Microbiologie moléculaire et génétique

Chapitre
This model illustrates 1: Gènes : Structure, Réplication, et Mutation
double-stranded DNA.
3-
DNA is the genetic Réplication de l’ADN chez les procaryotes
material for procaryotes
and eucaryotes.
Genetic information
is contained in the
sequence of base pairs
that lie in the center
 Introduction

• Lors de la division cellulaire, quand une cellule-mère donne deux cellules-filles,

il est essentiel que l’ADN présent dans les cellules-filles soit la copie identique
de l’ADN présent dans la cellule-mère. Cette copie de l’ADN est indispensable
à réaliser avant la mitose on parle de réplication de l’ADN. Préalablement à
toute division cellulaire, la quantité d’ADN est multipliée par deux.
 Définition :

Définition :
- La réplication est le processus par lequel la cellule copie son ADN avant de
se diviser.

- Ce mécanisme est nécessaire pour la transmission du matériel génétique

aux cellules filles.

- C’est est un phénomène complexe et ordonné sous le contrôle de plusieurs

enzymes, et de protéines dont les ADN polymérases.
La réplication est gouvernée par un ensemble de
caractéristiques:

– Semi-conservative.
– Bidirectionnelle.
– Complémentaire et dans le sens 5 ’ 3’.
– Semi-discontinue.
– Nécessite la présence d’une amorce.
 mechanism of DNA replication in greater depth.

1- La réplication de l'ADN est semi-conservative 5′ 3′

Parental helix
G C
A T
G
C
T A
T A
G C

La réplication de l'ADN est semi- A T

T
A
A
conservative. Cela signifie que C G
Replication fork

les molécules filles contiennent A

C
T A T
G

chacune un polynucléotide dérivé G

G
C G
G
C

de la molécule d'ADN originale A T A T

A T A T
et un brin nouvellement T A
C G
T A
C G Replicas

synthétisé. A T
C
T A
A
C
T A
T

3′ G C 5′ 3′ G C 5′

Parental New New Parental

Figure 11.10 Semiconservative DNA Replication. The replication

Figure 1: Réplication semi-conservative de l'ADN.
fork of DNA showing the synthesis of two progeny strands. Newly
synthesized strands are in maroon. Each copy contains one new and
one old strand. This process is called semiconservative replication.
La fourche de réplication de l'ADN montrant la synthèse de deux brins descendants. Les brins nouvellement
synthétisés sont en rose. Chaque copie contient un brin nouveau et un brin ancien. Ce processus est appelé
réplication semi-conservative.
ern of DNA synthesis and then examine the bacterial chromosome is a single replicon, the forks meet on th
replication in greater depth.
2-Réplication bidirectionnelle
other side and two separate chromosomes are released.

5′ 3′
Chez lesParental
procaryotes
helix Origin
G C
A T
G
C
- Bidirectionnel à partir d'une
T A seule origine de réplication
T A
G C
A T Replication forks
A
T A
C - Réplicon G
Replication fork
G
partie du génome qui
A T
2 fourchettes se
G C
contient une origine et
G
déplacent en
sens inverse
qui est répliquée en tant
A
A
T
T
A
G qu'unité. T A
CG Replicas
C C
A T A
A T

5′ 3′ G C 5′

New Parental
Chez les eucaryotes
- Bidirectionnel
- Origines de réplication multiples
10–100 µm

Replication
forks
Figure 3 La réplication de l'ADN eucaryote.
La réplication est initiée tous les 10 à 100 ︎micromètre les fourches de
Figure 11.13 The Replication of Eucaryotic DNA. Replication
réplication s'éloignent de l'origine. L'ADN nouvellement copié est en rouge.is
initiated every 10 to 100 !m and the replication forks travel away from
the origin. Newly copied DNA is in red.
3. Orientation
Chez tous les organismes vivants, la réplication (La synthèse du nouveau brin de l’ADN) se
fait toujours dans la direction 5’ 3’: Le brin fils est allongé par l’addition de nouveaux
nucléotides à son bout 3’.
La synthèse de l’ADN s’effectue toujours dans le sens 5’ 3’. Les deux brins sont
antiparallèles, en suivant la direction de la fourche de réplication un brin est synthétisé dans
le sens 5’ 3’ mais l’autre brin est synthétisé par étapes ou par morceaux. Ce sont de petits
fragments appelés fragment d’Okazaki qui sont synthétisés en discontinue dans le sens 5’ 3’.

Figure 4: La direction de la fourche et des brins nouvellement synthétisés

 4. Semi discontinue :

La réplication de l'ADN se
produit de manière différente
sur les deux brins. (A) Le brin
de tête est copié en continu, la
synthèse se produisant dans le
sens 5’- 3’. (B) La synthèse
sur le brin retardataire est
discontinue car les brins sont
antiparallèles. La synthèse se
produit en segments courts
(fragments d'Okazaki) parce
que l'ADN polymérase ne peut
synthétiser l'ADN que dans le
sens 5’-3’
 5. La présence d’une amorce

Une séquence nucléotidique préexistante est obligatoire à

l’initiation de la réplication.
 Les acteurs de la réplication :
1) Les protéines DnaA, DnaB et DnaC : ouvrent la double hélice.
2) Les hélicases: sont des enzymes qui nécessitent l’énergie fournie par l’hydrolyse de l’ATP
pour briser les liaisons hydrogènes entre les 02 brins d’ADN.
3) Les protéines de liaison au single brin SSB(Single Strand Binding) : stabilisent la
conformation ouverte de la double hélice
4) Les primases : sont des ARN polymérases capables de synthétiser l’amorce d’ARN.
5) Les topoisomérases : suppriment les supereneroulement en amont de la fourche de
réplication et relâchent les tensions en présence d’ATP. Tel ADN gyrase : introduit des super-
enroulements négatifs dans l’ADN (et élimine les super- enroulements positifs diminuant ainsi
la tension générée par la séparation des deux brins de l’ADN en aval de la fourche de
réplication).
 Les acteurs de la réplication :

6) Les ADN polymérases : sont les enzymes fondamentales à la réplication

responsables de la polymérisation des nucléotides lors de la réplication de l’ADN.
Elles se déplacent le long de l’ADN simple brin et ajoute des nucléotides libres à
l’extrémité 3’ du brin. Elles sont de 3 types (I, II et III) pour les procaryotes :

- L’ADN polymérase III: qui poursuit la synthèse de l’ADN sur l’amorce.

(Réplication du brin avancé et synthèse des fragments d’Okazaki).
- L’ADN polymérase II: Réparation de l’ADN endommagé grâce à une activité
exonucléase 3’ vers 5’.
- L’ADN polymérase I:hydrolyse les amorce et les remplace par de l’ADN et
réparation de l’ADN.
Mg++
Mécanisme de la réplication :
chez les procaryotes
Chez les procaryotes (bactéries), la réplication
débute en un point précis du chromosome, dit
point d’initiation ou origine de la réplication
(ORI). Le chromosome d’E. coli possède une
seule origine de réplication : OriC. Il s’agit d’une
séquence d’environ 245 pb. Caractérisée par la
présence de séquences répétées de 9 et 13
nucléotides riche en paires A-T qui favorise le
déroulement de la double hélice de l’ADN.
(appelées séquences 9-mères et 13-mères
respectivement). Ces séquences constituent les
sites de liaison de la protéine DnaA.

L’ADN répliqué à partir d’une unique origine est

appelé réplicon. Le chromosome bactérien est
considéré comme un seul réplicon.
 1.Initiation :
Ouverture de la double hélice et formation de la fourche réplicative
 1.Initiation :
Ouverture de la double hélice et formation de la fourche réplicative :
1.Initiation
1.Initiation
1.Initiation
 2. Elongation

- Dans chaque fourche de réplication, les deux brins d’ADN (brin avancé et brin retardé) sont
synthétisés simultanément par l’ADN polymérase III.
 2. Elongation
a) Synthèse du brin avancé
 2. Elongation
b) Synthèse du brin retardé
• 1) Le primosome synthétise une amorce;

• 2) L’ADN polymérase III s’attache à l’ADN matrice et allonge l’amorce

par de l’ADN dans le sens 5’→3’ ;

• 3) La synthèse d’ADN se poursuit jusqu’à ce que l’ADN ploymérase III

atteint l’amorce suivante. Le fragment ainsi généré est appelé « fragment
d’Okazaki » ;

• 4) L’ADN polymérase III se fixe sur laprochaine amorce pour

commencer un autre cycle de synthèse ;

• 5) En parallèle, l’ADN polymérase I intervient pour dégrader l’amorce

du fragment d’Okazaki et remplacer les ribonucléotides éliminés par des
désoxyribonucléotides ;

• 6) Une ADN ligase intervient ensuite pour souder les extrémités libres

- Les étapes (1) à (6) sont répétées jusqu’à ce que les fourches de réplication
se joignent.
Synthèse simultanée sur les brins avancé et retardé
 3.Terminaison

La réplication du
chromosome circulaire
d’E. coli se termine
lorsque les deux
fourches se
rencontrent, dans une
région opposée au site
d’initiation de la
réplication oriC.
 LA RÉPLICATION UNI-DIRECTIONNELLE (en cercle roulant)

Chez certains plasmides, comme le plasmide F, et certains virus, comme le bactériophage

lambda, la réplication de l'ADN se fait de manière "Unidirectionnelle" en "Cercle roulant" :