Année universitaire

2022-2023

LICENCE SV
2ème année

BIOLOGIE VEGETALE 2 (S3M2)

TRAVAUX PRATIQUES

Evolution de la teneur en sucres au cours de la maturation de la banane

Intervenants :
Anne Arlot Responsable : Tony PALAMA
Mathieu Sales-Davy [email protected]
Mohamed Triba
Grégory Nin
Contenu du compte-rendu (qui sera déposer au plus tard le 18 janvier 2023 au format .pdf sur Moodle uniquement !)

Vos comptes-rendus (format pdf) devront comporter les différentes 5- Résultats

rubriques suivantes :
Indiquez les données obtenues lors des TP, en précisant les unités,
les dilutions, les masses de végétal utilisé…
1- Page de garde (préciser noms et prénoms des étudiants)
Donnez les explications détaillées des calculs et les graphiques.
2- Introduction Respectez les consignes données dans le fascicule de TP.

Indiquez dans quel contexte se place votre étude. Vous pouvez Résumez les résultats sous forme de tableau récapitulatif (si
utiliser différentes sources bibliographiques afin d’introduire au nécessaire). Décrire succinctement mais rigoureusement les résultats
mieux votre travail. obtenus.

3- Objectifs 6- Discussion

Indiquez précisément mais succinctement le(s) but(s) des Commentez les résultats en les remettant dans le contexte de l’étude
expériences. et en vous aidant des connaissances vues en cours et/ou des
recherches bibliographiques que vous aurez faites.
4- Méthodes
7- Conclusion
Expliquez les méthodes employées et leurs principes, s’il y a lieu. Il
ne s’agit pas ici de reprendre les énoncés des protocoles décrits dans 8- Références bibliographiques
ce polycopié.
9- Annexes

Reportez ici vos données (= mesures) brutes dans des tableaux !

 Evolution de la teneur en sucres au cours de la maturation de la banane

La maturation d’un fruit est un cas de sénescence d’un organe. Au cours de cette maturation, on peut assister à de nombreux changements tels
que l’augmentation de l’intensité respiratoire des tissus internes, un changement de coloration, un ramollissement du fruit, un changement dans la
composition des glucides, etc.
De nombreux fruits tels que la banane contiennent de l’amidon dont la teneur diminue fortement au cours de la maturation. Ceci correspond à
une transformation de l’amidon en sucres simples solubles dont une partie est oxydée durant la crise climactérique. Celle-ci correspond au
déclenchement de la maturation et à l’émission maximale d’éthylène.

L’évolution de la teneur en sucres sera étudiée ici sur des bananes présentant différents degrés de maturation.

Chaque groupe (= paillasse) sera donc en charge d’analyser l’ensemble des degrés de maturité (nombre sera défini lors de la séance de TP !)

I- Extraction des sucres solubles

Pour chaque lot de banane, couper et peser 5 g de banane. Dans un bécher contenant 50 mL d’eau distillée, ajouter les 5 g de banane coupés
finement. Porter l’ensemble (eau + banane) à ébullition pendant 15 minutes.

Broyer les morceaux de bananes à l’aide d’un broyeur mécanique (broyeur de Potter) ou d’un mortier + pillon en ajoutant 5 mL d’eau ayant servi
à faire bouillir les bananes. Pour recueillir la totalité du broyat, ajouter encore 5 mL d’eau ayant bouilli avec les bananes. Homogénéiser
l’ensemble au vortex et partager la suspension dans deux tubes à centrifuger. Après avoir équilibré les deux tubes (à 0.1 g près), en ajoutant si
nécessaire l’eau bouillie, centrifuger les tubes pendant 5 min à 5 000 rpm.

Dans une fiole jaugée de 100 mL, récupérer ensuite le surnageant des deux tubes puis ajuster le volume final à 100 mL avec de l’eau distillée.
La liqueur obtenue contient l’extrait de sucres réducteurs et solubles.
II- Dosage de l’amidon
Le dosage de l’amidon contenu dans les extraits s’effectue à l’aide d’une courbe étalon établie par la lecture au spectrophotomètre. L’amidon a la
propriété de former en présence du réactif iodo-ioduré un complexe absorbant à 620 nm.

1- Courbe étalon

- Le réactif iodo-ioduré contenant du KI et du I2, à des concentrations respectives de 30 g.L-1 et 3 g.L-1, est stocké au réfrigérateur dans un flacon
ambré. Avant de réaliser le dosage, faire une dilution à 4% de ce réactif (4 mL de réactif + 96 mL d’eau distillée).

- A partir d’une solution d’amidon (10 g/L-1), établir une gamme étalon de 1 ; 0.5 ; 0.25 ; 0.125 mg.mL-1.

- Pour chaque solution étalon à doser, prélever 0.1 mL de solution et le mélanger dans une cuve à spectrophotomètre avec 2.4 mL de réactif iodo-
ioduré à 4%. Bien agiter le mélange et lire sa DO à 620 nm après avoir étalonné l’appareil avec un « blanc » (0.1 mL d’eau distillée + 2.4 mL de
réactif iodo-ioduré).

2- Dosage de l’amidon contenu dans les échantillons

Pour chaque échantillon, faire une dilution au dixième, en prélevant 1 mL de chaque liqueur obtenue en I- et en le mélangeant à 9 mL d’eau
distillée.
Prélever 0.1 mL de ce nouveau mélange et procéder de la même manière que pour le dosage de l’amidon contenu dans les solutions étalons.

III- Extraction des sucres solubles réducteurs

L’action simultanée du ferrocyanure de potassium et du sulfate de zinc permet de séparer dans un extrait les sucres solubles réducteurs des autres
sucres non réducteurs tels que l’amidon.

Prélever 25 mL de liqueur obtenue en I- Mettre ces 25 mL dans un bécher et y ajouter 5 mL de ferrocyanure de potassium à 15% et 5 mL de
sulfate de zinc à 20%. Un précipité laiteux de ferrocyanure de zinc se forme en entraînant l’amidon.
Attendre 15 min puis transférer l’ensemble (précipité et phase soluble) dans un tube à centrifuger. Centrifuger (après équilibrage des tubes)
pendant 5 min à 5 000 rpm.
Récupérer la totalité du surnageant dans une fiole jaugée de 250 mL. Ajuster le volume final à 250 mL avec de l’eau distillée.
IV- Dosage des sucres simples solubles
En milieu acide, les sucres simples solubles sont transformés par l’anthrone en molécules organiques furfuraniques, puis, par déshydratation à la
chaleur, en dérivé furfural. Le complexe ainsi formé de couleur vert bleuté absorbe à une longueur d’onde de 625 nm.

1- Courbe étalon

Etablir une gamme étalon de 0.1 ; 0.05 ; 0.025 ; 0.0125 mg.mL-1 de glucose à partir d’une solution de 1 mg.mL-1. de glucose. Tracer la courbe
étalon après avoir effectué le dosage colorimétrique comme indiqué ci-dessous.

2- Dosage

Dans des tubes à essai, mettre :

- 2.5 mL du réactif préparé (anthrone à 0.2%)
- 0.5 mL de la solution à analyser (échantillon ou solution de la gamme étalon)

Agiter correctement au vortex le mélange et le chauffer au bain-marie bouillant pendant 15 min. Refroidir rapidement les tubes dans de la glace
pilée. Bien mélanger au vortex et transférer le mélange dans des cuves à spectrophotomètre pour faire la lecture de la DO à 625 nm. Etalonner
préalablement l’appareil avec un « blanc » (0.5 mL d’eau distillée + 2.5 mL de réactif, mélanger, bouillir, et remélanger).

V- Résultats – Discussion
A partir des résultats obtenus, que pensez-vous de l’évolution de la teneur des sucres au cours de la maturation de la banane ?