République Algérienne Démocratique et Populaire

Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique

Université de BLIDA -1-

Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie

Département de Biologie des Populations et Organismes

Mémoire de Fin d’Etudes en Vue de l’Obtention du Diplôme de

Master 2 en Sciences Biologiques

Option : Génomique et Biotechnologie Végétale

Thème

Essai d’applications de l’huile essentielle de la lavande

papillon (Lavandula stoechas L.) sur ses activités biologiques
(antimicrobienne et insecticide).

Présenté par : KAIBOUCHE Nacera & LAISSAOUI Omar

Le : 3 0 / 06/2016 à 1 1 :0 0 h

Devant le jury composé de:

Mme AYADI R. MCB Université Blida 1 Présidente

Mme BENMANSOUR N. MAA Université Blida 1 Examinatrice
Mme AMARA N. MAA Université Blida 1 Promotrice
Mr BOUKHATEM M.N. MCA Université Blida 1 Co-Promoteur

Année Universitaire : 2015-2016

 Remerciements

Nous exprimons d’abord nos profonds remerciements et nos vifs

reconnaissances à Mme AMARA N. pour avoir accepté de nous encadré et de
diriger ce travail. Qu’elle trouve ici nos sentiments de gratitude et de
reconnaissance.

Nous vifs remerciements à Mr. BOUKHATEM M. N. Qui a accepte de

diriger ce travail, pour ses encouragements, ses conseils, sa disponibilité et surtout
pour sa patience dans la correction de ce mémoire.

Nous tenons à remercier Mme. AYADI R. d’avoir accepté de présider le jury de

ce mémoire.

Notre remerciement s’adresse également à Mme. BENMANSOURE N.

d’avoir accepté d’examiner notre travail.

Nous tenons à remercier tous nos enseignants et nos collègues de Biologie et

toutes personnes qui nous ont aidés de près ou de loin à l’élaboration de ce travail.
 LISTE DES ABREVIATIONS

AFNOR : Association Française de Normalisation

ATB : Antibiotique
ATF : Antifongiques
CRAPC : Centre de Recherche Scientifique et Technique en Analyses Physico-Chimiques
CG-SM : Chromatographie Gazeuse-Spectromètre de Masse
DZI : Diamètre de Zone d’Inhibition
PAM : Plantes Aromatique et Médicinale
PA : principe actif
HE : Huile Essentielle
ATCC: American Type Culture Collection
MH : Muller-Hinton
SAB : Sabouraud additionné de Chloramphénicol
GRAS : Generally Recognized As Safe
ECBU : Examen Cytobactériologique des Urines
INPV : institut national de la protection des végétaux
 LISTE DES TABLEAUX

Titre Page
Tableau I. Taxonomie de La lavande à toupet 06
Tableau II. Les principaux constituants des huiles essentielles du genre L. steochas 09
Tableau III. Souches bactériennes utilisées pour le screening antibactérien in vitro de l’essence de 14
Lavandula stoechas.
Tableau IV. Souches fongiques utilisées pour le screening antifongique in vitro de l’essence de 15
Lavandula stoechas.
Tableau V. Propriétés organoleptiques de l’essence aromatique de Lavandula stoechas. 21
Tableau VI. Composition chimique de l’huile essentielle de Lavandula stoechas 22
Tableau VII. Résultats de l’activité antibactérienne in vitro de l’essence aromatique de Lavandula 24
stoechas
Tableau VIII. Résultats de l’activité antifongique in vitro de l’essence aromatique de Lavandula 28
stoechas
Tableau IX. Efficacité de l’HE par contact vis-à-vis le puceron (Aphis spiraecola) Annexe
Tableau X. Efficacité de l’HE par contact vis-à-vis la mineuse de la tomate (Tuta absoluta) Annexe
Tableau XI. Efficacité de l’HE par contact vis-à-vis la coccinelle asiatique (Harmonia axyridis) Annexe
Tableau XII. Analyse de la variance du taux de la mortalité des adultes d’Aphis spiraecola Annexe
Tableau XIII. Analyse de la variance du taux de la mortalité des larves de Tuta absoluta Annexe
Tableau XIV. Analyse de la variance du taux de la mortalité des adultes d’Harmonia axyridis Annexe
Tableau XV. Classification et cycle évolutif des trois insectes étudiés Annexe
 LISTE DES FIGURES

Titre Page
Figure 1.1. Illustration de la partie aérienne Lavandula stoechas 04
Figure 1.2 : Distribution géographique Lavandula stoechas en bassin méditérranéen 06
Figure 2.1 : Illustration de la méthode de microatmosphère 18
Figure 2.2 : Illustration de la méthode de l’aromatogramme 18
Figure 2.3 : Observation des trois insectes par la loupe binoculaire 19
Figure 3.1 : Profil chromatographique de l’essence aromatique de Lavandula stoechas. 23
Figure 3.2 : Résultats de l’activité antibactérienne de l’essence aromatique de Lavandula 26
stoechas
Figure 3.3 : Résultats de l’activité antifongique de l’essence aromatique de Lavandula 30
stoechas
Figure 3.7 : Cinétique de la mortalité des insectes (Aphis spiraecola) vis à vis l’HE 31
Figure 3.8 : Détermination de la DL50 et la DL90 de l’HE vis-à-vis les insectes d’Aphis 32
spireacola.
Figure 3.9 : Cinétique de la mortalité des insectes (Tuta absoluta) vis à vis l’HE 33
Figure 3.10 : Détermination de la DL50 et la DL90 de l’HE vis-à-vis les larves de Tuta 33
absoluta
Figure 3.11 : Cinétique de la mortalité des insectes (Harmonia axyridis) vis à vis l’HE 34
Figure 3.12 : Détermination de la DL50 et la DL90 de l’HE vis-à-vis les adulte 35
(Harmonia axyridis)
Figure 1 : Test d’activité bio insecticide de l’HE contre les insectes d’Aphis spiraecola Annexe
Figure 2: Test d’activité bio insecticide de l’HE contre les larves Tuta absoluta. Annexe
Figure 3 : Test d’activité bio insecticide de l’HE contre les insectes d’ d’Harmonia Annexe
axyridis.
 TABLE DES MATIERES

Résumé

Liste des Abréviations

Liste des Figures

Liste des Tableaux

Introduction 1

Chapitre 1 : Synthèse Bibliographique

1-1Etude de la lavande 3
1.1.1. Historique 3
1.1.2. Description botanique 3
1.1.3. Etymologie et noms vernaculaires 4
1.1.4. Classification botanique 5
1.1.5 .Origine et répartition géographique 6
1.1.6. Ecologie 7
1.1.7. Production et intérêt commercial 7
1.1.8. Usages 8
1.1.9. Huile essentielle de Lavandula stoechas L. 9
[Link]. Composition chimique 9
[Link]. Indications thérapeutiques de l’huile essentielle 10
[Link]. Toxicité de l’huile essentielle 12

Chapitre 2: Matériel et Méthodes

2.1. Matériel 13

2.1.1. Matériel biologique 13

2.1.2. Matériel non biologique 13

2.2. Méthodes 15

2.2.1. Étude analytique de l’huile essentielle 15

[Link]. Propriétés organoleptiques de l’huile essentielle 15

[Link]. Analyses chromatographiques de la fraction aromatique 15

2.2.2. Etude de l’activité antimicrobienne de l'huile essentielle 17

[Link]. Microatmosphère 17

[Link]. Aromatogramme sur milieu solide 17

2.2.3. Evaluation du potentiel bio insecticide de l’huile essentielle 19

Chapitre 3 : Résultats et Discussion

3.1. Etude analytique de l'huile essentielle 21

3.1.1. Caractéristiques organoleptiques 21

3.1.2. Détermination du profil chromatographique 21

3.2. Résultats de l’activité antimicrobienne en phase vapeur 24

3.3. Résultats de l’activité antimicrobienne en phase liquide 29

3.4. Activité bio insecticide de l’huile essentielle 34

Conclusion 36

Références Bibliographiques 38

Annexe
 RESUME

Notre étude s’intéresse à valoriser la fraction aromatique d’une plante médicinale

Algérienne, lavande papillon (Lavandula stoechas L.), en aromathérapie anti-infectieuse,
comme ingrédient actif dans la conservation des denrées alimentaires et comme bio insecticide.

L’extraction de l’essence aromatique de la partie aérienne fraiche de la plante a été

effectuée à l’échelle industrielle par entrainement à la vapeur d’eau. L’huile essentielle (HE)
analysée par Chromatographie Gazeuse-Spectrométrie de Masse contient le fenchone
(39,23%) comme composé majoritaire, suivi par le Camphre (18,04%) et le 1.8 Cinéol
(17,64%). Les autres composés sont présents avec un taux inférieur à 3%.

L’étude de l’activité antimicrobienne de l’HE a été accomplie par deux méthodes

(microatmosphère et aromatogramme), sur des germes microbiens (15 souches bactériennes et
04 souches fongiques). L’HE a présenté une activité antibactérienne majeure sur les souches
de Staphylococcus aureus avec une inhibition totale (90 mm) a été constatée en
aromatogramme pour la dose de 60µl d’HE par disque.
En microatmosphère, l’essence aromatique s’est avéré aussi un puissant fongicide car la
majorité des souches testées ont été inhibées totalement. De plus, une action sur la majorité
des bactéries à Gram+, a été notée.

L’essai bio insecticide a montré que l’HE de Lavandula stoechas a un effet biocide
sur les trois insectes quelle que soit leurs stade de développement, surtout lorsqu’il est
appliqué sous sa forme pure ; provoquant une mortalité de 100% après 48h d’exposition.

Mots-clés : lavande papillon ; Lavandula stoechas ;Microatmosphère ;

Aromatogramme ; Fongicide ; Huile essentielle.
 ABSTRACT

Our study focuses on enhancing the aromatic fraction of a medicinal plant Algerian
butterfly lavender (Lavandula stoechas L.), anti-infective aromatherapy, as active ingredient
in the conservation of both food and bio insecticide.

The extraction of the aromatic essence of fresh aerial part of the plant was carried out
on an industrial scale by stripping with water vapor. The essential oil (HE) analyzed by Mass
Spectrometry Jovian-chromatography contains fenchone (39.23%) as the major component,
followed by camphor (18.04%) and 1.8 Cineol (17.64%). The other compounds are present
with a rate lower than 3%.

The study of the antimicrobial activity of the HE was accomplished by two methods
(Vapour diffusion and Disc diffusion), a broad spectrum of microbial germs (15 bacterial
strains and 04 fungal strains). The HE presented a major antibacterial activity against
Staphylococcus aureus strains with a complete inhibition (90 mm) was recorded in
aromatogramme for 60μl dose of EO per disc.
Microatmosphere in the aromatic essence was as a powerful fungicide because the
majority of the strains tested were inhibited completely. Furthermore, an action on the
majority of Gram + bacteria, was noted.

The test bio insecticide showed that HE Lavandula has a biocidal effect on the three
insects whatever their stage of development, especially when applied in its pure form; causing
100% mortality after 48h exposure.

Keywords: wild lavandula ; Lavandula stoechas ; Vapour diffusion ; Disc diffusion

Fungal effect ; Essential oil.
 Introduction

INTRODUCTION

Parmi les différents moyens à disposition pour empêcher un développement microbien, on

peut citer les huiles essentielles (HE). Ces extraits de végétaux odorants font l'objet de nombreuses
recherches scientifiques dans le domaine médical et ils ont démontré leur efficacité pour le traitement
de nombreuses pathologies. Au contraire de la grande majorité des agents antimicrobiens utilisés pour
la désinfection de l'air, ces substances ne sont pas ou sont peu toxiques (Dung et al., 2008).

La qualité microbiologique d’un aliment constitue l’une des bases essentielles de son aptitude à
satisfaire la sécurité du consommateur. Un aliment, exposé à la détérioration par les bactéries,
moisissures et les insectes peut diminuer ses caractéristiques sensorielles, nutritives et sanitaires
(Rozier et al., 1986). Malgré l’amélioration des techniques de conservation des aliments, la nature des
conservateurs alimentaires reste une des questions les plus importantes pour la santé publique. L’un
des principaux problèmes de l’industrie agro-alimentaire est d’assurer une bonne conservation des
aliments, (Burt, 2004).

Des quantités substantielles de denrées alimentaires stockées sont attaquées par des bactéries, des
moisissures et des insectes dans le monde entier. En particulier dans les pays en voie de
développement, les aliments stockés subissent des dommages sérieux, menant aux pertes économiques
et au risque sanitaire (Ownagh et al., 2010). Par la suite, plusieurs conservateurs synthétiques ont été
limités dans plusieurs pays, en raison de leurs effets toxicologiques indésirables à long terme, y
compris la cancérogénicité (Ho et al., 2009). De même, la tendance actuelle des consommateurs à
chercher une alimentation plus naturelle a incité la recherche, le développement et l’application de
nouveaux produits naturels ayant des activités antimicrobiennes et bio insecticides dans le but de les
utiliser comme alternatives aux conservateurs synthétiques dans le domaine des industries
agroalimentaires. Les plantes aromatiques ont été traditionnellement employées pour l’assaisonnement
et la prolongation de la durée de conservation des aliments (Wang et al., 2010). La plupart de leurs
propriétés sont dues aux huiles essentielles produites par leur métabolisme secondaire (Rozier et al.,
1986).

Ces huiles sont d'intérêt croissant pour les industries et la recherche scientifique en raison, d’une
part, de leurs activités antimicrobiennes (Dung et al., 2008), d’autre part, la plupart sont classées dans
la liste des substances GRAS (Generally Recognized As Safe), qui les rendent utiles en tant que
conservateurs naturels dans les industries agroalimentaires (Gachkar et al., 2007).

1
 Introduction

Les HE peuvent êtres utilisées comme moyen de défense contre les ravageurs phytophages ; Ces
extraits contiennent des composés qui sont pour la plupart des molécules peu complexes, soit des
monoterpènes avec leurs phénols reliés, et des terpènes plus complexes, dont les sesquiterpenes (Cseke
et Kaufman 1999).

Au cours des dernières années, l'exploitation économique des espèces du genre

Lavandula a augmentée en raison de l'utilisation de leurs HE. Ces huiles peuvent être obtenues de
plantes sauvages ou cultivées. Plusieurs travaux ont étudiés la composition chimique et l’activité
biologique des huiles de lavande, mais peu de travaux en Algérie ont porté sur l’espèce (Lavandula
steochas L). Ce qui nous a amenée à étudier cette plante.

L’intérêt que représentent les lavandes sauvages (Lavandula steochas .L) est qui trouvent des
applications dans divers domaines, médical et agricole, nous a poussés à envisager des possibilités de
valoriser l’essence végétale de cette plante à parfum, en vue d’offrir une alternative aux insecticides
de synthèse.

L’objectif assigné à notre travail consiste à étudier la composition chimique de l’essence de la

lavande, par chromatographie gazeuse couplé à une spectrométrie de masse.

L’évaluation des propriétés antimicrobiennes de cette essence a été déterminée, in vitro, sur des
souches bactériennes et fongiques, en utilisant deux méthodes (microatmosphère et aromatogramme).

La détermination de l’efficacité bio insecticide de l’HE in vitro contre trois insectes, puceron
"Aphis speraecola", la mineuse de la tomate " Tuta absoluta "et la coccinelle asiatique "Harmonia
axyridis" à été menée.

2
C ha p i t r e 1 : S y nt h è s e B i bl i og r a p hi q u e

1.1. Etude de la lavande

1.1.1 Historique

Au cours des dernières années, l'exploitation économique des espèces du genre Lavandula a
augmentée en raison de l'utilisation de leurs huiles essentielles. Ces huiles peuvent être obtenues de
plantes sauvages ou cultivées. Au Moyen Âge, les pouvoirs désinfectants étaient reconnus et on en
faisait des fumigations et des emplâtres destinés à combattre la peste (Benabdelkader, 2012).
A cette époque, on trouvait la lavande dans les jardins de monastères où, associée à d'autres plantes
aromatiques et médicinales (PAM), elle était utilisée à but curative. Les plantes étaient d'ailleurs les
seuls éléments de la pharmacopée (Benabdelkader, 2012).
Le développement au XIIIème siècle des Facultés de Marseille et Montpellier (France) a joué un rôle
important dans la connaissance des bienfaits des plantes locales et les recherches des universitaires
s'appliquaient aux moyens d'en extraire les principes actifs (PA). On la retrouve citée dans de
nombreux textes (Gontard, 1940 ; Monge2013 ; Cassé, 2013).

En 1952, les premiers essais de coupe mécanique et le développement des cultures de

lavandin entraînent le déplacement des cultures. Dans le même temps, deux autres facteurs ont
contribué à la diminution constante des surfaces cultivées en lavande : le développement de produit
de synthèse et l'apparition d'une maladie encore mal expliquée : le dépérissement prématuré des
plants qui affecte directement la durée de vie et la productivité des plantations. L'HE de lavande fine
n'est plus utilisé dans les produits de grande consommation, où les produits de synthèse moins
coûteux l'ont remplacée. Elle demeure irremplaçable dans les deux domaines prestigieux de son
histoire : la parfumerie de luxe et la sphère médicale avec le développement de la phytothérapie et de
l'aromathérapie (Gontard, 1940 ; Monge2013 ; Cassé, 2013).

1.1.2. Description botanique

stoechas se présente sous la forme d‟un arbrisseau ou d‟un buisson très aromatique et très
ramifié pouvant atteindre un mètre de haut avec une lourde odeur semblable à celle du pin. Les
feuilles opposées de 2-4 cm de long sont sessiles, tomenteuses, oblongues, lancéolées, linéaires,
étroites et recourbées sur les bords et sont souvent grises. Les inflorescences de coupe carrée sont
sessiles, compactes et surmontées d‟une couronne de bractées florales violettes, élargies, stériles,

3
C ha p i t r e 1 : S y nt h è s e B i bl i og r a p hi q u e

obovales ou spatulées de 1 à 2 cm de longueur. Les bractées fertiles sont largement ovales,

membraneuses, veinées et plus courtes que le calice. Le Calice est sessile, à treize nervures avec des
lobes moyens modifiés en un appendice. La Corolle est de couleur violet foncée ou mauve (Figure
1.1), les stigmates sont capités. Le nombre de chromosomes dans tous les taxons étudiés est de 2n =
30 (Chaytor, 1937). Les fruits sont sans intérêt économique. Ils permettent cependant la production
de graines, Le fruit est un akène plus exactement appelé “nucule” (Chaytor, 1937).

Figure 1.1 . Illustration de la partie aérienne fleurie de L. stoechas

(Benabdelkader, 2012).

1.1.3. Etymologie et noms vernaculaires

Le mot lavande dérive du verbe « laver ». Il est peut être issu de l'italien lavando (action de
laver). Cette étymologie laisse penser que très tôt la lavande a été utilisée pour parfumer le linge
fraîchement lavé. Des sachets de fleurs séchées sont traditionnellement placés dans les armoires pour
éloigner les mites et parfumer la garde-robe. Mais il est également possible que Lavandula et lavande
soient tirés du latin « livere » (qui signifie "pour être bleuâtre") qui, en latin médiéval, a donné le
terme lavindula (Benabdelkader, 2012).
Noms vernaculaires de lavandula steochas selon (Bellakhdar et al., 1997).
Arabe : Halhal, astuhudus, meharga.

4
C ha p i t r e 1 : S y nt h è s e B i bl i og r a p hi q u e

Berbère : Amezzir, timerza, imezzir.

Anglais : Spanish lavender (in America), lavender (in Europe), Italian lavender, top lavender
Français : lavande stoechade, lavande papillon, lavande stéchas, lavande à toupet.

1.1.4. Classification botanique

Le genre Lavandula L., est composé d'environ 39 espèces, de nombreux hybrides et près de
400 cultivars enregistrés, Comme beaucoup de Lamiacées, les lavandes sont connues pour leurs HE
riches en terpènes (Upson et Andrews, 2004).
Une des premières classifications modernes majeures du genre Lavandula se trouve dans "A
Taxonomic Study of the Genus Lavandula" de Chaytor (1937). Sa révision reconnaît 28 espèces ainsi
que de nombreux taxons infra-spécifiques répartis en 5 sections, Stoechas, Spica, Subnudae,
Pterostoechas et Chaetostachys. Cependant, toutes les principales formes cultivées et
commercialisées résident dans les sections Stoechas et Spica. Récemment, la classification
phylogénétique du genre Lavandula a été réexaminée par Upson et Andrews (2004). Cette étude a
conduit à reconnaître 39 espèces réparties en 3 sous-genres Fabricia, Sabaudia et Lavandula qui sont
également divisés en sections qui se répartissent en différentes espèces. Par exemple, Lavandula
comprend les sections Lavandula, Dentatae et Stoechas ; L. angustifolia, L. latifolia et L. lanata
représentent les différentes espèces. Cette organisation taxonomique a été réalisée sur la base de plus
de 40 critères anatomiques mais aussi par une analyse phylogénétique basée sur la comparaison de
séquences nucléaires (Internal Transcribed Spacer - séquence interne traduite). Le premier grand
groupe génétique interne au genre Lavandula correspond au sous-genre Lavandula, et le second
Fabricia. Le groupe Sabaudia est moins clairement isolé (statistiquement soutenu) ainsi que la
section Hasikenses au sein du sous-genre Fabricia. Au sein du sous-genre Lavandula, les sous-clades
correspondent aux sections existantes sauf la section Dentatae qui est devenue une section à part,
indépendante de la section Stoechas. Au sein du sous-genre Fabricia, les sous-clades correspondent
aux sections Pterostoechas, Subnudae et Chaetostachys. (Upson et Andrews, 2004).
Les noms latins des lavandes ne posent plus guère de problèmes, il n'en va pas de même
avec les noms courants. La même lavande devient française, anglaise ou espagnole selon le pays où
elle est classée (Small et Deutsch, 2001 ; Dupin et Festy, 2012). On distingue quatre espèces
principales :
L. angustifolia, L. stoechas, L. latifolia et l‟hybride L. x intermedia

5
C ha p i t r e 1 : S y nt h è s e B i bl i og r a p hi q u e

La classification botanique de l‟espèce L. steochas (Upson et Andrews, 2004) est la suivante :

Tableau I. Taxonomie de La lavande à toupet
Règne Plantae
Sous règne Plantes vasculaires
Embranchement Spermaphytes
Sous embranchement Angiospermes
Classe Dicotylédones
Sous classe Dialypétales
Ordre Lamiales
Famille Lamiaceae
Sous-famille Nepetoideae
Genre Lavandula
Espèce Lavandula stoechas L.
(Upson et Andrews, 2004)

1.1.5. Origine et répartition géographique

Lavandula stoechas a été historiquement la première lavande à être formellement décrite et

dont le territoire géographique est le plus vaste. Elle est répandue dans tout le bassin méditerranéen
(Europe méridionale, l‟Afrique du Nord et le Moyen Orient) avec une petite disjonction sur la
frontière Lybie-Egypte (Figure 1.2). Actuellement, elle a été introduite et est cultivée en Bretagne,
Nouvelle Zélande et en Australie (Lis-Balchin, 2002 ; Lim, 2014).

Figure 1.2. Distribution géographique de Lavandula stoechas en bassin méditerranéen

(Upson et Andrews, 2004).

6
C ha p i t r e 1 : S y nt h è s e B i bl i og r a p hi q u e

1.1.6. Ecologie

La lavande papillon (Lavandula stoechas), est une plante originaire du bassin méditerranéen.
C‟est un arbrisseau aux feuilles persistantes, qui fleurit au printemps. Dans leur habitat naturel, les
lavandes vivent sur des sols arides et calcaires ; en fait, elles s'accommodent aux divers types de sols,
sauf de ceux qui seraient exagérément humides. Elle supporte d‟ailleurs la sécheresse, les sols
pauvres et les grands vents. Mais elle préfère les sols siliceux et les terrains acides. Elle tolère le froid
jusqu‟à -5°C. La floraison, plus précoce que chez les autres lavandes, se déroule d‟avril à mai puis en
automne (Peter, 2004 ; Lim, 2014).

1.1.7. Production et intérêt commercial

Commercialement, plus de 462 tonnes d‟HE sont produites annuellement à partir d'espèces du
genre Lavandula (Lawrence, 1992). La popularité persistante et la valeur commerciale de la lavande
a été confirmée quand elle a été nommée « herbe de l'année 1999 » par le réseau de la culture et la
commercialisation d‟herbes médicinales, aromatiques et à parfum aux Etats-Unis d'Amérique. Leurs
HE sont de haut intérêt économique dans les industries des parfums, des cosmétiques, des arômes
agro-alimentaires, pharmaceutiques et de nos jours également dans l'aromathérapie (Lis-Balchin,
2002 ; Upson et Andrews, 2004). La proportion des principaux terpènes dans l‟HE est un critère
d‟évaluation de la qualité de l‟HE. Les teneurs relatives de ces substances jouent un rôle important
dans le choix de telle ou telle variété par l‟herboriste ou l‟industriel (Lis-Balchin, 2002).

En 2009, les surfaces cultivées en France étaient de près de 15 000 ha pour le lavandin et
4000 ha pour la lavande, la production était d'environ 10 tonnes pendant le début des années 1980.
[Link], est de moindre importance comme source d‟HE, mais avec ses hybrides, cette espèce est
de plus en plus populaire en tant que plante ornementale (Peyton 1983 in Upson et Andrews, 2004).
Des quantités limitées (moins de 1 tonne) de L. stoechas sont produites en Espagne à partir de plantes
sauvages. L‟HE, riche en fenchone, est principalement utilisé en aromathérapie.
La Bulgarie avec une production de 45 tonnes en 2010 et entre 55 à 60 tonnes en 2011 est devenue le
premier producteur mondial de lavande avec 45 tonnes devant la France produisant de 25 à 30 tonnes
à cette date. Les deux pays fournissent les trois quarts de la production internationale et entre 80% et
90% de l'huile essentielle de lavande bulgare est vendue en France (Upson et Andrews, 2004).

7
C ha p i t r e 1 : S y nt h è s e B i bl i og r a p hi q u e

1.1.8 Usages

Les lavandes sont parmi les plantes médicinales les plus utilisées. Des preuves documentées
de l'utilisation des lavandes comme agent thérapeutique remontent jusqu'aux anciens Romains, Grecs
et Arabes (Lis-Balchin, 2002 ; Dupin et Festy, 2012 ; Lim, 2014). Les espèces du genre Lavandula
sont aussi des plantes mellifères qui génèrent des miels de couleurs et odeurs propres à chaque
espèce. Les fleurs de la lavande fine constituent des sources majeures de nectar pour les abeilles
(Guyot-Declerck, 2002). De nombreuses plantes de lavande sont également vendues comme plantes
ornementales pour les jardins populaires. Enfin, il a été mentionné que certaines lavandes sont aussi
utiles dans l'agriculture biologique comme bio-insecticides. Elles constituent des cultures de choix
dans les terres arides (González-Coloma et al., 2006).

Les fleurs de lavande, séchées, sont très résistantes et conservent leurs arômes très longtemps,
les ancien utilisent la lavande dans l'eau du bain pour son parfum et ses propriétés antiseptiques et
calmantes.
L'essence de lavande contient des composants différents selon les espèces, On l'obtient par
distillation des sommités florales. C'est bien sûr la parfumerie qui fait le plus gros usage de la lavande
on peut tout parfumer avec la lavande, depuis les savonnettes jusqu'aux détergents et au papier
hygiénique. Dans les parfums proprement dits, la lavande est surtout réservée aux hommes, soit en
soliflore dans les eaux de toilette, et dans les eaux de Cologne (Lis-Balchin, 2002 ; Dupin et Festy,
2012 ; Lim, 2014).

Bien que L. stoechas fût la première lavande à être utilisée en parfumerie, son HE est
aujourd‟hui délaissée en raison de son odeur fortement camphrée et de la concurrence importante des
autres lavandes qui se prêtent mieux à la culture intensive et dont l‟odeur est plus agréable. La forte
teneur en camphre généralement observée limite ses applications en cosmétologie (Monge, 2013).

On peut faire infuser des fleurs de lavande dans du lait, utilisé ensuite pour la préparation de
glace ou de crème à la lavande. Dans certaines régions du Maghreb, Lavandula stoechas est utilisée
dans quelques préparations culinaires comme le couscous (Benabdelkader, 2012).

8
C ha p i t r e 1 : S y nt h è s e B i bl i og r a p hi q u e

1.1.9. Huile essentielle de Lavandula stoechas L.

[Link]. Composition chimique

Les études sur la composition chimique des HE (Tableau II) des espèces du genre
Lavandula montrent qu‟elles sont plus riches en monoterpènes qu‟en sesquiterpènes et que ces deux
groupes de molécules constituent la majeure partie des HE. Les Etudes des constituants volatils des
espèces de lavande ont révélé la présence de plus de 200 constituants chimiques, beaucoup d'entre
eux étant présents sous forme de trace. Certaines espèces telles que L. stoechas synthétisent plus de
100 terpènes différents alors que d‟autres espèces telle que L. canariensis expriment une diversité
terpénique beaucoup plus faible. L. stoechas a été plus particulièrement étudiée du fait de son aire de
répartition large et de son utilisation traditionnelle très ancienne. Globalement, les espèces du sous-
genre Lavandula sont les plus étudiées à cause de l‟intérêt commercial de leurs HE (Upson et
Andrews, 2004)

Tableau II. Les principaux constituants des HE de l‟espèce du genre L. stoechas

(Benabdelkader, 2012)

[Link]. Indications thérapeutiques de l’huile essentielle de lavande

La lavande utilisée dans la médecine populaire qui la considérait comme tonique, résolvante
et carminative. Ils la prescrivent pour lutter contre des infections pulmonaires (Said, 1996). En Crète,

9
C ha p i t r e 1 : S y nt h è s e B i bl i og r a p hi q u e

l'infusion des feuilles est utilisée par des thérapeutes traditionnels comme spasmolytique, contre le
diabète, les douleurs menstruelles féminines, les calculs rénaux, l'otite, l‟hypertension, La plante est
également utilisée comme antispasmodique dans les douleurs des coliques, expectorant, stimulant
(Giray et al., 2008) Elle est appelée „le balai du cerveau‟. Elle est d‟ailleurs utilisée sous forme de
fumigation pour soigner "le mal des sinus" et pour les différentes maladies du système nerveux
central, comme l'épilepsie et la migraine, la lavande a aussi des effets positifs sur les plaies, les
infections urinaires, les maladies cardiaques et l'eczéma. Finalement, elle possède également des
vertus analgésiques, sédatives, antiseptiques et antimicrobiennes (Cavanagh et Wilkinson, 2002).

L‟HE de L. stoechas obtenu par entrainement à la vapeur d‟eau ou par hydrodistillation des
inflorescences ou de l‟ensemble des parties aériennes de la plante a été utilisée comme remède contre
les affections coliques et pulmonaires, pour soulager les maux nerveux de tête, les affections
hépatiques et pour le nettoyage des plaies (Gülçin et al., 2004). Dans les hôpitaux français, on utilisa
pendant plusieurs décennies des HE, dont celle de la lavande, pour désinfecter l'air et enrayer ainsi
les infections microbiennes et fongiques. Ses nombreuses indications et son innocuité font de l‟HE
de lavande un des fleurons de l'aromathérapie moderne (Lim, 2014).

Récemment, La lavande y est utilisée comme relaxant (Lis-Balchin et Hart, 1999). Les
aromathérapeutes considèrent l'HE de lavande comme la plus bénéfique, avec des cultivars sauvages
cultivés à haute altitude. La preuve scientifique est encore manquante pour un possible effet de
détente générale après une inhalation (Lis-Balchin, 2002). L'HE de lavande est antiseptique et
bactéricide. Appliquée pure sur la peau elle soulagerait les brûlures et les piqûres d'insectes.
Appliquée sur les tempes, elle soulagerait les douleurs migraineuses. On attribue à la variété latifolia
un effet apaisant lors de crises de dermatite atopique (Rhind et Pirie, 2012).

En Algérie, L. stoechas est très connue sous le nom local "Helhal". Elle est largement
distribuée à travers toute la périphérie nord du pays. Dans la médecine populaire algérienne, les
parties aériennes, surtout les inflorescences, sont utilisées comme un agent antiseptique et stimulant
(Benabdelkaser, 2012).
Dans le domaine clinique, plusieurs recherches ont été menées pour asseoir le bien fondé de
l‟utilisation de l‟essence de lavande. Les principales études concernent principalement le système
nerveux. En voici quelques exemples de ces études :

10
C ha p i t r e 1 : S y nt h è s e B i bl i og r a p hi q u e

Anxiété, agitation : L‟HE de lavande est utilisée pour traiter l‟anxiété et l‟agitation fait l‟objet d‟un
nombre croissant d‟essais cliniques (Woronuk et al., 2011). Diffusée dans l‟air ou appliquée sur la
peau par massage, elle a permis de diminuer l‟agitation et l‟agressivité de personnes âgées souffrant
de démences (Motomura et al., 2001 ; Holmes et al., 2002 ; Lin et al., 2007). Plusieurs études
mentionnent également que la lavande atténue l‟anxiété de personnes exposées, volontairement ou
pas, à une situation génératrice de stress : isolement volontaire (Motomura et al., 2001), admission
aux soins intensifs, attente ou suite d‟une intervention médicale (Buckle, 1993 ; Braden et al.,
2009).
Ainsi, des chercheurs asiatiques ont constaté que l‟HE de lavande réduit la pression sanguine
et certains marqueurs physiologiques du stress (taux de cortisol) (Toda et Morimoto, 2008 ; Shiina
et al., 2008 ; Hoya et al., 2008 ; Field et al., 2008). Par ailleurs, administrée par voie orale sous
®
forme de gélules (Silexan ), l‟HE de lavande a permis d‟améliorer le sommeil ainsi que la condition
mentale et physique de volontaires souffrant de troubles anxieux (Kasper et al., 2010). En cela, elle a
fait aussi bien que le lorazépam, un médicament de la famille des benzodiazépines, habituellement
prescrit dans le traitement de l‟anxiété (Woelk et Schläfke, 2010).
Insomnie : Des études, in vitro et sur des animaux ainsi que quelques essais cliniques préliminaires,
tendent à valider l‟usage traditionnel de la lavande, pour favoriser un bon sommeil ou traiter
l‟insomnie (Lewith et al., 2005), que celle-ci soit associée ou non à des symptômes de dépression.
Un bain parfumé à l‟HE de lavande a aussi réduit l‟agitation et favorisé le sommeil profond de bébés
par rapport à un bain non parfumé (Field et al., 2008). La diffusion d‟HE de lavande a également
augmenté la concentration de jeunes adultes soumis à une série de tests informatisés. L‟effet a été
observé au cours des séances de l‟après-midi, une période plus propice à la somnolence (Sakamoto
et al., 2005).

Réduction de la douleur : Les résultats d'essais, in vitro et d'études sur des animaux, démontrent que
la lavande a des propriétés antispasmodiques et légèrement anesthésiques (Lis-Balchin et Hart,
1999 ; Ghelardini et Galeotti, 1999). Au cours d‟études cliniques préliminaires, la lavande, souvent
combinée à d‟autres HE (en massage, en diffusion ou en inhalation), a soulagé des patients souffrant
de diverses douleurs : douleur à l‟épaule à la suite d‟un accident vasculaire (Shin et Lee, 2007),
cancer en phase terminale, douleur après une laparoscopie (Kim et al., 2007) et douleur au cours
d‟un changement de pansements (Kane et al., 2004). La lavande, utilisée en bain de pieds et au cours
de traitements de réflexologie a réduit la fatigue extrême dont souffraient des patients atteints de
cancer en phase terminale (Kohara et al., 2004).

11
C ha p i t r e 1 : S y nt h è s e B i bl i og r a p hi q u e

La Commission Européenne a approuvé l'usage interne de la lavande, en infusion et en HE, pour le

traitement de l'agitation et de l'insomnie ainsi que pour les troubles digestifs d'origine nerveuse
(dyspepsie, malaises intestinaux, ballonnements, etc.). Elle a également approuvé son usage externe,
en balnéothérapie, pour le traitement des troubles fonctionnels de la circulation sanguine.

[Link]. Toxicité de l’huile essentielle

Lavandula stoechas à une faible toxicité et des HE non diluées peuvent être utilisées pour
traiter certaines brûlures et avoir des effets bénéfiques sur la cicatrisation. Cependant, des cas de
dermatite allergique après contact direct avec la peau ont été rapportés (Lis-Balchin, 2002).

12
Chapitre 3 : Résultats et discussion

3.1. Etude analytique de l'huile essentielle

3.1.1. Caractéristiques organoleptiques

Les résultats du contrôle des paramètres organoleptiques de l’HE de Lavandula stoechas sont
colligés dans le Tableau V. Ces paramètres sont en accord avec ceux répertoriés dans les normes
(AFNOR 2000).

Tableau V. Propriétés organoleptiques de l’essence aromatique de Lavandula stoechas.

Caractéristiques Résultats Normes AFNOR (2000)
Organoleptiques
Aspect Liquide mobile Liquide mobile, limpide
Couleur Jaune Jaune clair
Odeur Caractéristique, agréable, rappelant Odeur caractéristique de lavande,
l’odeur des sommités fleuries, très légèrement camphrée
légèrement camphrée

La détermination des propriétés organoleptiques est une étape nécessaire de vérification et de

contrôle de la qualité, mais demeure insuffisante pour caractériser l’HE. Il sera primordial de
déterminer le profil chromatographique de cette fraction aromatique.

3.1.2. Détermination du profil chromatographique de l'huile essentielle

Les résultats de l’analyse chromatographique (Tableau VI et Figure 3.1) rapportent, dans

l’ordre d’élution, la composition qualitative et quantitative de l’essence de lavande papillon. Au total,
vingt-huit (28) composés ont été détectés. Pour l’identification, nous avons d’abord calculé leurs
Indices de Rétention (IR) ; ensuite nous les avons comparés à ceux de la littérature.

21
Chapitre 3 : Résultats et discussion

Tableau VI. Composition chimique de l’huile essentielle de Lavandula stoechas par CG-SM.
N° Composés % RI
1 Pinene <Alpha-> 1.15 926
2 Camphene 2.36 951
3 Pinene <Beta-> 0.12 974
4 Carene<Delta-3-> 0.30 1014
5 1,8 Cineol (Eucalyptol) 17.64 1088
6 Fenchone 39.23 1091
7 Linalool 0.28 1098
8 Fenchol <exo-> 0.47 1117
9 Camphre 18.04 1149
10 Borneol 0.53 1173
11 Terpin-4-ol 0.14 1184
12 P Cymen-8-ol <Para-> 0.70 1186
13 Verbenone 0.15 1207
14 Fenchyl acetate <exo-> 0.32 1236
15 Carvone 0.15 1245
16 Borneol acetate 3.97 1285
18 Cyclosativene 0.30 1356
19 Copaene<alpha-> 0.24 1368
20 Selinene <Beta-> 0.14 1485
21 Calamenene<Cis-> 0.31 1521
23 Caryophyllene oxide 0.46 1570
24 Veridiflorol 2.17 1565
25 Ledol 0.37 1590
27 Cadinol <Alpha-> 0.41 1653
28 Cadalene 0.36 1674
IR : Indice de Rétention calculé sur une colonne apolaire (HP5-MS)

A la lecture des résultats, il apparait clairement que le fanchone représente le composé

majoritaire de l’essence du lavande papillon avec un taux de 39,23%, suivi par le Camphre (18,04%)
et le 1.8 Cinéol (17,64%) encore appelé Eucalyptol. Les autres composés sont présents avec un taux
inférieur à 3%. D’un point de vue biochimique, la famille des monoterpènes oxygénés, représentée
par les alcools et leurs esters, est la plus abondante avec un taux supérieur à 70%.

22
Chapitre 3 : Résultats et discussion

Abundance

T I C : H A L H A L .D \ d a t a . m s
1 .4 e + 0 7

1 .2 e + 0 7

1e+07

8000000

6000000

4000000

2000000

1 0 . 0 0 2 0 . 0 0 3 0 . 0 0 4 0 . 0 0 5 0 . 0 0 6 0 . 0 0 7 0 . 0 0 8 0 . 0 0 9 0 . 0 0 1 0 0 .0 01 1 0 .0 0
T im e -->

Figure 3.1. Profil chromatographique de l’essence aromatique de Lavandula stoechas.

Les études des constituants volatiles des espèces de lavande ont révélé la présence de plus de
200 constituants chimiques, beaucoup d'entre eux étant présents sous forme de traces. Certaines
espèces telles que L. stoechas synthétisent plus de 100 terpènes différents alors que d’autres espèces
telles que L. canariensis expriment une diversité terpénique beaucoup plus faible. L. stoechas a été
plus particulièrement étudiée du fait de son aire de répartition large et de son utilisation traditionnelle
très ancienne (Cavanagh et Wilkinson, 2006, Benabdelkader, 2012).

Dans une autre étude réalisée sur quatre populations sauvages de L. stoechas de la Crète
(Skoula et al. 1996), les auteurs ont montré que les principaux constituants des HE sont
alternativement, ou en combinaison le fenchone, le camphre, le 1,8-cinéol, l’α-pinène et l'acétate de
myrtényle. Par ailleurs, alors que le fenchone était un élément majeur de l’HE de toutes les quatre
populations, trois étaient également riches en camphre et la quatrième en 1,8-cinéol. Pour notre
échantillon, l’essence analysée de la lavande à papillon parait être de chémotype fenchone, avec la
présence d’un 2ème composé majoritaire, le camphre et le 1.8-cinéol. Dans une autre étude (Gören et
al. (2002), l’HE d’une [Link] originaire de Turquie, se caractérisait plutôt par un profil jamais
retrouvé et ayant une forte teneur en pulégone (40.4 %), menthol (18.1 %) et menthone (12.6 %), en
parallèle avec une absence totale de fenchone et de camphre.

23
Chapitre 3 : Résultats et discussion

3.2. Résultats de l’activité antimicrobienne de l’HE en phase liquide

L’activité antibactérienne de l’essence aromatique de Lavandula stoechas effectuée par deux

méthodes différentes et complémentaires (aromatogramme et microatmosphère) a été réalisée sur
plusieurs souches microbiennes. Au total, 06 bactéries à Gram + et 09 à Gram- ainsi que quatre 04
champignons (03 levures et 01 moisissure) ont été utilisées lors de ce screening. Les résultats de ce
test antimicrobien sont rapportés dans les Tableaux VII et VIII. A noter que le diamètre du disque
(9 mm) a été inclus dans le calcul du Diamètre de la Zone d’Inhibition (DZI).

Tableau VII . Résultats de l’activité antibactérienne in vitro de l’essence aromatique de Lavandula

stoechas en comparaison avec les antibiotiques

Méthode utilisée
Aromatogramme Microatmosphère

Quantité Huile Essentielle (μL/disque)

20 60 20 60
Souches Gram–
Escherichia coli (Ec1) 15 26 - 30
E. coli (Ec 2) 20 35 12 35
Klebsiella pneumoniae 30 65 30 55
Proteus mirabilis 18 35 - -
Pseudomonas aerogenosa 12 25 - -
Acinetobacter baumannii 20 30 45 90
Citobacter freundii - - 20 48
Salmonella enteritidis - 24 - 45
Salmonella typhi - 16 - -

Souches Gram+
Bacillus cereus 28 60 15 36
Staphylococcus aureus (Sa1) 22 45 20 65
S. aureus (Sa2) 20 80 55 90
S. aureus (Sa3) 24 80 50 90
S. saprophyticus 14 24 _ _
Streptococcus sp. _ 25 _ 30
(β-hémolytique)

(-) : aucune zone d’inhibition

24
Chapitre 3 : Résultats et discussion

A la lecture des résultats obtenus lors de ce screening antibactérien par aromatogramme, il

apparait clairement qu’à la plus faible dose, Klebsiella pneumoniae est l’espèce la plus sensible à
l’action inhibitrice de l’HE avec un DZI égal à 30 mm, suivi par E. coli (Ec 3) (20mm) et Proteus
mirabilis (18 mm). Cette action bactériostatique a été enregistrée pour les souches à Gram-. De plus
et avec le dosage le plus élevé (60 µl), Klebsiella Pneumoniae demeure toujours est la souche la plus
sensible à l’action inhibitrice de l’HE avec un DZI de l’ordre de 65 mm, suivi par E. coli (Ec 3) et
Proteus mirabilis (35mm).

Pour les bactéries à Gram +, de faibles valeurs de DZI ont été obtenues pour la plus faible
dose (20 µL), ne dépassant pas la valeur de 28 mm pour Bacillus cereus et 24 mm pour
Staphylococcus aureus (Sa2). De plus et avec la quantité la plus élevée (60 µL), deux espèces
bactériennes à savoir Staphylococcus aureus (Sa2) et S. aureus (Sa3) ont été inhibées totalement en
aromatogramme, suivi par Bacillus cereus (60 mm) et Staphylococcus aureus (Sa1) (45 mm).

Figure 3.2. Résultats de l’activité antibactérienne de l’essence aromatique de Lavandula stoechas

(Originale, 2016).

Nous avons remarqué qu’il existe une certaine différence de sensibilité entre les bactéries à
Gram+ et à Gram-. Ceci est en totale adéquation avec la majorité des travaux antérieurs (Tepe et al.,
2005). Ces derniers confirment que les Gram+ sont plus sensibles à l’action antimicrobienne de l’HE
que les Gram-. En fait, les Gram- possèdent une résistance intrinsèque aux agents biocides, qui est en
relation avec la nature de leur paroi. L'espace périplasmique est rempli d'enzymes qui dégradent les

25
Chapitre 3 : Résultats et discussion

substances complexes pour qu'ils puissent traverser la membrane cytoplasmique, et inactivent les
produits chimiques toxiques (ATB, métaux lourds, HE,...) (Burt, 2004).

Les résultats de notre screening antimicrobien semblent être en accord avec d’autres travaux
indiquant que les HE de population non-algériennes de L. stoechas possèdent également des activités
antiseptiques (Benabdelkader, 2012). Il a été rapporté que l'huile volatile de lavandes sauvages, en
provenance de Tunisie, a une activité antibactérienne vis-à-vis des Staphylococcus aureus
(Bouzouita et al., 2005). De même, des activités antibactériennes ont été signalées pour l’HE de L.
stoechas sauvage de Turquie (Gören et al., 2002). Récemment, plusieurs publications scientifiques
ont mis en exergue les propriétés inhibitrices de plusieurs espèces du genre Lavandula, en particulier
vis-à-vis de Aspergillus nidulans et Trichophyton mentagrophytes (Moon et al., 2009). Cependant, la
comparaison de l’efficacité des extraits aromatiques, ou des constituants individuels, à travers les
différentes publications, reste difficile à établir. Cette difficulté réside dans le fait que les paramètres
expérimentaux (méthodes employées, conditions physiologiques des germes, dose utilisée) diffèrent
entre les études.

Pour les résultats obtenus en aromatogramme, les souches fongiques demeurent les plus
sensibles à l’action inhibitrice de l’essence aromatique in vitro. Candida albicans est l’espèce le plus
sensible à l’action inhibitrice de l’HE avec un DZI égal à 45 mm, suivi par Saccharomyces cerevisiae
(Sc1), Saccharomyces cerevisiae (Sc2) (30mm) et Aspergillus braziliensens (20 mm).

Tableau VIII. Résultats de l’activité antifongique in vitro de l’essence aromatique de Lavandula

stoechas en comparaison avec des antifongiques.

Méthode utilisée

Aromatogramme Microatmosphère
Quantité HE (μL/disque)

20 60 20 60
Souches
Candida albicans 24 45 24 90
Saccharomyces cerevisiae (Sc1) 18 30 35 90
Saccharomyces cerevisiae (Sc2) 15 30 00 55
Aspergillus braziliensens 12 20 _ 70

26
Chapitre 3 : Résultats et discussion

Beaucoup de chercheurs ont confirmé la présence de l'activité antifongique des métabolites

terpéniques des lavandes. Nos résultats sont en concordance avec ceux de plusieurs travaux
antérieurs (Lis-Balchin, 2002 ; Zuzarte et al., 2013). Le mécanisme d’action des extraits
aromatiques sur les souches fongiques n’a pas été totalement élucidé. Cependant, certaines études
soulignent que l’action antifongique de ces substances terpéniques est due à une augmentation de la
perméabilité de la membrane plasmique suivie d'une rupture de celle-ci, entrainant une fuite du
contenu cytoplasmique et donc la mort de la levure (Cox et al., 2000). La lyse des cellules de levure
a été montrée par la libération de substances absorbant à 260 nm (Chami et al., 2005).

L’activité antibactérienne des HE ainsi que leur mode d’action sont directement influencés par
la nature et la proportion de leurs constituants qui entrent dans leur composition. Les composés
majoritaires sont souvent responsables de l’activité antibactérienne observée (Dorman et Deans,
2000). En effet, il est admis que l’activité antimicrobienne des HE se classe dans l’ordre décroissant
selon la nature de leurs composés majoritaires: phénols > alcools > aldéhydes > cétones > oxydes >
hydrocarbures > esters (Dorman et Deans, 2000).

Dans notre étude, la composition de l’HE utilisée est dominée par la présence de fenchone,
camphre, et 1,8-cinéol qui sont réputés comme des composés terpéniques ayant un pouvoir
antimicrobien (Dorman and Deans, 2000).
Le travail mené par (Dorman et Deans, 2000), les alcools terpénoïdes ont montré une activité
contre les germes testés, en agissant comme des agents dénaturant les protéines ou des agents
déshydratants. Les alcools sont d’ailleurs reconnus pour exercer un effet plutôt bactéricide que
bactériostatique (Dorman et Deans, 2000).
Dans une autre étude, c’est le linalool qui s’est montré le plus efficace avec l’inhibition de 17
bactéries. Il était suivi par le cinéole et le géraniol (chacun d’eux inhibant 16 bactéries), puis par le
menthol et le citral qui ont inhibé respectivement 15 et 14 bactéries (Pattnaik et al., 1997). De ce
fait, le pouvoir antimicrobien de l’essence de la lavande pourra être relié, sans doute, à son profil
biochimique caractérisé par la prédominance des composés oxygénés (90%) (Cavanagh et
Wilkinson, 2002).

3.3. Résultats de l’activité antimicrobienne de l’HE en phase vapeur

D’après les résultats obtenus en microatmosphère, nous avons remarqué que Staphylococcus
aureus (Sa3), est la souche la plus sensible à l’action inhibitrice de la phase vapeur de l’essence de
lavande avec un DZI de l’ordre de 55 mm pour la plus faible dose, suivie par S. aureus (Sa2) 50 mm

27
Chapitre 3 : Résultats et discussion

et S. aureus (Sa1) 20 mm (Tableau VII). Un pouvoir antibactérien de la phase vapeur de l’essence a

été remarquée pour les bactéries à Gram +. Par ailleurs, une inhibition totale a été enregistrée avec
certains staphylocoques pathogènes.

Concernant les bactéries à Gram -, les DZI obtenus ne dépassent pas, dans les meilleurs des
cas, une valeur de 45 mm pour Acinetobacter baumannii avec la plus faible dose, suivi par
Klebsiella Pneumoniae (30 mm). De plus et avec le dosage le plus élevé (60 µl), l’espèce
bactérienne Acinetobacter baumannii a été inhibée totalement en microatmosphère, suivi par
Klebsiella Pneumoniae (55mm) et Citobacter freundii (48mm). Ces résultats semblent être différents
de ceux obtenus en aromatogramme. En outre, les isolats de Pseudomonas aeruginosa et Salmonella
typhi ont manifesté une résistance totale à l’action inhibitrice de la phase vapeur. Par ailleurs, les
meilleurs résultats obtenus en phase vapeur demeurent, sans conteste, ceux du pouvoir antifongique
de l’essence de lavande (Tableau VIII). Les levures Candida albicans et Saccharomyces cerevisiae
(Sa1) ont été inhibées totalement en microatmosphère, suivie par Aspergillus braziliensens (70 mm)
et Saccharomyces cerevisiae (Sa2) (55mm).

Le mode d’action fongicide des HE a été abordé par quelques études qui sont arrivées à la
conclusion que ce mécanisme se manifeste par une altération de la membrane plasmique de la cellule
fongique (Cox et al., 2001).

28
Chapitre 3 : Résultats et discussion

Figure3.3. Résultats de l’activité antifongique de l’essence aromatique de Lavandula stoechas

(Originale, 2016).

En thérapie, l’essence de lavande pourra trouver une place comme désinfectant atmosphérique
en milieu hospitalier afin de lutter contre les infections nosocomiales et les contaminations
aéroportées, ainsi que pour le contrôle de l’hygiène de l’air. Bien conduite, la diffusion
atmosphérique devient un procédé idéal visant à la protection et à la prévention contre les infections
nosocomiales et les pathologies hivernales (De Billerbeck, 2002 ; Laird et Phillips, 2012).
Rappelons pour mémoire que ce sont les médecins, « parfumeurs et fumigateurs », qui été chargés de
la désinfection des locaux et de l’hygiène hospitalière au XVIIIème siècle. En plus de leurs actions
bactéricide et fongicide, les essences de lavande ont la particularité d’avoir des effets
psychophysiologiques bénéfiques (Lis-Balchin, 2002).

Les résultats que nous avons obtenus sont très prometteurs pour l’utilisation de l’essence de la
lavande comme principe actif, dans des préparations galéniques à visée thérapeutique, ou pour lutter
contre les infections microbienne et fongique. Ces résultats obtenus in vitro sont très encourageants
pour une éventuelle application in vivo, voire même dans une matrice alimentaire.

29
Chapitre 3 : Résultats et discussion

3.6. Activité bio insecticide de l’HE (par contact-inhalation)

 Sur les pucerons Aphis spireacola (adultes)

A la lecture des résultats obtenus pour les insectes adultes Aphis spireacola (La Figure3.7,
Tableau IX - Annexe), il apparait que l’HE a provoqué un pourcentage de mortalité allant de 21,46 à
100% au bout de 48h d’exposition de la plus faible dose à la plus forte dose (de 20µl à la dose pure).
Ces mortalités se sont échelonnées dans le temps. En effet au bout de 48h elle passe de (1.67 à
21.46%), (5,59 à 57,66%), (7,25 à 87,11%), (9,5 à 100%) respectivement pour les quatre doses
(20,40 ,80µl et pure).

300

250
Porcentage de mortalité

200
pure
150 80µl
40µl
100
20µl

50

0
1h 6h 12h 24H 48h

Figure 3.7. Cinétique du taux de mortalité des insectes (Aphis spiraecola) vis a vis l’HE.

La mortalité de 50% a été engendré par les doses 20 µl et 40µl. A la dose pure le taux de
mortalité a dépassé les 90%. Ces résultats sont confirmés par la DL50 et la DL90 et calculées à
partir de la droite de régression, qui sont respectivement 31.62 µl et 309.02 µl.

30
Chapitre 3 : Résultats et discussion

Droite d'ajustement
probit = 3,047 + 1,297 log(dose)
S 0,591999
8 R carré 91,5 %
R carré (ajust) 87,3 %

7
probit

4
1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0
log(dose)

Log(dose) : logarithme décimal des doses ; probit : les valeurs de mortalités corrigées et transformées

Figure 3.8. Détermination de la DL50 et la DL90 de l’HE vis-à-vis les insectes d’Aphis spireacola.

L’analyse de variance du taux de la mortalité des adultes Aphis spiraecola des différences
significatives entre les quatre doses utilisées avec une valeur de F=4.10 (F: coefficient de
signification) et P=0.025 ≤ 0.05 (Tableau XII - Annexe).

 Sur la mineuse de la tomate Tuta absoluta (larves)

D’après les résultats (Figure 3.9, Tableau X-Annexe), l’HE est révélé toxique contre les larves
(Tuta absoluta) a la dose 80µl et la dose pure. A la première heure d’exposition au traitement, les taux
de mortalités pour les deux doses (80µl et pure) sont respectivement 13,33 et 60%. Après 48h
d’exposition il y a eu une augmentation de cette dernière qui a atteint 75 et 100% respectivement. A
la même durée d’exposition, la dose 20 et 40 µl n’a provoqué qu’un taux faible de mortalité 25 et
41,6% respectivement.

31
Chapitre 3 : Résultats et discussion

30000,00%

25000,00%
porcentagede de mortalité

20000,00%
Pure

15000,00% 80µl
40µl
10000,00% 20µl

5000,00%

0,00%
1h 2h 6h 12h 24h 48h

Figure 3.9. Cinétique de la mortalité des insectes (Tuta absoluta) vis à vis l’HE.

La DL 50 et la DL 90 sont de 46.45µl et de 410.20µl successivement, nous avons remarqué

que la DL 50 est compris entre 40µl et 80µl, alors que la DL 90 se situe entre 80µl et la dose pure
(Figure3.10).

Droite d'ajustement
probit = 2,744 + 1,353 log(dose)
S 0,291951
8 R carré 98,0 %
R carré (ajust) 97,0 %

7
probit

4
1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0
log(dose)

Figure 3.10. Détermination de la DL50 et la DL90 de l’HE vis-à-vis les larves de Tuta absoluta.

32
Chapitre 3 : Résultats et discussion

L’analyse de variance de la mortalité des larves de Tuta absoluta montre une différence
hautement significative entre les doses utilisées avec une valeur de F=22.37 et P =0.000 ≤0.05
(Tableau XIII- Annexe).

 Sur la coccinelle asiatique Harmonia axyridis (adultes)

Les résultats obtenus pour la coccinelle asiatique (Harmonia axyridis) (Figure 3.11, Tableau
XI-Annexe), ont montré que les mortalités enregistrées pour l’HE pure a provoqué 100% de
mortalité après 48h de traitement. Pour les autres doses les mortalités enregistrées sont inferieures à
50%.

180
160
140
Porcentage de mortalité

120
Pure
100
80µl
80
40µl
60
20µl
40
20
0
1h 2h 6h 12h 24h 48h

Figure 3.11. Cinétique de la mortalité des insectes (Harmonia axyridis) vis à vis l’HE.

La DL50 et la DL90 ont été calculées à partir de fonction de la droite de régression sont de
151µl et 645.65µl respectivement (figure 3.12).

33
Chapitre 3 : Résultats et discussion

Droite d'ajustement
probit = 0,5773 + 2,029 log(dose)
S 0,0647967
8 R carré 100,0 %
R carré (ajust) 99,9 %

7
probit

1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0

log(dose)

Figure 3.12. Détermination de la DL50 et la DL90 de l’HE vis-à-vis les adulte d’ Harmonia axyridis.

L’analyse de variance du taux de la mortalité des adultes d’Harmonia axyridis montre une
différence hautement significative entre les dose de traitement avec une valeur de F=20.74 et
P=0.000 ≤ 0.05 (Tableau XIV- Annexe).

Les essais réalisés ont montré que l’huile essentielle de Lavandula stoechas a un effet bio-
insecticide sur les trois insectes quelle que soit leurs stade de développement. En effet cette toxicité a
été enregistrée selon les niveaux de concentration de l’HE et la durée d’exposition.

Les résultats ont montré que l’huile essentielle de Lavandula stoechas est plus toxique lorsqu’il est
appliqué sous sa forme pure ; provoquant une mortalité de 100% après 48h d’exposition.

De nombreux travaux ont été réalisés sur ce sujet en utilisant la même essence et aussi le même
genre d’insectes (puceron). En effet les études menées par (Amirat et al., 2011) ont montré une
bonne activité bio-insecticide de l’HE de la même plante qui peu agir comme toxiques ou répulsifs.

Selon Amirat et Tebboub, (2011), les huiles de Lavandula stoechas manifeste des effets toxiques
et répulsifs vis-à-vis des pucerons (Aphis pomi), les taux des mortalités de puceron augmentent
proportionnellement avec la dose de l’HE. Ces travaux confirment nos résultats pour Aphis
spiraecola.

34
Chapitre 3 : Résultats et discussion

Par contre, les larves de Tuta absoluta sont beaucoup plus résistantes aux différentes dilutions
(20, 40 et 80µl), comparativement aux adultes d’Aphis spiraecola, car ces larves creusent des galeries
ou elles peuvent pénétrer dans les feuilles. Ces galeries offrent un échappe ou bien une protection
pour ces larves.

Selon Ngamo et Hance (2007) une huile essentielle n’exerce pas forcément la même activité
aux différents stades du cycle biologique d’un insecte, comme il existe une grande variation dans la
sensibilité des espèces d’insectes pour une même huile essentielle.

Selon Bostanian et al. (2005) les huiles essentielles agissent directement sur la cuticule des insectes
et acariens à corps mou, ils sont moins efficaces avec des insectes à carapace dure tels que les
coléoptères et hyménoptères adultes.

Pour les essais de l’HE sur chaque insecte, les résultats des tests statistiques montrent qu’il
existe une variation concernant le taux de mortalité, qui dépend de la dose utilisée en huiles
essentielles et la durée d’exposition. L’évaluation de la mortalité des larves de Tuta absoluta et les
adultes d’Harmonia axyridis ont révèle une différence hautement significative. Selon Kim et al.
(2003) les effets toxiques des huiles essentielles dépendent de l’espèce d’insecte, et du temps
d’exposition.

La toxicité des huiles essentielles sur les insectes est induite par l’action de leurs composés
majoritaires (Seri-Kouassi et al ., 2004). En effet, l’efficacité insecticide des HE peut être singulière
ou lorsqu’elles sont mises ensemble (Ngamo et Hance, 2007).

Les mécanismes d’action des huiles essentielles sont méconnus et relativement peu d’études
ont été réalisées à ce sujet (ISMAN, 2005). Les travaux récents montrent que les monoterpènes
agissent au niveau des récepteurs de l’acéthyl-cholinestérase des jonctions neuromusculaires (Ngamo
et Hance, 2007) Effectivement, d'après les travaux d’Obeng-Ofori (1997), le 1,8-cinéole au contact
avec les insectes agit en bloquant la synthèse de l'hormone juvénile, il inhibe l'acétyl-chlolinestérase
en occupant le site hydrophobique de cet enzyme qui est très actif. En général, les huiles essentielles
sont de nos jours connues comme des neurotoxines (Ngamo et Hanc, 2007).

35
Chapitre 2 : Matériel et méthodes

2.1. Objectif du travail

Notre étude s’est étalée sur une période de 4 mois, de février jusqu’au mois de mai 2016. Les
différentes expérimentations ont été effectuées dans les structures suivantes :
 Centre de Recherche (CRAPC) (Bou-Ismail) afin de déterminer la composition chimique de
l’HE de la lavande et son profil chromatographique.
 Laboratoire bactériologie de l’Etablissement Publique Hospitalier (EPH) de Fabour et
laboratoire d’hygiène de l’Etablissement Public de la Santé (EPSP) Blida dans le but d’asseoir les
propriétés antibactériennes et antifongiques de l’essence de lavande in vitro.
 Laboratoire d’Entomologie de l’institut national de la protection des végétaux (I.N.P.V) de
Boufarik dans le but d’évaluation de l’activité bio insecticide de l’essence de lavande in vitro.

2.1. Matériel

2.1.1. Matériel biologique

[Link] Matériel végétal

L’huile essentielle de Lavande papillon (Lavandula stoechas) a été extraite par la société
« [Link] » spécialisée dans la production des huiles essentielles, sise à Lakhdaria (Bouira). L’HE
a été extraite à partir de la parie aérienne fraiche de la plante (tige, feuilles et fleurs) au mois de Juin
2015. Le procédé d’extraction utilisé est l’entrainement à la vapeur d’eau conduit à échelle
industrielle.
Aussi, l’HE est certifiée « 100% naturelle » car n’ayant était additionnée ou mélangée à aucun
solvant organique durant la phase de production. L’HE a été conservé dans des flacons stériles teintés
à 4°C à l’abri de l’air et de la lumière, pendant toute la durée de notre travail, pour éviter d’éventuels
phénomènes d’oxydation ou de contamination.

[Link]. Souches microbiennes étudiées

Afin d’évaluer le pouvoir antiseptique de l’essence aromatique de la lavande, un screening

antimicrobien de l’essence aromatique de lavande papillon a été effectué, in vitro, sur quinze (15)
souches bactériennes et quatre (04) isolats fongiques. Certaines souches sont de référence ATCC
(American Type Culture Collection) alors que d’autres ont été isolées à partir des prélèvements de
malades ayant contracté différentes infections (intoxications alimentaires, infections urinaires ou
cutanées), au niveau du laboratoire bactériologie (EPH Fabour, et laboratoire d’hygiène de Blida).

13
Chapitre 2 : Matériel et méthodes

Ces bactéries et champignons ont été conservés et maintenus en vie, par des repiquages continus, sur
des milieux de culture adéquats.

Tableau III. Souches bactériennes utilisées pour le screening antibactérien in vitro de l’essence de
Lavandula stoechas.
Souches bactériennes Origine Famille
Bactéries à Gram -
Salmonella typhi ATCC25911 Enterobacteriaceae
Pseudomonas aeruginosa ATCC27853 Pseudomonadaceae
Escherichia coli (Ec1) ATCC 25922 Enterobacteriaceae
Escherichia coli (Ec2) ECBU Enterobacteriaceae
Acinetobacter baumannii ECBU Pseudomonadaceae
Citobacter freundii ECBU Enterobacteriaceae
Klebsiella pneumoniae Pus Enterobacteriaceae
Proteus mirabilis Pus Enterobacteriaceae
Salmonella Enteritidis Pus Enterobacteriaceae
Bactéries à Gram +
Bacillus cereus ATCC 10876 Bacillaceae
Staphylococcus aureus (Sa1) ATCC 25923 Micrococcaceae
Staphylococcus aureus (Sa2) ATCC 6538 Micrococcaceae
Staphylococcus saprophyticus ECBU Micrococcineae
Staphylococcus aureus (Sa3) Pus Micrococcaceae
Streptococcus sp. (β hémolytique) Pus Micrococcineae

ATCC: American Culture Collection; ECBU: Examen Cytobactériologique des Urines.

Tableau IV. Souches fongique utilisées pour le screening antifongique in vitro de l’essence de
Lavandula stoechas.
Souche fongique Origine Famille
Levures
Candida albicans ATCC24433 Cryptococcaceae
Saccharomyces cerevisiae (Sc1) ATCC9763 Saccharomycetaceae
Saccharomyces cerevisiae (Sc2) Alimentaire Saccharomycetaceae
Moisissure
Aspergillus braziliensens ATCC16404 Trichocomaceae

14
Chapitre 2 : Matériel et méthodes

[Link]. Matériel animale

L’étude a porté sur trois espèces d’insectes différentes, elles sont prélevées à partir d’une
parcelle mise en place à cet effet à la station expérimentale de l’Institut National de la Protection des
Végétaux (I.N.P.V) Boufarik.
Les pucerons Aphis speraecola sont prélevés à partir des feuilles infestées des arbres de
clémentinier. La mineuse de la tomate Tuta absoluta, est prélevé des plants de la tomate (variété
Cawa). La collecte des coccinelles asiatiques Harmonia axyridis a été faite dans un champ de roseau
commun ou il y a une grande invasion de puceron.

2.1.2. Matériel non biologique

Milieux de culture, les instruments utilisés et les réactifs : (voir annexe).

2. 2. Méthodes

2.2.1. Étude analytique de l’huile essentielle

[Link]. Propriétés organoleptiques de l’huile essentielle

Les différentes caractéristiques organoleptiques (aspect, couleur et odeur) de l’essence
aromatique de la lavande sauvage ont été notées.

[Link]. Analyses chromatographiques de la fraction aromatique

-Principe de la Chromatographie gazeuse-Spectrométrie de masse (CG-SM)

Le spectromètre de masse couplé à un chromatographe en phase gazeuse permet d’identifier
et de quantifier les constituants d’un mélange de molécules volatiles. En soumettant une HE à la CG-
SM, nous déclenchons un processus à plusieurs étapes :
- ionisation des molécules qui se volatilisent sous l’effet de la haute température.
- accélération des ions formés qui se dirigent vers le dispositif de séparation.
- séparation des ions et leur distribution suivant leur rapport masse /charge et leur détection.
- traitement du signal : le signal de sortie de l’appareil conduit au spectre de masse qui constitue la
représentation conventionnelle de l’abondance des ions en fonction de leurs rapports m/z.
La comparaison informatique du spectre d’un pic inconnu avec une ou plusieurs « librairies » de
référence permet son identification. Ce couplage augmente considérablement la quantité et la qualité
des informations obtenues (Adams, 2004).

15
Chapitre 2 : Matériel et méthodes

-Conditions opératoires
Les analyses chromatographiques de l’HE ont été effectuées sur un chromatographe en phase
gazeuse type Hewlett-Packard (6890) couplé avec un spectromètre de masse (Quadripôle). La
fragmentation est effectuée par impact électronique à 70eV. La colonne utilisée est une colonne
capillaire HP-5MS (30m x 0.25mm), l’épaisseur du film est de 0.25μm. La température de la colonne
est programmée de 45°C pendant 8 min, pallier 2°C min-1 jusqu’ à 300°C. Le gaz vecteur est
l’hélium pur dont le débit est fixé à 0.5 ml. min-1. Le mode d’injection est le mode split (rapport de
fuite : 1/70) avec une valeur d’injection 0.2µl. L’appareil est relié à un système informatique gérant
une bibliothèque de spectre de masse NIST 98 et piloté par un logiciel « HP ChemStation »
permettant de suivre l’évolution des analyses chromatographiques.

-Identification des constituants

L’identification des constituants a été faite sur la base de la comparaison de leurs Indices de
Rétention (IR) avec ceux des composés de référence de la littérature (Adams, 2004). Une
confirmation est apportée à l'aide des spectres de masse en comparaison avec ceux des composés
standard de la banque de données informatisée (NIST 98).
La préparation de la table des n-alcanes pour la mesure des indices de Kovats des composées
identifiés dans l’HE a été faite comme suit : Solution des n-alcanes de C8 à C26 (origine: Aldrich et
Fluka Chemicals) à 5% dans le pentane, soit 0,1g de chaque alcane dans 20 ml de pentane, conservé
au réfrigérateur. L’identification des composés a été effectuée par comparaison de leurs IR (Indices
de Kovats) et des spectres de masse ions-fragments caractéristiques obtenus expérimentalement à
ceux cités dans la littérature et/ou inventoriés dans les banques de librairies spectrales (Wiley7, NIST
2002). Les indices de Kovats (IK) sont calculés comme suit :
IK = 100 n + 100 * (TRc – TR n / TR n + 1 – TR n )
n: Nombre d’atomes de carbone de l’alcane élué avant le compose;
TRc : Temps de rétention du composé ;
TRn : Temps de rétention de l’alcane à n atomes de carbone élué avant le composé ;
TRn+1 : Temps de rétention de l’alcane à n+1 atomes de carbone élué après le composé.

2.2.2. Étude de l'activité antimicrobienne de l’huile essentielle

[Link]. Microatmosphère ou méthode en phase vapeur

16
Chapitre 2 : Matériel et méthodes

Nous avons utilisés cette méthode dans le but d’exploiter les propriétés antimicrobiennes de la phase
volatile de l’HE (Figure 2.2). Cette méthode est rarement citée car les auteurs qui se sont penchés
spécifiquement sur l’activité de la phase gazeuse sont encore peu nombreux (Tyagi et Malik, 2011).
La différence entre cette technique et les aromatogrammes réside principalement dans la position du
disque imprégné. Cette technique permet de mettre en évidence la diffusion des composants volatils
des HE à l’intérieur d’une boîte Pétri. Le disque imprégné est déposé au centre du couvercle de la
boîte Pétri, renversée pendant la durée de l’expérience. Celui-ci n’est donc plus en contact avec le
milieu gélosé. La boîte est fermée avec le couvercle en bas et mise à l’étuve à des températures
adéquates. Il se produit une évaporation des substances qui, en contact avec les microorganismes
ensemencés sur la gélose, vont inhiber leur croissance. A la sortie de l’étuve, l’absence de la
croissance microbienne se traduit par une zone translucide sur la gélose de contour plus ou moins
nette à tendance circulaire.

[Link]. Technique en milieu solide : Méthode des aromatogrammes

Nous avons adopté la technique de (Tyagi et Malik, 2011) pour évaluer dans un premier
temps l'activité antimicrobienne de l’HE. L’aromatogramme qui est basée sur une technique utilisée
en bactériologie médicale, appelée antibiogramme ou méthode par diffusion en milieu gélosé. Elle a
l’avantage d’être d’une grande souplesse dans le choix des produits à tester, de s’appliquer à un très
grand nombre d’espèces et d’avoir été largement évaluée. Cette technique (Figure 2.1) repose sur le
pouvoir migratoire par diffusion des HE à l’intérieur d’une boîte Pétri, dans un milieu nutritif solide.
Dans cette méthode, nous avons utilisé des disques de papier filtre de 9 mm de diamètre (Schleicher
& Schuell, Bio Science GmbH, Dassel et Germany), imprégnés d’une quantité d’HE (20 et 60
µl/disque) que nous déposons à la surface d’un milieu gélosé (Muller-Hinton (MH) pour les bactéries
ou la gélose Sabouraud additionné de Chloramphénicol (SAB) pour les champignons) préalablement
ensemencé en surface avec une suspension. La boîte est ensuite fermée et incubée dans l’étuve à
37°C pendant 24 heures pour les bactéries et à 25°C pendant 72h ou 5 jours pour les levures et les
moisissures, respectivement. Chaque dose diffusée à partir du disque au sein de la gélose et y
détermine un gradient de concentration. Les bactéries et les champignons croissent sur toute la
surface de la gélose sauf là où elles rencontrent une concentration d'essence suffisante qui inhibe leur
croissance. A la sortie de l’étuve, l’absence de la croissance microbienne se traduit par un halo
translucide autour du disque dont le diamètre est mesuré et exprimé en mm.

17
Chapitre 2 : Matériel et méthodes

Figure 2.1. Illustration de la méthode de Figure 2.2. Illustration de la méthode de

microatmosphère (Zaika, 1988). l’aromatogramme (Zaika, 1988).

2.2.4. Evaluation de l’activité bio insecticide de l’HE (par contact-inhalation)

Les doses d’huile essentielle ont été utilisées est préparées en diluant chaque fois dans 10ml
de solvant (acétone) les volumes successifs 20 µl, 40 µl, 80 µl, et une dose pure.

Dans ce test nous avons utilisé 60 insectes de l’Aphis spiraecola qui ont été mises dans
chaque boite de Pétri contenant un support végétal (1 à 2 feuilles de clémentinier) avec les
différentes doses de l’HE, l’acétone est utilisé comme témoins pour les trois essais, 05 larves de Tuta
absoluta ont été introduites dans chaque boite de Pétri contenant un support végétal (1 à 2 feuilles
de la tomate variété Cawa) et 05 insectes adultes d’Harmonia axyridis dans un support d’élevage
contenant des feuilles de roseau infestées par le puceron (1 à 2 feuilles).

Chaque essai est répété trois fois, la lecture des résultats a été faite après 1h, 2h, 4h, 6h, 24h,
et 48h. Les boites sont conservées dans des conditions ambiantes de température et hygrométrie.

Les pucerons (Aphis spiraecola) La mineuse de la tomate (Tuta La coccinelle (Harmonia

absoluta) axyridis)

18
Chapitre 2 : Matériel et méthodes

Figure 2.3. Observation des trois insectes par la loupe binoculaire (Originale, 2016)

 Estimation de la mortalité et calcul de DL50 et DL 90

Le comptage des insectes morts (adultes et larves) est réalisé pendant une période de 48
heures. Les mortalités enregistrées ont été exprimées après la correction des résultats du témoin.
L'efficacité d'un produit est évaluée par la mortalité. Le nombre d'individus dénombrés morts dans
une population traitée par un toxique n'est pas le nombre réel d'individus tué. Il existe, en fait dans
toute population traitée une mortalité naturelle qui vient s'ajouter à la mortalité provoquée, les
pourcentages de mortalité doivent être corrigés par la formule d'Abbott (Abbott, 1925).

MC % = ( M – Mt ) * 100 / ( 100 – Mt )

MC : Mortalité corrigée.

M : Pourcentage de morts dans la population traitée.

Mt : Pourcentage de morts dans la population témoin.

Dans le but de mieux comprendre la relation qui existe entre la mortalité des doses utilisées et le
temps d’exposition de l’huile essentielle, nous avons déterminé leur DL50 et DL90.

La dose létale pour 50% de la population d’insectes DL50 est calculée par la méthode des
Probits (Fanny, 2008). Les pourcentages de mortalité sont transformés en Probits. La régression du
logarithme de la dose en fonction des Probits des mortalités à l’aide de logiciel MINITAB (version
17) a permis de déterminer la DL50 et DL90 de HE de Lavandula stoechas.

Pour estimer le taux de mortalité de l’effet bio insecticide d’HE, une analyse de la variance
(ANOVA) a été effectuée en fonction des concentrations et de la durée à l'aide d’un logiciel
MINITAB (version 17).

19
 CONCLUSION

Les plantes aromatiques et médicinales riches en principes actifs trouvent des applications dans
de nombreux domaines notamment dans le domaine alimentaire.

Dans ce contexte, nous avons essayé d’évaluer in vitro des activités antibactériennes,
antifongique et bio insecticide de l’huile essentielle d’une plante médicinale, largement répandue dans
le bassin méditerranéen, la lavande papillon (Lavandula stoechas L.).

La composition chimique de l’HE par analyse chromatographique CG-SM nous a permis

d’identifier et de quantifier 28composés, fenchone (39,23%), Camphre (18,04%), et le 1.8 cinéol
(17,64%) comme composés majoritaires.

L’évaluation de l’activité antimicrobienne de l’HE sur différents germes pathogènes, isolés

cliniquement ou provenant d’une collection de référence. Par deux méthodes (microatmosphère et
aromatogramme) ont montré que huile étudier est fortement inhibitrice pour les concentrations
utilisées.

L’essence de Lavandula stoechas L. peut être considérée comme un antibactérien car elle
présente une bonne action inhibitrice sur plusieurs souches bactériennes comme les Staphylocoques
pathogènes ou certains Entérobactéries. Cette essence pourra être cataloguée aussi comme un
antifongique puissant car elle présente un large spectre d’action sur les levures et les moisissures telles
que Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae et Aspergillus braziliensens avec des zones
d’inhibition très importantes. Ces résultats laissent entrevoir la possibilité d’une éventuelle utilisation
des essences de lavande dans la désinfection de l’air dans les hôpitaux.
L’huile essentielle de Lavandula steochas L. a montré une activité biocide et répulsive
intéressante sur les pucerons Aphis speraecola , et la mineuse de la tomate Tuta absoluta, par contre
il a été enregistré un taux de mortalité au-dessus 50 % sauf pour la dose pure chez les adultes de
coccinelle asiatique Harmonia axyridis.

En perspective cette essence peut être utilisée comme matière première active dans la
formulation de biopesticide.

38
 En effet nos travaux peuvent se poursuivre dans ce sens afin de trouver une formulation
appropriée qui sera testée en milieu paysan sur une parcelle de culture.

L’utilisation des essences de lavande dans la désinfection de l’air dans les hôpitaux ou encore
dans la lutte contre les infections nosocomiales.

39
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

1. AFNOR. (2000). Recueil de normes : les huiles essentielles. Tome 2. Monographies relatives aux huiles
essentielles. AFNOR, Paris, France.
2. ADAMS, R. P. Identification of essential oil components by gas chromatography/ mass spectroscopy.
Illinois: Allured Publishing Corporation, 2004. p.1-69.
3. Amirat N., Tebbob S., Sebti M., 2011. Effet Insecticides de l’huile essentielle chémotypées de deux
plantes aromatiques lavandula steochas et origanum glandulosum de la région de Jijel.
4. Bellakhdar, J., 1997 la pharmacopée marocaine traditionnelle. Médecine arabe ancienne et savoirs
populaires. IBIS Pess.318 P.
5. Benabdelkader, T. (2012). Biodiversité, bioactivité et biosynthèse des composés terpéniques volatils des
lavandes ailées, Lavandula stoechas sensu lato, un complexe d'espèces méditerranéennes d'intérêt
pharmacologique. Thèse de Doctorat en Science, Filière de Biologie. Université Jean Monnet-Saint-Etienne
(France) en co-tutelle avec l’Ecole normale supérieure de Kouba (Alger, Algérie).
6. Bostanlan. J., Akalach M., and Chiasson H., 2005. Effects of a Chenopodium based botanical
insecticide/acaricide on Orius insidiosus (Hemiptera: Anthocoridae) and Aphidius colemani (Hymenoptera:
Braconidae). Pest Manag. Sci, 61, pp: 979-984.
7. Bouzouita, N., Kachouri, F., Hamdi, M., Chaabouni, M. M., Aissa, R. B., Zgoulli, S., & Lognay, G. C.
(2005). Volatile constituents and antimicrobial activity of Lavandula stoechas L. oil from Tunisia. Journal of
Essential Oil Research, 17(5), 584-586.
8. Braden, R., Reichow, S., & Halm, M. A. (2009). The use of the essential oil lavandin to reduce
preoperative anxiety in surgical patients. Journal of Perianesthesia Nursing, 24(6), 348-355.
9. Bradley, B. F., Brown, S. L., Chu, S., & Lea, R. W. (2009). Effects of orally administered lavender
essential oil on responses to anxiety‐provoking film clips. Human Psychopharmacology: Clinical and
Experimental, 24(4), 319-330.
10. Bruneton J. « Pharmacognosie, Phytochimie, Plantes médicinales ». Editions Tec & Doc, Paris 1999,
éditions médicales internationales, pp: 483-560.
11. Buckle, J. (1992). Aromatherapy. Nursing Times, 89(20), 32-35.
12. Cassé, C. (2013). La mémoire de l’exploitation de la lavande dans le pays barrêmois.
13. Cavanagh, H. M. A., & Wilkinson, J. M. (2002). Biological activities of lavender essential oil.
Phytotherapy Research, 16(4), 301-308.
14. Chami, F., Chami, N., Bennis, S., Bouchikhi, T., & Remmal, A. (2005). Oregano and clove essential
oils induce surface alteration of Saccharomyces cerevisiae. Phytotherapy Research, 19(5), 405-408.
15. Chaytor, D. A. (1937). A taxonomic study of the genus Lavandula. Journal of the Linnean Society of
London, Botany, 51(338), 153-204.
16. Cox, S. D., Mann, C. M., Markham, J. L., Bell, H. C., Gustafson, J. E., Warmington, J. R., & Wyllie, S.
G. (2000). The mode of antimicrobial action of the essential oil of Melaleuca alternifolia (tea tree oil). Journal
of Applied Microbiology, 88(1), 170-175.
17. Cox S.D., Mann C.M. & Markham J.L., 2001. Interactions between components of the essential oil of
Melaleuca alternifolia. Journal of Applied Microbiology 91: pp. 492-497.
18. Cseke, L.J. et p.b. kaufman. 1999. How and Why and why these compounds are synthesized by plants.
Pages 37-90 in p.b kaufman, L.J. cseke, S. Waber, J.A. Duke et H.L. Brielmann (eds.), Naturel products from
[Link] Press, Boca Raton, FL.
19. De Billerbeck, V. G., Roques, C., Vanière, P., & Marquier, P. (2002). Activité antibactérienne et
antifongique de produits à base d'huiles essentielles. Hygiènes, 3, 248-51...
20. Dorman, H. J. D., & Deans, S. G. (2000). Antimicrobial agents from plants: antibacterial activity of
plant volatile oils. Journal of Applied Microbiology, 88(2), 308-316.

40
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

21. Dung N.T., Kim J.M. and Kang S.C., 2008. Chemical composition, antimicrobial and antioxidant
activities of the essential oil and the ethanol extract of Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr and Perry buds.
Food and Chemical Toxicology 46: pp.3632-3639.
22. Dupin C, Festy D. (2012). La lavande, c'est malin: Huile essentielle, fraîche ou séchée, découvrez les
incroyables vertus de cette fleur pour la beauté, la santé, la maison. Leduc Éditions, France.
23. Field, T., Field, T., Cullen, C., Largie, S., Diego, M., Schanberg, S., & Kuhn, C. (2008). Lavender bath
oil reduces stress and crying and enhances sleep in very young infants. Early Human Development, 84(6), 399-
401.
24. Gachkar L., Yadegari D., Rezaei M.B., Taghizadeh M., Astaneh S.A. and Rasooli I., 2007. Chemical
and biological characteristics of Cuminum cyminum and Rosmarinus officinalis essential oils. Food Chem., 102:
pp.898-904.
25. Ghelardini, C., Galeotti, N., Salvatore, G., & Mazzanti, G. (1999). Local anaesthetic activity of the
essential oil of Lavandula angustifolia. Planta Medica, 65(8), 700-703.
26. Giray, E. S., Kırıcı, S., Kaya, D. A., Türk, M., Sönmez, Ö., & Inan, M. (2008). Comparing the effect of
sub-critical water extraction with conventional extraction methods on the chemical composition of Lavandula
stoechas. Talanta, 74(4), 930-935.
27. Gontard, M. (1940). La culture de la lavande en France. Les Études rhodaniennes, 16(1),43-60.
28. González-Coloma, A., Martín-Benito, D., Mohamed, N., García-Vallejo, M. C., & Soria, A. C. (2006).
Antifeedant effects and chemical composition of essential oils from different populations of Lavandula luisieri
L. Biochemical Systematics and Ecology, 34(8), 609-616.
29. Goren, A. C., Topçu, G., Bilsel, G., Bilsel, M., Aydogmus, Z., & Pezzuto, J. M. (2002). The chemical
constituents and biological activity of essential oil of Lavandula stoechas ssp. stoechas. Zeitschrift fur
Naturforschung C-Journal of Biosciences, 57(9-10), 797-800.
30. Gülçin, Ì., Şat, İ. G., Beydemir, Ş., Elmastaş, M., & Küfrevioǧlu, Ö. İ. (2004). Comparison of
antioxidant activity of clove (Eugenia caryophylata Thunb) buds and lavender (Lavandula stoechas L.). Food
Chemistry, 87(3), 393-400.
31. Guyot-Declerck, C., Renson, S., Bouseta, A., & Collin, S. (2002). Floral quality and discrimination of
Lavandula stoechas, Lavandula angustifolia, and Lavandula angustifolia× latifolia honeys. Food
Chemistry, 79(4), 453-459.
32. Ho C.L., Wang E.I.C., and Su Y.C., 2009. Essential oil compositions and bioactivities of the various
parts of Cinnamomum camphora Sieb. var. linaloolifera Fujuta. 31 (2) ： pp. 77-96.
33. Holmes, C., Hopkins, V., Hensford, C., MacLaughlin, V., Wilkinson, D., & Rosenvinge, H. (2002).
Lavender oil as a treatment for agitated behaviour in severe dementia: a placebo controlled study. International
Journal of Geriatric Psychiatry, 17(4), 305-308.
34. Hoya, Y., Matsumura, I., Fujita, T., & Yanaga, K. (2008). The use of non pharmacological interventions
to reduce anxiety in patients undergoing gastroscopy in a setting with an optimal soothing environment.
Gastroenterology Nursing, 31(6), 395-399.
35. Isman, M. B., 2005. Botanical insecticides, deterrents and repellents in modem agriculture and an
increasingly regulated world. Annu. Rev. Entomol., N° 51, pp. 45-66.
36. Jeanfils, J., Burlion, N., & Andrien, F. (1991). Antimicrobial activities of essential oils from different
plant species. Revue de l'Agriculture-Landbouwtijdschrift (Belgium).
37. Kane, F. M., Brodie, E. E., Coull, A., Coyne, L., Howd, A., Milne, A., & Robbins, R. (2004). The
analgesic effect of odour and music upon dressing change. British Journal of Nursing, 13(Sup4), S4-S12.
38. Kasper, S., Gastpar, M., Müller, W. E., Volz, H. P., Möller, H. J., Dienel, A., & Schläfke, S. (2010).
Silexan, an orally administered Lavandula oil preparation, is effective in the treatment of ‘subsyndromal’
anxiety disorder: a randomized, double-blind, placebo controlled trial. International Clinical Psycho-
pharmacology, 25(5), 277-287.

41
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

39. Kim, J. T., Ren, C. J., Fielding, G. A., Pitti, A., Kasumi, T., Wajda, M., & Bekker, A. (2007). Treatment
with lavender aromatherapy in the post-anesthesia care unit reduces opioid requirements of morbidly obese
patients undergoing laparoscopic adjustable gastric banding. Obesity Surgery, 17(7), 920-925.
40. Kim S., Roh J., Kim D., Leeh., & Ahn Y., 2003. Insecticidal activities of aromatic plant extracts and
essential oils against Sitophilus oryzae and Callosobruchus chinensis. J. Stored Prod. Res, 39, pp: 293-303.
41. Kohara, H., Miyauchi, T., Suehiro, Y., Ueoka, H., Takeyama, H., & Morita, T. (2004). Combined
modality treatment of aromatherapy, footsoak, and reflexology relieves fatigue in patients with cancer. Journal
of Palliative Medicine, 7(6), 791-796.
42. Laird, K., & Phillips, C. (2012). Vapour phase: a potential future use for essential oils as
antimicrobials?. Letters in Applied Microbiology, 54(3), 169-174.
43. Lawrence, B. M. (1992). Chemical components of Labiatae oils and their exploitation. Advances in
Labiatae science, 399-436.
44. Lewith, G. T., Godfrey, A. D., & Prescott, P. (2005). A single-blinded, randomized pilot study
evaluating the aroma of Lavandula augustifolia as a treatment for mild insomnia. Journal of Alternative &
Complementary Medicine, 11(4), 631-637.
45. Lim, T. K. (2014). Edible medicinal and non-medicinal plants (Vol. 1, pp. 656-687). Springer.
46. Lis-Balchin, M. (Ed.). (2002). Lavender: the genus Lavandula. CRC press.
47. Lis‐Balchin, M., & Hart, S. (1999). Studies on the mode of action of the essential oil of Lavender
(Lavandula angustifolia). Phytotherapy Research, 13(6), 540-542.
48. Monge, R. (2013). Les Routes de la Lavande: au carrefour du développement culturel et de la
valorisation de la ressource. Routes touristiques et itinéraires culturels, entre mémoire et développement (pp.
139-147).
49. Motomura N, Sakurai A, Yotsuya Y. Reduction of mental stress with lavender odorant. Percept Mot
Skills. 2001; 93Z713* 718
50. Ngamo L.S.T et Hance Th., 2007. Diversité des ravageurs des denrées et méthodes alternative de lutte
en milieu tropical. Tropicultura, 2007. 25, 4, 2015-220.
51. Obeng-Ofori D., Reichmuth C.H., Bekele J. & Hassanali A., 1997. Biological activity of 1,8-cineole, a
major component of essential oil of Ocimumkenyense (Ayobangira) against stored product beetles, Journal of
Applied Entomology,
52. Ownagh A., Hasani A., Mardani K. and Ebrahimzadeh S., 2010. Antifungal effects of thyme, agastache
and satureja essential oils on Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus and
Fusarium solani. Veterinary Research Forum. 2; pp. 99-105.
53. Pattnaik, S., Subramanyam, V. R., Bapaji, M., & Kole, C. R. (1997). Antibacterial and antifungal
activity of aromatic constituents of essential oils. Microbios, (89), 39-46.
54. Peter, K. V. (2004). Handbook of herbs and spices. v. 1. Woodhead publishing.
55. Rhind, J. P., & Pirie, D. (2012). Essential oils: a handbook for aromatherapy practice. Singing Dragon.
56. Ristorcelli, D., Tomi, F., & Casanova, J. (1998). 13C‐NMR as a tool for identification and enantiomeric
differentiation of major terpenes exemplified by the essential oil of Lavandula stoechas L. ssp.
stoechas. Flavour and Fragrance Journal, 13(3), 154-158.
57. Said, H. M., & Saeed, A. (1996). Medicinal herbal: A textbook for medical students and doctors (Vol.
1). Hamdard Foundation Pakistan.
58. Sakamoto, R., Minoura, K., Usui, A., Ishizuka, Y., & Kanba, S. (2005). Effectiveness of aroma on work
efficiency: lavender aroma during recesses prevents deterioration of work performance. Chemical Senses, 30(8),
683-691.
59. Seri-Kouassi B. P., Kanko C., et Aboua L. R. N., Bekon K. A.,Glitho A. I., 2004. Action des huiles
essentielles de deux plantes aromatiques de Côte-d’Ivoire sur Callosobruchus maculatus F. du niébé. C. R.
Chimie 7, pp : 1043–1046.

42
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

60. Shin, B. C., & Lee, M. S. (2007). Effects of aromatherapy acupressure on hemiplegic shoulder pain and
motor power in stroke patients: a pilot study. The Journal of Alternative and Complementary Medicine, 13(2),
247-252.
61. Skoula, M., Abidi, C., & Kokkalou, E. (1996). Essential oil variation of Lavandula stoechas L. ssp.
stoechas growing wild in Crete (Greece). Biochemical Systematics and Ecology, 24(3), 255-260.
62. Small, E., & Deutsch, G. (2001). Herbes culinaires pour nos Jardins de Pays Froid. Ismant Peony
Press.
63. Soden, K., Vincent, K., Craske, S., Lucas, C., & Ashley, S. (2004). A randomized controlled trial of
aromatherapy massage in a hospice setting. Palliative Medicine, 18(2), 87-92.
64. Tepe, B., Daferera, D., Sokmen, A., Sokmen, M., & Polissiou, M. (2005). Antimicrobial and antioxidant
activities of the essential oil and various extracts of Salvia tomentosa Miller (Lamiaceae). Food
Chemistry, 90(3), 333-340.
65. Toda, M., & Morimoto, K. (2008). Effect of lavender aroma on salivary endocrinological stress
markers. Archives of Oral Biology, 53(10), 964-968.
66. Tyagi, A. K., & Malik, A. (2010). Liquid and vapour-phase antifungal activities of selected essential
oils against Candida albicans: microscopic observations and chemical characterization of Cymbopogon
citratus. BMC Complementary and Alternative Medicine, 10(1), 65.
67. Tyagi, A. K., & Malik, A. (2011). Antimicrobial potential and chemical composition of Mentha piperita
oil in liquid and vapour phase against food spoiling microorganisms. Food Control, 22(11), 1707-1714.
68. Upson, T., & Andrews, S. (2004). The genus Lavandula. Royal Botanic Gardens, ISBN, 1842460102.
69. Wang H.F., Yih K.H. and Huang K.F., 2010. Comparative study of the antioxidant activity of forty-five
commonly used essential oils and their potential active components. Journal of
Food and Drug Analysis, Vol. 18, №1, pp. 24-33.
70. Woelk, H., & Schläfke, S. (2010). A multi-center, double-blind, randomised study of the Lavender oil
preparation Silexan in comparison to Lorazepam for generalized anxiety disorder. Phytomedicine, 17(2), 94-99.
71. Woronuk, G., Demissie, Z., Rheault, M., & Mahmoud, S. (2011). Biosynthesis and therapeutic
properties of Lavandula essential oil constituents. Planta Medica, 77(1), 7.
72. Zaika, L. L. (1988). Spices and herbs: their antimicrobial activity and its determination1. Journal of
Food Safety, 9(2), 97-118.

43
 Annexe

Appareillages, Verreries et les réactifs

Appareillages Verreries et instruments Réactifs

CG-SM Boites Pétri L’acétone

Etuve bactériologique Pipettes Pasteurs Eau physiologique
incubateur Flacons en verre
Bec benzène Ecouvillons
La loupe Disque d’antibiotiques
Tubes à essais
Pinces
Micropipettes

Milieux de culture

Suivant les méthodes et les souches microbiennes testées, nous avons utilisé des milieux de
culture solides, en l’occurrence la gélose Muller-Hinton (MH) pour les bactéries et la gélose
Sabouraud additionné de Chloramphénicol (SAB) pour les champignons. Aussi, des milieux de
culture sélectifs ont été utilisés dans le but d’identifier certains germes bactériens (gélose
Chapman pour les staphylocoques, milieu Hektoen pour les entérobactéries, ainsi que la Gélose
Nutritive (GN) pour l’isolement des micro-organismes non exigeants.
Tableau IX. Efficacité de l’HE par contact vis-à-vis le puceron (Aphis spiraecola)

Mortalité observée
Mortalité Mortalité corrigée
Dose (µl) Temps (h) Probit
moyenne (%) (%)
E1 E2 E3

1h 07 05 06 10 9,5 3,66

6h 39 42 38 66.11 65,53 5,41

Pure 12h 45 46 49 77.77 76,87 5,74

24h 55 49 50 85,55 84,70 6,04

48h 60 60 60 100 100 8.09

1h 00 01 03 2.22 1,67 2,95

6h 05 09 07 11.66 10,16 3,72

20 12h 11 12 09 17.77 14,45 3,92

24h 14 12 10 20 15,29 3,96

48h 17 15 20 28,88 21,46 4,19

1h 03 04 04 6.11 5,59 3,45

6h 21 25 25 39.44 38,41 4,69

40 12h 30 34 31 52.77 50,86 5,03

24h 36 37 34 59.44 57,05 5,18

48h 38 38 35 61,66 57,66 5,2

1h 05 04 05 7.77 7,25 3,52

6h 31 29 27 48.33 47,45 4,92

80 12h 38 36 34 60 58,38 5,2

24h 48 50 48 81.11 80 5,84

48h 55 51 53 88,33 87,11 6,13

1h 00 00 01 0.55

6h 01 00 02 1.66

Témoin 12h 03 02 02 3.88

24h 04 03 03 5.55

48h 07 05 05 9,44
Tableau X. Efficacité de l’HE par contact vis-à-vis la mineuse de la tomate (Tuta absoluta)

Mortalité observée
Mortalité moyenne Mortalité corrigée
Dose (µl) Temps (h) Probit
(%) (%)
E1 E2 E3

1 03 04 02 60 60 5,25

4 04 04 03 73,33 71,42 5,55

6 05 05 05 100 100 8.09

pure
12 05 05 05 100 100 8.09

24 05 05 05 100 100 8.09

48 05 05 05 100 100 8.09

1 01 01 00 13,33 13,33 3,87

4 02 01 00 20 14,29 3,92

6 02 02 00 26,66 15,38 3,96

20
12 02 02 01 33,33 23,07 4,26

24 02 02 02 40 30,77 4,5

48 02 02 02 40 25 4,33

1 01 01 01 20 20 4,16

4 01 01 01 20 14,29 3,92

6 01 01 02 26,66 15,38 3,96

40
12 01 01 03 33,33 23,07 4,26

24 01 02 03 40 30,77 4,5

48 02 03 03 53,33 41,66 4,8

1 01 01 00 13,33 13,33 3,87

4 01 02 02 33,33 28,57 4,45

6 01 02 02 33,33 23,07 4,26

80
12 02 03 03 53,33 46,15 4,9

24 03 04 03 66,66 61,53 5,31

48 04 05 03 80 75 5,67

1 00 00 00 00

4 00 01 00 6,66

6 00 01 01 13,33
Témoin
12 00 01 01 13,33

24 00 01 01 13,33

48 01 01 01 20
Tableau XI . Efficacité de l’HE par contact vis-à-vis la coccinelle asiatique (Harmonia axyridis)
Mortalité observée
Mortalité Mortalité corrigée
Dose (µl) Temps (h) Probit
moyenne (%) (%)
E1 E2 E3

1 01 01 01 20 20 4,16

4 02 03 02 46,66 46,66 4,92

6 04 05 05 93,33 93,33 6,48

pure
12 05 05 05 100 100 8.09

24 05 05 05 100 100 8.09

48 05 05 05 100 100 8.09

1 00 00 00 00 00 -

4 00 00 00 00 00 -

6 00 00 00 00 00 -
20
12 00 00 00 00 00 -

24 00 00 00 00 00 -

48 00 00 00 00 00 -

1 00 00 00 00 00 -

4 00 00 00 00 00 -

6 00 00 00 00 00 -
40
12 00 00 00 00 00 -

24 01 00 00 6,66 6,66 3,52

48 01 01 00 13,33 13,33 3,87

1 00 00 00 00 00 -

4 00 00 00 00 00 -

6 01 00 00 6,66 6,66 3,52

80
12 01 00 01 13,33 13,33 3,87

24 02 01 01 26,66 26,66 4,39

48 02 02 02 40 40 4.75

1 00 00 00 00

4 00 00 00 00

6 00 00 00 00
Témoin
12 00 00 00 00

24 00 00 00 00

48 00 00 00 00
Tableau XII. Analyse de la variance du taux de la mortalité des adultes d’Aphis spiraecola

Source DL SC ajust CM ajust Valeur F Valeur de P

dose (µl) 3 8389 2796.2 17.04 00.00

Temps(h) 4 8941 2235.2 13.62 00.00

Erreur 12 1969 164.1

Total 19 19299

F: coefficient de signification.

Tableau XIII. Analyse de la variance du taux de la mortalité des larves de Tuta absoluta

Source DL SC ajust CM ajust Valeur F Valeur de P

dose (µl) 3 17681 5893.7 52.37 00.00

Temps(h) 4 3581 716.2 6.36 00.02

Erreur 15 1688 112.5

Total 23 22950

Tableau XIV . Analyse de la variance du taux de la mortalité des adultes d’Harmonia axyridis

Source DL SC ajust CM ajust Valeur F Valeur de P

dose (µl) 3 23205 7735.1 27.88 00.00

Temps(h) 5 3298 659.6 2.38 00.08

Erreur 15 4161 277.4

Total 23 30665
 Tableau XV. Classification et cycle évolutif des trois insectes étudiés.

Les insects
classification Description Cycle évolutif

Le puceron vert des agrumes Appelé encore puceron Les virginipares aptères d'environ 2 mm de Les pucerons effectuent leur cycle sur la
vert de l'oranger. longueur ont la même couleur que les jeunes face inferieure des feuilles et sur les
Aphis spiraecola jeunes rameaux. Plusieurs dizaines de
Règne : Animalia feuilles d'agrumes, Front plat ou légèrement
générations annuelles se succèdent et se
sinué. superposent.
Embrenchement :Arthropo Antennes égales à la moitié du corps
da La multiplication est essentiellement
Abdomen sans aucune pigmentation
parthénogénétique, les femelles
Classe : Insecta Cornicules noires, droites, légèrement engendrant de nouvelles générations sans
coniques (avec une base un peu plus épaisse avoir été fécondées.
Ordre :Hemipetera
que la partie apicale) Cauda noire, allongée
Famille :Aphididae et contractée au niveau du 1/3 basal, Les
virginipares ailées sont de couleur brun foncé
Espèce :Aphis spiraecola
à noir, sauf l'abdomen qui reste
habituellement verdâtre.

La mineuse de la tomate

Règne : Animalia [Link], ravageur de la tomate et autres La larve passe par quatre stades dont un
Tuta absoluta

Embranchement : Solanacées, est un macrolépidoptère, dont : stade baladeur, sa couleur varie selon le
l’adulte est un petit papillon de nuit (7mm) de stade, elle est beige claire au premier
Arthropoda couleur grise, le mâle est plut petit que la stade, puis verdâtre à rose du deuxième au

Classe : Insecta femelle, les œufs sont de petites taille 0,36mm quatrième stade, au dernier stade, la face
de long et 0,22 mm de large de forme dorsale se colore en rouge et la taille peut
Ordre :Lépidoptères cylindrique et de couleur crème à jaunâtre. atteindre 7,5 mm de diamètre

Famille : Gelechiidae

Genre : Tuta

Cette coccinelle présente une large gamme de La coccinelle passe par plusieurs formes
coloris, allant du rouge à points noirs au noir à au cours de sa vie : l’adulte pond des œuf
La coccinelle Asiatique Règne : Animalia
points rouges, en passant par de nombreuses qui éclosent et donnent naissance aux
Harmonia axyridis Embranchement : nuances de jaune. Les élytres sont ornés de larves de premier stade (l1), ces dernières
zéro à 19 points. se développent et devient des larves de
Arthropoda
deuxième, troisième et quatrième stade
Classe : Insecta Le mâle est plus petit que la femelle, avec des (l2, l3, l4). Puis elles se transforment en
tailles variant1 de 4,9 à 8,2 mm de long et de nymphe, stade immobile au cours duquel
Ordre :Coleoptera 4,0 à 6,6 mm de large. l’insecte change d’aspect, pour enfin
Famille : Coccinellidae émerger sous la forme adulte.

Genre : Harmonia
 Figure 1. Test d’activité bio insecticide de l’HE contre les insectes d’Aphis spiraecola

Figure 2 . Test d’activité bio insecticide de l’HE contre les larves Tuta absoluta.

Figure 3. Test d’activité bio insecticide de l’HE contre les insectes d’ d’Harmonia axyridis.
Introduction
 Chapitre 1
Synthèse Bibliographique
 Chapitre 2
Matériel et méthodes
 Chapitre 3
Résultats et discussion
Conclusion
Annexe
 Références
Annexe
bibliographiques