Ministère de l'Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique

Université Ibn Khaldoun –Tiaret-

Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie
Département des Sciences de la Nature et de la Vie

Mémoire en vue de l’obtention du diplôme de Master académique

Domaine: "Sciences de la Nature et de la Vie"
Filière: "Sciences Biologiques"
Spécialité: "Microbiologie Appliquée"

Evaluation de l’activité antioxydante des composés

phénoliques issus de Curcuma longa L.

Présenté et soutenu publiquement par

Melle HAMZAOUI Hiba Elrahmane

Melle HATEM Nadjet
Melle KETROUSSI Soumia

Devant le Jury:

Président: Mme MAKHLOUFI C.

Promoteur: Mme BENARABA R.
Co-promoteur: Mme BENGUIAR R.
Examinateur: Mr ACEM K

Année universitaire: 2017–2018

 Remerciements
Avant tout, nous remercions Allah le tout puissant de nous avoir données la force,
le courage, la persistance et nous a permis d’accomplir ce modeste travail. Merci de nous
avoir éclairées le chemin de la réussite.

Nos vifs remerciements et notre profonde gratitude vont particulièrement à

Madame BENARABA R. qui nous a encadrées depuis les premiers instants. Sa pédagogie,
son dévouement, ses précieux conseils, ses encouragements, sa patience, sa disponibilité et sa
gentillesse ont été importants pour nous et on largement contribué à l’évolution de cette
étude.

Nous remercions Madame BENGUIAR R. pour nous avoir fait l’honneur d’être
notre Co-promotrice.

Nous tenons à remercier profondément Madame MAKHLOUFI pour l'honneur

qu'elle nous fait en acceptant de présider le jury de notre soutenance.

Aussi, nous tenons à remercier profondément Monsieur ACEM d’avoir accepté

d’examiner notre travail.

Nous remerciement s’adressent à Madame Fatiha et Melle Noura pour leurs conseils
et encouragements.

Nos immenses remerciements vont à tous nos amis de la promotion Master II

Microbiologie Appliquée.

Enfin nous remercions toutes les personnes qui ont contribué de près ou de loin à la
réalisation de ce travail.

HAMZAOUI Hiba Elrahmane

HATEM Nadjet
KETROUSSI Soumia
 Dédicaces
Je dédie ce modeste travail.

A la mémoire de mon grand père: Qui a été toujours dans mon esprit et dans

mon cœur, je lui dédie aujourd’hui ma réussite. Que Dieu, le miséricordieux, l’ accueil

dans son éternel paradis.

A ma très chère mère : Mokhtari Affia : Autant de phrases aussi expressives

soient-elles ne sauraient montrer le degré d’amour et d’affection que j’éprouve pour

toi. En ce jour mémorable, pour moi ainsi que pour toi, reçoit ce travail en signe de

ma vive reconnaissance et ma profonde estime. Puisse le tout puissant te donner

santé, bonheur et longue vie afin que je puisse te combler à mon tour.

A mon très cher père : Hamzaoui Mostefa : Tu as su m’inculquer le sens de la

responsabilité, de l’optimisme et de la confiance en soi face aux difficultés de la vie.

Tes conseils ont toujours guidé mes pas vers la réussite. Je te dois ce que je suis

aujourd’hui et ce que je serai demain et je ferai toujours de mon mieux pour rester ta

fierté et ne jamais te décevoir. Que Dieu le tout puissant te préserve, t’accorde santé,

bonheur, quiétude de l’esprit et te protège de tout mal.

A mon cher petit frère Ahmed Yacine Pour toute l’ambiance dont tu m’as

entourée, pour toute ta spontanéité et ton élan chaleureux, Je te dédie ce travail.

Puisse Dieu le tout puissant exhausser tous tes vœux.

A mes très chères sœurs Nousseiba, Khaoula, Amina : En souvenir d’une

enfance dont nous avons partagée les meilleurs et les plus agréables moments. Pour

toute la complicité et l’entente qui nous unissent, ce travail est un témoignage de mon

attachement et de mon amour.

À mon beau-frère : Mulham Kharraz.

À mes chers neveux : Mohamed, Mustapha.

A ma grande famille : je cite en particulier, mes tantes, mes oncles ainsi que

mes cousins et cousines.

À Mes meilleures amies: Kheira, Nadjet, Soumia, Hamida, Nour, Mimi et

Miada.

À tous ceux qui m’ont apportée d’aide de près ou de loin.

HAMZAOUI Hiba Elrahmane

 Dédicaces
J’ai l’honneur de dédier ce travail réalisé grâce à l’aide d’allah le tout puissant

A mon cher père HATEM Ahmed qui ma appris le sens de la persévérance tout au
long de mes études, pour son sacrifice ses conseils et ses encouragements.

A la lumière de mes yeux et le bonheur de ma vie ma mère qui m’a apportée son
appui durant toutes mes années d’étude, pour son sacrifice et soutien qui m’ont donnée
confiance, courage et sécurité.

A mon seul frère Abd Elhakim et mes sœurs Rima et Souad qui m’ont soutenue et
étaient toujours avec moi

A toute ma famille particulièrement mes cousines Imen, Djamila, Nouria, Alia,

Fatima

A mon binôme Hiba et Soumia

A mes adorables amies BELKACEM Djihad, KOUREK Imen pour tous ces bons
moments qu’on a eu à partager sous le signe d’une amitié pérenne.

A toute la promotion de Master II Microbiologie Appliquée

A tous mes enseignants pour m’avoir tout donnée, ce qui est inestimable, le savoir et
le savoir faire, je vous dis merci.

HATEM Nadjet
 Dédicaces
A l’aide d’Allah le tout puissant, qui m’a tracée le chemin de ma vie, J’ai
pu réaliser ce travail que je dédie :
A Ma famille KETROUSSI Et aux personnes les plus chères au monde
mes chers parents ;
A ma mère Keltoume et mon père Khaled
A ceux qui m’ont toujours encouragée pour que je réussisse
Dans mes études,
Pour leurs sacrifices et leurs soutiens tout au long mes étude.

A ma 2éme famille : Mes parents : Abdelkader, Zineb.

A Mon marie Kadi.
Ames sœurs : Asmaa, Aya.
Ames frères : Abderrahmane, Sadik, Younes.
Ames nièces: Inesse, Mayssa.

A tous mes professeurs que ce soit du primaire, du moyen, du secondaire

Ou de l’enseignement supérieur surtout Mme Benaraba Rachida pour son
encadrement.

A tous ceux qui m’ont aidée dans la réalisation de ce mémoire surtout

Mme Fatiha et Melle Noura.
A mon binôme, Nadjet et Hiba pour tout ce qu’on a eu à partager avec moi
dans les moments difficiles de ce travail.

Et sans oublier toutes les étudiantes de la spécialité

Microbiologie appliquée.
(Promotion2017-2018)

Soumia
 LISTE DES ABREVIATIONS

AG Acide gallique
AlCl3 Trichlorure d’aluminium
CE50 Concentration des antioxydants nécessaire pour réduire 50% la concentration
initiale du ferricyanure de potassium
•
DPPH 2, 2-Diphényl-1-Picrylhydrazyle
EAC Extrait aqueux de Curcuma
EAG Equivalent en acide gallique
EEC Extrait éthanolique de Curcuma
EMC Extrait méthanolique de Curcuma
EQ Equivalent en quercétine
ES Erreur standard
FeCl3 Chlorure de fer
FRAP Ferric Reducing Antioxidant Power
CI50 Concentration d’antioxydant requise pour diminuer la concentration de DPPH▪
initiale de 50%
K3Fe(CN) 6 Ferricyanure de potassium.
K2HPO4 Phosphate de potassium dibasique
KH2PO4 Phosphate de potassium monobasique
MS Matière sèche
Na2CO3 Carbonate de sodium
RFC Réactif de Folin Ciocalteu
TCA Acide Trichloracétique
Vit C Vitamine C

i
 LISTE DES FIGURES

Figure N°01 : Diagramme récapitulatif de la démarche expérimentale ...................................... 10

Figure N°02 : Inhibition du Radical libre DPPH• ........................................................................................................16
Figure N°03 : Rendements d’extraction des composés phénoliques de Curcuma longa L. pour
les trois solvants utilisés.......................................................................................... 18
Figure N°04 : Teneur en composés phénoliques totaux du Curcuma longa L. pour les trois
solvants utilisés exprimée en mg EAG par g de matière sèche .............................. 19
Figure N°05 : Teneur en flavonoïdes du Curcuma longa L. pour les trois solvants utilisés
exprimée en mg EQ par g de matière sèche ............................................................ 19
Figure N°06 : Pouvoir réducteur des extraits de Curcuma longa L. exprimé en CE50 .............. 22
Figure N°07 : Pouvoir réducteur de l'acide gallique, vitamine C et la quercétine exprimé en
CE50 ......................................................................................................................... 22
Figure N°08 : Courbe de corrélation entre la concentration de l’EEC et la capacité de réduire
le fer ........................................................................................................................ 23
Figure N°09 : Courbe de corrélation entre la concentration de l’EMC et la capacité de réduire
le fer ........................................................................................................................ 23
Figure N°10 : Capacité de piéger le radical libre DPPH• par les extraits issus de Curcuma
longa L. exprimé en CI50 ......................................................................................... 23
Figure N°11 : Capacité de piéger le radical libre DPPH• par l'acide gallique, la vitamine C et
la quercétine exprimée en CI50 ................................................................................ 23

ii
 LISTE DES TABLEAUX

Tableau N°01 : Matériel et produits chimiques utilisés.......................................................08

iii
 LISTE DES ANNEXES

Annexe I : Stress oxydant, causes et conséquences

Annexe II : Description, classification et composition de Curcuma longa L.
Annexe III : Les polyphénols
Annexe IV : Résultats numériques
Annexe V : Courbes d’étalonnage pour le dosage des composés phénoliques
Annexe VI : Courbes d’étalonnage pour l’évaluation de l’activité antioxydante

iv
LISTE DES ABREVIATIONS.......................................................................................................................i

LISTE DES FIGURES..................................................................................................................................ii

LISTE DES TABLEAUX.............................................................................................................................iii

LISTE DES ANNEXE..................................................................................................................................iv

INTRODUCTION

SOMMAIRE
I. SYNTHESE BIBLIOGRPHIQUE

I.1. Radicaux libres....................................................................................................................... 03

[Link] oxydatif ......................................................................................................................... 03
I.3. Antioxydants, rôle et fonction ............................................................................................... 04
[Link] et leur classe ........................................................................................ 04
[Link] longa L .................................................................................................................... 05
I.4.1. Présentation du Curcuma longa L ........................................................................... 05
I.4.2. Composition de Curcuma longa L. en polyphénols ................................................ 05
I.4.3. Propriétés thérapeutiques de Curcuma longa L. ..................................................... 06
I.4.3.1. Propriétés anti-inflammatoires ...................................................................................................06
I.4.3.2. Propriétés anticancéreuses ..........................................................................................................06
I.4.3.3. Effet cardioprotetcteur ................................................................................................................06

II. ETUDE EXPERIMENTALE

II.1. Objectifs du travail ............................................................................................................... 07

II.2. Lieu et durée de travail ......................................................................................................... 07
II.3. Matériel et produits chimiques ............................................................................................. 08
II.4. Matériel végétal .................................................................................................................... 09
II.5. Procédure expérimentale ...................................................................................................... 10
II.5.1. Préparation du matériel végétal ............................................................................ 11
II.5.2. Préparation des différents extraits à partir de la plante Curcuma longa L. .......... 11
II.5.2.1. Rendement d’extraction ...............................................................................12
II.5.2.2. Dosage des composés phénoliques ...................................................... 12
 II.5.2.3. Dosage des flavonoïdes ........................................................................ 13
II.5.3. Evaluation du pouvoir antioxydant des extraits de Curcuma longa L................................ 14
II.5.3.1. Test de réduction de fer FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power) 15
II.5.3.2. Evaluation de la capacité de piéger le radical libre DPPH• (2,2-
diphenyl-1-picrylhydrazyl .................................................................................. 16
[Link] statistique ................................................................................................................. 17

III. RESULTATS ET DISCUSSION

III.1. Rendements d’extraction ..................................................................................................... 18

III.2. Quantification des composés phénoliques totaux et flavonoïdes ........................................ 19
III.3. Evaluation de l’activité antioxydante .................................................................................. 21
III.3.1. Evaluation du pouvoir réducteur des extraits de Curcuma longa L.(Ferric
Reducing Antioxydant Power) .......................................................................................... 21
III.3.2. Evaluation de la capacité de piégeage du radical libre DPPH• (2,2-diphenyl-
1picrylhydrazil) par les extraits de Curcuma longa L. ..................................................... 23

CONCLUSION
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
ANNEXES
INTRODUCTION
 Actuellement, le développement des pathologies à stress oxydatif et l’effet
indésirable de certaines molécules pharmaceutiques de synthèse, mène les chercheurs à puiser
dans le monde végétal en quête d’une solution alternative. En effet près de la moitié des
médicaments que nous utilisons ont une composition d’origine végétale, et le quart renferme
des extraits ou des molécules actives provenant directement des plantes. Ainsi, par
l’intermédiaire des médicaments de synthèse ou d’hémi-synthèse autant que par le biais de la
phytothérapie, les plantes constituent le mode de traitement le plus répondu dans le monde, y
compris dans les pays occidentaux (Adida et al., 2016). Les propriétés thérapeutiques de ces
matrices naturelles sont dues à la présence de composés bioactifs appelés «métabolites
secondaires».
Ces biomolécules, à vertus thérapeutiques complémentaires ou synergiques, font
l’objet aujourd'hui d’un regain d'intérêt de la part de la communauté scientifique du fait
qu’elles ont été étudiées et reproduites chimiquement pour être incorporées dans de nombreux
médicaments, ceci est dû essentiellement à leur puissante activité antioxydante offrant ainsi
des stratégies prometteuses dans la prévention de certaines pathologies à stress oxydatif. Le
mécanisme sous-jacent implique la neutralisation des radicaux libres, le piégeage des métaux
de transition, l’induction des enzymes antioxydante et l’inhibition de certaines voies de
signalisation, menant ainsi à la prévention contre les dommages oxydatifs et ralentissent le
vieillissement cellulaire (Efraigne et Incemail, 2009).
Parmi l’ensemble des métabolites secondaires, les composés phénoliques représentés
majoritairement par les flavonoïdes, suscitent de plus en plus l'intérêt des chercheurs, car ils
sont considérés comme de très puissants antioxydants (Sarni-Manchado et Cheynier ,2006).
Dans l’arsenal des plantes médicinales caractérisées par leur richesse en ces composés on
trouve le Curcuma longa L. et plus particulièrement son rhizome, un des éléments essentiels
de la médecine ayurvédique, utilisé également en médecine traditionnelle depuis la nuit des
temps (Dias et al., 2013), pour stimuler la digestion et traiter les troubles qui lui sont liés.
Actuellement plusieurs vertus sont attribuées au Curcuma longa L. telles que l’activité anti-
inflammatoire, la stimulation du système immunitaire, la prévention de certains cancers,
l’action sur les troubles digestifs, hépatiques et l’activité antioxydante (Li et al., 2011).
Cependant, il a été clairement établi que l’efficacité phytothérapique et/ou
pharmaceutique d’une plante médicinale, repose essentiellement sur l’aspect qualitatif et
quantitatif de l’extrait issu de cette plante (Yan et Asmah, 2010). C’est pour cette raison qu’il
est nécessaire d’apporter une attention particulière au procédé et au type de solvants utilisés
pour l’extraction de ces composés actifs et déterminer l’extrait phénolique à efficacité
optimale qui permet de restituer toute la complexité moléculaire de cette plante. C‘est dans ce
cadre que s’inscrit l’objectif de ce présent travail. Ce dernier s’intéresse dans un premier
temps à optimiser l’extraction des composés phénoliques issus de Curcuma longa L., en
utilisant différents solvants et dans un deuxième temps, sélectionné l’extrait le plus riche en
polyphénols et en flavonoïdes ayant l’activité antioxydante la plus importante. L’évaluation
de cette activité est basée sur la capacité de réduire les métaux lourds et l’effet scavenger des
radicaux libres et ce dans l’optique de l’exploiter dans les stratégies de lutte et de prévention
vis-à-vis des pathologies à stress oxydatif.
 Chapitre I
Synthèse bibliographique
CHAPITRE I SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE

L’oxygène est la source de vie pour les organismes aérobies. Mais il peut être
également une source d’agression pour ces organismes. En effet des dérivés hautement
réactifs de l’oxygène peuvent apparaître au cours des réactions enzymatiques ou sous l’effet
des rayons U.V, des radiations ionisantes qui peuvent provoquer des dommages sur l’ADN,
les protéines cellulaires essentielles et les lipides membranaires (peroxydation lipidique),
pouvant aller jusqu’à la mort cellulaire (Arora et al., 2002) Parmi les espèces réactives on
-
trouve l’ion superoxyde (O2• ) et radical hydroxyle (OH•), ces dernier sont appelées les
radicaux libres.

I.1. Radicaux libres

En effet, les radicaux libres sont des molécules ou atomes qui possèdent un ou
plusieurs électrons non appariés sur leur couche externe (Andzi Barhé et Feuya Tchouya,
2016). Cet état leur confère une instabilité énergétique et cinétique. Il existe normalement un
équilibre dynamique entre la production de radicaux libres et leur neutralisation par les
systèmes de protection. Cet équilibre est parfois dépassé, soit lors d’une insuffisance
d’apports en antioxydants ou une déficience des enzymes protectrices et par conséquent
l’organisme se trouve dans un état de « stress oxydatif », ouvrant la porte à de nombreuses
pathologies, notamment le cancer (Koechlin-Ramonatxo, 2006).

I.2. Stress oxydatif

Depuis quelques années, le monde des sciences biologiques et médicales a été envahi
par un nouveau concept, celui du stress oxydant. Il se définit comme étant un déséquilibre au
sein d’un individu entre la production d’éléments oxydants et de mécanismes de défense
antioxydante (Sayre et al., 2008). Ce déséquilibre provient soit d’une production exagérée
d’agents oxydants, soit d’une altération des mécanismes de défense. Quand l’un ou l’autre de
ces mécanismes est présent, le stress oxydant est initié et contribue à l’apparaition de
certaines maladies telles que les maladies cardiovasculaires, neurodégénératives ou le cancer
(Morena et Canaud, 2002). L’organisme se protège en permanence contre la formation et
l’agression de ces oxydants grâce à divers mécanismes de défense tant enzymatiques que non
enzymatiques qui sont désignés par le terme «antioxydants ».

-3-
CHAPITRE I SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE

I.3. Antioxydants, rôle et fonction

Un antioxydant est toute substance qui, lorsqu'elle est présente à de faibles

concentrations comparées à celle d'un substrat oxydable, retarde ou inhibe de manière
significative l'oxydation de ce substrat (Young et Woodside, 2001).Le rôle physiologique des
antioxydants, comme le suggère cette définition, est de prévenir les dommages aux
composants cellulaires résultant de réactions chimiques impliquant des radicaux libres.
Ces derniers peuvent être produits en excès à cause des agents externes les
(pollution, les radiations, UV ou l’alcool),de ce fait notre système endogène de défense se
trouve incapable de réduire toutes ces espèces réactives, notre organisme a alors besoin d’une
alimentation riche en antioxydants. Parmi ces antioxydants, on trouve les vitamines C, E et A,
ainsi que les polyphénols et les flavonoïdes (Venkatachalam et Muthukrishnan,2012).

I.3.1. Polyphenols et leurs classes

Les composés phénoliques ou polyphénols sont des métabolites secondaires

caractérisés par la présence d’un cycle aromatique portant des groupements hydroxyles libres
ou engagés avec un glucide. Ils sont présents dans toutes les parties des végétaux depuis les
racines jusqu’aux fruits (Boizot et Charpentier, 2006). Ils prennent une importance
croissante, notamment à cause de leurs effets bénéfiques sur la santé. En effet, leur rôle
d’antioxydants naturels suscite de plus en plus d’intérêt pour la prévention et le traitement du
certains cancers, des maladies inflammatoires, cardiovasculaires et neurodégénératives
(Bougandoura et Bendimerad, 2013).
Les flavonoïdes constituent un groupe important des composés naturels appartenant à
la famille des polyphénols et qui sont quasiment universels chez les végétaux. Ils sont
responsables de la coloration des fleurs, des fruits et parfois des feuilles. Ils sont constitués
d’un squelette de base commun composé de 15 atomes de carbone assemblés en trois cycles
(Atanasova, 2009).Les flavonoïdes sont rencontrés dans les fruits comme les raisins, les
légumes particulièrement les oignons, les boissons telles que le thé et le café et également
dans les herbes et les épices telles que le gingembre et le Curcuma.

-4-
CHAPITRE I SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE

I.4. Curcuma longa L.

I.4.1. Présentation du Curcuma longa L.

Curcuma longa L. est un membre vivace de la famille des Zingiberaceae et est

cultivé dans les régions tropicales et subtropicales du monde, principalement en Inde et en
chine (Nguyen et al., 2017). Il était à l'origine apprécié principalement comme épice
alimentaire et comme colorant naturel pour les vêtements jusqu'à récemment quand il a été
découvert comme une source potentielle de nouveaux médicaments pour une variété de
maladies. Son importance en médecine a commencé avec la découverte que le rhizome de la
plante est riche en composés phénoliques (Elvira et al., 2015), identifiés comme
curcuminoïdes, en particulier la curcumine. Certaines des activités biologiques et des
propriétés thérapeutiques attribuées à la curcumine étaient des propriétés anti-inflammatoires,
antioxydantes, anti-cancérigènes et antivirales (Akram et al., 2010).

I.4.2. Composition de Curcuma longa L. en polyphénols

Les curcuminoïdes désignent un groupe de composés phénoliques présents dans le

curcuma, qui sont chimiquement apparentés à son principal ingrédient, la curcumine. Trois
curcuminoïdes ont été isolés du curcuma, à savoir la curcumine, la déméthoxycurcumine et la
bisdéméthoxycurcumine (Labban, 2014). Tous les trois confèrent la pigmentation jaune
distinctive à la plante Curcuma longa L. et en particulier à ses rhizomes. Bien que la structure
chimique de la curcumine ait été déterminée dans les années 1970 et 1980, les utilisations
potentielles des curcuminoïdes en médecine ont récemment fait l'objet d'études approfondies.

I.4.3. Propriétés thérapeutiques de Curcuma longa L.

La curcumine et ses dérivés se sont avérés être bioactifs. Certaines des propriétés
pharmacologiques et biologiques de la curcumine sont discutées comme ci-dessous.

-5-
CHAPITRE I SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE

I.4.3.1. Propriétés anti-inflammatoires

Traditionnellement la curcumine est connue pour ses effets anti-inflammatoires, la

curcumine a été indiquée dans les deux dernières décennies comme un puissant agent
immunomodulateur capable de moduler l'activation des cellules T, B, macrophages, cellules
tueuses naturelles et cellules dendritiques. L'administration orale de curcumine dans les cas
d'inflammation aigüe s'est révélée aussi efficace que la cortisone ou la phénylbutazone, et
moitié moins efficace dans les cas d'inflammation chronique (Steffi et Srinivasan, 2014).

I.4.3.2. Propriétés anticancéreuses

Selon de récents travaux de recherches, la curcumine possède différentes qualités

pouvant en faire un agent anticancéreux important. L'effet protecteur de la curcumine contre
les dommages radicalaires sur les lipides de l’ADN peut servir de mécanisme significatif pour
aider à réduire le risque de cancer chez certains individus. Des chercheurs ont suggéré que la
curcumine inhibe la croissance des cellules tumorales par des moyens provoquant l'apoptose
(mort cellulaire). La curcumine est considérée comme une star pour la prévention du cancer
(Nawaz et al., 2011).

I.4.3.3. Effet cardioprotetcteur

Les effets protecteurs du curcuma sur le système cardiovasculaire comprennent

l'abaissement des taux de cholestérol et de triglycérides, la diminution de la sensibilité des
lipoprotéines de basse densité (LDL) à la peroxydation des lipides et l'inhibition de
l'agrégation plaquettaire. La curcumine est un puissant agent anti-inflammatoire qui protège
contre les complications pulmonaires et cardiovasculaires.

-6-
 Chapitre II
Matériel et méthodes
CHAPITRE II MATERIEL ET METHODES

II. Matériel et Méthodes

II.1. Objectifs du travail

L’objectif de la présente étude consiste à :

 Optimiser l’extraction des composés phénoliques de Curcuma longa L. par le biais de la

technique de macération et par l’utilisation de trois solvants différents (Ethanol 70%,
Méthanol 70% et l’eau distillée);
 Déterminer la teneur totale en composés phénoliques et en flavonoïdes;
 Evaluer l’activité antioxydante (pouvoir réducteur et la capacité de piéger les radicaux
libres);
 Criblage de l’extrait phénolique ayant l’activité antioxydante la plus importante.

II.2. Lieu et durée de travail

La démarche expérimentale relative de cette présente étude, a été réalisée sur une
période qui s’étale du 25 Janvier au 22 mars 2018. Elle a été effectuée au sein des laboratoires
suivants :
 Laboratoire de Technologie Alimentaire, Biochimie de la faculté des Sciences de la Nature
et de Vie Université Ibn Khaldoun- Tiaret
 Laboratoire d’Amélioration et de Valorisation des productions animales locales Université
Ibn Khaldoun- Tiaret

II.3. Matériel et produits chimiques

Le matériel et les produits chimiques nécessaires à l’accomplissement de ce travail

sont cités dans le tableau N°01:

-7-
CHAPITRE II MATERIEL ET METHODES

Tableau N°01: Matériel et produits chimiques utilisés.

Matériel et Appareillages Produits Chimiques et réactifs

Agitateur magnétique (ROTMAG) Acide Ascorbique (C6H8O6; PM =176,128 g/mol)

Balance analytique (OHAUS) Acide gallique (C7H6O5; PM=170,12g/mol)

Etuve (Heraeus) Acide trichloracétique (163,38g/mol)

Spectrophotomètre (SHIMADZU) Carbonate de sodium (Na2CO3;PM=106 g/mol )

Micropipettes Chlorure de fer III (FeCl3; PM=162,2g/mol)

Vortex ( Techno Kartell) 2,2-Diphényl-1-Picrylhydrazyle

(DPPH•),(C18H12N5O6 ; PM= 394,32 g/mol)

Ethanol pur

Ferricyanure de potassium, K3 [Fe+3(CN)6] ; PM=

329,26 g/mol

Méthanol pur

Phosphate de potassium dibasique (K2HPO4;

PM= 228,23 g/mol).

Phosphate de potassium monobasique (KH2PO4;

PM= 136,09 g/mol).

Quercétine (C15H10O7 ; PM=302,236 g/mol)

Réactif de Folin-ciocalteau (PM=188,14g/mol, 2N)

Trichlorure d’aluminium (AlCl3; PM=133,34g/mol)

-8-
CHAPITRE II MATERIEL ET METHODES

II.4. Matériel végétal

La plante Curcuma longa L qui a fait l’objet de notre étude, a été achetée le 24
Janvier 2018 chez un herboriste de la wilaya de Tiaret, sous forme de Rhizome secs. Ces
derniers ont été identifiés au sein de la faculté des Sciences de la Nature et de la Vie de
l’université Ibn Khaldoun de Tiaret.

II.5. Procédure expérimentale

La procédure expérimentale regroupant les différentes étapes réalisées au cours de

cette étude est illustrée dans la figure N°01

-9-
CHAPITRE II MATERIEL ET METHODES

Curcuma longa L.

Séchage à 50°C pendant 3jours

dans l’étuve

Broyage et tamisage
(diamètre de 250µm)

Agitation à température Obtention d’une poudre

ambiante pendant 24h et à
l’obscurité.

Extraction par macération en utilisant

Filtration sur papier
filtre trois solvants soit : Le méthanol à
70% ; L’éthanol à 70% ; L’eau distillée

Evaporation à 50°C
dans l’étuve pendant
24h

Détermination des rendements

d’extraction Extraits phénoliques

Méthanolique Ethanolique Aqueux

Quantification des composés Evaluation de l’activité

phénoliques antioxydante

Test de piégeage
Polyphénols DPPH•
totaux

Test de réduction de
Flavonoïdes fer FRAP

Figure N°01: Diagramme récapitulatif de la démarche expérimentale.

Figure N°03:Diagramme récapitulatif de la démarche expérimentale.

- 10 -
CHAPITRE II MATERIEL ET METHODES

II.5.1. Préparation du matériel végétal

Les rhizomes de Curcuma longa L. ont été soigneusement nettoyés et découpés en

petits morceaux et séchés à l’étuve, à une température de 50 °C pendant 72 heures. Ces
morceaux ont été ensuite broyés dans un mortier et tamisés dans un tamis ayant un diamètre
de 250 µm de manière à obtenir une poudre à partir de laquelle les extraits ont été réalisés.

II.5.2. Préparation des différents extraits à partir de la plante Curcuma longa L.

Différentes méthodes d’extraction peuvent être adaptées à l’extraction des composés

naturels. Parmi celles-ci nous avons choisi la macération, une technique simple et facile à
mettre en œuvre (Tanvir et al., 2017).

Principe

Le principe de cette méthode consiste à laisser séjourner un solide dans un liquide afin d’en
extraire les principes actifs. Pour ce faire, le solvant doit franchir la barrière de l’interface
solide/liquide, ensuite dissoudre le composé actif présent à l’intérieur et l’entrainer vers
l’extérieur. Plusieurs auteurs suggèrent que l’entrée du solvant se fait par un mécanisme
osmotique et la sortie du soluté se fait par dialyse ou par diffusion (Lumbu et al., 2005).

Technique

Dans ce présent travail, trois solvants ont été utilisés ; le méthanol 70%, l’éthanol
70%, et l’eau et ce afin de définir le meilleur solvant qui optimise le rendement d’extraction.

En effet, 5 g de curcuma longa L. sous forme de poudre ont été macérés dans 100 ml
de solvants (méthanol à 70%, éthanol à 70% et l’eau distillée) pendant 24h à une température
ambiante et à l’obscurité. Après filtration sur papier filtre, le filtrat obtenu a été débarrassé de
son solvant par évaporation à 50°C et ce afin d’obtenir un extrait sec. Ce dernier, a été
conservé à -20°C pour des éventuelles expérimentations (Tanvir et al., 2017).

- 11 -
CHAPITRE II MATERIEL ET METHODES

II.5.2.1. Détermination du rendement

Le poids de l’extrait sec a été calculé par la différence entre le poids de la boite de
Pétri en verre contenant l’extrait (après élimination du solvant) et le poids de la boite de Pétri
vide. Le rendement de l’extraction est exprimé en pourcentage. Il est calculé par la formule
suivante:

R% = (PF/ PI) ×100

Avec : R : Rendement en pourcentage (%)

PF : Poids de l’extrait sec en g
PI : Poids de la poudre mise à l’extraction en g

[Link] des composés phénoliques

Le dosage des polyphénols totaux dans les différents extraits de Curcuma longa L.a
été effectué spectrophotométriquement selon la méthode au Folin-ciocalteau décrite par
Singleton et al. , (1999).

Principe

Le réactif de Folin-ciocalteau de couleur jaune est constitué par un mélange d’acide

phosphotungstique (H PW O ) et d’acide phosphomolybdique (H PMO O ).
3 12 40 3 12 40

Le principe de la méthode est basé sur l’oxydation des composés phénoliques en

milieu alcalin par ce réactif, cette réaction entraîne la formation d’un nouveau complexe
molybdène-tungstène de couleur bleu présentant un maximum d’absorption à une longueur
d’onde =760nm et dont l’intensité est proportionnelle à la quantité de composés phénoliques
présents dans l’échantillon, le dosage des composés phénoliques a été effectué par la
comparaison de la densité optique observée à celle obtenue par un étalon : l’acide gallique de
concentration connue.

- 12 -
CHAPITRE II MATERIEL ET METHODES

Technique

250 µl d’extrait (préparé dans le solvant approprié avec les dilutions convenables)
ont été ajoutés à 250 µl de réactif de Folin Ciocalteu (RFC) ayant une concertation de 0,2 N,
après une incubation de 2 minutes, 500 µl de Na2CO3 à 7,5 % ont été additionnés.
Le mélange ainsi obtenu a été incubé de nouveau pendant 20 min à une température
ambiante et à l’abri de la lumière. L’absorbance a été ensuite mesurée au spectrophotomètre à
760 nm contre un blanc sans extrait. Notons qu’une courbe d’étalonnage a été parallèlement
réalisée (voir annexe V, figure N°05) afin de quantifier le taux de polyphénols totaux dans
nos extraits, cette courbe a été établie avec des concentrations précises d’acide gallique
(0,125 ; 0,0625 ; 0,031 ; 0,0156 ; 0,0078 ; 0,0039 mg/ml) utilisé comme standard de
référence, ce dernier a subi les mêmes conditions expérimentales que l’échantillon. Les
teneurs en composés phénoliques ont été exprimées en mg EAG/ g de matière sèche et
calculée selon la formule suivante :

C = (c x D x V) / m

Avec : C : Teneur en polyphénols totaux (mg EAG/ g MS)

c : Concentration de l’échantillon calculée.
D : Facteur de dilution.
V : Volume du solvant en ml utilisé pour l’extraction
m : Masse de l’échantillon en g utilisée dans l’extraction

[Link] des flavonoïdes

L’estimation de la teneur en flavonoïdes totaux contenus dans les extraits de

Curcuma longa L. a été réalisée par la méthode de Bahorun et al., (1996).

Principe

Le principe de cette méthode est basé sur la formation de complexes de couleur jaune
entre les composés phénoliques et le trichlorure d’aluminium (AlCl3). Ceci traduit le fait que
le métal perd deux électrons pour s’unir à deux atomes d'oxygène de la molécule phénolique

- 13 -
CHAPITRE II MATERIEL ET METHODES

agissant comme donneur d’électrons. La couleur jaune présente une absorption maximale à
430 nm.
Technique

1ml d’extrait a été mélangé avec 1ml d’une solution de chlorure d’aluminium à 2%
(préparée dans l’eau distillée). Le mélange a été incubé à température ambiante et à l’abri de
lumière pendant 10 minutes, l’absorbance a été mesurée à 430 nm contre un blanc préparé. La
quantification des flavonoïdes se fait en fonction d’une courbe d’étalonnage réalisée par un
flavonoïde standard, la quercétine avec différentes concentrations (40 ; 20 ; 10 ; 5 ; 2.5 ;
1,25 ; 0,625 µg/ml ), (voir annexe V, figure N°06). La teneur en flavonoïdes a été exprimée
en milligramme équivalent de quercétine par gramme de poids sec de la plante (mg EQ/g de
matière sèche)et calculée selon la formule suivante :

C = (c x D x V) / m

Avec : C : Teneur en flavonoïdes exprimée en mg Equivalent quercétine par g de matière sèche.

c : Concentration de l’échantillon calculée.
D : Facteur de dilution.
V : Volume de solvant en ml utilisé pour l’extraction
m : Masse de l’échantillon en g utilisé dans l’extraction

II.5.3. Evaluation du pouvoir antioxydant des extraits de Curcuma longa L.

Dans cette étude, la mise en évidence de l’activité antioxydante in vitro de nos

extraits issus de Curcuma longa L. a été réalisée par deux techniques chimiques à savoir : la
réduction du fer Ferric Reducing Antioxydant Power (FRAP) et le piégeage du radical libre
DPPH•.

- 14 -
CHAPITRE II MATERIEL ET METHODES

II.5.3.1. Test de réduction de fer FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)

Principe

Cette technique permet de mesurer la capacité des extraits testés à réduire le fer
ferrique (Fe3+) présent dans le ferricyanure de potassium K3Fe(CN)6 en ferrocyanure de
potassium (Fe2+) (Oyaizu, 1986).

Technique

Le pouvoir réducteur du fer Fe3+ dans les extraits a été déterminé selon la méthode
décrite par Oyaizu (1986). 500 µl de chaque extrait à différentes concentrations ont été
mélangés avec 500 µl d’une solution de tampon phosphate 0,2M (pH=6,6) et 500µl d’une
solution de ferricyanure de potassium K3Fe(CN)6 à 1%. L’ensemble a été incubé dans l’étuve
à 50°C pendant 20 min ensuite, 500µl d’acide trichloracétique à 10% ont été ajoutés pour
stopper la réaction. A partir du mélange réactionnel précédent un aliquote de 1 ml a été
combiné avec 1 ml d’eau distillée et 500µl d’une solution aqueuse de FeCl3 à 0,1%.
L’absorbance du mélange réactionnel a été lue à 700 nm contre un blanc préparé de la même
manière, en remplaçant l’extrait par de l’eau distillée.
Le contrôle positif est représenté par trois solutions d’antioxydant standard : l’acide
gallique, la quercétine et l’acide ascorbique (vit C) dont les absorbances ont été mesurées
dans les mêmes conditions que les échantillons. Une augmentation de l’absorbance
correspond à une augmentation du pouvoir réducteur des extraits testés. Le potentiel réducteur
des extraits et des standards est exprimé par les valeurs de concentrations effectives à 50%
(CE50).
La CE50 a été rapportée comme étant la quantité d'antioxydant requise pour réduire
50% la concentration initiale de ferricyanure de potassium. Tous les essais ont été effectués au
moins trois fois et les graphiques ont été tracés en utilisant la moyenne de trois déterminations
(voir annexe VI).

- 15 -
CHAPITRE II MATERIEL ET METHODES

II.5.3.2. Evaluation de la capacité de piéger le radical libre DPPH• (2,2-

diphenyl-1-picrylhydrazyl)

Principe

Le radical 2,2-Diphényle-1-picrylhydrazyl (DPPH•) est généralement le substrat le

plus utilisé pour l’évaluation rapide et directe de l’activité antioxydante en raison de sa
stabilité en forme radical libre et la simplicité de l’analyse (Blois, 1958 ; Brand et al., 1995).
A température ambiante, le radical DPPH• présente, en solution alcoolique, une intense
coloration violette qui disparaît au contact d’une substance donneuse de protons.
Cette décoloration met en évidence le pouvoir antiradicalaire d’un échantillon par sa capacité
à piéger le radical libre et se traduit par une diminution de l’absorbance à 517 nm.

Figure N°02 : Inhibition du Radical libre DPPH•

Technique

Cette méthode est basée sur la mesure de la capacité des antioxydants à piéger le
radical 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil (DPPH•). Ce dernier est réduit à la forme d’hydrazine
(non radical) en acceptant un atome d’hydrogène.
L’effet de chaque extrait sur le DPPH• est mesuré par la procédure décrite par Sanchez-
Moreno et al. (1998).
Un volume de 750 µl de différentes concentrations de chaque extrait ou les standards
antioxydants (acide gallique, quercétine et vitamine C exprimés en µg/ml) a été ajouté à 750
µl de la solution méthanolique du DPPH• à 4 mg/ml et fraîchement préparée.

- 16 -
CHAPITRE II MATERIEL ET METHODES

Le mélange réactionnel a été incubé à une température ambiante et à l’obscurité

pendant 50 min, une lecture de l’absorbance a été effectuée à 517 nm. Les valeurs de CI50 ont
été déterminées graphiquement par la régression exponentielle des extraits et des solutions
standards (voir annexe VI) .

II.6. Analyse statistique

Les résultats ont été exprimés sous forme de moyenne ± erreur standard à la
moyenne. L’analyse des données a été réalisée à l’aide du logiciel Statistica Statsoft, (version
6.1, Statsoft, Tulsa. OK).L’ANOVA à un facteur a été utilisée pour effectuer la comparaison
des moyennes (comparaison entre les trois extraits de Curcuma). Cette analyse a été suivie par
le test Post-hoc Duncun afin de déterminer les différences significatives et comparer les
moyennes deux à deux.
Les différences ont été considérées comme statistiquement significatives pour un p value
inférieur à 0,05 dans l’ensemble des analyses statistiques. Les constations suivantes ont été
retenues :

 Pour un p<0,05 la différence est significative (*)

 Pour un p<0,01 la différence est très significative (**)
 Pour un p<0,001 la différence est hautement significative (***)

- 17 -
 Chapitre III
Résultats et discussion
CHAPITRE III RESULTATS ET DISCUSSION

III. Résultats
III.1. Rendements d’extraction :

Les rendements obtenus après l’extraction des composés phénoliques de Curcuma

longa L. en utilisant les trois solvants (méthanol, éthanol et l’eau) sont représentés dans la
figure N°03. Ils sont exprimés en pourcentage massique.

14% 12,36% ##
12% 11,21%

10%

8% **
6,24%
6%

4%

2%

0%
EEC EMC EAC

Figure N°03:Rendements de l’extraction des composés phénoliques de Curcuma longa L. pour les
trois solvants utilisés
(Les valeurs représentées correspondent à la moyenne ± ES de trois essais indépendants).

(*): EEC vs EAC; (#): EMC vs EAC; ($): EEC vs EMC

Le calcul des rendements par rapport au poids total de broyat (5g de matière végétale
en poudre utilisée pour l’extraction), montre que l’extrait éthanolique présente un rendement
de 12,36 %, ce dernier et quasi-identique à celui obtenu lors de l’extraction méthanolique
11,21 %,cependant l’extrait aqueux révèle le plus faible rendement avec un pourcentage de
6,[Link] dernier est significativement différent des deux rendements précédents, méthanol et
éthanol, avec des p de 0,01 et de0,007 respectif.
Ces résultats sont différents de ceux obtenus par Ungphaiboon et al. (2005), cet
auteur indique un rendement d’extraction de 30% pour l’extrait éthanolique issu de curcuma
longa L. en utilisant la même technique d’extraction et le même solvant que ceux utilisés au
cours de cette étude. Cependant le pourcentage du solvant est different (95%) en comparaison
avec notre solvant (éthanol à 70%).
Dans une autre investigation réalisée par Panpatil et ses collaborateurs (2013), sur
l’évaluation des activités biologiques des extraits issus de Curcuma longa L., le rendement

- 18 -
CHAPITRE III RESULTATS ET DISCUSSION

d’extraction obtenu, en utilisant l’éthanol pur comme solvant, est de l’ordre de 8% . Ce

résultat va de pair avec celui obtenu par, Joshi et al. (2009). Ces derniers présentent des
rendements de l’ordre de 7,93%, 8,03% et 8,02% pour l’extrait acétonique, éthanolique et
propanolique respectivement. Cependant ces auteurs ont opté pour la technique soxhlet
comme méthode d’extraction.
Toutefois, il est difficile de comparer nos résultats avec ceux de la littérature, le
rendement n’est que relatif et dépend de la méthode et des conditions expérimentales dans
lesquelles l’extraction a été effectuée, essentiellement la méthode, les solvants utilisés et la
température d’extraction. Ces derniers affectent le contenu total en polyphénols. Aussi il est
largement admis que les variations des rendements d’extraction pourraient être attribuées non
seulement à la différence de la polarité du solvant utilisé, qui joue un rôle clé dans
l'augmentation de la solubilité des composés phénoliques ; mais aussi la polarité des
composés phénoliques qui constituent l’extrait (Felhi et al., 2017).

III.2. Quantification des composés phénoliques totaux et des flavonoïdes :

Les teneurs en composés phénoliques totaux et en flavonoïdes des différents extraits

issus de Curcuma longa L. sont illustrés dans les figures N°04 et N°05

120 $$ $$$
103,16 90
82,64
100 80
70
(mg EQ/g) MS

80
## 60
mg EAG/g Ms

60
53,50 50
###
40 31,90
40 30
*** 20 ***
20
6,23 10 5,74
0 0
EEC EMC EAC EEC EMC EAC

Figure N°04:Teneur en composés phénoliques Figure N°05 : Teneur en flavonoïdes du

totaux du Curcuma longa L. pour les trois Curcuma longa L. pour les trois solvants utilisés
solvants utilisés exprimée en mg EAG par g de exprimée en mg EQ par g de matière sèche
matière sèche

(Les valeurs représentées correspondent à la moyenne ± ES de trois essais indépendants).

(*): EEC vs EAC; (#): EMC vs EAC; ($): EEC vs EMC

- 19 -
CHAPITRE III RESULTATS ET DISCUSSION

De ces résultats il ressort que l’extraction par la technique de macération en utilisant

l’éthanol, le méthanol à 70 % et l’eau distillée, aboutit à des teneurs en composés phénoliques
et en flavonoïdes très différentes. Ces teneurs varient considérablement entre les trois extraits
de Curcuma longa L. On constate que l’extrait éthanolique représente le taux le plus élevé en
polyphénols ainsi qu’en flavonoïdes. Les valeurs obtenues sont de l’ordre de 103,16 ± 2,77
mg EAG/g MS et 82,63 ± 0,49mg EQ/ g MS respectivement et ce en comparaison avec les
deux autres extraits : méthanolique et aqueux, où les teneurs sont de l’ordre (53,50 ± 4,33 mg
EAG/g MS ; 6,23 ± 1,36mg EAG/g MS pour les composés phénoliques et 31,90 ±1,32mg
EQ/g MS ; 5,74 ± 0,16mg EQ/g MS pour les flavonoïdes). Cette divergence est très
significative avec p = 0,003 pour l’EEC vs EMC et un p = 0,0005 pour l’EEC vs EAC, en ce
qui concerne les polyphénols, alors que pour les flavonoïdes on note un p= 0,0003 pour
l’EEC vs l’EMC et p = 0,0001 pour l’EEC vs l’EAC.
Aussi la comparaison des extraits alcooliques et aqueux laisse apparaitre une
présence très abondante des polyphénols et flavonoïdes dans les extraits alcooliques que dans
l’extrait aqueux (voir figure N°04 et 05). Ceci laisse suggérer que l’extraction par
macération avec l’utilisation de l’ éthanol ou du méthanol donne des teneurs supérieures en
composés phénoliques essentiellement falvonoiques en comparaison avec les teneurs
obtenues avec de l’eau distillée comme solvant d’extraction. Cette différence dans les teneurs
peut être attribuée à la polarité du solvant.
Les résultats du dosage des composés phénoliques obtenus au cours de cette étude
corroborent ceux indiqués par Mohd Nor et al. (2009).L’étude de ces auteurs est basée sur le
dosage des composés phénoliques totaux de l’extrait éthanolique des rhizomes de Curcuma
longa L. Ces auteurs indiquent que la concentration des polyphénols issus par cette
macération (à l’éthanol pur) est de 116,3 ± 0,02 mg EAG/g MS. Cependant, Kaur et Kapoor
(2002), rapportent dans leur étude des teneurs de l’ordre de175±7,2 mg EAG /100g MS, alors
que la teneur en composés phénoliques de l’extrait méthanolique suggérée par Indrianingsih
et al. (2015) est estimée à 43,2 mg EAG/g. Ces auteurs utilisent la technique de macération
avec le méthanol à 80% comme solvant d’extraction. D’autres chercheurs, indiquent que
l’extrait phénolique issu Curcuma longa L., contient une teneur polyphénolique de l’ordre de
67,9 ± 1,0 mg EAG/100g (Maizura et al.,2011). Aussi dans une étude réalisée sur les
rhizomes de cette plante, les teneurs en polyphénols totaux dans les extraits méthanolique,
éthanolique et aqueux, obtenus par la technique soxhlet, sont de l’ordre de 52,11 mg
EAG/100 g, 68,64 mg EAG/100 g et 4,82 mg EAG/100 g respectivement (Devi et al.,2015).

- 20 -
CHAPITRE III RESULTATS ET DISCUSSION

Ces résultats vont de pair avec les résultats obtenus au cours de notre étude, dans le
sens ou celle-ci démontre que l’extrait éthanolique est le plus riche en polyphénols en
comparaison avec les autres extraits.
Sahu et Saxena (2013), indiquent que les teneurs en flavonoïdes et polyphénols dans
l’extrait méthanolique issus par macération sont de 79,36 ± 0,01 mg EQ/g et de 260 ± 0,25
mg EAG/g respectivement. Ces valeur sont largement supérieures aux valeurs obtenues au
cours de cette étude.
Il est clair qu’il existe des divergences entre les teneurs en polyphénols et
flavonoïdes obtenues et celles évoquées par les littératures. Ceci peut trouver son explication
dans le fait que les méthodes, les types de solvants, le pourcentage des solvants, la
température, et la durée de l’extractions, peuvent influencer de manière significative
l’estimation de la teneur et le type des composés phénoliques totaux et des flavonoïdes dans
les différent extraits (Hayouni et al., 2007 ; Grujic et al., 2012).
Aussi, la méthode de quantification des polyphénols peut être un facteur de
divergence fondamental, en effet la technique au Folin-ciocalteau est une technique à faible
spécificité. Ceci est dû à la sensibilité extrême de ce réactif à réduire tous les groupes
d’hydroxyles ce qui est l’inconvénient principal de cette technique (Gomez-Caravaca et al.,
2006).
En outre, Moure et al. (2001), ont démontré que la polarité la plus élevée du solvant
a tendance à donner de plus grandes quantités de polyphénols. Par conséquent, des différences
significatives dans les teneurs en composés phénoliques observées entre les extraits
alcooliques et l’extrait aqueux dans cette étude, peuvent être attribuées à la polarité du
solvant.

III.3. Evaluation de l’activité antioxydante

III.3.1. Evaluation du pouvoir réducteur des extraits de Curcuma longa L.
(Ferric Reducing Antioxydant Power) :

Les résultats concernant l’activité réductrice des extraits (méthanolique, éthanolique

et aqueux) de Curcuma longa L., l’acide gallique (AG), la quercétine et l’acide ascorbique
(Vit C) (utilisés comme antioxydants standards), sont illustrés dans les figures N°06 et N°07.
Ils sont exprimés en concentration effectrice à 50% (CE50).

- 21 -
CHAPITRE III RESULTATS ET DISCUSSION

7 *** 70
5,87 56,43
6 60

5 50
CE50 en mg /ml

CE50 en µg /ml
4 40 32,17
##
3
2,76 30 25,47
$$
2 1,46 20

1 10

0 0
EEC EMC EAC AG Quercitine Vita C

Figure N°06: pouvoir réducteur des extraits Figure N°07: pouvoir réducteur des standards
de Curcuma longa L. exprimé en CE50 exprimé en CE50
(Les valeurs représentées correspondent à la moyenne ± ES de trois essais indépendants).

(*): EEC vs EAC; (#): EMC vs EAC; ($): EEC vs EMC

L’ensemble des résultats mentionnés dans les figures N°06 et N°07, indiquent que
l’extrait éthanolique présente une activité antioxydante, reflétée par la capacité réductrice du
fer, plus élevée et très significative en l’opposant aux extraits méthanolique et aqueux et ce
avec des concentrations de l’ordre de 1,46 ± 0,10 mg/ml ; 2,76 ± 0,08 mg/ml ; 5,87 ± 0,20
mg/ml respectivement. Néanmoins, ce pouvoir de réduction du fer est largement faible par
rapport au pouvoir réducteur des substances antioxydantes standards. Ceci est constaté par le
biais des CE50 classées comme suit : Acide gallique : 25,47µg/ml ± 0,06 ; quercétine : 32,17
µg/ml ± 2,87 et finalement l’acide ascorbique avec une CE50 de 56,43 µg/ml ± 2,01. Il en
ressort que l’acide gallique présente un fort pouvoir réducteur comparativement à nos extraits
de Curcuma longa [Link] des autres antioxydants de références compte tenu de sa faible CE50.
Les différents extraits issus de Curcuma longa L. exercent un effet dose dépendant.
En effet, d’après les résultats obtenus avec la technique FRAP une augmentation
proportionnelle de la réduction du fer avec l’augmentation des concentrations des extraits de
la plante étudiée a été constatée. Donc, il est évident qu’il existe une corrélation entre la
teneur en polyphénols, essentiellement les flavonoïdes, et la capacité de réduire le fer, ce qui
indique une forte corrélation positive et significative avec r = 0,9994 pour l’EEC et un
r = 0,9998 pour l’EMC (voir figures N°08 et N°09).

- 22 -
 CHAPITRE III RESULTATS ET DISCUSSION

Figure N°08 : Courbe de corrélation entre la Figure N°09 : Courbe de corrélation entre la
concentration de l’EEC et la capacité de réduire concentration l’EMC et la capacité de réduire
le fer le fer

III.3.2. Evaluation de la capacité de piéger le radical libre DPPH• (2,2-diphenyl-

1picrylhydrazil) pour les extraits de Curcuma longa L. :

L’activité antioxydante des différents extraits de Curcuma longa L. par le biais du

piégeage du radical libre DPPH•, a été évaluée dans les mêmes conditions que celles des
antioxydants standards (acide gallique, quercétine et la vitamine C). Ces résultats sont
exprimés en concentration inhibitrice à 50% (CI50). Les figures N°10 et N°11 illustrent les
différentes CI50 obtenues.
3,0 ** 6
2,48
2,5 5 4,33

2,0 4
CI50 en µg/ml
CI50 en mg/ml

1,5 3
## 1,91
1,0 0,64 2 1,34
0,48
0,5 1

0,0 0
EEC EMC EAC AG Quercitine Vit C

Figure N°10: Capacité de piéger le radical libre Figure N°11: Capacité de piéger le radical libre
•
DPPH par les extraits de issus de Curcuma longa DPPH• par l'acide gallique, la vitamine C et la
L. exprimée en CI50 quercétine exprimée en CI50
(Les valeurs représentées correspondent à la moyenne ± ES de trois essais indépendants).
(*): EEC vs EAC; (#): EMC vs EAC; ($): EEC vs EMC

- 23 -
CHAPITRE III RESULTATS ET DISCUSSION

D’après les résultats de la technique de piégeage du radical libre (DPPH•), l’extrait

éthanolique représente l’extrait le plus actif avec une CI50 de l’ordre de 0,48 ± 0,032 mg/ml,
les deux autres extraits méthanolique et aqueux, montrent une activité inférieure à celle de
l’extrait éthanolique avec des concentrations de 0,64 ± 0,21 mg/ml et de 2,48 ± 0,06 mg/ml
respectivement. Toutefois, ce pouvoir reste significativement inferieur à celui constaté avec
les antioxydants de référence (voir figure N°11).
Ces derniers montrent une activité antiradicalaire puissante appréciée par des CI50 de
l’ordre de 1,34 ± 0,27µg/ml ; 1,91 ± 0,48 µg/ml et 4,33 ± 3,19 µg/ml pour Acide gallique,
quercétine et la vitamine C.
L’activité antioxydante des extraits issus de cette étude s’avère différente à celle
évoquée dans la littérature. En effet, ces résultats divergent de ceux obtenus par Ramkissoon
et al. (2013), ces derniers ont réalisé une expérimentation sur l’évaluation du profil
antioxydant de l’extrait éthanolique de différentes plantes médicinales. Ils ont rapporté que
l’extrait issu de Curcuma longa L. présente un pouvoir réducteur avec une concentration
effectrice à 50 % de l’ordre de 2,043 ± 0,189 mg/ml. Dans une autre étude menée sur la
capacité réductrice du l’extrait éthanolique issu de Curcuma la valeur de la CE50 est de 5,33 ±
0,60 µmol/ ml (Račková et al. ,2009). Celle-ci est largement supérieure à celle obtenue dans
notre étude. Aussi Surveswaran et ses associés ont étudié le pouvoir réducteur de l’extrait
méthanolique de plusieurs plantes d’origine Indienne. D’après leurs résultats le Curcuma
présente une forte capacité réductrice avec une CE50 de l’ordre de 3,76 µmol/ml, ce qui révèle
une activité antioxydante supérieure à celle obtenue avec nos extraits (Surveswaran et al.,
2007).
Parallèlement, les résultats du test du piégeage du radical libre DPPH• évoqués par
notre étude indique que l’extrait éthanolique présente l’activité antioxydante la plus
importante, avec une CI50 de l’ordre de 0,48 ± 0,032 mg/ml, par rapport aux autres extraits
(0,64 ± 0,21 mg/ml ; et 2,48 ± 0,06 mg/ml), ceci va de pair avec les résultats enregistrés par le
test FRAP.
Aussi, les résultats du pouvoir de piéger le radical DPPH• de nos extraits sont
largement inferieurs à ceux rapportés par Srvidya et al. (2009), ces derniers ont réalisé des
études sur le pouvoir inhibiteur de l’extrait éthanolique issu de trois espèces différentes de
Curcuma contre le radical DPPH•. Ils rapportent que l’espèce Curcuma longa L. possède
l’activité antioxydante la plus élevée par rapport aux deux autres espèces avec une valeur de
CI50 de 37,45 ± 2,5 µg/ml, ce pouvoir est très puissant s’il est comparé à celui de notre extrait
éthanolique.

- 24 -
CHAPITRE III RESULTATS ET DISCUSSION

Les résultats de Srvidya et al. (2009) confirment ceux obtenus par Panpatil et al.
(2013).Celui-ci démontre dans son expérimentation que 91% du radical libre DPPH• était
réduit par l’extrait éthanolique de Curcuma pour une concentration de 183,38 µg/ml, cette
concentration est supérieure à celle obtenue avec notre extrait éthanolique.
Une étude comparative menée par Devi et al. (2013), sur le pouvoir inhibiteur des
extraits éthanoliques, méthanoliques et aqueux issus par la technique soxhlet, contre le
radical DPPH• exhibe une inhibition de 86,91% du radical libre DPPH• par l’extrait
éthanolique, 83,104% d’inhibition de ce radical par l’extrait méthanolique et 69,19% par
l’extrait aqueux. Cette étude indique que les extraits éthanolique et méthanolique sont les
piégeurs du radical DPPH• les plus puissants en comparaison avec l’extrait aqueux. Il va de
même pour nos extraits. Aussi dans l’investigation réalisée par Ramkissoon et al. (2013), sur
l’évaluation du profil antioxydant de l’extrait éthanolique de différentes plantes médicinales,
l’extrait issu de Curcuma longa L. présente une activité antioxydant, via le piégeage de
radicale DPPH•, puissante avec une concentration de 0,206 ± 0,173 mg/ ml.
Cependant, Denre (2014), démontre dans son étude sur l’extrait méthanolique issu
de Curcuma longa L., une faible capacité de piéger le DPPH• avec une concentration
d’inhibition de 5,99 ± 0,68 mg/ml. Cette activité antioxydante est faible en comparaison à
celle de notre extrait évaluée à 0,64 mg/ml.
Cette dissimilitude observée entre nos résultats et ceux de la littérature, trouve
probablement son explication dans la différence du statut phénolique (la constitution et la
nature des composés phénoliques) entre les extraits du curcuma, elle-même dépendante de la
variabilité de certains paramètres physicochimiques arrêtés dans chaque expérimentation
comme la méthode, le solvant et les conditions d’extraction. Aussi la variété de la matrice
végétale, le patrimoine génétique, la période de la récolte, les conditions de séchage, les
conditions climatiques et le stade de développement de la plante sont des facteurs qui jouent
un rôle crucial dans l’influence de l’activité biologique de l’extrait en l’occurrence l’activité
antioxydante (Macheix et al., 2005 ; Paulucci et al., 2013). Ceci peut réduire la fiabilité et
rendre difficile la comparaison entre notre étude et les études antérieures.
Aussi, on peut supposer qu’il existe une relation entre l’activité observée, la structure
et la quantité des composés phénoliques qui constituent l’extrait. En outre l’efficacité
optimale d’un extrait n’est pas due à un seul constituant actif principal, mais à l’action
combinée (synergie) de différents composés à l’origine de cet extrait (Jayaprakasha et al.,
2006) Donc, une analyse qualitative est appréciable afin de compléter cette investigation et
tirer des conclusions plus probantes quant à la relation structure-activité de nos extraits.

- 25 -
CONCLUSION
 Curcuma longa L. également connu sous le nom de curcuma, est l'une des plantes
médicinales les plus populaires, largement distribuée dans les régions tropicales et
subtropicales du monde et amplement cultivé en Asie du Sud-Est. Les rhizomes de cette
plante fournissent une poudre jaune et savoureuse, utilisés depuis longtemps dans la médecine
chinoise et ayurvédique (Martins et al., 2013).
Curcuma longa L. possède plusieurs vertus illustrées dans la pharmacopée
traditionnelle, telle que l’action sur les troubles digestifs et hépatiques. Actuellement, ces
propriétés sont attribuées aux curcuminoïdes, un groupe de composés phénoliques composés
principalement de curcumine, de déméthoxycurcumine et de bisdéméthoxycurcumine.
L’objectif de cette présente étude s’intéresse aux composés phénoliques du
Curcuma longa L. et à leur extraction, et ce en utilisant la méthode de macération (avec
différents solvants), dans le but d’évaluer in vitro leur activité antioxydante. Les résultats
obtenus indiquent que l’extrait éthanolique et méthanolique possèdent le rendement le plus
élevé estimé à 12,36 et 11,21% en comparaison a l’extrait aqueux avec un rendement de
6,24%.
La teneur en polyphénols totaux pour les extraits de Curcuma longa L. a été estimée
par la méthode colorimétrique de Folin-ciocalteau, les résultats obtenus indiquent que
l’extrait éthanolique est le plus riche en polyphénols avec un taux de 103,16 mg EAG/g de
MS, suivi de l’extrait méthanolique contenant 53,50 mg EAG/g de MS et en fin l’extrait
aqueux avec une faible teneur évaluée à 6,23 mg EAG/g de MS. Tandis que le résultat du
dosage des flavonoïdes montre que les extraits éthanolique, méthanolique et aqueux de
Curcuma longa L. possèdent des teneurs en flavonoïdes de l’ordre de 82,63 mg EQ/ g de MS ;
31,90 mg EQ/ g de MS ; 5,74 mg EQ/g de MS respectivement.
Concernant l’évaluation de l’activité antioxydante estimée par la méthode de FRAP,
l’EEC a une capacité de réduire le fer avec une CE50(1,46 mg/ml), différente à celle obtenu
par l’EMC CE50(2,76mg/ml) et par l’EAC avec une CE50 de 5,87 mg/ml. Toutefois, l’acide
gallique, la quercétine et l’acide ascorbique présentent un fort pouvoir réducteur de fer
(CE50 = 25,47µg/ml ; CE50 = 32,17 µg/ml; CE50 = 56,43 µg/ml respectivement) par rapport
aux extraits de Curcuma longa L. Parallèlement et pour l’évaluation de l’activité de piégeage
du radical libre DPPH•, la même remarque demeure. La CI50 la plus forte est celle de l’EEC,
obtenue à 0,48mg/ml, contre celle de l’EMC et de l’EAC avec des CI50de l’ordre de
0,64mg/ml et de 2,48 mg/ml respective. Si bien que les antioxydants standards présentent
toujours une forte capacité de piégeage du radical DPPH• avec des CI50 de l’ordre de µg/ml
par rapport à nos extraits de Curcuma longa L.
Pour finir, le Curcuma longa L. est une source inépuisable de substances
antioxydantes naturelles, ayant un large spectre de fonctions biologiques et devrait trouver
une application autant que nouvelle formule pharmaceutique ou nutraceutique, indiquée aussi
bien dans la prévention des pathologies causées par le stress oxydatif ainsi que dans les
maladies caractérisées par un désordre inflammatoire. Ainsi, pour confirmer cette suggestion
et dans la continuité de ce présent travail les perspectives suivantes peuvent être envisagées:

 Optimiser la méthode d’extraction en envisageant d’autres types de solvants pour

la macération.
 Adopter d’autres méthodes d’extraction comme par exemple la méthode de
soxhlet, extraction par sonication ....etc.
 Faire des travaux supplémentaires pour identifier et isoler les composés bioactifs
de Curcuma en utilisant des techniques plus fines (Chromatographie couplée à la
spectrométrie de masse, HPLC et RMN…) et évaluer ses propriétés biologiques in vivo, telles
que l’activation des voies de signalisation.
 REFERENCES
BIBLIOGRAPHIQUES
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

Adida H., Benariba N., Bechiri A., Chekroun E., Djaziri R., (2016). Phytochemical study
and evaluation of the antiradical activity of extracts of Pituranthos scoparius. Phytothérapie,
14, p207-212

Akram M., Mohiuddin E., Asif M., (2010). Curcuma longa and Curcumin. Rom. J. Biol. –
plant biol., vol 55, 2, p65–70

Andzi Barhé T., Feuya Tchouya G. R., (2016). Comparative study of the anti-oxidant
activity of the total polyphenols extracted from Hibiscus Sabdariffa L., Glycine max L. Merr.,
yellow tea and red wine through reaction with DPPH free radicals. Arabian Journal of
Chemistry, 9(1), p1–8

Arora A., Sairam R. K., Srivastava G. C. (2002). Oxidative stress and antioxidative system
in plants. Current science, 82(10), p1227-1235

Atanasova M., (2009). Revue de Génie Industriel Phénols et flavonoïdes totaux dans les
extraits secs des feuilles des bouleaux argentés bulgares. Revue de Génie Industriel, 4, p21–
25

Bahorun T., Grinier B., Trotin F., Brunet G., Pin T., Luncky M., Vasseur J., Cazin M .,
Cazin C., Pinkas M., (1996).Oxygen species scavenging activity of phenolic extracts from
hawthorn fresh plant organs and pharmaceutical preparations. Arzneimittel-Forsching, 46,
p1086-1089

Bleu G. M., Traoré F., Coulibaly S., (2011). Effets pharmacodynamiques d’un extrait
hydroalcoolique de Curcuma longa Linné (Zingiberaceae) sur le système cardiovasculaire,
Phytothérapie , 9, p7–17

Blois M.S., (1958). Antioxidant determinations by the use of stable free radical. Nature, 181,
p1199-1200
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

Boizot N., Charpentier J. P., (2006). Méthode rapide d’évaluation du contenu en composés
phénoliques des organes d’un arbre forestier. Le Cahier Technique de l’Inra, p79–82.

Bougandoura N., Bendimerad N., (2013). Evaluation de l’activité antioxydante des extraits
aqueux et méthanolique de Satureja calaminthassp. Nepeta (L.)Briq. Nature and Technologie,
9, p14–19

Brand-Williams W., Cuvelier M. E., Berset C., (1995). Use of a free radical method to
evaluate antioxidant activity. LWT - Food Science and Technology, 28(1), p25-30

Denre M., (2014). The determination of vitamin C, total phenol and antioxidant activity of
some commonly cooking spices crops used in West Bengal. International journal of plant
physiology and biochemistry, 6(6), p66–70

Devi H. P., Mazumder P. B., Devi L. P., (2015). Antioxidant and antimutagenic activity of
Curcuma caesia Roxb. rhizome extracts. Toxicology Reports, 2, p423–428

Dias F., Kemmelmeier C., Cristina C., Luciana C., Augusto C., Janeiro V., Machinski
M., (2013). Inhibitory effect of the essential oil of Curcuma longa L. and curcumin on
aflatoxin production by Aspergillus flavus Link. Food Chemistry, 136(2), p789–793
.
E

Efraigne J. O. D., Incemail, J. P. (2009).Stress oxydant et antioxydants : mythes et réalités.

Rev Med Liège, 63 (1), p 10–19

Elvira A., Antonio C., Maribel L. (2015). Genotypic Characterization of Turmeric

(Curcuma longa L.) Accessions from Mindanao, Philippines Using RAPD Markers, Procedia
Chemistry, 14, p157 – 163
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

Fan-Cheng M., Yan-Qing Z., Dai R., Ruibing W., Chunming W., Li-Gen L., Xiao-Qi
Z., Wen-Cai Y., Qing-Wen Z., (2018). Turmeric: A Review of its chemical composition,
quality control, bioactivity, and pharmaceutical application. Natural and Artificial Flavoring
Agents and Food Dyes, 7, p 299-350

Felhi S., Daoud A., Hajlaoui H., Mnafgui K., Gharsallah N., Kadri A., (2017). Solvent
extraction effects on phytochemical constituents profiles, antioxidant and antimicrobial
activities and functional group analysis of Ecballium elaterium seeds and peels [Link]
Science and Technology, 37(3), p.483-492

Gomez-Caravaca A.M., Gomez-Romero M., Arraez-Roman D., Segura-Carretero A.,

Fernandez-Gutierrez A., (2006). Advances in the analysis of phenolic compounds in
products derived from bees. J. Pharmaceutical and Biomedical Analysis,41, p1220-1234

Grujic N., Lepojevic Z., Srdjenovic B., Vladic J.,Sudji, J., (2012).Effects of Different
Extraction Methods and Conditions on the Phenolic Composition of Mate Tea Extracts.
Molecules, 17, p2518-2528

Hayouni E.A., Abedrabba M., Bouix M., Hamdi M., (2007) The effects of solvents and
extraction method on the phenolics contents and biological activities in vitro of Tunisian
Quercus coccifera L. and Juniperus phoenicea L. fruit extracts. Food Chemistry, 105, p1126–
1134.
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

Indrianingsih A. W., Tachibana S., Itoh K., (2015). In Vitro Evaluation of Antioxidant and
α-Glucosidase Inhibitory Assay of Several Tropical and Subtropical Plants. Procedia
Environmental Sciences, 28, p639–648

Jayaprakasha G. K., Rao L. J., Sakariah K. K. (2006). Food Chemistry Antioxidant

activities of curcumin , demethoxycurcumin and bisdemethoxycurcumin, 98, p720–724

Joshi P., Jain S., Sharma V., (2009). Turmeric (Curcuma longa L.) a natural source of
edible yellow color. International Journal of Food Science and Technology, 44(12), 2402–
2406

Kapakos G., Youreva V., Srivastava A. K., (2012). Cardiovascular protection by

Curcumin:Molecular aspects. Indian Journal of Biochemistry and Biophysics, 49(5), p306-
315

Kaur C., Kapoor H. C., (2002). Anti-oxidant activity and total phenolic content of some
Asian vegetables, International Journal of Food Science and Technology, 37, p153–161

Koechlin-ramonatxo C., (2006). oxidative stress and antioxidant supplementation , or an

other way for nutrition in respiratory diseases, Nutrition clinique et métabolisme, 20, p165–
177

Labban L., (2014). Medicinal and pharmacological properties of Turmeric (Curcuma

longa).International Journal of Pharmaceutical and Biomedical Research, 5(1), p17–23

Li S., Yuan W., Deng, G., Wang P., Yang P., Aggarwal B. B., (2011). Chemical
Composition and Product Quality Control of Turmeric ( Curcuma longa L.), p28–54
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

Lumbu S., Kahumba B., Kahambwe T., Mbayo T., Kalonda M., Mwamba M., Penge O.,
(2005). Contribution à l’étude de quelques plantes médicinales anti diarrhéiques en usage
dans la ville de Lubumbashi et ses environs. Annales de Pharmacie, 3 (1), p 75-86

Macheix J-J., Fleuriet A., Jay-Allemand C., (2005). Les composés phénoliques des
végétaux un exemple de métabolites secondaires d’importance économique Edition : presses
polytechniques et universitaires romandes.

Maizura M., Amina A., Wan Aida W. M., (2011). Total phenolic content and antioxidant
activity of kesum ( Polygonum minus ), ginger ( Zingiber officinale ) and turmeric ( Curcuma
longa ) extract. Sciences-New York, 531, p 526–531

Martins R. M., Pereira S. V., Siqueira S., Salomão W. F., Alexandre L., Freitas P.,
(2013). Curcuminoid content and antioxidant activity in spray dried microparticles containing
turmeric extract. FRIN, 50(2), p 657–663

Mohd Nor F., Mohamed S., Idris N. A., Ismail R., (2009). Antioxidative properties of
curcuma longa extract in accelerated oxidation and deep frying studies. JAOCS, Journal of
the American Oil Chemists’ Society, 86(2), p141–147

Moure A., Cruz J. M., Franco D., DomõÂnguez M., Sineiro J., DomõÂnguez H.,
Parajo C., (2001). Natural antioxidants from residual sources. Food Chemistry, vol. 72, no.
2, p. 145– 171

Morand C. M. D., (2014). Polyphénols et santé vasculaire: mise en évidence du rôle direct
des polyphénols dans les effets bénéfiques des agrumes dans la protection vasculaire,
Innovations Agronomiques, 41(5), p71-87

Morena M., Canaud J. C. B., (2002). Stress oxydant, hémo-incompatibilité et

complications de la dialyse au long cours, Néphrologie, 23, p201-208
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

Nawaz A., Khan G. M., Hussain A., Ahmad A., Khan A., (2011). Curcumin a natural
product of biological importance. Journal of Research, 27(1), p7-14

Nguyen T. T. H., Si J., Kang C., Chung B., Chung D., Kim D., (2017). Facile preparation
of water soluble curcuminoids extracted from turmeric (Curcuma longa L.) powder by using
steviolglucosides. Food Chemistry, 214, p366–373

Oyaizu M., (1986). Studies on products of browning reaction prepared from glucosamine.
Japanese Journal of Nutrition, 44, p307–315

Panpatil V. V., Tattari S., Kota N., Nimgulkar C., Polasa K., (2013). In vitro evaluation
on antioxidant and antimicrobial activity of spice extracts of ginger , turmeric and garlic, 2(3),
p143–148

Paulucci V. P., Couto R. O., Teixeira C. C. C., Freitas L. A. P., (2013).Optimization of

the extraction of curcumin from Curcuma longa rhizomes. Brazilian Journal of
Pharmacognosy, 23(1), p 94–100

Račková L., Koštálová D., Bezáková L., Fialová S., Bauerová K., t ., lo insk
M., (2009). Comparative study of two natural antioxidants, curcumin and Curcuma longa
extract. Journal of Food and Nutrition Research, 48(3), p148–152

Ramkissoon J. S., Mahomoodally M. F., Ahmed N., Subratty A. H., (2013).Antioxidant

and anti-glycation activities correlates with phenolic composition of tropical medicinal herbs.
Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, 6(7), p561–569
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

Sahne F., Mohammadi M., Najafpour G. D., Moghadamnia A. A., (2016). Extraction of
bioactive compound curcumin from turmeric (Curcuma longa L.) via different routes: a
comparative study. J. Biotechnol., 13(3), p 173–180

Sahu R., Saxena, J., (2013). Screening of Total Phenolic and Flavonoid Content in
Conventional and Non-Conventional Species of Curcuma. Journal of Pharmacognosy and
Phytochemistry, 2(1), p176–179

Sanchez-Moreno C., Larrauri Jose A., Saura-Calixto F., (1998). A Procedure to Measure
the Antiradical Efficiency of Polyphenols. Journal of the Science of Food and Agriculture, 76
(2), p 270-276

Sarni-Manchado P., Cheynier V., (2006). Les polyphénols en agroalimentaire. Lavoisier/

TEC ET DOC. Paris

Sayre L. M., Perry G., Smith M. A., Sayre L. M., Perry G., Smith M. A., (2008).
Oxidative Stress and Neurotoxicity, Chem. Res. Toxicol., 21, p172–188

Singoleton V., Orthofer R., Lamuela- Raventos R., (1999). Analysis of total phenols and
other oxidation subctrates and antioxydants by means of folin-ciocalteau reagent. Methode of
enzymologie, 299, p152-178

Srvidya A.R., Yadev A. K., Dhanbal S. P., (2009). Antioxidant and Antimicrobial Activity
of Rhizome of Curcuma aromatica And Curcuma Zeodaria ,Leaves of Abutilon Indicum,
1(1), p14–19

Steffi P. F., Srinivasan M., (2014). Curcumin, a potent anticarcinogenic polyphenol. Asian
Journal of Pharmaceutical and Clinical Research, 7(. 2), p1–8

Surveswaran S., Cai Y. Z., Corke H., Sun, M., (2007). Systematic evaluation of natural
phenolic antioxidants from 133 Indian medicinal plants. Food Chemistry, 102(3), 938–953
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

Tanvir E. M., Hossen M. S., Hossain M. F., Afroz R., Gan S. H., Khalil M. I., Karim N.
(2017). Antioxidant Properties of Popular Turmeric (Curcuma longa) Varieties from
Bangladesh. Journal of Food Quality, p1–8

Tokusoglu O., Simset A., Parvizi M., Eymen D., (2015). Turmeric Curcuminoid
polyphenolics as antioxidant and anticarcinogenic agents. Natural Science and Discovery,
1(3), p 56–61

Ungphaiboon S., Supavita T., Singchangchai P., Sungkarak S., Rattanasuwan P., Itharat
A., (2005). Study on antioxidant and antimicrobial activities of turmeric clear liquid soap for
wound treatment of HIV patients. Songklanakarin Journal of Sciences and Technology, 27, p
569-578

Venkatachalam U., Muthukrishnan S., (2012). Free radical scavenging activity of ethanolic
extract of Desmodium gangeticum. Journal of Acute Medicine, 2(2), p 36–42

Yan S. W., Asmah R., (2010). Comparison of total phenolic contents and antioxidant
activities of turmeric leaf, pandan leaf and torch ginger flower. International Food Research
Journal, 17(2),p 417–423

Young I. S., Woodside J. V., (2001). Antioxidants in health and disease. J Clin Pathol, 54,
p176–186
ANNEXES
ANNEXES

Annexe II. Description, classification et composition de Curcuma longa L.

1. Description botanique

Curcuma longa L. est une plante herbacée de 0,6 à 1 mètre de hauteur, vivace par des
rhizomes, tuberculeux, elliptiques ou cylindriques. Ces rhizomes présentent des cicatrices
circulaires qui correspondent à l’endroit d’insertion des tiges feuillées desséchées (Bleu et al.,
2015).Il possède de grandes feuilles pointues engainantes à limbes elliptiques de couleur verte
pouvant mesurer jusqu’à 45 centimètres de long et 18 centimètres de large. A l’intérieur de
ces longues feuilles s’élève une tige surmontée d’un plumet de fleurs jaunes qui mesure de 4
à 5 centimètres.

Règne : Plantae
Division : Magnoliophyta
Classe : Liliopsida
Sous classe : Zingiberidae
Ordre : Zingiberales
Famille : Zingiberaceae
Genre : Curcuma
Espèce : Curcuma longa Linné

Figure N°02: Classification phylogénétique du Curcuma longa L. (Tokusoglu et al. ,2015)

1. Composition chimique
Tableau N°01: Valeurs énergétiques et nutritionnelles de Curcuma longa L. ( Fan-Cheng
et al., 2018)

Energie 354 Kcal Minéraux Vitamines

Eau 11.36 g Magnésium 193 mg Vitamine K 13.4 mg

Protéines 7.8 g Calcium 183 mg Vitamine B3 5.14 mg

Glucides 64.9 g Phosphore 268 mg Vitamine B6 1.80 mg

Fibres 21.10 g Fer 41.42 mg Vitamine B9 39 mg

Acides Gras Manganèse 7.8 mg Vitamine E 3.1 mg
Omega 9 3.12 g Potassium 2525 mg L’acide ascorbique 26 mg
Omega 3 0.48 g Cuivre 603 mg L’ uile essentielle
Omega 6 1.69 g Curcumine 3888 mg Sesquiterpènes, zingiberène 5%
ANNEXES

Curcumin

Déméthoxycurcumine

Bisdéméthoxycurcumine

Figure N°03 : Structure chimique de curcuminoïdes (Sahne et al., 2016)

ANNEXES

Annexe III. Les polyphénols

Tableau N°02: Principales classes des composés phénoliques ( Sarni-Manchado et

Cheynier 2006).
ANNEXES

Figure N°04: Différentes familles de polyphénols et leurs principales sources alimentaire

(Morand et al. , 2014)
ANNEXES

Annexe IV. Résultats numériques

Tableau N°03 : Rendement d’extraction de Curcuma longa L. par technique de macération

Extraits Rendement massique% (m /m)

EEC 12,36% ± 0,0025
EMC 11,21% ± 0,005
EAC 6,24% ± 0,003

Chaque valeur représente la moyenne ± ES de quatre essais indépendants

Tableau N°04: Teneur en composés phénoliques et de flavonoïdes de Curcuma longa L.

Teneur en polyphénols totaux (mg Teneur en flavonoïdes

Extraits
EAG /g MS) (mg EQ/g MS)
EEC 103,16 ± 2,77 82,63 ± 0,49
EMC 53,50 ± 4,33 31,90 ± 1,32
EAC 6,23 ± 1,36 5,74 ± 0,16

Chaque valeur représente la moyenne ± ES de trois essais indépendants

Tableau N°05: Activité antioxydante des extraits de Curcuma longa L.

Extraits CE50 (mg/ml) CI50 (mg/ml)

EEC 1,46 ± 0,10 0,48 ± 0,03

EMC 2,76 ± 0,08 0,64 ± 0,20

EAC 5,87 ± 0,20 2,48 ± 0,06

Tableau N°06 : Activité antioxydante des standards

Standard CE50 (µg/ml) CI50 (µg/ml)

Acide gallique 25,47 ± 0,06 1,34 ± 0,27
Quercétine 32,17 ± 2,87 7,62 ± 3,19
Vit C 56,43 ± 2.01 4,33 ± 0,48

Chaque valeur représente la moyenne ± ES de trois essais pour (FRAP) et deux essais pour
(DPPH•) indépendants
CE50= 0.5 +(-) b /a ; CI50= 0.68767472 / valeur absolu de l’exponentielle
ANNEXES

%= DO T+- DO de l’échantillon / DO T+
ANNEXES

Annexe V. Courbes d’étalonnage pour le dosage des composés phénoliques

DO
=760 nm y = 6,6998x - 0,0122
0,9 R² = 0,9997
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0 0,02 0,04 0,06 0,08 0,1 0,12 0,14
Concentration en mg/ml

Figure N°05:Courbe d’étalonnage de l’acide gallique.

DO
= 430nm
y = 0,0413x - 0,0137
1,8 R² = 0,9995
1,6
1,4
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
0 10 20 30 40 50
Concentration en µg/ml

Figure N°06: Courbe d’étalonnage de la quercétine.

ANNEXES

Annexe VI. Courbes d’étalonnage pour l’évaluation de l’activité antioxydante

1. Courbes de régression linéaire utilisées dans l’évaluation de la CE50 par la méthode
FRAP

DO DO
λ=700 nm y = 0,0128x + 0,0186 λ=700 nm y = 0,0181x - 0,0036
0,7 R² = 0,9838 R² = 0,9959
1
0,6 0,9
0,8
0,5 0,7
0,4 0,6
0,5
0,3 0,4
0,2 0,3
0,2
0,1 0,1
0 0
0 10 20 30 40 50 60 0 10 20 30 40 50 60
Concentration en µg/ml Concentration en µg/ml

DO y = 0,0167x - 0,0188
λ=700 nm
0,9 R² = 0,9982
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0 10 20 30 40 50 60

Concentration en µg/ml

Figure N°07: Courbes de la régression linéaire utilisée dans l’évaluation de la CE50 de

quercétine.
DO DO
λ=700 nm y = 0,0198x - 0,0040 λ=700 nm y = 0,0205x - 0,0246
1,2 R² = 0,9998 1,2 R² = 0,9996
1 1

0,8 0,8

0,6 0,6

0,4 0,4

0,2 0,2

0 0
0 20 40 60 0 10 20 30 40 50 60

Concentration en µg/ml Concentration en µg/ml

ANNEXES

DO
λ=700 nm
1,2 y = 0,0199x - 0,0045
R² = 0,9993
1

0,8

0,6

0,4

0,2

0
0 10 20 30 40 50 60
Concentration en µg/ml

Figure N°08: courbes de la régression linéaire utilisée dans l’évaluation de la CE50 de

l’acide gallique.
DO DO
λ=700 nm y = 0,0082x + 0,0186 λ=700 nm y = 0,0093x + 0,0124
R² = 0,9986 R² = 0,9999
0,45 0,6
0,4 0,5
0,35
0,3 0,4
0,25
0,3
0,2
0,15 0,2
0,1
0,1
0,05
0 0
0 10 20 30 40 50 60 0 10 20 30 40 50 60
Concentration en µg/ml Concentration en µg/ml

DO
λ=700 nm
y = 0,0082x + 0,0231
0,5
R² = 0,9994
0,45
0,4
0,35
0,3
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0 10 20 30 40 50 60
Concentration en µg/ml

Figure N°09: Courbes de la régression linéaire utilisée pour l’évaluation de la CE50 de la

Vit C.
ANNEXES

DO DO
λ=700 nm y = 0,3642x + 0,0200 λ=700 nm y = 0,3339x + 0,0205
R² = 0,9962 0,8 R² = 0,9822
1,8
1,6 0,7
1,4 0,6
1,2 0,5
1
0,4
0,8
0,3
0,6
0,4 0,2
0,2 0,1
0 0
0 1 2 3 4 5 0 0,5 1 1,5 2 2,5
Concentration en mg/ml Concentration en mg/ml

DO
λ=700 nm
y = 0,2823x + 0,0275
1,4
R² = 0,9956
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
0 1 2 3 4 5
Concentration en mg/ml

Figure N°10: Courbes de la régression linéaire utilisée pour l’évaluation de la CE50 de

l’EEC.

DO DO
λ=700 nm y = 0,1830x + 0,0053 λ=700 nm y = 0,1879x + 0,0005
1,4 R² = 0,9990 1,4 R² = 0,9996
1,2 1,2
1 1
0,8 0,8
0,6 0,6
0,4 0,4
0,2 0,2
0 0
0 1 2 3 4 5 6 7 0 1 2 3 4 5 6 7

Concentration en mg/ml Concentration en mg/ml

ANNEXES

DO
λ=700 nm y = 0,1690x + 0,0055
1,2 R² = 0,9982
1

0,8

0,6

0,4

0,2

0
0 1 2 3 4 5 6 7

Concentration en mg/ml

FigureN°11: Courbes de la régression linéaire utilisée pour l’évaluation de la CE50 de

l’EMC.

DO DO
λ=700 nm y = 0,0821x + 0,0074 λ=700 nm y = 0,0796x + 0,0053
R² = 0,9930 0,35 R² = 0,9935
0,35
0,3 0,3

0,25 0,25

0,2 0,2
0,15 0,15
0,1 0,1
0,05 0,05
0 0
0 1 2 3 4 5 0 1 2 3 4 5
Concentration en mg/ml Concentration en mg/ml

DO
λ=700 nm y = 0,0706x + 0,0085
0,3 R² = 0,9911
0,25

0,2

0,15

0,1

0,05

0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5

Concentration en mg/ml

Figure N°12: Courbes de la régression linéaire utilisée pour l’évaluation de la CE50 de

l’EAC.
ANNEXES

2. Courbes hyperboliques utilisées dans l’évaluation de la CI50 par le Test de DPPH●

DO DO
λ=517 nm λ=517 nm
y = 0,4863e-0,1556x y = 0,4620e-0,0636x
0,6 R² = 0,9984 0,6 R² = 0,9971

0,5 0,5

0,4 0,4

0,3 0,3

0,2 0,2

0,1 0,1

0 0
0 5 10 15 20 25 30 0 5 10 15 20 25 30
Concentration en µg/ml Concentration en µg/ml

Figure N°13: Courbes hyperboliques utilisées dans l’évaluation de la CI50de quercétine.

DO DO
λ=517 nm λ=517 nm
y = 0,4761e-0,3622x y = 0,4738e-0,6406x
0,6 0,6
R² = 0,9982 R² = 0,9997
0,5 0,5

0,4 0,4

0,3 0,3

0,2 0,2

0,1 0,1

0 0
0 1 2 3 4 5 6 7 0 1 2 3 4
Concentration en µg/ml Concentration µg / ml

DO
λ=517 nm y = 0,4694e-0,6511x
0,5 R² = 0,9970
0,45
0,4
0,35
0,3
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5

Concentration en µg/ml

Figure N°14: Courbes hyperboliques utilisées dans l’évaluation de la CI50 de l’acide

gallique.
ANNEXES

DO DO
λ=517nm y = 0,5753e-0,1382x λ=517nm
0,6 y = 0,4762e-0,1482x
0,7 R² = 0,9970
R² = 0,9992
0,6 0,5
0,5
0,4
0,4
0,3
0,3

0,2 0,2
0,1 0,1
0
0 5 10 15 20 25 30 0
0 5 10 15 20 25 30
Concentration en µg/ml Concentration en µg/ml

DO
λ=517 nm
0,45 y = 0,4002e-0,2032x
0,4 R² = 0,9989
0,35
0,3
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0 2 4 6 8 10 12 14
Concentration en µg/ml

Figure N°15: Courbes hyperboliques utilisées dans l’évaluation de la CI50de la Vit C.

DO DO
λ=517 nm λ=517 nm
0,6 y = 0,4627e-1,7962x 0,7 y = 0,5999e-0,8577x
R² = 0,9964 R² = 0,9895
0,5 0,6

0,5
0,4
0,4
0,3
0,3
0,2 0,2

0,1 0,1

0 0
0 0,5 1 1,5 2 0 0,5 1 1,5 2

Concentration en mg/ml Concentration en mg/ml

Figure N°16: Courbes hyperboliques utilisées dans l’évaluation de la CI50 de l’EMC.

ANNEXES

DO DO
λ=517 nm λ=517 nm
0,7
y = 0,5982e-1,3385x 0,7 y = 0,5957e-1,5325x
0,6 R² = 0,9720 0,6
R² = 0,9837
0,5
0,5
0,4 0,4
0,3 0,3
0,2 0,2

0,1 0,1

0 0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2
Concentration en mg/ml Concentration en mg/ml

Figure N°17: Courbes hyperboliques utilisées dans l’évaluation de la CI50 de l’EEC.

DO DO
λ=517 nm λ=517 nm
0,7
y = 0,5765e-0,2697x 0,7 y = 0,6081e-0,2844x
0,6 R² = 0,9323 R² = 0,9878
0,6
0,5
0,5

0,4 0,4

0,3 0,3

0,2 0,2

0,1 0,1

0 0
0 0,5 1 1,5 2 0 0,5 1 1,5 2
Concentration en mg/ml Concentration en mg/ml

Figure N°18: Courbes hyperboliques utilisées dans l’évaluation de la CI50 de l’EAC.

RESUME

Curcuma longa L. appartient à la famille des Zingiberaceae est l'un des herbes
médicinales les plus populaires, utilisé et reconnue pour ses vertus thérapeutiques depuis
l'antiquité en médecine traditionnelle. L’objectif de cette présente étude est d’extraire les
composés phénoliques par la méthode de macération en utilisant trois solvants différents et ce
dans le but d’évaluer leur pouvoir antioxydant. Le rendement des extraits bruts (Extrait
éthanolique, extrait méthanolique et extrait aqueux) est de l’ordre de: 12,36%, 11,21% et
6,24%. L’estimation quantitative des polyphénols totaux et des flavonoïdes par la méthode
colorimétrique a témoigné la richesse des extraits en ces composés. Les résultats montrent que
l’extrait éthanolique est caractérisé par la teneur la plus élevée en composés phénoliques et en
flavonoïdes avec un taux de 103,16 ± 2.77 mg EAG/g MS et de 82.63 ± 0.49 mg EQ/g MS,
respective. L’évaluation du pouvoir antioxydant par deux techniques différentes à savoir la
réduction du fer : FRAP et le piégeage du radical libre DPPH•, indiquent aussi que l’extrait
éthanolique possède une bonne efficacité antioxydante avec une CE50 de 1,46 ± 0,10 mg/ml et
une CI50 de 0,48±0,032 mg/ml, ces dernières sont supérieures a celles enregistrées par les
deux autres extraits, méthanolique ( une CE50 de 2,76 ± 0,08 et une CI50 de 0,64 ± 0,20
mg/ml) et aqueux ( une CE50 de 5,87 ± 0,20 et une CI50 de 2,48 ± 0,06 mg/ml).

Mots clés : Curcuma longa L., Composés phénoliques, Flavonoïdes, Activité

antioxydante.

‫الملخص‬

‫كركم لونغا ينتمي إلى عائلة الزنجبيليات وهو يعتبر من النباتات الطبية الشعبية ألاكثر استعماال منذ العصور القديمة‬
‫ الهدف من هذه الدراسة هو استخراج املركبات الفينولية بطريقة النقع باستعمال‬.‫و ذلك بفضل خصائصه العالجية املتعددة‬
‫ بينت النتائج أن مردود املستخلصات الخامة) املستخلص‬.‫ثالثة مذيبات مختلفة و ذلك من أجل تقييم نشاطها املضاد لألكسدة‬
‫ نتائج القياس الكمي إلاجمالي‬٪1.36 ‫ و‬٪66.36 ، ٪63.21 ‫ املستخلص امليثانولي و املستخلص املائي (مرتبة كالتالي‬،‫الايثانولية‬
‫ تظهر النتائج أن املستخلص‬.‫للمركبات الفينولية و الفالفونيدات بالطريقة اللونية شهدت على ثراء املستخلصات بهذه املركبات‬
33.12‫ و‬/ ‫ ملغ مكافئ حمض الغاليك‬3.22 ± 612.61 ‫إلايثانولي يتميز بأعلى نسبة من املركبات الفينولية و الفالفونيدات بمستوى‬
FRAP ‫ القدرة الارجاعية‬: ‫تقييم قوة مضادات ألاكسدةباستخدام تقنيتين مختلفتين هما‬. ‫ ملغ مكافئ كارسيتين على التوالي‬1.60 ±
ً ‫يشير‬DPPH•‫و قدرة محاصرة الجذر الحر‬
1.61 ‫أيضا إلى أن املستخلص إلايثانولي له فعالية مضادة لألكسدة عالية (مع تركيز‬
‫ أعلى من تلك املسجلة من مستخلصين آخرين املستخلص امليثانولي بتركيز‬،‫ مل على التوالي‬/ ‫ ملغ‬1.63 ± 1.123 ،‫ مل‬/ ‫ ملغ‬6.61±
.‫ مل‬/ ‫ملغ‬2,48 ± 0,06 ‫ مل‬/ ‫ملغ‬5,87 ± 0,20 ‫ مل و املستخلص املائي بتركيز‬/ ‫ملغ‬2,76 ± 0,08‫ مل‬/ ‫ملغ‬0,64 ± 0,20
.‫ النشاط الضد ألاكسدة‬، ‫ الفالفونيدت‬،‫ املركبات الفينولية‬،‫ الكركم لونغا‬:‫الكلمات املفتاحية‬