origines, citons la surproduction endogène
d’agents prooxydants d’origine inflammatoire, un déficit nutritionnel en antioxydants ou même
une exposition environnementale à des facteurs pro-oxydants (tabac, alcool, médicaments,
rayons gamma, rayons ultraviolets, herbicides, ozone, amiante, métaux toxiques) [13, 11, 14].
L’accumulation des EOR a pour conséquence l’apparition des dégâts cellulaires et tissulaires
souvent irréversibles dont les cibles biologiques les plus vulnérables sont les protéines les lipides
et l’acide désoxyribonucléique [8, 15] (Figure1)

[Link] biologiques et endommagement oxydatifs induits par les EOR [17].

6
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

II.1.1. Les lipides

Les acides gras polyinsaturés (AGPI) sont la cible privilégiée des EOR en raison de leurs
hydrogènes bis allyliques facilement oxydables. Comme ces derniers sont les lipides maj
majeurs des
membranes cellulaires et des lipoprotéines, on comprend leurs vulnérabilités particulières. L
Les
produits d’oxydation formés peuvent participer en tant que second messager à la régulation de
fonctions métaboliques, de l’expression des gènes et de la prolifération cellulaire. Ils peuvent
aussi, et surtout, se comporter comme des substances toxiques responsable des
dysfonctionnements et d’altérations cellulaires (perte d’acides
d’acid gras polyinsaturés, dimi
diminution de
la fluidité membranaire, modification de l’activité des enzymes et des récepteurs membranaires,
libération du matériel à partir du compartiment subcellulaire [18, 19].. La peroxydation lipidique,
se déroule
oule en trois phases suivantes:
suivantes (illustrées par la figure2).

[Link]
Les trois étapes de la peroxydation lipidique [21]
[21].

7
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

a) l’initiation: l’attaque par un radical OH• du groupement méthylène présent entre deux
doubles liaisons d’acide gras polyinsaturés produit un radical carboné R• (OH• enlève un
atome d’hydrogène du CH2 puis les doubles liaisons subissent un réarrangement moléculaire
conduisant à la formation de diènes conjugués), en présence d’O2 le radical carboné est
transformé en radical peroxyleRO•2 [20].
b) la propagation: le radical RO•2 enlève un hydrogène à un nouvel AGPI voisin qui à son
tour produira un radical R• puis un radical RO•2, une réaction en chaîne s’installe. En
présence de métaux de transitions, les hydroperoxydes formés peuvent subir un clivage au
niveau des liaisons C-C pour donner naissance à divers produits de décompositions ; le
malondialdehyde (MDA) et le 4-hydroxynonéal représentant les produits les plus toxiques de
la peroxydation lipidique [20,19].
c) la terminaison: cette phase consiste à former des composés stables issus de la rencontre
entre deux espèces radicalaires ou le plus souvent par la réaction d’un radical avec une
molécule antioxydante dite ‘briseur de chaîne’ [17].
II.1.2. Les protéines
Les acides aminés des protéines sont la cible des EOR, soit au niveau de leur chaîne
latérale, avec formation de produits d’oxydations, soit au niveau de la liaison peptidique,
entraînant la fragmentation de la chaîne [22]. Si la majorité des acides aminés peuvent être
oxydés par les EOR, les acides aminés soufrés (cystéine et méthionine) et aromatiques
(tyrosine, tryptophane) sont les plus sensibles. L’oxydation des acidesamines génère des
groupements hydroxyles et carbonyles sur les protéines mais peut également induire des
modifications structurales plus importantes comme des réticulations intra ou
intermoléculaires, ce qui affecte leurs fonctionnements, antigénicités et leurs activités, [20,
19, 6]. Les protéines modifiées deviennent généralement plus sensibles à l’action des
protéases et sont alors dirigées vers la dégradation protéolytique au niveau du protéasome
[23].

II.1.3. Les acides nucléiques

Les bases puriques, pyrimidiques et le désoxyribose sont la cible privilégiée des EOR, ils
sontalors transformés en produits de fragmentations et en bases oxydées, [24]. Les EOR ont une
grande affinité de réaction avec certaines bases constitutives de l’ADN. La guanine est ainsi
facilement transformée en 8-hydroxy-2’- déoxyguanosine (8-OH-dG) qui est normalement
éliminée par des enzymes de réparation de l’ADN qui peuvent, elles aussi, être victimes de

8
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

l’action des radicaux libres. Si ces systèmes de protection sont débordés ou défectueux, les
altérations du matériel génétique s’accumuleront au
au sein de l’ADN représentant ainsi la première
étape impliquée dans la mutagenèse, la carcinogenèse
car et le vieillissement [19
19].

II.1.4.. Systèmes de défenses antioxydants

Le maintien d’un niveau non cytotoxique des EOR est assuré par des systèmes d’antioxy
d’antioxydants.

Un antioxydant peut être défini comme toute substance capable, à concentration relativement
faible, d’entrer en compétition avec d’autres substrats oxydables et ainsi retarder ou empêcher
l’oxydation de ces substrats [25
25].. Les cellules utilisent de nombreuses stratégies anti
anti-oxydantes
et consomment beaucoup d’énergie pour contrôler leurs niveaux d’espèces réactives de ’oxygène
(Figure3).. La nature des systèmes antioxydants diffère selon les tissus et les types cellulaires et
selon qu’on se trouve dans le milieu intracellulaire ou extracellulaire. Les défenses antioxydantes
de notre organisme peuvent se diviser en systèmes enzymatiques et systèmes non enzymatiques
[26].

Figure3.Régulation
Régulation de la production d’espèces réactives
réactives de l’oxygène par les systèmes de
défenses antioxydants [13].

9
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

a. Antioxydants endogènes
Les défenses antioxydantes de l’organisme peuvent se diviser en systèmes antioxydants
nzymatiques (figure4) :

Figure4: Balance radicaux libres /antioxydants [27]

Un système de défense primaire:

primaire: composé d’enzymes et de substances anti oxydantes

·
-la superoxydedismutase (SOD) :diminue la durée de vie de l’anion superoxyde O2 .

-La catalase : transforme le peroxyde d’hydrogène (H2O2) en simple molécule d’eau

d’eau.

-La glutathion peroxydase (GPx) : détruit le peroxyde d’hydrogène et les peroxydes lipidiques
lipidiques.

-Les molécules piégeurs : le glutathion (GSH), l’acide urique, les protéines à groupement thiols,
biquinone, …etc.

Un système de défense secondaire : composé d’enzymes

es protéolytiques, des phospholipases, des

ADN endonuclease et ligase, des macroxyprotéinases.

10
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

b. Antioxydant d’origine végétale

Les plantes constituent des sources très importantes d’antioxydants. Les antioxydants naturels dont
l’efficacité est la plus reconnue aussi bien dans l’industrie agroalimentaire que pour la santé humaine

sont: les tocophérols, les caroténoïdes et les polyphénols. [12]

b.1. Tocophérols :

La grande stabilité des huiles végétales, dans les conditions d’oxydation, est due à la présence
d’untaux élevé d’antioxydants naturels dont les plus importants sont les tocophérols qui se
présentent sous quatre formes isométriques: α, β, δ et γ. Les tocophérols protègent contre
l’oxydation naturelle des acides gras, en particulier les acides gras polyinsaturés (AGPI). Ont
signalé qu’une molécule de tocophérol peut protéger 103 à 106 molécules d’AGPI. [12].

Exemple de tocophérol

La vitamine E
La vitamine E est un antioxydant majeur liposoluble. C’est un composé amphiphile, capable de
s’insérerdans les membranes cellulaires : globules rouges, cellules endothéliales, cellules
musculaires, neurones (c’est le seul antioxydant du système nerveux central).

b.2. Caroténoïdes

Les caroténoïdes sont, avec la chlorophylle et les anthocyanes, les pigments les plus répandus
dans la nature. A ce jour, plus de 600 caroténoïdes ont été identifiés, mais seule une quarantaine
est retrouvée régulièrement dans l’alimentation humaine. Une trentaine de caroténoïdes et de
leurs métabolites a été identifiée dans le plasma et les tissus humains, mais 6 caroténoïdes sont
majoritaires : le β-carotène, le lycopène, la lutéine, la β-cryptoxanthine, l’α- Carotène, et la
zéaxanthine. [12] Les sources alimentaires de ces antioxydants naturelles sont présentées dans le
(tableau3)

11
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

Tableau 3: Principaux antioxydants non enzymatiques et sources alimentaires associées [14]

Principaux nutriments Sources Alimentaires

Antioxydants
Vitamine C Agrume, melon, brocoli, fraise, Kiwi, chou, poivron

Vitamine E Huile de tournesol, de soja, de maïs, beurre, œufs,noix

β-carotène Légumes et fruits orangés, et vert foncés

Sélénium Poisson, œufs viandes, céréales, volaille

Zinc Viande, pain complet, légumes verts, huîtres, produits laitiers

Flavonoïdes Fruits, légumes, thé vert

Acides phénoliques Céréales complètes, baies, cerises

Tanins Lentilles,thé, raisins, vin

Métabolisme de Caséine, Lactalbumine(petit-lait), produit laities

cystéine, glutathion Brocoli, chou œufs, poissons, viandes

12
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

III. Les composés phénoliques

III.1. Définition

Les composants phénoliques sont des métabolites secondaires caractérisés par la présence d’un
cycle aromatique portant des groupements hydroxyles libres ou engagés avec des glucides.

Ils sont présents dans toutes les parties des végétaux (racines, tiges, feuilles, fleurs, pollens,
fruits, graines et bois); et sont impliqués dans de nombreux processus physiologiques comme la
croissance cellulaire, la rhizogénèse, la germination des graines et la maturation des fruits.

Les principales classes des composants phénoliques sont les acides phénoliques (acide caféique,
acide hydroxycinnamique, acide ferulique, acide chlorogenique…), les flavonoïdes, les tanins, et
les [Link] composants phénoliques sont des molécules biologiquement actives, ils sont
largement utilisés en thérapeutique comme vasoconstricteurs, anti-inflammatoires, inhibiteurs
enzymatiques, antioxydants et antiradicalaires, antimicrobiens. [28]

III.2. Les produits naturels des plantes et leurs activités biologiques

Les plantes produisent un grand nombre de composés, Ils ont des intérêts multiples mis à profit
dans l’industrie : en alimentation, en cosmétologie et en dermopharmacie. Ils se sont surtout
illustrés en thérapeutique et dépassent actuellement 100 000 substances identifiées. Les
produits naturels des plantes peuvent êtres classés en deux catégories, les métabolites primaires
et les métabolites secondaires [29].

 Les métabolites primaires : ils ont un rôle essentiel pour le métabolisme et le

développement végétal, se retrouvent dans toutes les espèces;
 Les métabolites secondaires: ils ne sont pas produits directement lors de la photosynthèse
mais résultent de réactions chimiques ultérieures [29]. Ils sont des molécules qui ne
participent pas directement au développement des plantes mais plutôt interviennent dans les
relations avec les stress biotiques, abiotiques, microorganismes pathogènes…etc. On conçoit
donc que la plante puisse développer un métabolisme particulier lui permettant de synthétiser
les substances les plusdiverses pour se défendre. Ils sont différents dans les différentes
espèces [30]. Parmi eux : les terpènes, les flavonoïdes, les tannins, les saponosides, les
alcaloïdes et les coumarines [29].

13
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

a. Les flavonoïdes

Le terme flavonoïde désigne une très large gamme des composés naturels appartenant à la
famille des polyphénols[31]. Qui peuvent être rencontrés dans une large variété de fruits et de
légumes consommés quotidiennement par l'être humain. En plus de leur rôle dans la
pigmentation des végétaux, certains de ces composés présentent des activités biologiques
d'intérêts, telles que des actions anti- antioxydantes [32], anti-inflammatoires [29, 31, 32],
antihypertenseurs, anti-influenza [29], antifongiques et antivirales [29,33].

b. Les tannins

Les tannins sont des polyphénols polaires [34] très abondants chez les angiospermes, les
gymnospermes et les dicotylédones [35], existent dans presque chaque partie de la plante:
feuilles, fruits et racines, ils sont caractérisés par leur capacité antioxydante et leur propriété
thérapeutique [34] ; Les tannins permettent de stopper les hémorragies et de lutter contre les
infections [36]. Ils sont divisés en deux groupes:

 Tannins hydrolysables qui sont des esters d’un sucre (généralement le glucose) et d’un
nombre variable de molécules d’acide phénolique (acide gallique ou acide
héxahydroxydiphénique (HHDP);
 Tannins condensés qui sont formés par la condensation des unités flavan-3-ols et flavan-
3-4-diols[31].

c. Les terpènes

Les terpènes forment un groupe de produits naturels largement représenté, Ils sont formés par la
polymérisation des unités à 5 atomes de carbone. Ils constituent le principe odoriférant des
végétaux. Cette odeur est due à la libération des molécules très volatiles.

Des études faites sur des animaux ont montré que certaines classe des terpènes telle que : le béta
sitostérol, comme son glucoside, possèdent des propriétés anti-inflammatoire, antipyrétique,
antinéoplasique et immuno-modulatrice [29]. Aussi, les terpènes sont largement utilisés dans le
secteur de la nutrition humaine (saveur, conservateur) et l’industrie du parfum [37].

14
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

d. Les saponosides

Mot latin « sapon », l’herbe à savon [38] Ils sont des métabolites secondaires hétérosidiques
présents dans de nombreuses plantes et quelques organismes marins. De nature amphiphile, ces
molécules sont connues pour leur propriété tensio-active ou encore leur capacité à lyser les
globules rouges (hémolyse) [39].

e. Les coumarines

Se trouvent dans de nombreuses espèces végétales et possèdent des propriétés très diverses. Ils
sont capables de prévenir la peroxydation des lipides membranaires et de capter les
radicaux hydroxyles , superoxydes et peroxyles. Les conditions structurales requises pour
l’activité antiperoxydante des coumarines sont similaires à celles signalées pour les flavonoïdes
[36].

f. Les alcaloïdes

Les alcaloïdes sont des molécules d'origine naturelle. On les trouve principalement chez les
végétaux, mais aussi chez les animaux et chez certains micro-organismes [38]. Ils ont une nature
basique, contenants de l’azote [29] et sont pharmacologiquement actifs, ils sont utilisés aussi
comme antalgiques majeurs (morphine), pour combattre l’excès d’acide urique (colchicine),
comme substance paralysante/stimulante (curare, caféine), comme anticancéreux (vinblastine,
vincristine).ils sont aussi de forts agents antimicrobiens [40].

III.3. Effets biologiques des polyphénols

Les composés polyphénoliques sont d’ailleurs de plus en plus utilisés en thérapeutique [41]. De
nombreux travaux suggèrent que les polyphénols participent à la prévention des maladies cardio-
vasculaires [42]. Leur consommation se traduit par une augmentation transitoire de la capacité
antioxydante du plasma dans les heures qui suivent le [Link] polyphénols sont associés à de
nombreux processus physiologiques dans la qualité alimentaire,impliqués lorsque la plante est
soumise à des blessures mécaniques. La capacité d’une espèce végétale àrésister à l’attaque des
insectes et des microorganismes est souvent corrélée avec la teneur en composés phénoliques
[43].Ces composés montrent des activités antioxydantes [44,45] ,anticarcinogènes,
antiinflammatoires,antiathérogènes,antithrombotiques analgésiques, antibactériennes, antiviraux
[46], anti-allergènes,vasodilatateurs [47,48](figure5).

15
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

Figure5 Effets biologiques des polyphénols [49].

Figure5:

IV. Les flavonoïdes

IV.1. Définition

Les flavonoïdes désignent une très large gamme de composés naturels appartenant à la famille
des polyphé[Link] molécules sont considérées comme des pigments
pigments quasiment universels des
végétaux; ils sont responsables de la coloration des fleurs, des fruits et parfois des feuilles. Ils
existent le plus souvent à l’état naturel sous forme d’hétérosides.

Les flavonoïdes sont des dérivés benzo-γ-pyran.

benzo pyran. Leur structure de base est celle d’un
diphénylpropane à 15 atomes de carbone (C6-C3
(C6 -C6),
C6), constitué de deux noy
noyaux aromatiques
(ou anneaux) que désignent les lettres A et B, reliés par un hétérocycle oxygénés, qui désigne la
lettre C.

IV.2. Classification

La classe des flavonoïdes comporte à elle seuleplus

seuleplus de 4000 substances qui ont été isolées et
identifiées à partir
rtir des milliers des plante,
pl , qu’endivise en plusieurs catégories: Les flavones,les
flavonols et les dihydroflavonols, les isoflavonoïdes, les biflavonoides, les flavanones, les

16
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

flavanols, les flavanediols(leucocyanidines), les anthocyanidines, les chalcones et les

dihydrochalcones, les aurones [50]. (tableau4)

Tableau4 :Principales classes des flavonoïdes

Les flavonoïdes Exemples Aliments Les caractéristiques

Flavones L'apigénine Lutéoline Peau des fruits ,persil, Les Flavones et
,Chrysine et céleri . Flavonols sont
caractérisés par la
présence d'une double
liaison entre C2 et C3,
Flavonols Quercétine Poireau, radis, thé noir, et l'existence
Kaempférol
oignon, pomme, olive et d'hydroxyle en C3 dans
Myricétine
brocolis les flavonols .

Flavanones Naringénine, Poireau, radis, thé noir, Ces molécules sont

Eriodictyol
oignon, pomme, olive, caractérisées par
Taxifoline
brocolis, et vin rouge l’absence de double
liaison entre C2 et C3et
Dihydroflavonols Dihydrokaempfér-ol Fruits de genre citrus par la présence de
centre d’asymétrie ,La
seule différence entre
ces deux classes est la
présence d'hydroxyle en
C3 dans les
dihydroflavonols
Anthocyanidols Cyanidol, malvidol et Raisin, fraise et Caractérisées par
l’engagement de l’OH
apigénidol framboise
en C3 dans une liaison
héterosidique.

17
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

Chalcones Butéïne et phlorétine / Les chalcones,

dépourvues de
l’hétérocycle central,
sont caractérisées par la
présence d’un chainon
tricarboné, cétonique
α,β-insaturé .
Aurones Sulfurétine Caractérisées par une
/ structure de2-
benzylidènecoumarone .

Isoflavones Genisteine, Daidzeine Légumineuses (soja, et Caractérisés par leur

pois chiches verts), et Variabilité structurale
graines de tourne sol dont l'attachement du
cycle B se fait en [Link]
ont un effet préventif
sur les cancers du sein .
a. Flavonoïdes hétérosides: la partie osidique peut être mono, di ou trisaccharidique. En général, les
hétérosides sont hydrosolubles et solubles dans les alcools, bon nombre d’entre eux ont une
hydrosolubilité plutôt faible (rutoside, hespéroside).
b. Les flavonoïdes aglycones :Les génines sont, pour la plupart, solubles dans les solvants organiques
[Link] lipophiles des tissus superficiels des feuilles (ou des frondes) sont directement extraits par
des solvants moyennement polaires (dichlorométhane) ; il faut ensuite les séparer des cires et des
graisses extraites simultanément (on peut certes laver d’abord àl’hexane, mais la sélectivité de ce
solvant n’est pas absolue) [51].
s tanins vrais. [52]

18
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

IV.3. Biosynthése des flavonoïdesLes flavonoïdes possèdent tous le même élément structural de
base, car ils dérivent d’une origine biosynthétique commune. Le cycle A est formé à partir de
trois molécules de malonyl-coenzymeA (malonyl-CoA), issues du métabolisme du glucose. Les
cycles B et C proviennent eux aussi du métabolisme du glucose, mais par la voie du shikimate
via la phénylalanine qui est convertie en ρ-coumarate puis en ρ-coumaroyl-CoA. Le ρ-
coumaroylCoA et les 3 malonylCoA se condense en une seule étape enzymatique pour former
une chalcone , la 4, 2’,4’, 6’-tétrahydroxychalcone . Le cycle Cse forme par cyclisation de
lachalcone,réaction catalysée par la chalcone-isomérase qui induit une fermeture
stéréospécifique du cycle conduisant à une seule 2(S)-flavanone : la naringénine. Ce cycle
s’hydrate ensuite pour former les différentes classes de flavonoïdes [53]. Des étapes ultérieures
surtout de glycosylation et acylation amènent les flavonoïdes à la forme définitive dans laquelle
elles se trouvent in vivo [54].

IV.4. Effets biologiques et pharmacologiques des flavonoïdes

Etant de distribution ubiquitaire au sein des végétaux, les flavonoïdes pourraient être à l’origine
des vertus préventifs et curatifs de plusieurs plantes médicinales. La principale propriété,
initialement attribuée aux flavonoïdes, est d’être vasculoprotectrices et venotoniques, car ils sont
capables dediminuerla perméabilité des capillaires sanguins et de renforcer leur résistance [55].
Actuellement, les flavonoïdes sont connus par de remarquables activités pharmaco biologiques
comme entre autres des effets, antivirales, antimicrobiens et anticancéreux (56 ,57]
antiallergiques, anti-inflammatoires, anti-thrombotiques, anti-tumoraux et hépato protecteurs
[58]. Ces activités sont attribuées en partie aux propriétés anti-oxydantes de ces composés
naturels.

IV.5. Activité antioxydante des flavonoïdes

Ces dernières années, une importance particulière a été accordée aux propriétés antioxydantes
des flavonoïdes qui sont attribuées à; (i) leur capacité de piéger directement les RL, (ii) de
chélater les ions métalliques impliqués dans la production des EOR via les réactions de Fenton et
Haber-Weiss, (iii) d’inhiber quelques enzymes en particulier les oxydases, (iv) d’activer les
enzymes antioxydantes et (v) de réduire les radicaux α-tocophéryl [59,60,61].

19
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

IV.5.1.
.1. Piégeage direct de radicaux libres

Les flavonoides possèdent une structure chimique aromatique permettant une délocalisation
électronique importante, donc une stabilisation de leurs formes radicalaires. À cause de leur faible
potentiel redox (62Javanovic et al.,1994),
al., les flavonoïdes (Flav-OH)
OH) sont thermo dynamiquement
•
capables de réduire les radicaux libres oxydants (R ) comme le superoxyde, le radical peroxyle, le
•
radical alkoxyle et le OH par transfert d’hydrogène (Figure6).
(

Figure6 : Réaction des flavonoïdes avec les EOR [63]

•
Le radical aroxyle résultant (Fl-O
(Fl ) peut réagir avec un autre radical libre pour former une structure
quinonestable.

En outre, le radical aroxyle peut interagir avec l’oxygène pour donner une quinone et un anion
superoxyde. Cette réaction qui peut prendre place en présence
présence de taux élevés de métaux de
transition, est responsable de l’effet prooxydant indésirable des flavonoïdes [64]. La capacité des

20
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

flavonoïdes d’agir comme antioxydants dépend donc, non seulement du potentiel redox du
•
couple Flav- O /Flav-OH, mais aussi de la réactivité du radical aroxyle. [65]

De nombreuses études ont établi des relations entre les structures chimiques des flavonoïdes et
leur pouvoir piégeur (scavenger) des radicaux libres [62,66,65,67,68 , 57]. Ces travaux ont pu
conclure que les composés les plus actifs sont ceux qui combinent les critères suivants:

i) La structure ortho-dihydroxy sur le cycle B (groupement catéchol) qui confère la stabilité au

radical flavonoxy et participe à la délocalisation des électrons (la substitution de ces
groupements hydroxyles sur le cycle B par des groupements méthoxyles altère le potentiel redox
et donc la capacité radical scavenger des flavonoides) [69 ,70]

ii) La double liaison C2-C3 en conjugaison avec la fonction 4-oxo sur le cycle C augmente la
capacité radical scavenger des flavonoides [70].

iii) La présence du groupe 3-OH en combinaison avec la double liaison C2-C3 augmente
également la capacité radical scavenger des flavonoides (la substitution du groupement 3-OH
conduit à l’augmentation de l’angle de torsion et une perte de la coplanarité conduisant ainsi à la
réduction de l’activité antioxydante) [70].

IV.5.2. Chélation des ions métalliques

2+ 2+
Les ions du fer (Fe ) et du cuivre (Cu ) sont essentiels pour certaines fonctions physiologiques.
Ils peuvent être, soit des constituants des hémoprotéines, soit des cofacteurs des différentes
enzymes du système de défense antioxydant (par exemple, Fe pour la catalase, Cu pour la
cerruloplasmine, Cu et Zn pour lasuperoxydedismutase). Mais ils sont aussi responsables de la
production du radical hydroxyle par la réduction du peroxyde d’hydrogène selon les réactions de
Fenton et Haber Weiss [71]. Les flavonoïdes sont considérés comme de bons chélateurs de ces
ions métalliques [72 ,73]. Les études menées par Van Acker et ses collaborateurs (1996) sur la
chélation du fer par certains flavonoïdes, ont pu ressortir les sites potentiels pour la chélation des
ions mét(alliques(Figure 7); (i) un noyau catéchol sur le cycle B, (ii) les groupes 3-hydroxyle et
4-oxo du cycle C, et (iii) les groupes 4-oxo et 5-hydroxyle entre les cycles A et C [68,61].

21
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

Figure7 :Flavonoïdes et leurs sites proposés pour la chélation des ions métalliques [68].

IV.5.3. Inhibition enzymatique

●-
Les flavonoïdes sont capables d’inhiber une large gamme d’enzymes génératrices du O et
2

d’autres EOR, la xanthine oxydase, la protéine kinase C, la cyclooxygenase, lipooxygenase,

monooxygenase microsomal, et la glutathion S-Transferase. Les flavonoïdes ayant une moitié
catéchol sur le cycle B inhibent la succinoxidase mitochondriale et la NADH oxydase [68 ,74].

a. Inhibition de la xanthine oxydase

Depuis 1968, quand McCord et Fridovich ont démontré la participation de la xanthine

oxidase(XO) dans la génération des radicaux libres, l’intérêt aux nouvelles propriétés de cette
enzyme s’estconsidérablement accru. Son rôle dans la génération des EOR dans plusieurs
pathologies a été largement étudié. L’allopurinol est le seul inhibiteur de la XO utilisé en
clinique pour contrôler la production de l’acide urique dans la goûte et l’hyperuricémie [75,76].
Cependant, la toxicité sévère de l’allopurinol a été rapportée [77]. Pour cela, la recherche de
nouveaux inhibiteurs dépourvus d’effets indésirables est toujours d’actualité. Les composés
phénoliques d’origine naturelle, comme les flavonoïdes, semblent être des inhibiteurs
prometteurs de la xanthine oxydase. Plusieurs études sur des polyphénols naturels (surtout les
flavonoïdes), sous forme de plantes entières ou extraits purifiés, ont montré qu’ils peuvent être
une source importante d’inhibiteurs de la XO.

22
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

[Link]été des flavonoïdes

IV.6.1-Propriétés anti-inflammatoires des flavonoïdes et effets sur le système

immunitaire
De nombreux travaux semblent indiquer que les flavonoïdes possèdent des propriétés anti-
inflammatoires[78 , 79, 80] et qu’ils sont capables de moduler le fonctionnement du système
immunitaire[81]. Les flavonoïdes sont de puissants inhibiteurs de la prolifération des
lymphocytes B et T [82,83]. Cet effet des flavonoïdes sur les lymphocytes B ou T peut être
variable: en effet, les flavones (apigénine, lutéoline et 7,3’,4’ hydroxyflavone) et les flavonols
(kaempférol, quercétine et myricétine) inhibent la prolifération des lymphocytes T alors que
seule la myricétine est active sur les lymphocytes B. L'explication est encore inconnue.

L’effet antiprolifératif des flavonoïdes pourraient s’expliquer par leur capacité à inhiber l’activité
de certaines protéines kinases (protéine Kinase C ou protéine tyrosine kinase) [82, 83]. Par
ailleurs, les flavonoïdes sont susceptibles de diminuer la libération d’histamine des basophiles et
des mastocytes [84].La phagocytose qui accompagne une infection virale ou bactérienne est
suivie d’une production d’espèces oxygénées réactives par les neutrophiles ce qui va promouvoir
l’inflammation.D’une manière générale, les espèces radicalaires, quelles que soient leurs
origines, peuvent induire des dommages tissulaires, favoriser le processus de vieillissement,
voire être à l’origine de certaines pathologies telles que le cancer et l’athérosclérose [85]. Il est
intéressant de noter que de nombreux flavonoïdes sont capables de contrer cette production
d’espèces oxygénées par les neutrophiles [86]. Les flavonoïdes inhibent également l’adhésion et
l’agrégation desplaquettes. L’hispiduline, une méthoxyflavone, diminue par exemple
l’agrégation plaquettaire en augmentant les taux intracellulaires en AMPc à la suite d’une
inhibition des phosphodiestérases[87]. En effet, l’accumulation. D’une manière générale, les
espèces radicalaires, quelles que soient leurs origines, peuvent induire des dommages tissulaires,
favoriser le processus de vieillissement, voire être à l’origine de certaines pathologies telles que
le cancer et l’athérosclérose [85]. Il est intéressant de noter que de nombreux flavonoïdes sont
capables de contrer cette production d’espèces oxygénées par les neutrophiles [86]. Les
flavonoïdes inhibent également l’adhésion et l’agrégation des plaquettes. L’hispiduline, une
méthoxyflavone, diminue par exemple l’agrégation plaquettaire en augmentant les taux
intracellulaires en AMPc à la suite d’une inhibition des phosphodiestérases[87]. En effet,
l’accumulation d'AMPc plaquettaire semble interférer avec la mobilisation de Ca2+ impliqué
dans l’agrégation de ces cellules [87].

23
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

IV.6.2. Propriétés antivirales et antibactériennes

La stratégie de recherche d’un composé antiviral consiste à mesurer la réduction de l’infection

virale de cellules en culture. Une substance peut agir à différents niveaux du cycle viral:

- au niveau de l’adsorption du virus sur la cellule hôte,

- au niveau de la pénétration du virus dans la cellule hôte,

- au niveau de la réplication du virus et la synthèse des protéines virales,

- au niveau de l’assemblage et de la sortie du virus hors de la cellule hôte.

Les flavonoïdes sont capables d’agir au niveau de la synthèse des protéines virales. Ce
mécanisme semble être impliqué dans la protection des souris vis-à-vis d’une infection virale à la

suite d’une administration journalière de 3-0-méthylquercétine à raison de 20 mg/kg pendant 9

jours[88]. Mucsi et Pragaien 1985 [89], ont également montré une corrélation entre l’effet
inhibiteur de certains flavonoïdes sur divers virus de l’herpès et leur capacité à augmenter les
taux intracellulaires en AMPcdans des cellules infecté[Link] travaux ont mis en évidence un
impact des flavonoïdes sur le rétrovirus HIV responsable du syndrome d’immunodéficience
acquise (SIDA). De nombreux agents sont susceptibles d’inhiber la réplication du rétrovirus du
SIDA par une inhibition de la reverse [Link], ils peuvent être toxiques pour
l’organisme. Il a été étudié l’impact des flavonoïdes sur la «reverse transcriptase ». Les
flavonoïdes se sont montrés de bons inhibiteurs de cette enzyme [90].

Cependant, leur impact semble plus fort sur l’ADN et l’ARN polymérase de la cellule hôte que
sur la reverse transcriptase virale [91,92]. Récemment, des chercheurs ont montré que les
flavonoïdespouvaient avoir une action plus sélective en interagissant avec une glycoprotéine de
surface du virus HIV (la gpl20), empêchant ainsi la liaison du virus à la cellule hôte [93]. Enfin,
les flavonoïdes seraient susceptibles d’inhiber l’intégraserétrovirale du virus HIV-1. Cette
enzyme permet l’intégration du génome viral à celui de la cellule hôte. Des études structure-
activité devraient permettre de montrer quelles sont les molécules les plus actives [94]. En fait, il
semble que l’intérêt éventuel des flavonoïdes ou d’autres micro-nutriments pour combattre le
virus du SIDA n’ait pas été suffisamment [Link]éoriquement, les flavonoïdes pourraient
exercer deseffets antibactériens puisqu’ils sont de puissants inhibiteurs in vitro de l’ADN gyrase
[95]. Une étude a montré l’effet bactéricide de différentes flavanones sur un staphylococcus

24
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

Aureus [96].Le mécanisme des effets antimicrobiens des polyphénols est sans doute très
complexe. Parmi les hypothèses avancées, il faut citer :

- l’inhibition des enzymes extracellulaires microbiennes,

- la séquestration de substrat nécessaire à la croissance microbienne ou la chélation de métaux

tels que le fer,

- l'inhibition du métabolisme microbien [97].

IV.6.3. Propriétés pro-oxydantes des flavonoïdes : [98 ,99]

Nous avons décrit précédemment des propriétés antioxydantes des flavonoïdes mais il ne faut as

négliger leurs propriétés [Link] les flavonoïdes jouent un rôle de pro-oxydants.

En effet, plusieurs d’entre eux ont été décrits comme responsables d'auto-oxydation et de la
génération de radicaux oxygénés actifs, comme le peroxyde d’hydrogène. Ainsi, ils seraient
capables de réduire le fer ferrique (Fe3+) en fer ferreux (Fe2+) aboutissant à la formation de
radicaux hydroxyles par réaction entre Fe2+ et 2 H2 O.

En définitive, certains flavonoïdes pourraient accélérer la survenue de l’atteinte oxydative de

l’ADN, des protéines et des glucides in vitro. ainsi, le potentiel prooxydantde ces composés ne
doit pas être négligé dans le mécanismed'action des flavonoïdes. L’activité pro-oxydante est le
résultat de la capacité à réduire les métaux comme le Fe3+ pour donner Fe2+ qui réagira avec
O2 ou 2 H2 O avec génération d’initiateurs de l’oxydation.

Les attaques oxydatives des tissus in vivo induites par la réaction de Fenton sont les sources
biochimiques principales du radical hydroxyle. Cette réaction est dépendante de la présence de
fer non lié aux protéines.

C’est pourquoi la clarification du rôle des métaux réduits actifs et des agents réducteurs comme

catalyseurs de l’oxydation de molécules in vivo est intéressante.

Il semblerait que les composés phénoliques réduisent le Fe3+ et catalysent la formation de

radical hydroxyle qui est responsable des dommages oxydatifs du désoxyribose, des bases de
l’ADN et d’altérations diverses de l’ADN. Désormais, il s’agit d’éliminer les propriétés pro-
oxydantes des composés phénoliques doués d’une activité antioxydante tout en gardant cette
dernière intacte, c’est pourquoi d’autres études doivent être menées à ce sujet.

25
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

VI.6.4.D’AUTRES EFFETS BIOLOGIQUES

Les flavonoïdes peuvent aussi empêcher le diabète ou du moins le réduire en inhibant l'enzyme
aldose réductase [100].Ong et Khoo ont reporté que la myricétine possède un effet
hypoglycémiant chez des animaux diabétiques. [101,102].Certains flavonoïdes peuvent entraver
l'athérosclérose et par conséquent réduisent le risque des maladies cardiovasculaires [103].

V. La plante médicinale inula viscosa

V.1. Definition

L’inule visqueuse est une plante vivace de la famille des Asteraceae. Le nom inule vient de
l’encient nom de l’anné[Link] par déformation du grec hélénion.L’inule visqueuse est
fréquente en région méditérrané[Link] elle fleurit à la fin de l’été et au début de l’[Link]
affectionne les anciennes cultures (friches) , les décembres,les bords des routes et des
chemins,formant d’abondantes touffes vertes à capitules jaunes, elle est considérée comme assez
[Link] est l’un des qulques représentants du genre Dittrichia. [104].

V.2. Répartition géographique :

Fréquente en région méditerranéenne, où elle fleurit à la fin de l'été et au début de l'automne.

Elle affectionne les anciennes cultures, les décombres, les bords desroutes et des chemins,
formant d'abondantes touffes vertes à capitules jaunes ; elle est considérée comme assez
envahissante.

Elle est l'un des rares représentants du genre Dittrichia, auquel appartient aussi Dittrichia
graveolens (l'inule fétide). Elle est connue au Maroc sous les noms vernaculaires : Terhalâ,

Mâgrâmân, Bagramane ou encore Amagramane.

V.3. Description de la plante :

L'Inule visqueuse est une plante toute glanduleuse -visqueuse, à odeur agréable (selon certains,
désagréable pour d'autres), ligneuse à sa base(forte racine pivotante lignifiée pouvant atteindre
30 cm de long). La feuille est glanduleuse, crénelée, embrassante (formant deux petites
oreillettes à sa base).La plante peut atteindre 120 cm. Les fleursjaunes à forte odeur sont
rayonnantes, regroupées en inflorescences en longues grappes pyramidales. On lesobserve en
septembre-octobre.L'Inule visqueuse (Dittrichiaviscosa)et l'Inule fétide (Dittrichiagraveolens)

26
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

peuvent être confondues à l'état végétatif mais l'Inule fétide a les feuilles non-dentées. L'inule
visqueuse est une plante vivace Lors de sa floraison, la moitié inférieure de sa tige se lignifie.

V.4. Place dans la systématique :Inula viscosa (Dittrichia viscosa) (figure8 )

(Quezel p., Santa S., 1963. Nouvelle flore de l’Algérie et des régions désertiques et
méridionales, Tome II, Ed. CNRS, Paris, 590-593.)

Règne:plantae

Division:Magnoliophyta (plantes à fleurs)

Classe:Magnoliopsida
Ordre:Asterales
Famille:Asteraceae
Sous-famille: Asteroideae
Genre:Dittrichia
Espèce:Inula

27
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

A . LA FLEURE [Link] partie aérienne

C. CAPITULE D. LA FEUILLE

Figure8 :Aspect morphologique de la plante inula viscosa

28
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

V.5. Principaux constituants

32 composants ;dont l’huile essentielle qui comprend5% fokienol (11,8%),T-muurorol(7,9%),

(E)-nérolidol (5,5%) et-cadinene (5.0%). -Cadinene (5,0%).Les huiles essentielles ont été testés
contre Helicobacter pylori et Listeria monocytogenes et en a complètement inhibé la croissance à
88,80à 133,[Link]" 1. Les résultats montrent que l'utilisation de l’huile essentielle de [Link]
peut être utilisé dans le traitement de l'ulcère gastrique.( D. Silva, E. Denham, L. Faleiro, G.
Miguel, C. Cavaleiro, L. Salgueiro).-inuline Les travaux d’Abu Zarga et al [105,106] ont décrit
la présence en plus de 14composés identifiés dans l’huile essentielle d’[Link] de la région
jordanien, 6 nouveaux sesquiterpeniques de [Link]és sont l’acide 3b-
hydroxyilicique, l’acide 3a-hydroxy-epiilicique,l’acide 2a-hydroxyilicique,l’acide.
9b-hydroxy-2-oxoisocostique, l’acide 1b-hydroxyilicique et l’acide 2bhydroxyilicique
V.6. Propriétés / indications
Elle est utilisée pour ses activités : anti- -inflammatoires [107], antidiabétiques [108],
ntipyrétiques, Antiseptiques[109],

-pour traiter les troubles gastroduodénaux [110].

- effet antiulcérogénique a été attribué à la composition flavonique d’[Link] [111] .

- L’extrait flavononique et l’huile essentielle d’Inulaviscosamontrent unactivité antifongique

contre les dermatophytes et Candida spp [112].

-Anticatharrale

-Digestive

V.7. Formes d’utilisation et dosage:

L’huile essentielle uniquement en usage externe

. Contre-indications- Toxicité:l’huile essentielle est à éviter auprès des femmes enceintes,
allaitantes et les enfants de moins de 2 ans.
V.8. Utilisation en médecine traditionnelle

[Link] très utilisée dans les médications traditionnelle [113]. Elle est utiliée pour ses
activités :anti- inflammatoires[114] , anti diabétique[115], anti pyrétiques , et anti septiques[116]
(Tableau 5).

29
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

Tableau5. Quelques usages traditionnels du Inula Viscosa :

La Partie
Pays Voie Usages Réf.
plante utilisée

Espagne Plante Traitement de gastroduodénal

[117,118,119,120
entière
I. Maroc Cutanée Traitement de l’HTA. 121 ,122]
Viscosa
Parties Antifongique, Antibactérienne ,
Algérie
aériennes etAnti diabétique

VI. L’inflammation
La réponse inflammatoire est une réponse adaptative engendrée en réponse à des stimuli nocifs
telle qu’une infection ou une agression tissulaire. Elle nécessite une régulation fine,
généralement bénéfique, elle conduit à l’élimination d’éventuels pathogènes et au retour à
l’homéostasie du tissu lésé. Une régulation défectueuse peut engendrer des dommages
irréversibles. Une réponse insuffisante conduit à une immunodéficience pouvant entrainer une
infection secondaire ou même un cancer. Exacerbée, au contraire, elle augmente la morbidité et
la mortalité dans des pathologies comme l’arthrite rhumatoïde, la maladie de Crohn ou encore le
diabète. Mal contrôlée, l’inflammation peut s’étendre au reste del’organismevia la circulation
sanguine. Elle peut alors conduire à des dommages tissulaires irréversibles locaux ou
généralisés, parfois à un choc septique entrainant dans les cas les plus graves le décès [123;124].

La réponse inflammatoire est associée au système immunitaire, qui peut-être divisé en deux
branchesinter connectées. L’immunité innée est la plus ancienne. Elle est présente chez tout
organismepluricellulaire. Les cellules du système immunitaire inné possèdent des récepteurs
pattern Recognition Receptors(PRR) et des voies de signalisation hautement conservés pour
détecter et réagir face à une infection ou à une blessure. La détection de ces signaux exogènes
d’origine microbienne, les pathogen-associated Moléculair pattern (PAMPs), ou endogènes, les
alarmines[125] conduire à l’initiation de la cascade inflammatoire et à l’activation d’une réponse
immunitaire acquise ou adaptative [124 ;126] La réponse inflammatoire se déroule en quatre
étapes :

30
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

la reconnaissance des signaux de danger, le recrutement de cellules sur le site d’infection,

l’élimination du pathogène et la résolution de l’inflammation conduisant à un retour à
l’homéostasie et à la cicatrisation du tissu lésé[124](En absence d’une résolution, s’installeune
inflammation chronique.

VI.1. L’inflammation aigue

Il s'agit de la réponse immédiate à un agent agresseur, de courte durée (quelques jours à quelques

semaines), d'installation souvent brutale et caractérisée par des phénomènes vasculoexsudatifs

intenses. Les inflammations aiguës guérissent spontanément ou avec un traitement, mais peuvent

laisser des séquelles si la destruction tissulaire est importante [127].

L’inflammation aigue se constitue en trois phases :

VI.1.1. Phase vasculaire

Il s’agit d’une vasoconstriction artériolaire, très brève de quelques secondes. Elle est due à
l’action du système sympathique, et est très rapidement ressentie puisque douloureuse, expliquée
par la libération d’histamine, de sérotonine et de kinine, l’excitabilité des terminaisons nerveuses
en est la conséquence et va conforter le processus douloureux. Cette constriction n’est pas
innocente sur les plaquettes présentes dans la circulation, laquelle est perturbée. Ces plaquettes
vont alors s’activer. Très vite à cette vasoconstriction, va faire suite une vasodilatation des
vaisseaux sanguins. Le débit local est augmenté et la perméabilité descapillaires est exacerbée,
ce qui explique l’extravasion des cellules sanguines(diapedese) [Figure9]. Ce qui explique en
partie la constitution de la chaleur et de la rougeur. La migration des cellules s’accompagne d’un
transfert de plasma qui crée l’oedème.

31
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

Figure9:Formation du transsudat et d’exsudat(128)

VI.1.2. Phase cellulaire (recrutement des leucocytes)

Les phénomènes vasculo-exsudatifs initiaux permettent l'arrivée dans le foyer inflammatoire des
leucocytes. Les premiers sur place (environ 6 heures) sont les polynucléaires. Le plus souvent,
les polynucléaires sont progressivement remplacés sur le site inflammatoire par les cellules
monocytes. Parmi celles-ci, les macrophages ont pour fonction d'assurer la détersion grâce à leur
capacité de phagocytose. Il s'y associe des lymphocytes et des plasmocytes qui participent à la
réponse immune spécifique de l'antigène [123]. L’afflux des cellules, fait que celles-ci vont
d’abord se marginaliser sur le site de l’agression en environ 30 minutes. C’est à ce moment
qu’on pourra constater « in situ » la présence de polynucléaires neutrophiles, lesquelles sont
plaqués le long des cellules endothéliales de l’endroit concerné. Ces cellules vont traverser la
paroi, grâce à de nombreux facteurs attractants comme l’IL8, C5a et LTB4 (Figure10). Ces
cellules vont en effet ingérer les éléments lésés. Cette fonction n’est pas simple. Elle repose sur

32
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

la dégranulation des composants internes de la cellule. Ceci conduit à la sécrétion des protéases
(élastase et collagénase), et la libération des radicaux libres. Les polymorphonucléaires
neutrophiles(PMNs) vont contribuer à l’éradication des corps étrangers (s’il y a lieu) ou des
tissus lésés (en cas de traumatisme par exemple). Dans ce type de situation, la réaction va
s’arrêter mais ceci n’est pas toujours le cas et les macrophages dont le pouvoir phagocytaire est
important, vont intervenir. Ceci constitue le passage de la réaction inflammatoire proprement
dite à la réaction immunitaire et la mise en place des processus inhérents [127].

I.1.3. Phase de résolution

La phase de résolution, dite de réparation, dépond du degré des lésions tissulaires. En effet, dans
les conditions les plus favorables, les agents agresseurs sont éliminés par les PMNs, et les
produits de dégradation ainsi que les débris cellulaire sont phagocytés par les macrophages.

Les macrophages vont alors sécréter des cytokines et des médiateurs qui vont induire la phase de
cicatrisation et de régénération tissulaire. Le retour à un état physiologique consiste dans un
premier temps en la réparation de l’endothélium par les cellules endothéliales elles-mêmes, ces
cellules pouvant produire et remodeler les éléments de leur stroma (collagène de type I et III) ou
de leur lame basale (collagène de type IV et V, laminine). Si l’atteinte est plus sérieuse et
entraîne une destruction du tissu atteint, d’autres cellules vont intervenir pour réparer le nouveau
tissu. Les macrophages vont participer al’angiogenèse, mais ce sont surtout les fibrocytes puis
les fibroblastes qui vont produire les protéines matricielles des tissus intercellulaires, comme le
collagène, la fibronectine et la laminine pour permettrela reconstruction des tissus. Le système de
l’angiogenèse est ainsi remis au repos et la réaction inflammatoire peut s’éteindre[129].

33
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

Figure 10 : Processus de migration des neutrophiles a travers les vaisseaux sanguins [128]

VI.2. L’inflammation chronique :

Morphologiquement, l'inflammation chronique est définie par la présence de lymphocytes,

acrophages, et plasmocytes dans les tissus. Dans de nombreux cas, la réponse inflammatoire
chronique peut persister pendant de longues périodes (plusieurs mois ou années). Elle est
considérée comme être causé par l’engagement persistant des réponses de l’immunité innée et
acquise, comme dans la polyarthriterhumatoïde, rejet de l'allogreffe chronique, dans la
bérylliose, et dans l'inflammation granulomateuse. Il est prouvé que les macrophages dans ces
lésions produisent une série de médiateurs pro-inflammatoires qui activent les fibroblastes pour
fixer le collagène et activer les autres macrophages et lymphocytes pour libérer des médiateurs
responsables des réponses inflammatoires. L’inflammation chronique est initialement déclenchée
par des réponses vasculaires qui impliquent l'apparition de molécules d'adhésion sur la surface
des cellules endothéliales qui vont spécifiquement entrainer l'adhésion des lymphocytes et des
monocytes, et permettent leur transmigration dans le compartiment extravasculaire [127]. Tout
comme dans la réponse inflammatoire aiguë, les lymphocytes et les monocytes, subissent un
processus d'activation qui favorisent l'adhérence et la transmigration de ces cellules dans le
34
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

compartimentextravasculaire. En tout type de réponse inflammatoire, les différences entre les

types de molécules d'adhésion exprimées sur les cellules endothéliales détermineront le type de
leucocytes qui migrent [130;127].

VI.3. Médiateurs solubles et cellulaires de l'inflammation

VI.3.1. Médiateurs solubles

Certains de ces médiateurs existent sous forme inactive, avant toute lésion tissulaire, cette
dernière ne faisant qu'activer ces molécules; d'autres sont synthétisés ou libérés à partir de
différentes populations cellulaires. Leurs actions sont multiples, souvent redondantes et intègrent
les voies de la coagulation, de l'immunité innée, de l'hématopoïèse et du système nerveux
[128,127]

Les protéases plasmatiques comprennent le complément (activation par la voie classique ou par
la voie alterne en fonction des stimuli, produisant des fragments chémoattractants tels que le C3a
et le C5a), les kinines dont la cascade est initiée par différentes lésions tissulaires exposant du
collagène ou des membranes basales et permettent d'activer le facteur XII, enfin des facteurs
protéiques de coagulation et de fibrinolyse activant également le facteur XII qui génère de la
plasmine, elle-même responsable de la production de médiateurs inflammatoires [127]. Le
tableau 1 résume l’origine et les effets des plus importants médiateurs chimiques de
l’inflammation.

VI.3.2. Médiateurs cellulaires de l'inflammation aiguë

Plusieurs types cellulaires interviennent dans la réaction inflammatoire. Les cellules les plus
importantes sont les PMNs qui sont attirés au niveau des lésions tissulaires par la présence des
médiateurs précoces de l'inflammation (leucotriènes, C5a). Cette attraction nécessite au préalable
des interactions entre les cellules endothéliales et les neutrophiles qui, en plusieurs étapes,
établissent des contacts grâce à des molécules d'adhésion (CD62L, CD11, CD18) qui se lient à
des protéines membranaires des cellules endothéliales [128]. Dans le site inflammatoire, ces
polynucléaires neutrophiles s'activent et dégranulent, en réponse à différents médiateurs solubles
déjà évoqués (C5a, leucotriènes, facteurs d'activation des plaquettes, histamine), augmentent leur
production d'enzymes oxydatives et leur capacité à phagocytoser sous l'effet des leucotriènes, de
facteurs de croissance hémopoïétiques tels que le G-CSF et le GM-CSF, duTumorNecrosis
Factor( TNF) et de l'Interleukine [127].

35
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

D'autres cellules sont attirées sur le site de l'inflammation et participent à la constitution de

l'infiltratinflammatoire : les monocytes migrent et deviennent des macrophages activés capables
de phagocytose, de production de protéines antibactériennes et de médiateurs proinflammatoires.

Les éosinophiles sont également recrutés au site de l'inflammation aiguë, en particulier lorsque
celle-ci est le fait d'une réaction allergique respiratoire, gastro-intestinale ou cutanée. Les
plaquettes contribuent au processus inflammatoire par la libération de nombreux médiateurs
incluant le fibrinogène, le plasminogène, des protéases plasmatiques ainsi que de la sérotonine.

Enfin, les lymphocytes B et T produisent les cytokines proinflammatoires,initient la réponse

immunitaire adaptative et contribuent à l'activation des PMNs par la production
d'immunoglobulines par les B-lymphocytes [128,127].

VI.4. Anti-inflammatoires
VI.4.1. Anti-inflammatoire non stéroïdiens

Les anti-inflammatoire non stéroïdiens (AINS) sont une des classes thérapeutiques les plus
tilisées dans le monde en raison de leurs propriétés anti-inflammatoires, anti-pyrétique et
antalgiques. Actuellement, il y a plus de 50 différents AINS sont sur le marché mondial.

Le mécanisme d’action des AINS a été précisé par les travaux de Vane en 1971, il repose en
grande partie sur l’inhibition compétitive, réversible ou non, de la cyclooxygénase, enzyme qui
permet la production de prostaglandine à partir de l’acide arachidonique. Cette caractéristique
commune à tous les AINS conduit à une diminution de la production des prostaglandines
(notamment la PGE2 et la PGI2), importants médiateurs de l’inflammation (Figure11). Même si
d’autres modes d’action existent, cette activité explique largement lespropriétés
pharmacologiques et thérapeutiques des AINS, mais aussi une partie de leurs effets secondaires
en raison du rôle ubiquitaire et des fonctions physiologiques des prostaglandines (Nicolas et al.,
2001). Ainsi, la production exagérée de prostaglandines en situation pathologique participe à
l’inflammation (vasodilatation, augmentation de la perméabilité capillaire) et à la douleur
(sensibilisation des nocicepteurs) alors que sa production basale permet l’homéostasie tissulaire
(production de mucus, de bicarbonates et maintien du flux

sanguin sous muqueux gastrique, maintien de l’hémodynamique rénale en cas d’hypoperfusion

en particulier). L’inhibition de la synthèse des prostaglandines par les AINS semblait donc,
jusqu’à récemment, devoir obligatoirement s’accompagner d’effets favorables et délétères [131]

36
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

Figure11 :mécanisme d’action des AINS [132]

VI.4.2. Anti-inflammatoires stéroïdiens

Les anti-inflammatoires stéroïdiens (AIS) constituent une vaste famille de médicaments dérivés
du cortisol, principal glucocorticoïde surrénalien. Les glucocorticoïdes sont des substances
dérivées du cholestérol, dont la production est stimulée par l’ACTH libérée selon un cycle
nycthéméral par le lobe antérieur de l’hypophyse.

Dans les tissus cibles, les glucocorticoïdes se fixent à leurs récepteurs des glucocorticoïdes (GR)
du cytoplasme de la cellule. Après quoi, le complexe récepteur-ligand formé pénètre dans le
noyau cellulaire où il se fixe à de nombreux éléments de réponse aux glucocorticoïdes dans la
région du promoteur des gènes-cibles. Le récepteur, ainsi fixé à la molécule d'ADN

[Link] interagit avec les facteurs de transcription basiques, provoquant une

augmentation de l'expression génique de gènes-cibles spécifiques. Ce processus est appelé

37
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

transactivation et conditionne la plupart des effets secondaires métaboliques et cardiovasculaires

des glucocorticoïdes (Figure12).

Le mécanisme opposé est appelé transrépression. Le récepteur hormonal activé interagit avec des
facteurs de transcription spécifiques et prévient la transcription des gènes-cibles. Les
glucocorticoïdes sont capables d'empêcher la transcription de tous les gènes immuns, incluant

celui codant IL-2[133]

Les glucocorticoïdes ordinaires ne font pas de différence entre la transactivation et la

ransrépression, et influencent à la fois les gènes immuns "voulus" et ceux "non voulus" régulant
les fonctions métaboliques et cardiovasculaires. Actuellement, les efforts de recherche visent à
découvrir des glucocorticoïdes agissant sélectivement qui seraient capables de ne réprimer que le
système immunitaire [134]

Figure12 : Mécanisme d’action des glucocorticoïdes [133].

VI.4.3. Anti-inflammatoires d’origine végétale

Le nombre de composés phytochimiques, trouvé dans le règne végétal est très vaste, et leur
spectre d'activité est tout aussi grand. Certains de ces composés phytochimiques ont des
propriétés anti inflammatoire. Beaucoup sont présumés agir en bloquant les voies de la
cyclooxygénase et la lipoxygénase ainsi que par d'autres mécanismes. Quelques exemples de
plantes douées d’activités anti-inflammatoires sont cités dans le ﴾tableau 6﴿.

38
CHAPITRE I REVUE BIBLIOGRAPHIQUE

Tableau6. Exemples de plantes médicinales douées d’activités anti-inflammatoires (133Barnes,

1998).

Nom scientifique Famille Partie Nom Utilisation

utilisée commun

Zingiber officinale Zingiberaceae Rhizome Gingembre arthrose, migraine,

douleurs rhumatismales

Helleborusorientalis Ranunculaceae Racines Lenten-rose Oedemes, douleurs

rhumatismales

Laurocerasus Rosaceae Feuilles Laurier Fièvre, pharyngite,

officinalis R. douleurs d’estomac,
hémorroïdes

Curcuma longa Zingiberaceae Rhizome Curcuma Douleurs rhumatismales,

lupus systémique,
psoriasis, infections
rénales

Neriumoleander L. Apocynaceae Fleures Laurier rose Douleurs, maux de tête

Harpagophytum Pédaliacées Tubercule Griffe du Arthrose, lombalgie,

procumbens diable neuvralgie,
maux de tête, fièvre

Rhododendron Ericaceae Feuilles Rhododendron Oedèmes, états grippaux,

ponticum L. pontique mal de
Dents

Juglansregia L. Juglandaceae Feuilles, Noyer Douleurs rhumatismales,

fruits commun fièvre, eczéma. Malaria

Oenotherabiennis Onagraceae Graines Onagre Douleurs rhumatismales,

bisannuelle
Helleborusorientalis Ranunculaceae Racines Lenten-rose Oedemes, douleurs
rhumatismales

39
CHAPITRE II MATERIEL ET METHODES

MATERIEL ET METHODES

Le travail expérimental, ayant pour objet l’étude de l’activité antioxydant et anti-inflammatoire

de la plante médicinale :Inulaviscosa .La partie expérimentale est réalisée au laboratoire de
biologie animal,UniversitéMentouri -Constantine-.

[Link]ériel

[Link]ériel biologique(Echantillonnage)

[Link]ériel végétal
l’espèce sélectionnée « [Link] » a été récoltée dans une espace université mentouri en Mars
2014 et identifiée par Mr. Lounisyoucefkhodja au laboratoire d’obtention des Biologie Appliqué
MAB,àl’université [Link] partie aérienne(feuilles,fleurs et tiges) de la plante
récoltée a ensuite été séchée à l’abri de l’humidité et de la lumière du soleil pendant 1
[Link],la plante séche a été pulvérisée au broyeur pour obtenir une poudre fine pour qu’elle
soit prête à l’utilisation.

I.1.2.Réactifs chimiques et instrumentations

plusieurs réactifs chimiques et solvants ont été utilisés dans nos expériences,parmi ceproduits :
acide sulfurique (H2SO4), acide chloehydrique (HCl), acide
acétique,NaOH ,NH4OH,KI,I2,NaCl,,AlCl3 ;acide galique ;rutine ,quercétine,méthanol,eau
distillé, coton.

DPPH,diclofénac,BSA,Gumme ,Arabique,K2HPO4,KH2PO4,K3Fe(Cn)6,FeCl3,Parmi
l’appareillage utilisé :,spectrophotométreUV-Visible double faisceau (JENWAY 6305
UV/VIS),Chambre d’observation UV « 264/3645 nm »(VILBERCOURMAT),Bain
Marie(MEMMERT),Etuveuniversselle de 5 à220°C avec ventilation (MEMMERT),Agitateur
magnétique (SCILOGEX), vortex (VELP), Balance (OHAUS). PH mètre.

40
CHAPITRE II MATERIEL ET METHODES

II.Méthodes
II.1. Préparation de l’extrait végétale
II.1.1. Préparation de l’extrait total aqueux
La préparation de cet extrait consiste à macérer 80 g de la partie aérienne de poudre végétale ans
2L d’eau distillée. Le macérât est homogénéisé pendant 24 heures à l’aide d’un agitateur
magnétique de type (SCILOGEX). L’homogénat est filtré successivement 2 fois sur du coton
hydrophile puis une fois sur du papier filtre Wattman N°1. Le filtrât obtenu est évaporé à l’aide
d’une étuve de type (MEMMERT) à 50°C pour donner une poudre qui constitue ETAIV .

II.2. Screening phytochimique de l’extrait végétale

Les tests phytochimiques sont réalisés sur l’extrait brut méthanolique de [Link] (EMIV) et
l’extrait total aqueux (ETAIV).

II.2.1. Mise en évidence des tanins

A 2 ml de la solution à tester, ajouter 2 à 3 gouttes de la solution de FeCl3 à 2%. Untest positif
est révélé par l’apparition d’une coloration bleue-noire et un précipité (laisse reposer quelques
minutes) .

II.2.2. Mise en évidence des saponosides

 Test 1 : 5 ml de la solution à tester sont bien mélangé avec 10 ml d’eau distillée
²pendant 2 min.

La formation d’une mousse persistante après 15 min confirme la présence des

aponosides .

 Test 2 : 5 ml de l’extrait sont mélangés avec 2 ml de chloroforme et 3ml d’acide

sulfurique concentré. Une couleur rouge-marronne de la couche d’interface indique
la présence des triterpéneshétérosidique.

41
CHAPITRE II MATERIEL ET METHODES

II.2.3. Mise en évidence des flavonoïde

5 ml d’extrait sont traités avec quelques gouttes d’AlCl3 (1%). La présence des flavonoïdes est
confirmée par l’apparition d’une couleur jaune.

II.2.4. Mise en évidence des composés réducteurs

Ce test est basé sur la réaction de Keller-Kiliani. A 1 ml de l’extrait ajouter 5 ml d’acide acétique
contenant des traces de FeCl3 et 5 ml d’acide sulfurique contenant des traces de FeCl3. La
présence des composés réducteurs est confirmé par la formation de deux phases une colorée en
brun rouge (acide acétique) et la deuxiéme en bleu-vert (acide sulfurique).

II.2.5. Mise en évidence des alcaloïde

Ce test est fait pour révéler la présence ou l’absence des alcaloïdes sels. A l’extrait sec, ajouter 5
ml d’HCl (2 N) au résidu et chauffer dans un bain marie. Filtrer le mélange et réaliser les tests
avec le réactif deWagner (2g de KI et 1,27g d’I2 solubilisé dans 100 ml d’eau distillée). La
présence de turbidité ou de précipitation indique la présence des alcaloïdes sels.

II.3. Dosage des flavonoïdes

Les flavonoïdes d’extraits a été ajouté à 1 ml de la solution d’AlCl3 (2%, dans le
méthanol).Aprés 10 minutes d’incubation, l’absorbance a été lue à 430 [Link] concentration des
flavonoïdes dans les extraits a été calculée à partir d’une courbe d’étalonnage y= ax+b établie
avec la quercétine à différentes concentrations(1-40 ug/ml,chacune a été préparée dans le
méthanol) pratiquée dans le méthanol) pratiquée dans les même conditions opératoires que les
extraits servira à la quantification des flavonoides . La teneur enflavonoidesà été exprimé en
milligrammes équivalents de quercétine par grammes du poids d’extrait(mg EQ/g E).[135 ,136]

II.4. Dosage des polyphénols totaux

Le dosage des polyphénols totaux des extraits A.d’[Link] été effectué selon la méthode de
bleu de Prusse (Price and Butler, 1977) modifiée par Graham (1992). Cette technique est basée
sur le principe d’oxydation du ferricyanide de potassium (K3Fe[CN]6) par les polyphénols pour
donner les ions ferreux (Fe2+), ces derniers réagissent avec le chlorure de fer (FeCl3) et donne le
complexe bleu de Prusse qui absorbe à 700 nm. Brièvement, 0.1 ml de l’extrait a été ajouté à 3
ml de l’eau distillée. Après agitation, 1 ml du K3Fe(CN)6 (0.016 M) puis 1 ml du FeCl3 (0.02 M,

42
CHAPITRE II MATERIEL ET METHODES

dans le HCl 0.1N) ont été ajoutés successivement avec un intervalle de temps d’une minute.
Après 15 minutes, 5 ml de la solution stabilisante (contenant 30 ml Gomme Arabique 1 %, 30 ml
acide phosphorique 85 % et 90 ml de l’eau distillée) ont été ajoutés et l’absorbance a été lue à
700 nm. La concentration des polyphénols totaux a été calculée à partir de l’équation de
régression de la courbe d’étalonnage de l’acide gallique (figure 19) (0-200 μg / ml) et exprimée
en milligrammes équivalents d’acide gallique par grammes du poids d’extrait (mg EAG / g E).
[137,138]

[Link] (effet scavenger)

L’activité anti-radicalaire des différents extraits A.d’[Link] été évaluée, in vitro, parle test
de DPPH. Cette méthode spectrophotométrique utilise le radical DPPH (2,2'-diphenyl-1-
picrylhydrazyl) de couleur violette comme réactif, qui vire aujaune, en présence de capteurs de
radicaux libres, et se réduit en 2,2'-diphenyl-1-picrylhydrazine (Cuendet et al., 1997; Burits and
Bucar, 2000). Ceci permet de suivre la cinétique de décoloration à 517 nm. Pour cela, 50 μl de
chacune des différentes concentrations des extraits ont été incubés avec 5 ml d’une solution
méthanolique de DPPH à 0.004 %. Après une période d’incubation de 30 minutes,
lesabsorbances à 517 nm ont été enregistrées. Les résultats obtenus pour chaque extrait testé ont
été exprimés par rapport à ceuxobtenus pour le BHT pris comme antioxydant de référence. Le
pourcentage d’inhibition (I %) du radical DPPH par les extraits d’A. iva a été calculé comme
suit: I % = [(AC – AE) / AC] × 100

AC: absorbance en absence de l’inhibiteur (contrôle négatif)

AE: absorbance en présence de l’inhibiteur (échantillon)

La concentration inhibitrice de 50 % de l’activité du DPPH (IC50) de chaque extrait a été par la

suite calculée à partir de l’équation qui détermine le pourcentage d’inhibition en fonction de la
concentration de l’inhibiteur. Elle a été exprimée en µg / ml et comparée avec celle du
BHT.[139,140]

43
CHAPITRE II MATERIEL ET METHODES

[Link]é Anti-inflammatoire

L’activité anti-inflamatoire in vitro de extrait méthanolique de I .viscosa et a été effectuée selon

la méthode d’inhibition de la dénaturation des protéines. La méthode consiste a préparé quatre
solution.
 La solution d’essai (0,5 ml) composé de 0,45 ml de la solution aqueuse de sérum bovine
albumine (SBA) 5 % et 0,05 ml d’extrait aqueux avec une concentration de 250 µg/ml.
La solution control test (0,5 ml) composé de 0,45 ml de la solution aqueuse de BSA 5 %
et 0,05 ml d’eau distillé.

La solution contrôle produit (0,5 ml) composé de 0,45 ml d’eau distillé et 0,05 ml d’extrait

aqueux avec une concentration de 250 µg/ml .

La solution standard test (0,5 ml) compose de 0,45 ml de la solution aqueuse de BSA 5 % et 0,05

ml de la solution de standard diclofénac sodium avec une concentration de 250 µg/ml.

Tous les solutions au-dessus ont été ajustée à pH 6,3 par une solution d’HCl (1N), les chantillons
ont été incubées à 37 ° C pendant 20 min, ensuit la température étaitaugmenté pour garder
leschantillons à57°cpendant 3 min, après refroidissement des tubes, 2,5ml de la solution
phosphate buffer saline (pH 6,3)a été ajouté auxsolutions ci-dessus, l’absorbance a étéluepar le
spectrophotomètreUV –visibleà416 nm,etle pourcentage d'inhibitiondeladénaturation des
protéinesa été calculée comme suit:

Pourcentage d’inhibition = 100- × 100

Le contrôle représente 100% des protéines dénaturées ; et les résultats sont comparé avec le
diclofenac sodium ( 250ug/ml) .

[141, 142, 143, 144].

44
Chapitre III Résultats et Discussion

Chapitre III.Résultats et Discussion

Le présent travail porte sur l’étudephytochimique et l’évaluation de l’activité antioxydantes et

anti-inflamatoire d’ extrait aqueux de la partie aérienne de la plante médicinale « [Link] ».

I. Le rendement de l’extrait (Tableau7)

Tableau7 :Le rendement de l’ extrait de I. viscosa

Le poids du Le poids de extrait
matériel végétal aqueux Le rendement en (%)
en (g) en (g)

EAIV 20 g 25%

la méthode extraction par macération sous agitation permet d’accélérer le processus

d’extraction et de minimiser le temps de contact d’eau avec l’extrait tout en préservant la bio-
activité de ses constituants. De même, le déroulement de cette extraction à température
ambiante ainsi que l’épuisement d’extrait à pression réduite permet d’obtenir le maximum des
composés et de prévenir leur dénaturation ou modification probable dues aux températures
élevées utilisées dans d’autres méthodes d’extraction.
Le calcule des rendements par rapport au poids sec de la poudre végétale (Tableau) a montré
que l’EAQIV représente le rendement élevé de 25%.
il est difficile de comparer ces résultats avec ceux de la bibliographie de manière générale. En
effet, le rendement n’est pas relatif; il dépend de la méthode et des conditions dans lesquelles
l’extraction a été effectuée. D’autre part, la méthode d’extraction affecte également le contenu
total en phénol et flavonoïdes[145].

II. Tests de mise en évidence de certains composés Phytochimiques

Les tests phytochimiques réalisés sur EAIVrévèle la présence de plusieurs familles de
composésdont les résultats sont présentés dans le (tableau8).

45
Chapitre III Résultats et Discussion

Tableau8 : Analyse phytochimique préliminaire d’extrait aqueux de I. viscosa.

composés EAQIV
Tanins +
Apparition d’une coloration bleue noire et un précipité après 3min

Saponosides +
+
Flavonoïdes Apparition d’une couleur jaune

+
Composés
réducteurs Apparition de deux phases, une colorée en brun rouge et la
deuxième en bleu-vert.
Coumarines +
Alcaloïdes sels -

Résultat négatif avec le réactif de Wagner (absence de turbidité)

Les résultats sont interprétés comme suit:(+) Réaction positive, (-) Réactions négatives
L’étude phytochimique d’EAIVa montré que cette plante contient: des flavonoïdes,
dessaponosides, des tanins, des coumarines, des composés réducteurs, et absence des
alcaloïdes sels. Ce qui confirme les travaux de [146]qui a été révélé la présence
desesquiterpenicacids,1,3-dicaffeoylquinic acid [147]Saponosides, Tanins et Coumarines
chez [Link] La richesse de ce extrait en composés chimiques actifs pourrait expliquer son
utilisation traditionnelle comme un agent anti-gale, anti-inflammatoire [148, 149, 150, 151

III. Dosage des polyphénoles et des flavonoïdes

Les composés phénoliques (acides phénoliques, tannins et flavonoïdes) forment le groupe des
composés phytochimiques le plus important des plantes [152]. Et comme la majorité des
effets pharmacologiques des plantes est dû à ces substances, un dosage despolyphénols totaux
et des flavonoïdes des extraits a étéeffectué pour en estimer les teneurs.
46
Chapitre III Résultats et Discussion

III.1. Dosagedes flavonoïdes

L’étude quantitative d’extrait aqueux au moyen des dosages spectrophotométriques, selon la

méthode de trichlorure d’aluminiumavaient
d’aluminium pour objectif la détermination de la teneur totale
des flavonoïdes. Une courbe d’étalonnage (Figure13)
(Figure a été tracée pour cet objectif, établie
avec la quercétine à différentes concentration. Des mesures de densité pour chaque fraction
réalisées à 430 nm.. Les quantités des flavonoïdes correspondantes ont été rapportées en
équivalent milligramme de quercétine ou rutine par gramme d’extrait (Figure14) et
déterminés par l’équation de type:
type y=a x + b

gamme d'etalonnage

1,8
1,6
1,4
y = 0,041x + 0,010
1,2 R² = 0,999
1
Abs

Rutine
0,8
0,6
0,4 y = 0,017x + 0,030
R² = 0,996
0,2
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
[Cmg/ml]

Figure13. Courbes d’étalonnage de la quercétine et rutin

rutine

La détermination des taux des flavonoïdes par la méthode de trichlorure d’aluminium révèle
que l’extrait aqueux I .viscosa est riche en flavonoides .et Suivant la figure ci
ci-dessus, les
teneurs en flavonoïdes, exprimés en mg équivalent quercétine
quercétine ou rutine par g extrait sont:
6,29± 0,21 mgEQ/gEet 8, 36±
± 0,28 mg ER/gE respectivement.

47
Chapitre III Résultats et Discussion

EARIV
9 EAQIV
8

Qté des flavonoides en mg EQ/g et

7

mg ER/g extrait 6
5
4
3
2
1
0
CmgEQ/g CmgER/g

Figure14. Teneur en flavonoïdes totaux de I .viscosa

Chaque valeur représente la moyenne ± SD (n = 3).

Et les calcules quisont effectués à partir de la courbe d’étalonnage de la rutine montre que, la
concentration des flavonoides dans ce extrait est Supérieures à celles de la quercétine parce
que la pente de la courbe d’étalonnage de la rutine égale àla moitié de celle de la quercétine
(Figure14, section matériel et méthodes).

Il ya quelques années , une étude détaillée sur (( L. ) Asteraceae ,Inuleae ) Inula viscosa .a
révélé la présence de 16flavonoïdes aglycones ,dont certainessont trouvées dans l'extrait
acétoniquedelaparties aériennes[153]et Comme cette plante as le nom d' espèce viscosa due
au matière résineuse consiste des terpénoïdes , tels que les acides sesquiterpéniquesdécrit dans
les références [154,155]ilsontsupposé que la matière résineuse contient des flavonoïdes
aglycones comme c'estune caractéristique bien connue de beaucoup Asteraceae [156 ] et aussi
les autres familles des plantes [157]

Donc Cette richesse identifiés par nos résultats est due probablement a la présence des
Flavonoïdes aglycones qui ont été également signalés dans Inula cappa, recueillies dans
l'Assam ,Indta. Cette espèce présente trois flavonoïdes ont été trouvés dans un extrait
chloroformique de la partie aérienne. La même chose, aussi est probablement vrai pour les
sesquiterpénoïdes signalés dans plusieurs espèces Inula et des flavonoïdes ont été isolés par

48
Chapitre III Résultats et Discussion

EW près de Narbonne -Plage dans le sud de France en Août 1985 et de Vinaroz en Espagne
enAoût

[Link] des composés phénoliques totaux :

La quantification des composés phénoliques a été faite en fonction d’une courbe d’étalonnage
linéaire (y=ax) réalisé par une solution étalon (l’acide gallique) à différents
concentration.(Figure15)

gamme d'etalonnage acide gallique

1,2

0,8
Absorbance

0,6
y = 0,004x + 0,033
0,4 R² = 0,997

0,2

0
0 50 100 150 200 250
Concentration (μg/ml)

Figure15 : Courbe d'étalonnage de l’acide gallique. Chaque point de la courbe représente la

moyenne ± SEM (n = 3).

Les polyphénols totaux dans ce extrait sont dosés selon la méthode de bleu de Prusse
modifiée par [158]
La teneur en composés phénoliques d’extrait a été calculer à partir de la courbe d’étalonnage
et exprimée en milligrammes équivalent en acide gallique par 100 gramme de la matière
sèche, la mesure de la densité optique a été effectuée à la longueur d'onde de 760 nm. Les
résultats obtenus sont présentés dans le( Figure16)suivant:

49
Chapitre III Résultats et Discussion

75
70
65
60
55
50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
CE [Link] mgEAG/g E

Figure16:Quantité des phénols totaux dans l’ extraitaqueux d’acide galique

D’après les résultats présentés dans le figuren°17l’EAIV est riche en polyphénols (70,826087
± 0.036 mg EAG / g E)

L’examen de ces résultats permet de mettre en évidence une corrélation entre la teneur des
extraits en flavonoïdes et en composés phénoliques. Ceci est logique étant donné que les
flavonoïdes représentent les composés majoritaires des polyphénols. , le système
FeCl3/K3Fe(CN)6 confère à la méthode la sensibilité pour la détermination « semiquantitaive
» des concentrations des polyphénols, qui participent à la réaction rédox [159] [160] Le
pouvoir réducteur d’ extrait de la plante est dose dépendante (concentration dépendante). Le
pouvoir réducteur de l’espèce Inulaviscosaest probablement dû à la présence de
groupement,hydroxyle dans les composés phénoliques qui peuvent servir comme donneur
d’électron. Par conséquent, les antioxydants sont considérés comme des réducteurs et
inactivateurs des oxydants [161]. Quelques études antérieures ont également montré que le
pouvoir réducteur d’un composé peut servir comme unindicateur significatif de son activité
antioxydante potentielle [162,163].

50
Chapitre III Résultats et Discussion

III.3. testes,in vitro ,de l’activité antioxydant

III.3.1.Détermination de l’activité anti-radicalaire de extraitaqueux par la méthode de
DPPH (effet scavenger)
L’activité antioxydante de l’extrait de vis-à-vis du radical DPPH à été évaluée
spectrophotométriquement en suivant la réduction de ce radical qui s’accompagne par son
passage de la couleur violette à la couleur jaune mesurable à 517 nm (Figure17) la cinétique
de décoloration de ce radicale a été suivie après addition de 50 μl de chacune des
concentrations d’ extrait [Link].

DiphénylpicrylhydrazylDPPH (violet)Diphénylpicrylhydrazine DPPHH (jaune)

Figure17.Réaction d’un antioxydant avec le radical DPPH

Les profiles d’activité antiradicalaire obtenus (Figure19) révèlent que les extraits de [Link]
possèdent une activité antiradicalaire dose dépendante, les concentrations d’extraits et
standard qui piègent 50 % du radical DPPH (IC50)(Figure20). C’est un paramètre utilisé pour
estimer l’activité antioxydante. Plus cette concentration est faible plus l’effet antioxydant est
très élevé (Brand-Williams et al., 1995; Tsimogiannis and Oreopoulou, 2004; Atoui et al.,
2005). L’EAIV possède un effet scavenger puissant avec une valeur de IC50 (0,090± 0,0018
mg / ml)inferieur Troie fois de cellede BHT (0,0318± 0,00064 mg / ml)antioxydant
standard ;les IC50 a tété déterminée(Figure18)

51
Chapitre III Résultats et Discussion

90
80 y = 479,7x + 34,70
R² = 0,935
70
inhibition (%) 60
50
40
30
20
10
0
0 0,02 0,04 0,06 0,08 0,1 0,12

C BHT(ug/ml)

Figure18 : pourcentage d’inhibition de BHT

pourcentage d'inhibition %
120 y = 243,3x + 27,88
R² = 0,824
100

80

60

40

20

0
0 0,1 0,2 0,3 0,4
EAQIV mg/ml

Figure19 : pourcentage d’inhibition de l’ extrait aqueux de Quercétine de I .viscosa

52
Chapitre III Résultats et Discussion

0,1
0,09
0,08
0,07
0,06
0,05
0,04
0,03
0,02
0,01
0
IC 50 BHT IC 50 Inula viscosa

Figure20 : Laconcentration d’ extrait d’I. viscosaet de BHT qui inhibent 50 % du

radicalDPPHLes valeurs représentent la moyenne de trois essais ± SD

Tableau9: Les concentrations des composés phénoliques qui inhibent 50 % du radical DPPH.

Echantillons IC50(ug/ml)
Rutine 4,25 ±0,18
Quercitine 3,22±0,029
Acide gallique 0,58±0,01

55
Les composés phénoliques (acide gallique, quercétine et rutine) Tableau9possèdent une
activité anti-radicalaire très élevée et supérieure à celle du BHT. Le plus actif est l’acide
gallique avec une IC50 d’environ 0.58 ± 0.01 μg / ml, ensuite la quercétine et la rutine qui ont
des IC50 de 3.22 ± 0.029 et 4.25 ± 0.18 μg / ml, respectivement. Les résultats du présent
travail sont relativement en accord avec les études suivantes:[164]ont montré que l’effet
scavenger des extraits méthanoliquesde 5 espèces du genre Phyllanthus sur le radical DPPH
est en ordre suivant: Phyllanthusdebilis(87.24 %) > acide ascorbique (77.75 %) >P.
urinaria(73.18 %) > BHT (72.20 %) >P. virgatus(63.21 %) >P. maderaspatensis(48.90 %)
>P. amarus(38.67 %) à concentrationde 25 μg / ml. De plus, Dastmalchi et ses collaborateurs
(2008) ont déterminé que l’extrait éthanolique de Melissa officinalisL. est capable de piéger le

53
Chapitre III Résultats et Discussion

radical DPPH de manière dose dépendante,Le mécanisme de la réaction entre l’antioxydant et

le DPPH dépend de la conformation structurale de l’antioxydant [165,166]. Quelques
composés se réagissent très vite avec le DPPH en réduisant un nombrede molécules de DPPH
égal à celui des groupements hydroxyles de l’antioxydant [169]. L’effet scavenger des
flavonoïdes sur les radicaux libres dépend de la présence des groupements OH libres, en
particulier 3-OH, avec une configuration 3',4'-rthodihydroxy [170]. Le nombre et/ ou la
position des groupes hydroxyle sur les noyaux de ces molécules, les substitutions sur les
cycles B et A avec la présence de la double liaison C2-C3 en conjugaison avec la fonction 4-
oxo sur le cycle C renforcent l’activité antioxydante des flavonoidesFigure21[170].

Figure 21 : Principaux éléments de l'activité antioxydante des flavonoïdes.

VI. Activité anti-inflammatoire in vitro

Le tableau montre les résultats de l’activité anti-inflammatoire in vitro de extrait Aqueuxde

[Link] qui consiste à évaluer les pourcentages d’inhibition de la dénaturation de Bovine
serum albumine (BSA).(Tableau10)

54
Chapitre III Résultats et Discussion

Tableau10 : Pourcentage d’inhibition de la dénaturation de BSA à la concentration

De 250 µg/ml

% d’inhibition de la dénaturation des

Les échantillons
protéines
Diclofenac sodium 90.66±3.3

EAIV 79.47±10.9

D’après les résultats du tableau, l’extrait aqueux d’ [Link] dénaturationdeBSA à la

concentration de 250 µg/ml.

Le pourcentage d’inhibition de la dénaturation des protéines par l’extrait EAIV est de

79.47±10,9 avec une différence de 11.19%. Lorsque on le compare à ceux obtenus pour le
diclofenac sodium, un médicament anti-inflammatoire utilisé comme standard qui exercé un
pourcentage d’inhibition de 90.66±3.3% a la même concentration.

La dénaturation des protéines est parmi les causes de l’inflammation [171, 172] . La
production d’auto-antigènes dans les maladies inflammatoire peut être due à la dénaturation
des protéines in vivo. Le mécanisme possible de la dénaturation consiste à l’altération des
liaisons électrostatique, hydrogène, hydrophobe et disulfure qui maintien la structure
tridimensionnelle des protéines[171,173]

Il est prouvé que les anti-inflammatoires non stéroïdiens comme le phenylbutazone et

L’indomethazine inhibent pas seulement la synthèse des prostaglandines pro-inflammatoires,
mais inhibent aussi la dénaturation des protéines[174, 175].Ils empêchent la dénaturation
d'albumine traitée par la chaleur à pH physiologique (pH: 6.2 à 6.5).D’après les résultats, on
constate que les deux échantillons sont capables de contrôlé la production d’auto-antigène par
l’inhibition de la dénaturation des protéines.

55
Chapitre III Résultats et Discussion

L’activité inhibitrice de la dénaturation de BSA est peut être attribuée a la présence de

différents composés bioactifs tels que les flavonoïdes et les tannins dans les l’extrait trouvés
lors des criblages phytochimiques. De nombreuses études ont évalué l’effet inhibiteur de
différents extraits de plantes sur l’activité anti-inflammatoire in vitro par la méthode de la
dénaturation des protéines.

on peut conclure que le EAIVpossédeuneffet anti-inflammatoire marqué in vitro contre la

dénaturation desprotéines ,et que D'autres études définitives sont nécessaires pour déterminer
les mécanismes et les électeurs derrière ses actions anti-inflammatoires .

56
Conclusion générale :

La connaissance et l’usage des plantes médicinales constituent un vrai patrimoine de

l’être humain. Leur importance dans le domaine de la santé publique est très
accentuée dans ces dernières années grâce aux thérapeutiques qu’elles procurent.
Cette diversité en propriétés biologiques est liée certainement aux vertus
thérapeutiques attribuées à une gamme extraordinaire de molécules bioactives
synthétisées par la plante non seulement comme des agents chimique contre les
maladies, les herbivores et les prédateurs mais aussi comme des agents médicinaux tels
que les antioxydants.
Ces molécules naturelles de nature phénolique sont très recherchées en phytothérapie
vue les effets secondaires des médicaments et les séquelles néfastes des antioxydants
de synthèse à savoir le BHA et le BHT.
L’objectif primordial assigné par cette étude englobe le même contexte afin d’évaluer
les propriétés antioxydantes et anti-inflammatoire de la plante médicinale Algérienne
inula viscosa.
Dans la première partie, la quantification par des méthodes spectrophotométriques
nous a permit de déterminer les teneurs en phénols totaux par la méthode de bleu de
Prusse (Price and Butler, 1977) modifiée par Graham (1992) , en flavonoïdes par le
trichlorure d’aluminium. Et Les résultats obtenus nous ont révélé que la plante riche
en polyphénols et en flavonoides avec un teneur de 70,82 mg EAG/gE ; 6,29± 0,21
mgEQ/gE respectivement.

Dans la deuxième partie, nous sommes intéressés par l’étude des propriétés
Antioxydantes et anti inflammatoire par deux techniques .
Le potentiel antioxydant a été confirmé par les méthodes non enzymatiques. L’EAIV
possède un effet scavenger sur le radical DPPH élevé avec un IC50 de (0,090 mg / ml)
,et l’etudes de Activité anti-inflammatoire in vitro effectuée selon la méthode
d’inhibition de la dénaturation des protéines présentent un pourcentage d’inhibition de
79,47% .
Ces propriétés est en corrélation avec la teneur en phénols totaux plus
particulièrement les flavonoïdes ,et de tous les résultats obtenus, nous avons déduit
que l’extrait aqueux de la partie aérienne de la plante inula viscosa. présente une
bonne activité antioxydante et anti-inflammatoire qui pourrait être utilisé dans le
domaine pharmaceutique et Pour plus d’efficacité, de nombreuses perspectives
peuvent être envisagées :
Elargir le panel des activités antioxydantes in vitro et in vivo et pourquoi pas d’autres
tests biologiques : antitumorale, anticancéreuse et anti-analgésique Caractériser et
isoler les principes actifs responsables à ces propriétés pharmacologiques.
Abstract
The antioxidant compounds are the subject of many works because, in addition to
their use as conservatives in the foodstuffs by replacing synthesis antioxidants, they
intervene in the treatment of many diseases. Within the framework of discovered new
antioxidants from the natural sources, we have investigated in this work, the study of
phenolic compounds and the evaluation of the antioxidant and antiinflamatory
properties of [Link] aqueuse extract
The first part of this study concerns the extraction and the quantification of total
phenolics and flavonoids, by bleu of Prusse and the aluminium trichloride
respectively .The results obtained showed the richness of [Link], of phenolic
compounds which the content of 70,82 mg EAG/gE and The flavonoïds contents
expressed as quercetine equivalent were about 6,29± 0,21 mgEQ/gE .
The second part is the study of the antioxidant and antiinflamatory activity of the
plant extract using twoo techniques: DPPH radical scavenging and inhibition of
proteines dénaturation methode .
The antioxidant activity methods showed that EAIV have a strong scavenging of
radicals DPPH• (EC50 0,090± 0,0018 mg / ml) compared to BHT. And inhibition of
protein denaturation by 79.47% . These results suggest that this plant can be used to
treat diseases and inflamation that require the scavenging of free radical.
Keywords: : inula viscosa ,activité antioxydant , radicaux libres , polyphénols et
flavonoïdes , inflammation ,DPPH.
Résumé

Les composés antioxydants font l’objet de nombreux travaux car, en plus de leur
utilisation comme des conservateurs dans les denrées alimentaires en remplaçant les
antioxydants de synthèse, ils interviennent dans le traitement de nombreuses maladies.
Dans le cadre de la découverte de nouveaux antioxydants à partir des sources
naturelles, nous nous sommes intéressés dans ce travail à l’étude des composés
phénoliques et l’évaluation des propriétés antioxydants et anti-inflammatoire
d’extrait aqueux de plante médicinale Algérienne [Link].
La première partie de cette étude concerne l’extraction et la quantification des phénols
totaux et des flavonoïdes selon la méthode de bleu de Prusse ,et le trichlorure
d’aluminium respectivement. Les résultats obtenus ont montré la richesse de
[Link], des composés phénoliques avec un teneur de 70,82 mg EAG / GE et le
contenus des flavonoïdes est de 6,29 ± 0,21 mgEQ/gE étaient exprimée en
équivalent quercétine par g extrait .

La deuxième partie est l'étude de l'activité antinflammatoire activité d’extraits de

plante en utilisant deux techniques: DPPH (effet scavenger) et l'inhibition de la
proteines dénaturation .
La méthode évaluation d’ activité antioxydante d’ EAIV contre le radical DPPH •
montre une forte puissance avec un IC50 de 0,090 mg / ml ,comparé avec le BHT. Et
un poucentage inhibition de la dénaturation des protéines par 79.47 % . Ces résultats
obtenus suggèrent que cette plante peuvent être utilisés pour traiter les maladies et
l’inflamation qui nécessitent le piégeage des radicaux libres.

Mots clés : inulaviscosa ,activité antioxydant , radicaux libres , polyphénols et

flavonoïdes ,

inflammation ,
 ‫اﻟﻤﻠﺨﺺ‬

‫ﺗظل اﻟﻣرﻛﺑﺎت اﻟﻣﺿﺎدة ﻟﻸﻛﺳدة ھﻲ ﻣوﺿوع اﻟﻌدﯾد ﻣن اﻟدراﺳﺎت اﻟﻌﻠﻣﯾﺔ ‪ ،‬ﺑﺎﻹﺿﺎﻓﺔ إﻟﻰ اﺳﺗﺧداﻣﮭﺎ ﻛﻣﺎدة ﺣﺎﻓظﺔ‬
‫ﻟﻸﻏذﯾﺔ ﻓﺎﻧﮭﺎ ﺗﺳﺗﻌﻣل ﻓﻰ ﻋﻼج اﻟﻛﺛﯾر ﻣن اﻷﻣراض و ﻣﻧذ اﻛﺗﺷﺎف اﻣﻛﺎﻧﯾﺔ اﺳﺗﺑدال اﻟﻣواد اﻟﻣﺿﺎدة ﻟﻼﻛﺳدةاﻻﺻطﻧﺎﻋﯾﺔ‬
‫ﻓﻰ ﺑﻣواد ﻣﺿﺎدة ﻟﻼﻛﺳدة ﺟدﯾدة ﻣن ﻣﺻﺎدر طﺑﯾﻌﯾﺔ‪،‬و ﻓﻰ اطﺎر اﻟﺑﺣث ﻋن ﻣﺿﺎدات ﻟﻠﺗﺎﻛﺳد ﺟدﯾدة ﻧﺣن ﻣﮭﺗﻣون ﻓﻲ ھذا‬
‫اﻟﻌﻣل ﻟدراﺳﺔ اﻟﻣرﻛﺑﺎت اﻟﻔﯾﻧوﻟﯾﺔ وﺗﻘﯾﯾم ﺧﺻﺎﺋص ﻣﺿﺎدة ﻟﻸﻛﺳدة واﻟﻣﺿﺎدة ﻟﻼﻟﺗﮭﺎﺑﺎت ﻣن اﻟﻣﺳﺗﺧﻠص اﻟﻣﺎﺋﻲ ﻟﻠﻧﺑﺗﺔ‬
‫اﻟطﺑﯾﺔ اﻟﺟزاﺋرﯾﺔ‪[Link].‬‬

‫‪ .‬أوﻻ اﻟﺟزء اﻷول ﻣن ھذه اﻟدراﺳﺔ ﺗﺗﻌﻠق اﺳﺗﺧﻼص وﺗﻘدي ﻛل ر ﻣن اﻟﻔﯾﻧوﻻت واﻟﻔﻼﻓوﻧﯾدات وﻓﻘﺎ ﻟطرﯾﻘﺔ اﻷزرﻗوﺛﻼﺛﻲ‬
‫اﻟﺑروﺳﻲ و ﺗﻘﻧﯾﺔ ﻛﻠورﯾد اﻷﻟوﻣﻧﯾوم ﻋﻠﻰ اﻟﺗواﻟﻲ ‪ ،‬ﻛﺎن اﻟﻣرﻛﺑﺎت أظﮭرت اﻟﻧﺗﺎﺋﺞ ﺛراء ‪ [Link]‬ﺑﺎﻟﻣرﻛﺑﺎت اﻟﻔﯾﻧوﻟﯾﺔ‬
‫‪ 70.82.‬ﻣﻠﻎ ‪GE /EAG‬وﻣﺣﺗوى اﻟﻔﻼﻓوﻧوي ب ‪ mgEQ / GE 6.29‬ﻛﯾرﺳﯾﺗﯾن ﯾﻌﺎدل ﻏرام اﻟواﺣد ﻣن اﻟﻣﺳﺗﺧﻠص‪.‬‬
‫اﻣﺎ اﻟﺟزء اﻟﺛﺎﻧﻰ ﻣن ھذه اﻟدراﺳﺔ ﻓﺗﻣﺛل ﻓﻰ ﺗﻘدﯾر اﻟﻧﺷﺎط اﻟﺿد اﻻﻟﺗﮭﺎﺑﻰ و ﺿد ﺗﺎﻛﺳدى ﻟﻧﺑﺎت‪inula. Viscosa‬‬

‫‪ 090‬و ذﻟك ﻣن ﺧﻼل ‪ DPPH‬وﺗﺛﺑﯾط اﻟﺑروﺗﯾﻧﺎت ھذا وﺑﯾﻧت ﻧﺗﺎﺋﺞ ھذه اﻟدراﺳﺔ ان ﻟﻠﻣﺳﺗﺧﻠص اﻟﻧﺑﺎﺗﻰ ﯾﺳﺗطﯾﻊ ﺗﺛﺑﯾط ﺟذر‬
‫ب ﺗﻘﻧﯾﺗﻰ ﺗﺛﺑﯾط ال ‪ DPPH‬ال‪IC50‬‬

‫و ﺗﺛﺑﯾط ﻧﺷﺎط ﺿد اﻟﺗﮭﺎﺑﻰ ﺑﻧﺳﺑﺔ ‪.79,47 ٪‬‬

‫و ﻣن ﺧﻼل ھذه اﻟﻧﺗﺎﺋﺞ ﻓﺎن ﻟﮭذه اﻟﻧﺑﺗﺔ ﺧﺻﺎﺋص ﻣﺿﺎدة ﻟﻼﻛﺳدة و ﻣﺿﺎدة ﻟﻼﻟﺗﮭﺎب ﯾﻣﻛن اﺳﺗﻐﻼﻟﮭﺎ ﻟﻌﻼج اﻟﻛﺛﯾر ﻣن‬
‫اﻻﻣراض ﺧﺎﺻﺔ اﻟﺗﻰ ﯾﻧﺗﺞ ﻋﻧﮭﺎ ﺗﺣرﯾر اﻟﺟذور اﻟﺣرة‬
Références bibliographiques

[1 ] Anderson bj, pediatricanesthesia 2008.

[ 2]Ozcani et chalchat 2004, amiot 2005 .

[3 ] Favier, A.(2003).Le stress oxydant Intérêt conceptuel et expérimental dans la

Compréhensiondes mécanismes des maladies et potentiel thérapeutique. L’actualité

Chimique, p108-115.

[ 4]Haton C., (2005).Effets des rayonnements ionisants sur la structure de la fonction de la

cellule épithéliale [Link]èse de doctorat de l’université de Paris VI, France, pp : 43.

[5] Boumaza A. (2009). Effet de l’extratmethanolique de zygophyllum cornutumcoss

contre le stress oxydant associé au diabète sucré et les organes en relation. Mémoire En vue

de l’obtention du diplôme de Magister en Biologie cellulaire et moléculaire Option :

Toxicologie cellulaire et moléculaire. Université Constantine. p.18-25.

[ 6 ] Valko, M., leibfritz, D., Moncol, J., Cronin, M. T. D., Mazur, M., Telser, J. (2007) .

Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human [Link].

39: 44-84.

[7] Salvayre R, Auge N & Nègre-Salvayre A (2003). Rôle de l'oxydation dans la genèse et

laprogression de l'athérosclérose. L'athérosclérose : Physiopathologie, Diagnostics,

Thérapeutiques., J.F., Toussaint, M.P., Jacob, L., Lagrost, J., Chapman, Eds. Masson: Paris,

14, 269-290.

[ 8 ]Halliwell B (2006). Phagocyte-derived relative specie : salvation or suicide.T pends in

biochemical sciences . vol 3.N°9: 509-15.

[9 ] Durackova Z .Djrolo F.,Houngbe H.,Avode G.,Attonlou V.,Adrra B [Link] M.,

Références bibliographiques

(2008).Oxidants, Antioxidants and [Link] medicine .Gvozdjakova

A(ed)P: 19-43;

[ 10] Mohammedi Z. (2005),Etude du pouvir antimicrobien et antioxydant des huiles

essentieelles et falvonoides de quelques plantes de la région du Tlemcen , Thèse de magistère

, Université-AbouBakrBelkaid-Telemcen .

[11] Sorg, O.(2004) Oxydatif stress: a theoretical model or a biological [Link]

Rendus Biologies.327:649-662.

[12] BouhadjraK. (2011), étude de l’effet des antioxydants naturels et de synthèse sur la

stabilité oxydative de l’huile d’olive vierge, thèse pour l’obtention du diplôme de magister,

Université Mouloud Mammeri, Tizi-Ouzou.

[ 13 ]Pincemail, J., Bonjean, K., Cayeux, K., Defraigne, J.O. (2002)Physiological action of

Antioxidantdefences. Nutrition Clinique et Métabolisme. 16: 233-239.

[ 14 ]Koechlin-Ramonatxo, C. (2006)Oxygen , oxidative stress and antioxidant

supplementation ,or an other way for nutrition in respiratory diseases. Nutrition cliniqueet

métabolique. 20:165-177.

[ 15 ]Halliwell, B., Whiteman, M. (2004) Measuring reactive species and oxidative damage in vivo

and in cell culture : how should you do it and what do the results mean?. British journal of

pharmacology. 142: 31-2.

[ 16 ] Valko, M., Rhodes, C.J., Moncol, J., Izakovic, M., Mazur, M. (2006)Free radicals,

metals and antioxidants in oxidative stress-induced cancer. Chemico-biological interactions.

160: 1- 40.

[ 17 ] Kohen, R., Nyska, A. (2002)Oxidation of biological systems : oxidative stress

Références bibliographiques

phenomena, antioxidants, redox reactions and methods for their quantification. Toxicologic

Pathology.30: 620-650.

[ 18 ] Beckman, K.B., Ames, B.N. (1998)The free radical theory of aging matures.
Physiological Oxygen free radicals and human [Link]. 77: [Link]. 78: 547-

581.

[ 19 ] Lehucher-Michel, M.P., Lesgards, J.F., Delubac, O., Stocker, P., Durand, P., Prost,

M. (2001)Stress oxydant et pathologies humaines. La Pressemédicale. 30: 1076-1081.

[ 20 ] Martínez-Cayuela, M. (1995)Oxygen free radicals and human disease. Biochimie.77:

147-161.

[21] Sachdev, S., Davies, K.J.A. (2008)Production, detection, and adaptive responses to free

radicals in exercise. Free Radical Biology & Medicine. 44: 215–223.

[ 22 ] Berlette, B.S., Stadtman, E.R. (1997) Protein oxidation in aging disease, and oxidative

stress. The Journal of biological chemistry.272: 20313-20316.

[ 23 ] Jung, T,. Bader, N., Grune, T. (2007)Oxidized proteins : intracellular distribution and

recognition by the proteasome. Archives of Biochemistry and Biophysics.462: 231-237.

[ 24] Martinez-Cayela,M.(1994) Oxygen free radicals and human [Link].77: 147-161.

[ 25 ] Berger, M.M. (2006)Manipulations nutritionnelles du stress oxydant : état des

connaissances. Nutrition Clinique et Métabolisme. 20: 48-53.

[26]Goudable, J ., Favier, A. (1997)Radicaux libres oxygénés et antioxydants. Nutrition

Clinique etMétabolisme. 11: 115-20.

[27]Shimizu, H.(2004).Relationship between plasma glutathione levels and cardiovascular

Références bibliographiques

disease in a defined population :the Hisayama study, Stroke,35 (9) : 2072-2077.

[28] DjemaiZoughlache S. (2008),Etude de l’activité biologique des extraits du fruit de

Zizyphus lotus L, mémoire magister, Université -El Hadj Lakhder –Batna.

[29] Quezel p., Santa S., 1963. Nouvelle flore de l’Algérie et des régions désertiques et méridionales,
Tome II, Ed. CNRS, Paris, 590-593.

[ 30 ] Collin F., 2007. Identifier les fleurs du Maroc Atlantique par leurs couleurs, 59.

[31 ] Achille R.,1980. Botanique médicale, 4ème Ed. Paris: l’imprimerie de Rignoux, 321

[32] Kambouche N., Merah B., Bellahouel S., Bouayed J., Dicko A., Derdour A., Younos C.,
Soulimani R.,2008. Chemical composition and antioxidant potential of Rutamontana L. essential oil
from Algeria. Journal of Medicinal Food, 11(3) : 593-595.

[33] Claisse R., 1993. Plante à usage dermatologique de la pharmacopée traditionnelle marocaine.
Médicaments et aliments : l’approche ethnopharmacologique, 24(27) : 172-173.

[34] Kechkar M., 2008. Extraction de la Silymarine et étude de son activité antimicrobienne,
mémoire de magister en microbiologie appliquée, université Mentouri Constantine, 30-36.

[35]Sablonnière B., 2002. Biologie microbiologie. Ellipses, Paris, 270-273.

[36 ] Meyer A., Deiana J., Bernard A., 2004. Cours de microbiologie générale avec problèmes et
exercices corrigés. 2ème Ed. Biosciences et techniques, doin, 217-247.

[37]Upton A., 2006. Les produits antimicrobiens à domicile. Le problème de l’antibiorésistance.

Énoncé de la SCP, 11(3) : 177-181.

[38 ] Allion A., 2004. Environnement des bactéries et sensibilité aux biocides, thèse de doctorat en
sciences alimentaires. Ecole nationale supérieure des industries agricoles et alimentaires, 22-28.

[39 ] Marfak A., 2003. Radiolyse gamma des flavonoïdes. Etude de leur réactivité avec les radicaux
issus des alcools : formation de depsides, thèse de doctorat en pharmacie. Université de Limoges, 23.

[ 40 ] Milane H., 2004. La quercétine et ses dérivés: molécules à caractère pro-oxydant ou capteurs de
radicaux libres; études et applications thérapeutiques, thèse de doctorat en Pharmacochimie. Université
de Louis Pasteur Strasbourg, 22.

[41] Crozier,A.,Del Rio, D.,Clifford, M.N.(2010).Bioavailability of dietary flavonoids and

phenolic compounds. Molecular Aspects of Medicine, 31 : 446–467.

[ 42] Manach, C., Mazur, A., Scalbert, A. (2005). Polyphenols and prevention of
Références bibliographiques

cardiovascular diseases. Current Opinion in Lipidology, 16 : 1–8.

[43 ] Bahorun, T.(1997).Substances Naturelles [Link] flore Mauricienne .une source

d’approvisionnementpotentielle. Food and Agricultural Research council Mauritias,p83-

94.

[44 ] Gomez-Caravaca, A.M., Gomez-Romero, M., Arraez-Roman,D., Segura-Carretero,

A.,Fernandez-Gutierrez, A.(2006)Advances in the analysis of phenolic compounds in

products derived from bees. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 41:1220-

-1234.

[45 ] Xiuzhen, H.,Tao, S.,Hongxiang, L.(2007).Dietary Polyphenols and Their Biological

[Link] Journal of Molecular Sciences, 8 : 950-988.

[46] Babar,A. M.,Hahn, E.J., Paek, K.Y. (2007).Methyl Jasmonate and Salicylic Acid

Induced Oxidative Stress and Accumulation of Phenolics in Panax ginseng Bioreactor

Root Suspension Cultures. Molecules, 12: 607-621.

[ 47 ] Falleh, H., Ksouri, R., Chaieb, K., Karray-Bouraoui, N., Trabelsi, N., Boulaaba, M.,

Abdelly,C.(2008).Phenolic composition of [Link], and their

[Link], 331: 372-379.

[ 48 ] Hodgson, J. M.,Croft, K.D. (2010).Tea flavonoids and cardiovascular [Link]

Aspects of Medicine, 31: 495–502.

[49 ] Martin, S., Andriantsitohaina, R.(2002).Mécanismes de la protection cardiaque

etvasculaire des polyphénols au niveau de l’endothélium. Annales de cardiologie et

d’angéiologie, 51 : 304–315.
Références bibliographiques

[50] DjemaiZoughlacheS. (2008), Etude de l’activité biologique des extraits du fruit de

Zizyphus lotus L, mémoire magister, Université -El Hadj Lakhder –Batna.

[51]BelguidoumM. (2012),Une approche phytochimique pour différencier deux espèces de

genreZygophyllum, mémoire de master, Université KasdiMerbahOurgla.

[52]Konsol, M .M .R. Etudes ethnobotanique,phytochimique et activités biologiques de quelques

Lamiaceae du Burkinafaso : cas de LeucasMartinicensis(jacquin) R .Brown,HoslumdiaOppsitavahl

et OrthosiphonpallidusRoyle ex Benth ,Universitéd’ouagadougou.

[ 53 ] Lhuillier, A.(2007).Contribution à l’étude phytochimique de quatre plantes malgaches :

AgauriasalicifoliaHook.f ex Oliver,AgauriapolyphyllaBaker (Ericaceae),

TambourissatrichophyllaBaker ( Monimiaceae) et Embeliaconcinna

Baker(Myrsinaceae).Thèse de doctorat. Toulouse.

[ 54 ] Bouakaz, I., (2006).Etude phytochimique de la plante GenistaMicrocephala. Mémoire de

magister. Batna.

eme
[ 55 ] Bruneton, J .(1999). Pharmacognosie,phytochimie, plante médicinale,(3 éd).

Editions Tec &Doc Lavoisier,p1120.

[ 56 ] Narayana, K.R., Reddy, M.S., Chaluvadi, M.R., Krishina, D.R. (2001)Bioflavonoids

classification, pharmacological, biochemical effects and therapeutic potential. Indian Journal

of Pharmacology. 33: 2-16.

[ 57 ] Seyoum, A., Asres, K., El-Fiky, F.K.(2006)Structure-radical scavenging activity

relationships of flavonoids . Journal of phytochemistr.67: 2058-2070.

[ 58 ] Middleton, E., Kandaswami, C., Theoharidies, T.C. (2000)The effects of plant

Références bibliographiques

flavonoids on mammalian cells : implications for inflammation, heart disease and cancer.

Pharmacological reviews. 52: 673-751.

[59] Cotelle, N. (2001) Role of flavonoids in oxidative stress. Current topics in medicinal

chemistry. 1: 569-590.

[ 60 ] Lin, J.K., Weng, M.S. (2006)Flavonoids as Nutraceuticals. In :The science of

flavonoids. Grotewold, E. Eds, Springer, Pp: 217.

[61] Heim, E.K., Tagliaferro, A.R., Bobilya, D.J. (2002)Flavonoid antioxidants : chemistry ,

metabolism and structure-activity relationships. The Journal of Nutritional Biochemistry.13:

572-584.

[62] Javanovic, S.V., Steenken, S., Tosic, M., Marjanovic, B., Simic, M.J. (1994)

Flavonoids as [Link] of the American Chemical Society.116: 4846-4851.

[ 63 ] Densiov, E.T., Afanas’ev, I.B. (2005)IN: Oxidation and antioxidants in organic

chemistry and biology. Eds: Taylor & Francis Group (U.S.A), Pp: 703-861.

[64]McCord, J.M. (1995)Superoxide radical: Controversies, contradictions and paradoxes.

Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine.202: 112-117.

[ 65 ] Rice-Evans,C. (2001) Flavonoid as Antioxidants. Current medicinal chemistry.8: 797-807.

[66]Van Acker, S.A.B.E., Van Den Berg, D.J., Tromp, M.N.L., Griffioen, D.H.,

Bennenkom, W.P.V., Van Der Vijgh, W.J.F., Bast, A. (1996)Structural aspects of

antioxidant activity of flavonoids. Free radical biology & medicine. 20: 331-342.

[67] Cos, P., Ying, L., Calomme, M., Hu, J.P., Cimanga, K., Van Poel, B., Pieters, L.,

Vlientinck, A.V., Berghe, D.K. (1998) Structure-activity relationship and classification of

Références bibliographiques

flavonoids as inhibitors of xanthine oxidase and superoxide scavengers. Journal of natural

products. 61: 71-76.

[ 68 ] Pietta, P.G. (2000) Flavonoids as antioxidants. Journal of natural products.63: 1035-

1042.
[69 ]Hendrich, A.B. (2006)Flavonoid-membrane interactions : possible consequence for

biological effects of some polyphenolic compounds. ActapharmacologicaSinica.27: 27-40.

[70] Balasundram, N., Sundram, K., Samman, S. (2006) Phenolic compounds in plants and

agri-industrial by-products: Antioxidant activity, occurrence, and potential uses. Food

chemistry. 9: 191-20.

[71] Cotelle, N. (2001) Role of flavonoids in oxidative stress. Current topics in medicinal

chemistry. 1: 569-590.

[72 ]Morris, C.J., Earl, J.R., Trenam, C.W., Blake, D.R. (1995)Reactive oxygen species

and iron-a dangerous partnership in inflammation. The international journal of biochemistry

&cell biology. 27: 109-122.

[ 73 ] Brown, J.E., Khodr, H., Hider, R.C., Rice-Evans, C. (1998)Structural dependence of

2+
flavonoïdes interactions with Cu ions : implication for their antioxidant properties. The

Biochemical journal.330: 1173-1178.

[ 74 ] Densiov, E.T., Afanas’ev, I.B. (2005)IN: Oxidation and antioxidants in organic

chemistry and biology. Eds: Taylor & Francis Group (U.S.A), Pp: 703-861.

[ 75] Rundles, R.W., Metz, E.N., Sliberman, H.R. (1966) Allopurinol in the treatment of
Références bibliographiques

gout. Annals of Internal Medicine. 64: 229-258.

[ 76] Klinenberg, J.R., Goldfinger, S.E., Seegmiller, J.E. (1965)The effectiveness of

xanthine oxidase inhibitor allopurinol in the treatment of gout. Annals of internal medicine.

62: 639-647.

[77] Young, J.L., Boswell, R.B., Nies, A.S. (1974)Severe allopurinol hypersensitivity.

association with Thiazides and Prior Renal Compromise. Archives of internal medicine.134:

553-559.

[78] Da silva.E.J.A, Oliveira.A.B, Lapa.A.J. Pharmacological evaluation of the anti-

inflammatory activity of a citrus bioflavonoid, hesperidin, and the isoflavonoids, duartin and

claussequinone, in rats and mice. J. [Link]. 1994 46(2): 118-22.

[79] Galati.E.M, Monforte.M.T, Kirjavainen.S, Forestieri.A.M, Trovato.A, Tripodo.M.M.

Biological effects of hesperidin, a citrus flavonoid. (Note I):antiinflammatory and analgesic activity.

Farmaco.1994 40(11): 709-12.

[80] Read, M. [Link]: naturally occurring anti-inflammatory agents Vascular. Am. [Link].

1995 147(2): 235-7.

[81] [Link] properties of plant flavonoids: an overview. Int.J. Pharmacol. 1996 34

(5): 344-348.

[82] Mookerjee.B.K, Lee.T.P, Logue.G.P, Lippes.H.A, [Link] effects of flavonoids on

human lymphocyte proliferative responses. [Link]. 1986 213: 511-20.

[83] Namgoong.S.Y, Son.K.H, Chang.H.W, Kang.S.S, [Link] of naturally occurring

Références bibliographiques

flavonoids on mutagen-induced lymphocyte proliferation and mixed lymphocyte culture. Life Sci.

1994 54(5): 313-20.

[84] Middleton.E.J, [Link] inhibition of human basophil histamine release

stimulated by various agents. [Link].1984 33(21): 3333-8.

[85] [Link] Radicals, antioxidants and preventive [Link]. 1994 23(7): 1297-

301.

[86] Limasset.B, Le doucen.C, [Link], Ojasoo.T, Damon.M, De paulet.A. C. Effects of

flavonoids on the release of reactive oxygen species by stimulatedhuman neutrophils. Biochem.

Pharmacol.1993 46(7): 1257-71.

[87] Roengsumran.S, Petsom.A, Ngamrojanavanich.N, Rugsilp.T, Sittiwicheanwong.P,

Khorphueng.P, Cherdshewasart.W, [Link] and flavonoid glycoside from

[Link] their cAMPphosphodiesterase inhibitory activity. [Link].c Research of

ChulalongkornUniversity 2000 25(1): 169-176.

[88] Vrijsen.R.E.L, Van hoof.L.M, Vlietinck.A.J, Vandenberghe.D.A, Boeye.A. The

poliovirusinduced shut-off of cellular protein synthesis persists in thepresence of 3-methylquercetin, a

flavonoid which blocks viral protein and RNAsynthesis. Antivir. Res. 1987 7(1): 35-42.

[89] Mucsi.I, [Link] of virus multiplication and alteration of cyclic AMP level in cell

cultures by flavonoids. Experientia1985 41(7):930-1.

[90] Spedding.G, Ratty.A, [Link] of reverse transcriptasesby [Link].

Res. 1989 12(2): 99-110.

[91] Ono.K, Nakane.H, Fukushima.M, Chermann.J.C, Barre-sinoussi.F. Differential inhibitory

Références bibliographiques

effects of various flavonoids on the activities of reversetranscriptase and cellular DNA and RNA

polymerases. Eur. J. Biochem. 1990190(3): 469-76.

[92] Ono.K, [Link] of inhibition of various cellular DNA and RNA polymerases by

several flavonoids. J. Biochem. 1990 108(4): 609-13.

[93] Mahmood.N, Pizza.C, Aquino.R, De tommasi.N, PIacente.S, Colman.S, Burke.A, Hay.A.J.

Inhibition of HIV infection by [Link]. Res. 199346(7): 1257-71.

[94] Fesen.M.R, Pommier.Y, Leteurtre.F, Hiroguchi.S, Yung.J, Kohn.K.W. Inhibition of HIV-1

integrase by flavones, caffeic acid phenethyl ester (CAPE) and related compounds.

[Link]. 1994 48(3): 595-608.

[95] Ohemeng.K.A, Schwender.C.F, Fu.K.P, [Link] gyrase inhibitory and antibacterial

activity of some flavones. Bioorg. Med. Chem. Lett. 1993 3(2):225-30.

[96] Sato.M, Tsuchiya.H, Takase.I, Kureshiro.H, Tanigaki.S, Iinuma.M. Antibacterial activity of

flavanone isolated from Sophoraexigua againstmethicillin-resistant Staphylococcus aureus and its

combination withantibiotics. Phytother. Res. 1995 9(7): 509-12.

[97] Mila.I, [Link] antimicrobial properties through iron deprivation: a new hypothesis.

International Symposium on Natural Phenols inPlant Resistance, 1994 381(2): 749-755.

[98] Laughton.M.J, Halliwell.B, Evans.P.J, Hoult.J, [Link] Pro-oxydant actions

of the plant phenolicsquercetin, gossypol and myricetin. [Link].1989 38(17): 2859-

2865.

[99] Kessler.M, Ubeau.G, [Link]-and pro-oxydant activity of rutine and quercetin derivatives.

J. Pharm. Pharmacol., 2002 55: 1-11.

Références bibliographiques

[100] Chaudhry.P.S, Cabrera.J, Juliani.H.R, Varma.S.D. Inhibition of human lens aldose reductase

by flavonoids, sulindac and indomethacin. BiochemPharmacol. 1983 32: 1995.

[101] Ong.K.C, [Link] Effects of [Link] Pharmacol.

1997 29:121-126.196.

[102] Ong.K.C, [Link] of myricetin on glycemia and glycogen metabolism in diabetic

rats. Life Sci. 2000 67: 1695-1705.

[103] Hertog.M.G, Feskens.E.J, Hollman.P.C, Katan.M.B, [Link] flavonoids

and risk of coronary heart disease: the ZutphenElderly [Link]. 1993 342:1007-1011.

[104] [Link]

[ 105]Abu Zarga, M.H.; Hamed, E.M.; Sabri, S.S.;Voelter,W.; Zeller,K.P. New

sesquiterpenoids from the Jordanian medicinal plant Inulaviscosa. [Link].61:798-

800, 1998.

[106]Abu Zarga,M.H.; Sabri,S.S.; Hamed,E.M.; Khanfar,M.A.; Zeller,K.P.; Atta-Ur-Rahman.

A new eudesmane type sesquiterpene from [Link] Product

Research,Vol.17,No.2,pp.99-102, 2002.

[107] Barbetti,P., Chiappini, I., Fardella, G., Menghini, A. A new eudesmane acid from

Dittrichia (Inula) [Link] 51, 471,1985.

[108] Yaniv, Z., Dafni, A., Friedman, J., Palevitch, D. Plants used for treatment of diabetes in

Israel. Journal of Ethnopharmacology 19, 145-151.1987.9

[109]Lauro, L., Rolih, C. Observation an research on an extract of Inulaviscosa. Bollettino

SocietaItaliana Biological Sperimentable 66, 829-834. 1990.

[110]Lastra, C., Lopez, A., Motiva, [Link] and prostaglandin E2 generation in

Références bibliographiques

rats by flavenoids of Dittrichieviscosa. PlantaMedica 59, 497-501.1993.

[111] Alarcon De La Lastra, C. ; Lopez, A and Motilva, [Link] and

prostaglandin E2 generation in rats by flavonoids of Dittrichiaviscosa. PlantaMedica,

59, 497-501. 1993.

[112]Cafarchia,C. ; De Laurentis,N. ; Milillo,M.A. ; Losacco,V. ; Puccini,V. Antifungal

activity of essential oils from leaves and flawers of Inulaviscosa(Asteraceae) by

Apulian [Link].44 : 153-156, 2002.

[113] suspluga,C.,Balansard,G.,julien,[Link] of aerial part from inulaviscosaAit .Herba

Hung,19: 19-33,1180.

[114] Barbetti,p.,chiappini,I.,fardella,G.,Menghini,A. A new endesmane acid from dittrichia(inula)

viscosa. Planta Medica51,471,1985.

[115]Yaniv,z.,dafin,A;,friedman,j.,palevitch,D. plants used for treatment of

diabetes in [Link] of Ethmophrmacology19,145-151.1987.

[116]laura,[Link]. plants used for treatment of diabetes in [Link] of

Ethmophrmacology19,145-151.1987.

[117] Lastra, C., Lopez, A., Motiva, V., [Link] and prostaglandin E2 generation in

rats by flavenoids of Dittrichiaviscosa. PlantaMedica 59, 497–501.

[118] Lauro, L., Rolih, C., [Link] and research on an extract of Inula_iscosa.Bollettino

SocietaItaliana Biological Sperimentable66, 829–834.

[119]Benayache S, Benayache F, Dendougui H, Jay M (1991)Flavonoids of Inulaviscosa. Plant

Références bibliographiques

Med Phytother 25:170-6

[120]Cohen Y, Baider A, Ben-Daniel BH, Ben-Daniel Y (2002)Fungicidal preparations from Inula

viscosa. Plant ProtSci 38:629-30

[121] Al Dissi, N.M., Salhab, A.S., Al Hajj, H.A., [Link] of Inulaviscosaleaf

extracts on abortion and implantation in rats. Journal of Ethnopharmacology77, 117–121.

[122] Bach, J.F., [Link]-dependent diabetes mellitus as an autoimmune disease.

Endocrinological Review 15, 516–542.

[123] Nathan C (2002).Points of control in [Link], 420, 846-852.

[ 124 ] Barton G M (2008)A calculated response: control of inflammation by the innate immune

system. J Clin Invest, 118, 413-420.

[ 125] Bianchi M E (2007).DAMPs, PAMPs and alarmins: all we need to know about danger. J

LeukocBiol, 81, 1-5.

[ 126 ] Medzhitov R (2008).Origin and physiological roles of [Link], 454, 428-435.

[127 ] Charles N Serhan, Peter A Ward and Derek W Gilroy (2010).Fundamentals of

[Link] University Press, 2-3.

[ 128 ] Kumar Vinay, Abul K Abbas, Nelson Fausto and Richard Mitchell (2007).Robbins Basic

Pathology, 8th Edition, 20-60.

[129 ] Weill B, Batteux F and Dhainaut J (2003).Immunopathologie et réactions inflammatoires.

Eds, De Boeck Université (Paris), 12-23.

[ 130 ] NoursharghSussan, Fritz Krombach, and ElisabettaDejana (2006).The role of JAM-A

Références bibliographiques

andPECAM-1 in modulating leukocyte infiltration in inflamed and ischemic tissues. Journal

ofLeukocyteBiology, 80, 714-718.

[131] Blain, Jouzeau, Netter and Jeandel (2000).Les anti-inflammatoires non stéroïdiens

inhibiteurssélectifs de la cyclooxygénase 2. Intérêt et perspectives. RevMéd Interne, 21, 978-88.

[132] Nicolas Jean-François, Florence Cousin and Jean Thivolet (2001).Immunologie clinique et

allergologie. Aspirine et AINS : intolérance et allergie. John LibbeyEurotext, 2001, 55-58.

[133] Barnes Peter J (1998).Anti-inflammatory actions of glucocorticoids : molecular mechanisms.

Clinical Science, 94, 557-572.

[134 ] Han T, Li H L, Zhang QY, Han P, Zheng H C, Rahman K and Qin L P (2007).

Bioactivity-Guided Fractionation For Anti-Inflammatory And Analgesic Properties And Constituents

Of Xanthium Strumarium L. Phytomedicine, 14, 825–829

[135] Bahorun T., Gressier B., Trotin F., Brunete C., Dine T., Vasseur J., Gazin J.C., Pinkas M.,

Luycky M. and Gazin M. (1996).Oxigen species scavenging activity of phenolic extract from

howthorn fresh plant organs and pharmaceutical preparation. ArzneimForsh / Drug Res. 1-6.

[136]Trotin F., Brunete C., Dine T., Vasseur J., Gazin J.C., Pinkas M., Luycky M. and Gazin M.

(1996).Oxigen species scavenging activity of phenolic extract from howthorn fresh plant organs

and pharmaceutical preparation. ArzneimForsh / Drug Res. 1-6.

[137] Price M.P. and Butler L.G. (1977). Rapid visual estimation and spectrophotometric

determination of tannin content of sorghum grain. Journal of Agricultural and Food Chemistry25,

1268-1273.

[138] Graham H.D. (1992). Modified Prussian Blue assay for total phenols. Journal of Agricultural

and Food Chemistry40, 801-805.

Références bibliographiques

[139] Cuendet M., Hostettmann K. and Potterat O. (1997).Iridoidglucosides with free radical

scavenging properties from Fagraeablumei. Helvetica ChimicaActa80, 1144-1152.

[140] Burits M. and Bucar F. (2000).Antioxidant activity of Nigella sativa essential oil.

Phytotheraphy Research14, 323-328.

[141] Williams LAD, O’connar A, latore L, Dennis O, Ringer S, ANTI-inflammatory. West

indian Med j 2008; 57:327-331.

[142] Sangita C, priyanka C, Evaluation of in-vitro ant-inflammatory 2012; 2(suppl1):s

178- s180.

[143] Beta [Link], lEutahtaiodniSoRf ,aVnetidoaxiPdGa,n St waantdhiaPnKti,-

CinhfalanmdrmikaatoKry, RaacotivViAty, of Euphorbia [Link] Pac J Trop

Biomed 2011; S191-4

[144]Schtiavrimtya a nGdNt,oDtaulbfleayvoSnKo,idSactoinNte,n St aonfaAdeygaleJm.

aArnmtie-loinsfsleaemdms. aItnotrJyPharm Sci Drug Res 2011; 3(3): 214-8

[145] Lee et al., [Link] has more phenolic phytochemicals and a higher antioxydant capacity
than teas and red wine, J Agric Food chem., 51: 7292-7295.
[146]Cheng XR, RenJ,Wang CH, Guan B, Qin JJ, Yan SK, et [Link] A−D,

the first naturally occurring C17-pseudoguaianolides from Inulahookeri. Tetrahedron Lett

2013;54:1943–6.

[147]. Danino.O et al. / Food Research International 42 (2009) 1273–1280

[148]V. Hernández et al. / Life Sciences 81 (2007) 480–488

[149]S. Máñez et al. / Fitoterapia 78 (2007) 329–331

[150]M. Maoz, I. Neeman : Journal of Ethnopharmacology71 (2000) 479–482

[151][Link]./JournalofEthnopharmacology.(2014).
Références bibliographiques

[152]. Beta T., Nam S., Dexter J.E. and Sapirstein H.D. (2005).Phenolic content and antioxidant

activity of pearled wheat and Roller-Milled fractions. Cereal Chem. 82, 390-393.

[153]Grande, M., Piera, F., Cuenca, A., Torres.P. and Bellido, I. S. (1985) Planta Med. 51, 414.

[154]Ceccherelli, P., Curini, M..Marcotullio, C. and Menghini, A.(1985) Phytochetmstry24, 2987.

[155]Barbetti, P., Chiappmi, I. and Menghini.A. (1985) Planta Med. 51. 471.

[156] Dexter J.E. and Sapirstein H.D. (2005).Phenolic content and antioxidant activity of pearled

wheat and Roller-Milled fractions. Cereal Chem. 82, 390-393.

[157]Baruah, N. C., Sharma, R. P., Thyagarajan, G., Herr, W. and Govindan, S. V. (1979)

Phytochemistry 18, 2003.

[158] Graham H.D. (1992). Modified Prussian Blue assay for total phenols. Journal of Agricultural
and Food Chemistry40, 801-805.
[159] Amarowicz R., Pegg R.B., Rahimi-Moghaddamc P., Barl B., et Weil J.A.(2004) Free-radical

scavenging capacity and antioxidant activity of selected plant species from the Canadian prairies. Food

Chemistry. 84, 551–562.

[160] Chung Y-C., Chang C-T., Chao W-W., Lin C-F., et Chou S-T. (2002)Antioxidative activity

and safety of the 50% ethanolic extract from red bean fermented by Bacillus subtilis IMR-NK1.

Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50, 2454–2458.

[161] Siddhuraju [Link] Becker K. (2007)The antioxidant and free radical scavenging activities of

processed cowpea (Vignaunguiculata (L.) Walp.)seed extracts. Food Chemistry. 101(1), 10-19.
[162] Jeong S.M., Kim S.Y., Kim D.R., Jo S.C., Nam K.C., Ahn D.U., et Lee S.C. (2004) Effects of
heat treatment on the antioxidant activity of extracts from citrus peels. Journal of Agriculture and Food
Chemistry. 52, 3389–3393.
[163] Kumaran, A. et Karunakaran, R.J.(2007) In vitro antioxidant activities of methanol extracts
of five Phyllanthus species from India. Lebensmittel-Wissenschaft und Technologie. 40, 344–352.

[164]Kumaran A. and Karunakaran J.R. (2007). In vitro antioxidant activities of methanol extracts
Références bibliographiques

of five Phyllanthus species from India. L.W.T. 40, 344-352

[165]Molyneux P. (2004). The use of the stable free radical diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for

estimating antioxidant activity. Songklanakarin J. Sci. Technol. 26, 211-219.

[166]Tsimogiannis D.I. and Oreopoulou V. (2004). Free-radical scavenging and antioxidant activity

of 5,7,3',4'-hydroxy-substituted flavonoids. Innovative Food Science andEmerging Technologies 5,

523-528.

[167]Tsimogiannis D.I. and Oreopoulou V. (2006).The contribution of flavonoid C-ring on the

DPPH free radical scavenging efficiency. A kinetic approach for the 3’,4’-hydroxy
substituted members. Innovative Food Science and Emerging Technologies 7, 140-146.

[168]Kouri G., Tsimogiannis D., Bardouki H. and Oreopoulou V. (2007).Extraction and analysis of
antioxidant components from [Link] Food Science andEmerging
Technologies 8, 155-162.

[169]Bondet V., Williams W.B. and Berset C. (1997). Kinetic and mechanism of antioxidant activity
using the DPPH free radical method. Lebensmittel -Wissenschaft und Technologie30, 609-615

[170]Heim K.E., Tagliaferro A.R., Bobilya D.J. (2002). Flavonoid antioxidants: chemistry,
metabolism and structure-activity relationships. Journal of Nutritional Biochemistry 13,572-
584.

[171]Bagad YM, Umarkar AR, Tatia AU, [Link] of anti-inflammatory and

analgesic activity of brideliaairyshawii (Euphorbiaceae). J pharm Res 2011;4(5):1326-1332

[172]Mizushima Y and Kobayashi M (1968).Interaction of anti-inflammatory drugs with serum

proteins, especially with same biologically active [Link] of Pharmacy and Pharmacology 20
(1)169-173.
[173]M Sangeetha , K Kousalya, R Lavanya, Cherukuru S Chamundeeswari D, Uma
Maheswara R.2011. In-vitro Anti-inflammatory and Anti-arthritic Activity of Leaves of
[Link] Volume 2 (1): 822-827.

[174]M Sangeetha , K Kousalya, R Lavanya, Cherukuru S Chamundeeswari D, Uma

Maheswara R.2011. In-vitro Anti-inflammatory and Anti-arthritic Activity of Leaves of
CleodendronInerme. RJPBCS Volume 2 (1): 822-827.
[175]Adarshvm, ajaykp, Kavitha d, Anurag kb, Anti denaturation and antioxidant activities of
annonacherimola in-vitro. International Journal of Ppharma and Bio Sciences 2011;2(2):0975-6299