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Exercice 1
Ecrire les réactions d’ionisation de l'arginine et de l'acide aspartique quand on passe d'un milieu tres acide @ un
milieu trés basique. Calculer leur pHi. Les valeurs des pk d'ionisation de I'arginine et de l'aspartate sont les suivants
‘Acide aminé kK; (COOH) ke (NH) ks (Radical)
Arginine 2,7 9,04 12,48
Aspartate 21 98 42
Exercice 2
1. Afin de séparer par électrophorése un mélange composé de Glu (pHi 3,22), Arg (pHi 10,76) et Tyr (pHi 5,65), quelle
valeur de pH du milieu doit-on choisir pour que la Tyr reste au voisinage du point de dépét, avec migration du Glu
vers 'anode et de I’Arg vers la cathode ? Faire le schéma de I'électrophorégramme.
2. Ce méme mélange est soumis & une chromatographie d’échange d’ions sur résine anionique. Quel intervalle de pH
du milieu doit-on choisir pour retenir seulement Glu et Tyr sur la résine et éluer Arg ? Peut-on retenir Arg fixée & la
résine et éluer les 2 autres AcAm ? Justifier votre réponse.
Exercice 3
On posséde un mélange de 3 peptides que l'on veut séparer par électrophorése et par chromatographie d’échange
lions. On donne : pk NH, = 9,5 et pk COOH = 2,5
41. :HN-Lys-Val-Gin-Lys-COOH
2. JHN-Gly-Asp-Pro-Ala-Glu-COOH
3. HN-lle-Trp-Met-Gly-Leu-COOH
Comment vont-ils-migrer en électrophorése & ph 6 ?
Lequel de ces 3 peptides sera retenu par une résine échangeuse d’anions & pH 8 ?
Exercice 4
La séquence en acides aminés d'un polypeptide est :
2HN-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-Asp-Ala-Gly-
‘Asp-Gln-Glu-Ser-Ala-Glu-Ala-Phe-Pro-Leu-Glu-Phe-COOH
Quelle est la charge globale approximative & ph 7, sachant que les valeurs de pk des chaines.latérales (R) sont :
Ackm Arg lys Tyr Cys_—sHis: «Ss Glu AS
pk 1248 1053 109 83 60 425 42
Les pk des groupes terminaux sont de 7,8 (NH2) et 3,6 (COOH).
Exercice 5
Trois aminoacides sont obtenus aprés hydrolyse acide d'un tétrapeptide formé d'acides aminés différents. Que
déduisez-vous ? La Lys est obtenue aprés action de la carboxypeptidase. Deux dipeptides A et B sont obtenus aprés
action de la trypsine. U'acide aspartique et la Lys sont obtenus aprés hydrolyse acide de B.
Donner la séquence et la formule développée de ce peptide.
Exercice 6
Soit un pentapeptide, I'action du DNFB donne aprés hydrolyse un DNP-Ala et un DNP-Cys. L’action de I'hydrazine
donne des hydrazides d’AcAm et 2 AcAm sous forme libre : Ser et Glu. Aprés action du BME, on obtient un tripeptide
et un dipeptide. Que pouvez-vous dire de la structure du peptide ? Déterminez une séquence possible du peptide
{justifiez votre réponse). . .
Exercice 7
Les caractéristiques d'un mélange de 4 protéines de PM et de pHi différents sont les suivantes :
Protéine PM pHi
PL 20000 35
P2 35000 5,7
P3 18000 42
P4 22.000 48
1. On veut séparer ces protéines par chromatographie d’échange d’ions par ordre décroissant des pHi. Choisir le type
de résine qui convient 8 cette séparation, ainsi que le pH du miliew nécessaire a cette élution. Donner ordre
d’élution de ces protéines.
2. Comment déterminer le nombre de chaine(s) peptidique(s) qui compose(nt) une protéine ?
