Ecole Nationale Supérieure de
Biotechnologie - Taoufik Khaznadar,
Constantine
3ème Année du cycle Ingénieur
[Cours UE-SF 2 : Enzymologie
(Module V); Régulations enzymatiques
« allostériques »
Enseignant responsable : Dr. MAROUF A., Mohamed
Année universitaire 2023-2024
CONTENTS
05 Régulations enzymatiques « allostériques »
Méthodes de dosage et mesure des
06 activités enzymatiques
Régulations enzymatiques
« allostériques »
Introduction
Dans une voie métabolique enzyme « E1 » qui catalyse la première
réaction de la voie métabolique est inhibée par le produit terminal de
cette voie «rétro-inhibition » ou « Feed-back ».
Les enzymes de cette classe ont certaines propriétés exceptionnelles :
Leur cinétique n'obéit pas à l'équation de Michaelis-Menten les
courbes de « v » en fonction de « [S] » sont des sigmoïdes et non pas des
hyperboles équilatères.
Ces courbes suggèrent une relation d'ordre 2 (ou supérieur) entre «v» et «[S]» «v» est
proportionnel à [S]n, avec n > 1.
Ces enzymes portent le nom d’enzymes allostériques.
Le terme allostérique du grec « allos », autre, et « stereos », forme Les enzymes
allostériques prennent une autre forme (une autre conformation) à la suite de la liaison d’un
effecteur.
Dans une voie métaboliques, les enzymes allostériques forment les enzymes-clés de la
régulation de la voie métabolique enzymes régulateurs: contrôle la vitesse de l'ensemble
de la voie:
Enzyme michaelienne activité enzymatique régulée par la concentration du substrat
processus inefficace pour réguler une voie métabolique.
Les enzymes allostériques augmentation de la vitesse pour de faibles [S] meilleur
contrôle métabolique.
1. Propriétés Générales des enzymes allostériques
1.1. Définition
Allostérie Propriété de certaines protéines actives qui
peuvent changer de structure spatiale lorsqu'elles se lient à un
ligand (substrat ou effecteur ) en un site différent du site actif
cette liaison se traduit par une modification de l'activité.
1.2. Effecteurs allostériques
Les effecteurs allostériques inhibiteurs ou activateurs
ligands dont le site de fixation est différent du site actif site
allostérique.
Les effecteurs allostériques possèdent 3 propriétés
caractéristiques:
Leur structure est souvent très éloignée de celle du substrat naturel de l’enzyme d’où
nom d’effecteurs allostériques
Leur action est spécifique des composés de structure voisine n’ont pas d’action.
Agissent sur la première enzyme spécifique de la voie métabolique régulateurs de
l’activité enzymatique.
Effet allostérique homotrope ou Allostérie homotrope
effecteur est une molécule de substrat.
Effet allostérique hétérotrope ou Allostérie
hétérotrope effecteur est une molécule qui n'est pas
le substrat.
La modification de l'activité est toujours
quantitative:
augmentation activation allostérique
ralentissement inhibition allostérique.
1.3. Structure des enzymes allostériques: structure oligomérique
Enzymes allostériques ont une structure quaternaire
oligomérique formées d’un petit nombre de protomères
identiques ou différents « de 2 à 12 ».
Il y a plusieurs sites actifs et plusieurs sites allostériques par
molécule d’enzyme 1 site actif et 1 site allostérique par
protomère sites non indépendants.
La conformation de chaque protomère est contrainte par la
conformation des autres.
Il y a deux états possibles pour chaque protomère:
Etat tendu ou Tense « T » état non catalytique faible
affinité pour le substrat
Etat relâché ou Relaxed « R » état catalytique forte
affinité pour le substrat
On nomme transition allostérique le passage d'un état à
l'autre (tendu à relâché ou inversement).
1.4. Coopérativité ou Association Coopérative
Le graphe représentant « v0 » d’une enzyme allostérique
n’est pas une hyperbole Courbe sigmoïde coopération
entre les protomères.
Cette cinétique allostérique est plus lente que la cinétique
michaelienne pour les petites concentrations du substrat et
devient plus rapide au-delà existence d’une concentration
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seuil pour la coopérativité.
1.4.1. Définition de la « Coopérativité »
La fixation d'une molécule substrat sur un protomère facilite
la fixation d'autres molécules de substrats sur les autres
protomères coopération entre les sous-unités.
1.4.2. Types de coopérativité
a) Coopérativité positive
une molécule d'un ligand (substrat ou activateur) entraîne
l'augmentation de l'affinité pour les mêmes molécules de
substrat v = f([S] sigmoïde positive
Activateur déplace la courbe vers la gauche
Il y a deux types de coopérativité positive:
a1) Coopérativité homotrope positive (allostérie homotrope)
Ligand est une molécule de substrat effet du substrat sur sa propre fixation
Appétit vient en mangeant
a2) Coopérativité hétérotrope positive (allostérie hétérotrope positive)
Ligand est une molécule d’activateur Plus je connais les hommes,
plus j'aime mon chien.
b) Coopérativité négative (coopérativité hétérotrope négative ou
allostérie hétérotrope négative)
une molécule d'un effecteur (inhibiteur ) entraîne la diminution de
l'affinité pour les molécules de substrat v = f([S] sigmoïde positive la
soif s’en va en buvant.
Inhibiteur tend à aplatir la courbe en la déplaçant vers la droite.
1.4.3. La désensibilisation
La dissociation d’une enzyme allostérique en protomères peut soit:
entrainer une perte de l’activité catalytique
disparition du comportement allostérique le protomère obéit la loi de Michaelis-Menten
La désensibilisation montre interaction entre protomères est responsable de l’allostérie.
1.5. Cinétique d’une enzyme allostérique: Equation de Hill
Soit une enzyme oligomérique possédant « n* » sites actifs équivalents.
Cinétique est donnée par l’équation de Hill applicable à des réactions
enzymatiques du type:
k1 k2
E nS ESn E nP
k 1
Equation de Hill peut s’écrire:
v
S
n
K 0.5 S
n
Vmax
«K0.5» ou «K1/2» concentration de substrat donnant pour un enzyme
allostérique une vitesse de réaction égale à la moitié de la vitesse maximale
« n » nombre de Hill ou coefficient de Hill ou coefficient d’interaction ou indice de
coopérativité
« n » un nombre positif, inférieur, égal ou supérieur à 1.
« n » mesure le degré de coopérativité entre protomères plus la valeur est élevée
plus grande est la coopérativité:
« n = n* » Coopérativité totale cas théorique jamais atteint
« n=1» absence de coopérativité pas d’interaction entre les sites enzyme aura un
comportement purement michaëlien sites indépendants
« n >1 » coopérativité positive affinité apparente de l’enzyme augmente
« n <1 » coopérativité négative affinité apparente de l’enzyme diminue.
1.5.1. Détermination du nombre du Hill
v
S
n
v
S
n
K 0.5 S
Equation de Hill peut être réarrangée:
Vmax n
Vmax v K 0.5
Si on prend le logarithme, on obtient:
v S n v
Log Log Log
nLogS LogK0.5
Vmax v K 0.5 Vmax v
V v LogS
La courbe Log
v droite de pente « n » et d’ordonnée à l’origine
max
«-LogK0.5»
Les valeurs expérimentales de « n » ne sont pas
souvent entières prendre comme valeur de
« n » le nombre immédiatement supérieur.
1.6. Modèles moléculaires de l’allostérie
Deux modèles différents ont été proposés pour expliquer la coopérativité des ligands.
1.6.1. Modèle Concerté ou Symétrique ou modèle MWC (1965)
Modèle proposé par MONOD, WYMAN et CHANGEUX Ce modèle stipule que:
Enzyme se répartisse entre deux conformations qui sont en équilibre R T
Tous les protomères d’une même molécule d’enzyme sont tous identiques adoptent la
même conformation R ou T (R et T étant en équilibre)
Il n’existe pas d’état mixte formé de formes R et T modèle du tout ou rien.
Les protomères sont équivalents dans l’espace disposés par rapport à un axe de symétrie
conservation de la symétrie lors de la transition allostérique.
Dans le modèle de MWC chaque ligand déplace
l’équilibre en faveur de la forme capable de le fixer
c’est ce déplacement d’équilibre ou transition
allostérie qui se fait de manière coopérative:
En l’absence de substrat l’équilibre est en faveur de T
En présence du substrat l’ équilibre est déplacé vers R
Pour une molécule d’enzyme, la transition se fait en bloc comme un château de cartes :
les cartes tombent tous en même temps pas d’état mixte
1.6.1. Modèle Séquentiel ou modèle KNF(1966)
Modèle proposé par KOSHLAND, NEMETHY et FILMER Ce modèle
stipule que:
En l’absence de substrat toutes les molécules d’enzymes sont en
conformation T
La fixation du ligand sur un protomère d’une molécule d’enzyme fait
basculer le protomère dans l’état R ou T Transition allostérique
Une perte de symétrie transitoire de l’enzyme Il existe d’état mixte
formé de formes R et T .
Transition allostérique se répercute de proche en
proche d’un protomère au protomère voisin
coopérativité entre différents protomères comme une
rangée de dominos qui tombent l’un après l’autre.
1.7. Modèles cinétiques de l’allostérie
Effets activateurs ou inhibiteurs sont mesurés par des variations de « Km » et de « Vmax » par
rapport au substrat (S), activateur (A) ou Inhibiteur (I).
Cas d’enzymes allostériques deux modèles ou systèmes cinétiques sont définis:
1.7.1. Enzymes allostériques du système « K »
Enzymes du système « K » substrat et l'effecteur
ont des affinités différentes pour les formes R et T de
l'enzyme fixation toujours sigmoïde.
Les formes R et T ont une même vitesse maximale.
Effecteur ne peut modifier que l'affinité apparente
de l'enzyme pour le substrat modification de Km
(K0.5)
1.7.2. Enzymes allostériques du système « V »
Enzymes allostériques du système V substrat (S) a la même affinité pour les deux
formes d'enzyme R et T mais des activités catalytiques différentes Tout se passe comme
s'il n y avait qu’une seule forme d'enzyme fixation hyperbolique de S.
Pas de coopérativité homotrope
Activateur (A) et inhibiteur (I) modifient la vitesse sans modifier l’affinité.
NB: Pour beaucoup d’enzymes allostériques,
mais pas pour tous, si on trace v en fonction
de S, on obtient une courbe sigmoïde.
Enzyme allostérique effet coopératif des effecteurs (activateur : A ; inhibiteur : I)
mesure de la vitesse en faisant varier leur concentration à concentration de substrat
constante:
C’est une façon de détecter le caractère allostérique des enzymes du système V.
R et T Affinité différentes pour A et I
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Importance d’allostérie
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