[3ème année Licence- Microbiologie de l’environnement] TP 03
TP 03 : Dénombrement des microorganismes du sol
Cette manipulation a pour but de caractériser et de dénombrer les différents
groupes taxonomiques se trouvant dans un échantillon de sol.
I. Matériel
Flacon stérile
Une série de tubes contenant 9 ml d’eau physiologique stérile
Pipettes graduées stériles.
Spatule stérile
Boites de Pétri
Milieux de culture : Gélose nutritive (GN), Potatos Dextrose Agar (PDA)
Ruban Parafilm
II. Mode opératoire
II.1. Echantillonnage
Avant de procéder au prélèvement, écarter les 05 premiers centimètres du sol environ
Prélever environ 500 g du sol dans des flacons stériles avec une spatule stérile
II.2. Préparation des dilutions
Dans un erlenmeyer, dissoudre 10 g de sol dans 90 ml d’eau physiologique.
Homogénéiser l’échantillon mère (dilution 10-1) pendant 10 min
Transférer 1 ml de la suspension mère dans un deuxième tube contenant 9 ml d’eau
physiologique pour obtenir la dilution 10 -2
Refaire la même technique jusqu’à l’obtention 7 dilutions.
II.2. Dénombrement
II.2.1. Dénombrement des FTAM
Ensemencer 0.1 ml de chaque dilution (de 10-5 à 10-7) dans une boite de GN
Bien étaler avec la pipette râteau
Réaliser trois répétions pour chaque dilution.
Incuber à 30°C pendant 48h jusqu’à 07 jours,
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Dénombrer le nombre de colonies pour chaque dilution (les 03 répétions) et calculer la
moyenne de colonies/dilution.
Dénombrer les bactéries sporulées par la même technique mais en chauffant les dilutions 10 -5
à 10-7 pendant 10 min à 80°C avant l’ensemencement. L'incubation se fait à 37°C.
II.2.2. Dénombrement des champignons :
Ensemencer 0.1 ml de chaque dilution (de 10-1 à 10-3) dans une boite contenant le
milieu PDA (trois répétions par dilution)
Sceller les boites de Petri à l’aide du Ruban Parafilm.
Incuber à en position non retournée pendant 7 à 12 jours.
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