Ministère de l'enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique

Direction Générale des Études Technologique

Institut Supérieur Des Etudes Technologiques De Bizerte
Département Génie des Procédés

PROJET DE FIN D’ETUDES

En vue de l’obtention du

Diplôme de la licence en génie des procédés

Parcours Procédés Chimiques

Sujet

Validation d’une méthode de détermination

de substance apparentée dans un comprimé à
base de paracétamol et caféine

Entreprise d’accueil
Galien Pharma

Elaboré par : Melle Aouini Ibtihel

Melle Attouani Ibtihel

Soutenu le : …/06/2023

Encadré par : Mme Rim essedik

Mme Sabrine

N° PFE : PC

Année universitaire 2022/2023

Dédicaces
Remerciements
 Sommaire

I. Le médicament :............................................................................................................................1
1. Définition...................................................................................................................................1
2. Composition d'un médicament...................................................................................................1
3. Mise en forme d’un médicament...............................................................................................1
4. Les formes de médicaments.......................................................................................................1
1.1. Les comprimés...................................................................................................................1
4.1.1 Les caractéristiques...............................................................................................................1
4.1.2 Les avantages des comprimés...............................................................................................1
4.1.3 Les inconvénients.................................................................................................................1
4.1.4 Contrôle des comprimés.......................................................................................................1
5. Quelques termes relatifs aux médicaments :..............................................................................1
5.1. La pharmacopée.................................................................................................................1
5.2. Le contexte réglementaire..................................................................................................1
II. Généralités sur le paracétamol.......................................................................................................2
1. Origine.......................................................................................................................................2
2. Dénomination et Formule chimique...........................................................................................2
3. Caractéristiques physicochimique..............................................................................................2
4. Mécanisme d’action...................................................................................................................2
5. Caractéristique pharmacocinétique............................................................................................2
6. Indication thérapeutique............................................................................................................2
III. Généralités sur la caféine...........................................................................................................2
1. Origine.......................................................................................................................................2
2. Dénomination et Formule chimique...........................................................................................2
3. Caractéristiques physicochimique..............................................................................................2
4. Mécanisme d’action...................................................................................................................2
5. Caractéristique pharmacocinétique............................................................................................2
6. Indication thérapeutique............................................................................................................2
IV. Généralités sur les impuretés :...................................................................................................2
1. Définition...................................................................................................................................2
 2. Origine.......................................................................................................................................2
3. Types des impuretés..................................................................................................................2
4. Processus d’analyse des impuretés............................................................................................2
5. Les effets des impurtés .............................................................................................................2
V. La validation d’une méthode analytique analytique:.....................................................................2
1. Définition...................................................................................................................................2
2. Objectif......................................................................................................................................2
3. Intérêt de la validation ..............................................................................................................2
4. Les pré-requis à la validation.....................................................................................................2
5. Critères de la validation d’une méthode de dosage....................................................................3
VI. Chromatographie liquide à haute performance (HPLC) :...........................................................3
1. Définition...................................................................................................................................3
2. Principe......................................................................................................................................3
3. Appareillage..............................................................................................................................3
4. Paramètres fondamentales de la chromatographie :...................................................................3
 Liste des tableaux
Tableau 1 : les différents types d’excipients
 Listes des figures

Figure 1: l'industrie de Galien Pharma

Figure 2: Formule chimique de paracétamol

Figure 3 : Formule chimique de la caféine

Liste des abréviations

HPLC : chromatographie liquide haute performance

PA : Principe actif

LD : Limite de détection

LQ : Limite de quantification

ICH: International conference of harmonization

FDA: la Food and Drug Administration

EMA : l'Agence européenne des médicaments

OMS: l'Organisation mondiale de la santé

DCI : Dénomination commune internationale

USP : The United States Pharmacopeia

 Introduction générale

L’industrie pharmaceutique est le secteur économique qui regroupe les activités de

recherche, de fabrication et de commercialisation les médicaments pour la médecine
Humaine ou vétérinaire c’est une des industries les plus rentables et importantes
économiquement.

L’activité de l’industrie pharmaceutique est exercée par les laboratoires pharmaceutiques

et les sociétés de biotechnologie et reste un secteur clé et un important moteur de
croissance de l’économie mondiale.

Le laboratoire Galien Pharma est une compagnie pharmaceutique qui fabrique et

commercialise des produits génériques de haute qualité.

Dans ce cadre, le sujet traité concerne Validation d’une méthode de détermination de

substances apparentées dans un comprimé à base de paracétamol et caféine par
chromatographie liquide à haute performance (HPLC).

La validation d'une méthode de détermination de substances apparentées dans un

comprimé à base de paracétamol et caféine est une étape importante dans le processus de
fabrication de médicaments. Cette méthode permet de s'assurer que le comprimé contient
la quantité exacte de principes actifs, ainsi que d'identifier et de quantifier les impuretés
éventuelles présentes dans le produit fini car ce médicament est largement utilisé pour
soulager la douleur et la fièvre.

L'objectif de cette validation est permet à l'industrie pharmaceutique de s'assurer que la

production du médicament est conforme aux normes de qualité élevées requises par les
réglementations en vigueur, ce qui peut renforcer la confiance des patients dans le
médicament et la réputation de l'entreprise , Avec de garantir la qualité, la sécurité et
l'efficacité du médicament avant sa commercialisation.

La validation de cette méthode repose sur une analyse statistique basée sur un certain
nombre de critères aboutissant à une méthode analytique permettant de donner des
résultats fiable et de montrer qu’elle correspond à l’utilisation pour laquelle elle est
proposée.
La structure du présent mémoire se présente comme suit :

 La première partie est une partie bibliographique consacrée sur les généralités des
médicaments, paracétamol, caféine et les impuretés, Des notions sur la validation de ce
méthode par HPLC.
 Le deuxième chapitre est consacré aux conditions expérimentales : matériel et méthode

 Le troisième chapitre est consacré au traitement des résultats et discutions.

 Présentation de l’entreprise

Galien Pharmaceuticals est une unité pharmaceutique détenue et contrôlée à 52% par le
groupe Maxula,. Elle emploie actuellement plus de 40 collaborateurs dans la région de
Tabarka, zone de développement régional. Depuis fin 2021, la société a mis en place un
plan de développement et de dépôt d’AMM. Galien pharma (représenter dans la figure 1
suivante) est un Laboratoire pharmaceutique qui fabrique et distribue des médicaments et
compléments alimentaires.

Figure 3: l'industrie de Galien Pharma

1. .L’Organisation de l’industrie Galien pharmaceutiques :

( organigramme )
2. Les principales unités de Galien pharmaceutiques :
Il est composé de :

 Une zone de stockage :

Elle est devisée en 3 parties :
Un magasin des matières premières : est utilisé pour stocker les matières
premières utilisées dans la production de produits pharmaceutiques.
Un magasin des articles de conditionnement : est utilisé pour stocker les
matériaux d'emballage tels que les bouteilles, les étiquettes et les boîtes.
 Un magasin pour les produits finis : est utilisé pour stocker les produits
pharmaceutiques finis avant leur distribution.

 Une zone de production :

Les ateliers de production séparés en autant de formes à fabriquer :
Formes sèches (comprimés, gélules). Ces ateliers sont souvent équipés de machines
de pointe pour mélanger les ingrédients, comprimer les comprimés, encapsuler les
gélules et effectuer d'autres étapes du processus de fabrication.

 Une zone contrôle de qualité :

Le contrôle physicochimique: est l'unité responsable de la vérification de
l'identité, de la pureté et du dosage des matières premières et des produits finis.
Cette unité utilise des méthodes analytiques sophistiquées pour déterminer la
composition chimique des échantillons. Les techniques couramment utilisées
comprennent la chromatographie, la spectrométrie de masse, la spectroscopie infrarouge.

Le contrôle galénique : évalue la qualité de la forme finale du médicament,

C’est-à-dire la forme sous laquelle le médicament est présenté au patient, comme
les comprimés, les gélules. Cette unité vérifie la conformité des médicaments avec
les spécifications de qualité et les normes réglementaires. Les tests effectués
incluent la dissolution, la désintégration, la friabilité et la solidité des comprimés.

Le contrôle microbiologique : est une unité séparée des autres en raison de la

nature des tests à effectuer et des risques de contamination croisée. Cette unité
évalue la qualité microbiologique des médicaments en vérifiant la présence de
micro-organismes tels que les bactéries, les virus et les champignons. Les tests
effectués comprennent des essais de stérilité, des tests de conservation, des tests de
contamination environnementale et des tests de résistance antimicrobienne.

 La station de traitement d'eau : permet d'éliminer les impuretés et les

contaminants présents dans l'eau brute pour de nombreuses étapes du processus
pharmaceutique, notamment pour la préparation des solvants, la préparation de
solutions, la fabrication de comprimés, le nettoyage des équipements.
 3. Domaine d’activité :
Ses principales missions sont :

 la fabrication de médicaments de produits pharmaceutiques secs et de

compléments alimentaires humains conformes aux normes de qualité et de sécurité
en vigueur.
 Contrôle des médicaments (matière première et produit fini)
 Evaluation de la documentation chimique, biologique et pharmaceutique
 Etude bibliographique

Introduction :
La combinaison de paracétamol et de caféine est souvent utilisée dans les médicaments pour
soulager la douleur et la fièvre. Le paracétamol est un analgésique couramment utilisé pour
traiter divers types de douleurs et de fièvres, tandis que la caféine est un stimulant qui peut
aider à augmenter l'efficacité du paracétamol en accélérant son absorption dans le corps. La
combinaison de ces deux substances peut aider à soulager la douleur plus rapidement et plus
efficacement que le paracétamol seul.

I. Le médicament :

1. Définition du médicament

Les médicaments sont les produits utilisés dans la prévention, le diagnostic et le

traitement des maladies.

2. Composition de médicaments :
Un médicament comprend une partie responsable de ses effets sur l’organisme
humain, le principe actif, et, le plus souvent, une partie inactive faite d’un ou
plusieurs excipients.

Principe actif : aussi appelé substance active, est le ou les composants qui vont
avoir un effet thérapeutique. Les principes actifs préparés par synthèse chimique ou
issus des biotechnologies, se présentent sous forme de poudres ou, moins souvent,
de solutions.

Les excipients : la présence d’excipients est indispensable pour assurer la

conservation du médicament, lui donner un volume et une présentation utilisables
par le malade et permettre son identification ; on verra qu’ils jouent aussi un rôle
important dans la vitesse de mise à disposition de l’organisme du principe actif.
Chaque type d'excipient a une fonction spécifique dans la formulation des
médicaments. Voici un bref aperçu des rôles les plus courants des différents types
d'excipients :

Tableau 1 : les différents types d’excipients :

Excipient Rôle Exemples

Agents de Permettent d'augmenter le volume Lactose, cellulose

remplissage de la forme pharmaceutique microcristalline, mannitol

Agents de Masquent le goût désagréable du Aspartame, saccharine,

saveur médicament arômes naturels

Préviennent la croissance de micro- Benzoate de sodium,

Agents de organismes et prolongent la durée édétate disodique, acide
conservation de conservation du médicament ascorbique

Gomme arabique,
Agents de Améliorent la texture du povidone, stéarate de
texture médicament magnésium

Agents de Donnent de la couleur au Dioxyde de titane, oxyde

couleur médicament de fer, jaune de quinoléine

Amidon de maïs, cellulose

Agglomèrent les ingrédients entre microcristalline, gomme
Agents de liant eux pour former une tablette arabique

Agents de Facilitent l'écoulement des Huile de silicone, stéarate

lubrification ingrédients lors de la fabrication de magnésium, talc

Agents Protègent le médicament contre Gomme laque,

d'enrobage l'humidité, la lumière, la chaleur et hypromellose, opadry

3. la mise en forme de médicament :

 Un médicament se compose d’un ou de plusieurs principe actifs et d’excipients.
L’ensemble étant contenu dans un récipient.

Principe(s) actif(s) Excipient

Mise en forme galénique

Forme galénique Récipient

Conditionnement

Médicament

4. Les formes de médicaments :

La forme pharmaceutique est choisie par le médecin en fonction du site d’action, de

la durée d’action (instantanée, retardée) et du malade (adulte, enfant).

Il existe un très grand nombre de formes pharmaceutiques. Les plus usuelles sont
les formes :

Forme de médicament Voie d'administration

Comprimés Voie orale

Gélules Voie orale

Sirops Voie orale

Solutions injectables Voie intraveineuse, intramusculaire, sous-cutanée,

intradermique, intra-articulaire, intraoculaire, intra-tissulaire
 Pommades Voie cutanée

Suppositoires Voie rectale

Inhalateurs Voie pulmonaire

4.1. Les comprimés :

Définition :

Les comprimés sont des préparations de consistance solide contenant chacun une unité de
prise d’une ou plusieurs substances actives et obtenus en agglomérant par compression un
volume constant de particules. Les comprimés sont destinés dans la plupart des cas à être
absorbés tels quels par voie orale. Certains doivent être préalablement dissous dans de
l’eau: comprimés effervescents. D’autres doivent séjourner dans la bouche en vue d’y
exercer une action locale ou de permettre une absorption directe du médicament.

4.1.1 Les caractéristiques :

 Taille et forme : Les comprimés peuvent être fabriqués dans une variété de tailles
et de formes pour s'adapter aux besoins des patients. Certains comprimés peuvent
être ronds, ovales, carrés ou même en forme de cœur.

 Cohérence : Les comprimés peuvent être produits avec une consistance dure ou
molle, selon les besoins. Les comprimés à libération prolongée sont souvent conçus
pour être plus solides, tandis que les comprimés qui doivent être dissous
rapidement sont souvent plus mous.

 Couleur : Les comprimés peuvent être fabriqués dans une variété de couleurs, qui
sont souvent utilisées pour différencier les différents dosages ou types de
médicaments.
  Ingrédients inactifs : Les comprimés peuvent contenir une variété d'ingrédients
inactifs tels que des liants, des agents de remplissage, des lubrifiants et des
colorants pour aider à former la tablette.

 Dosage : Les comprimés peuvent être fabriqués avec des dosages variables pour
permettre une administration précise et adaptée aux besoins individuels de chaque
patient.

 Durée de conservation : Les comprimés sont souvent stables et ont une durée de
conservation plus longue que d'autres formes de médicaments, tels que les
solutions liquides ou les gélules.

4.1.2. Les avantages des comprimés :

 Dosage précis : Les comprimés peuvent être fabriqués avec des dosages précis, ce
qui facilite l'administration de la bonne quantité de médicament à chaque fois.

 Facilité d'utilisation : Les comprimés sont faciles à stocker, à transporter et à

prendre. Ils peuvent être pris avec de l'eau ou d'autres liquides, ce qui les rend
pratiques pour les personnes en déplacement.

 Stabilité : Les comprimés sont souvent stables et ont une durée de conservation
plus longue que d'autres formes de médicaments, tels que les solutions liquides ou
les gélules.

 Coût : Les comprimés sont souvent moins chers que d'autres formes de
médicaments, ce qui les rend plus abordables pour les patients.

 Facilité de production : Les comprimés peuvent être produits en grandes quantités

de manière relativement simple et rapide, ce qui permet de répondre aux besoins
des patients de manière efficace.

4.1.3. Les inconvénients :

  difficulté de déglutition : Certains comprimés peuvent être difficiles à avaler, en
particulier pour les personnes âgées, les enfants ou les personnes souffrant de
troubles de la déglutition.

 Lenteur d'absorption : Certains médicaments sous forme de comprimés peuvent

prendre plus de temps pour être absorbés dans le corps que d'autres formes, telles
que les injections.

 Effets secondaires : Les comprimés peuvent causer des effets secondaires

indésirables, en particulier lorsqu'ils sont pris à des doses élevées ou pendant de
longues périodes de temps.

 Interactions médicamenteuses : Certains médicaments peuvent interagir avec

d'autres médicaments que vous prenez, ce qui peut affecter l'efficacité ou la
sécurité de votre traitement.

 Difficulté à ajuster les dosages : Certains médicaments sous forme de comprimés

peuvent être difficiles à ajuster pour des dosages plus précis, en particulier pour les
doses faibles.

4.1.4. Contrôle des comprimés :

 Contrôle de la qualité des matières premières : Les matières premières utilisées

pour fabriquer les comprimés sont soumises à des contrôles de qualité pour garantir
qu'elles répondent aux normes de qualité et de pureté requises.

 Tests de dissolution : Les comprimés sont testés pour vérifier leur capacité à se
dissoudre et à libérer le médicament dans l'organisme de manière efficace.

 Analyse de la composition : Les comprimés sont analysés pour vérifier la

présence et la quantité de chaque ingrédient actif et excipient utilisé dans leur
fabrication.

 Tests de stabilité : Les comprimés sont soumis à des tests de stabilité pour vérifier
leur capacité à conserver leur qualité, leur efficacité et leur sécurité pendant une
certaine période de temps.
  Contrôle de la production : Les comprimés sont fabriqués conformément à des
normes de fabrication strictes pour garantir leur qualité et leur sécurité.

 Contrôle de l'emballage : Les comprimés sont emballés conformément à des

normes de qualité strictes pour garantir leur protection contre la contamination et
leur sécurité pendant le transport et le stockage.
5. Quelques termes relatifs aux médicaments :
5.1. La pharmacopée :

La pharmacopée est un recueil de normes et de standards qui définit la qualité, la pureté et

la force des substances médicamenteuses, des produits pharmaceutiques et des excipients
utilisés dans la fabrication des médicaments. Les pharmacopées nationales, telles que la
Pharmacopée Européenne, la Pharmacopée américaine (USP), ou la Pharmacopée
française, sont régulièrement mises à jour et révisées pour refléter les dernières
connaissances scientifiques et techniques en matière de médicaments. Les Pharmacopées
sont constituées de plusieurs monographies

Une monographie est un ensemble de spécifications définissant des caractéristiques

qualitatives et quantitatives des matières premières ou produits finis pharmaceutiques en
vue d’assurer une qualité optimale. On distingue :

- Les monographies générales décrivant de manière générale les contrôles à réaliser.

- Les monographies spécifiques décrivant les contrôles spécifiques à réaliser pour une
substance ou un produit pharmaceutique donné

5.2. Le contexte réglementaire :

Le contexte réglementaire fait référence à l'ensemble des règles, des lois, des directives et
des normes en vigueur dans un secteur donné, qui établissent les normes et les exigences
en matière de qualité, de sécurité, de santé et d'environnement. Dans un contexte
réglementaire, les entreprises sont tenues de se conformer à ces normes et de suivre des
procédures strictes afin de garantir que leurs produits et services sont conformes aux
règlementations en vigueur.

Dans de nombreux secteurs, notamment dans l'industrie pharmaceutique, l'industrie

alimentaire, l'industrie chimique, l'industrie du tabac, l'industrie cosmétique, etc., le
 contexte réglementaire est très important, car il peut avoir des conséquences importantes
sur la santé et la sécurité des consommateurs, sur l'environnement, ainsi que sur les
entreprises elles-mêmes.

Les réglementations sont établies par les gouvernements et les organismes de

réglementation compétents, tels que la Food and Drug Administration (FDA) aux États-
Unis, l'Agence européenne des médicaments (EMA) en Europe, ou encore l'Organisation
mondiale de la santé (OMS) au niveau international. Les entreprises doivent se conformer
à ces réglementations pour obtenir des autorisations de mise sur le marché de leurs
produits et services, ainsi que pour maintenir leur statut de conformité tout au long de leur
cycle de vie.

II. Généralités sur le paracétamol :

1. Origine :

Le paracétamol appelé acétaminophène c’est un médicament analgésique et antipyrétique

couramment utilisé pour soulager la douleur et abaisser la fièvre. Le paracétamol est un
dérivé du phénol, une classe de composés organiques aromatiques contenant un groupe
hydroxyle (-OH) attaché à un anneau de benzène. Il a été synthétisé pour la première fois en
combinant de la p-nitrophénol avec du chlorure de zinc pour former de la p-aminophénol,
qui a ensuite été acétylée avec de l'anhydride acétique pour former le paracétamol.

2. Dénomination et Formule chimique :

La dénomination commune internationale (DCI) et la formule chimique du paracétamol
sont les suivantes :
Dénomination commune internationale (DCI) : Paracétamol
Formule chimique : C8H9NO2

Figure 4: Formule chimique de paracétamol

 Le nom chimique est : N-acétyl-para-aminophénol
le paracétamol est également connu sous d'autres noms commerciaux, tels que
Tylenol, Panadol et Calpol, mais sa dénomination commune internationale est
paracétamol.

3. Caractéristiques physicochimique

Masse molaire : 151,16 g/mol

Point de fusion : 168-172 °C

Solubilité dans l'eau : 1,25 g/100 ml à 20 °C

Solubilité dans l'éthanol : 1 g/100 mL à 20 °C

Solubilité dans l'éther éthylique : 0,05 g/100 mL à 20 °C

pH de la solution aqueuse à 0,1 % (p/v) : environ 6,5 à 7,5

4. Mécanisme d’action :

Les humains utilisent le paracétamol en thérapie depuis plus d'un siècle en raison de ses
propriétés antipyrétiques et analgésiques. Néanmoins, son mécanisme d'action reste un sujet
de débat et est au stade hypothétique. Cependant, des études récentes ont mis l'accent sur le
fait que le paracétamol est principalement actif au niveau du système nerveux central.

5. La caractéristique pharmacocinétique

Les caractéristiques pharmacocinétiques du paracétamol incluent les éléments suivants :

Absorption : le paracétamol est rapidement absorbé par voie orale et atteint des
concentrations plasmatiques maximales en environ 90 minutes.

Distribution : le paracétamol est largement distribué dans les tissus corporels, mais sa
concentration est généralement plus élevée dans le foie, où il est métabolisé. Le paracétamol
est également présent dans le lait maternel et traverse la barrière placentaire.

Métabolisme : le paracétamol est principalement métabolisé dans le foie par conjugaison

avec l'acide glucuronique et la cystéine, ainsi que par oxydation avec le cytochrome P450
2E1. Une petite quantité de paracétamol est également métabolisée par la voie du sulfate.

Élimination : le paracétamol et ses métabolites sont excrétés principalement par les reins
sous forme de conjugaisons avec l'acide glucuronique et la cystéine. Moins de 5% du
paracétamol est excrété sous forme inchangée dans l'urine.

Demi-vie d'élimination : la demi-vie d'élimination du paracétamol est d'environ 2 à 3

heures chez les adultes en bonne santé, mais elle peut être plus longue chez les personnes
atteintes d'une insuffisance hépatique ou rénale.

6. Indication thérapeutique :

. Ses principales indications thérapeutiques comprennent :

Soulagement de la douleur légère à modérée : le paracétamol est souvent utilisé pour
soulager la douleur associée aux maux de tête, douleurs menstruelles, douleurs dentaires,
douleurs musculaires et articulaires .

Réduction de la fièvre : le paracétamol est également utilisé pour abaisser la fièvre chez
les adultes et les enfants.

Traitement de l'arthrose : le paracétamol peut être utilisé en combinaison avec d'autres

médicaments pour soulager les douleurs associées à l'arthrose.
le paracétamol n'a pas d'effets anti-inflammatoires significatifs et ne doit pas être utilisé
pour traiter les douleurs inflammatoires telles que celles associées à l'arthrite rhumatoïde.
Il est important de suivre les instructions du médecin ou du pharmacien et de ne pas
dépasser la dose recommandée.

III. Généralité sur la caféine :

1. Origine :
La caféine est un alcaloïde c'est-à-dire un composé organique contenant de l’azote, de la
famille des méthylxanthines, présent dans de nombreux aliments, qui agit comme
stimulant psychotrope et comme léger diurétique. La caféine a été découverte en 1819
par le chimiste allemand Friedrich Ferdinand Runge. Il la nomma « kaffein » en tant
que composé chimique du café, qui en français devint caféine.

La caféine est présente dans les graines, les feuilles et les fruits de différentes plantes
où elle agit comme insecticide naturel, paralysant ou tuant les insectes qui s'en
nourrissent. Elle est le plus couramment consommée sous forme d'infusions de la
graine du caféier ou des feuilles du théier, de même que dans plusieurs aliments et
boissons contenant des produits dérivés de la noix de Kola.

2. Formule chimique et Dénomination:

 La caféine est une base faible de formule brute C8H10N4O2,

 DCI : 1, 3,7-triméthylxanthine ou encore 1, 3,7- trimethyl-1H-purine-2,6-dione .

La structure chimique de la caféine est présentée dans la figure suivant :

Figure 5: structure chimique de la caféine

3. Mécanisme d’action :
Une revue de la littérature indique que l’effet diurétique de la caféine implique
l’antagonisme des récepteurs de l’adénosine à différents niveaux :

La caféine augmente le taux de filtration glomérulaire par inhibition de la vasoconstriction

de l’artériole afférente lors du réflexe tubulo-glomérulaire
 La caféine inhibe la réabsorption sodée par le tube contourné proximal, ce qui augmente
la diurèse.

La caféine inhibe le réflexe hépatorénal via les terminaisons nerveuses des espaces de
Mall.

4. Caractéristiques physicochimique :

La caféine est une base faible et peut réagir avec des acides pour donner des sels, et se
présente sous forme de poudre cristalline, blanche, inodore et de saveur amère [36]. Voici
quelques-unes des caractéristiques physicochimiques de la caféine :

 Point de fusion : 238 °C

 Point d'ébullition : 178 °C

 Solubilité : soluble dans l'eau (à raison de 2 g par 100 mL d'eau à température

ambiante), dans l'éthanol, l'acétone, le chloroforme et d'autres solvants organiques

 pH : la caféine est un composé neutre avec un pKa de 0,9

 Masse moléculaire : 194,19 g/mol

 Elle absorbe dans l'UV avec un maximum d’absorption à la longueur d'onde de 274
nm.

5. Caractéristique pharmacocinétique :

Les caractéristiques pharmacocinétiques de la caféine sont importantes à comprendre pour

comprendre comment elle est absorbée, distribuée, métabolisée et éliminée par le corps :

Absorption : La caféine est rapidement absorbée après ingestion par voie orale. Elle est
généralement absorbée dans l'intestin grêle et atteint rapidement la circulation sanguine.

Distribution : La caféine est distribuée dans tout le corps, y compris le cerveau, les
muscles, les organes internes et les tissus adipeux. Elle traverse facilement la barrière
hémato-encéphalique, ce qui lui permet d'agir rapidement sur le système nerveux central.
Métabolisme : La caféine est principalement métabolisée par le foie, où elle est
transformée en plusieurs métabolites, notamment la para xanthine, la théophylline et
l'acide urique. Ces métabolites sont éliminés par les reins sous forme d’urine.

Élimination : La caféine a une demi-vie de 3 à 5 heures chez les adultes en bonne santé.
Elle est principalement éliminée par les reins sous forme de métabolites urinaires. Le taux
d'élimination peut être influencé par des facteurs tels que l'âge, le sexe, le poids corporel,
la consommation d'alcool et l'utilisation de certains médicaments.

6. Indications thérapeutiques :

La caféine pharmaceutique est utilisée pour traiter plusieurs conditions médicales, comme
la migraine, l'apnée du sommeil chez les nouveau-nés prématurés, l'asthme, l'hypotension
orthostatique, et pour stimuler le système nerveux central et améliorer la performance
sportive [1]. Pour traiter la migraine, la caféine est souvent combinée avec d'autres
médicaments tels que l'aspirine et l'acétaminophène afin d'améliorer leur absorption et leur
efficacité [2]. En outre, la caféine peut être utilisée comme adjuvant dans le traitement de
l'asthme, en aidant à ouvrir les voies respiratoires et à améliorer la fonction pulmonaire [1].
La caféine peut également être utilisée pour stimuler le système nerveux central et pour
améliorer les performances sportives

IV. Généralités sur les impuretés :

1. Définition :

Les impuretés ou des métabolites peuvent se former pendant la synthèse du médicament ou

pendant son stockage. Ces substances peuvent avoir des effets indésirables sur la sécurité
et l'efficacité du médicament et doivent donc être évaluées et quantifiées pour s'assurer
qu'elles sont présentes en dessous des limites acceptables.

2. Origines :

Les impuretés dans les produits pharmaceutiques peuvent provenir de différentes sources,
telles que :
  Les matières premières utilisées pour fabriquer le médicament :
Les matières premières utilisées pour la fabrication de médicaments peuvent
contenir des impuretés en raison de leur origine naturelle, de leur processus de
production ou de leur stockage.
 Les réactifs chimiques utilisés dans la synthèse du médicament : Les réactifs
chimiques utilisés dans la synthèse des médicaments peuvent également contenir
des impuretés, qui peuvent se retrouver dans le produit final.

 Les processus de fabrication : Les processus de fabrication tels que la

purification, la cristallisation ou la distillation peuvent entraîner la formation
d'impuretés dans le produit final.

 Les conditions de stockage : Les conditions de stockage peuvent également

entraîner la formation d'impuretés dans le produit final. Par exemple, l'exposition à
la lumière, à la chaleur ou à l'humidité peut entraîner la dégradation du médicament
et la formation de produits de dégradation indésirables.

3. Type des impuretés :

a) Les impuretés organiques : ce sont des impuretés qui sont des composés
organiques, tels que les solvants résiduels, les produits de dégradation, les
impuretés de synthè[Link] substances apparentées sont des impuretés
organiques. Elles peuvent provenir d'intermédiaires également appelés
sous-produits de synthèses ou de produits de dégradation. Ces substances
une fois identifiées, possèdent un seuil d'acceptation Lorsqu’elles sont
présentes dans un produit pharmaceutique.
 Le 4 – aminophénol :

Le 4-aminophénol est un composé chimique qui est structurellement lié au paracétamol,

également connu sous le nom d'acétaminophène. En fait, le paracétamol est produit à
partir du 4-aminophénol par un processus de synthèse chimique.
Le 4-aminophénol est une substance cristalline blanche qui appartient à une classe de
composés appelés phénols. Il est utilisé comme ingrédient dans la fabrication de divers
produits, notamment des colorants, des pigments, des produits pharmaceutiques et des
produits chimiques pour la photographie.
Cependant, le 4-aminophénol peut également être toxique s'il est ingéré en grande
quantité, car il peut endommager le foie et les reins.

En somme, le 4-aminophénol est une substance apparentée qui joue un rôle important
dans la synthèse du paracétamol et d'autres médicaments, mais qui peut également être
toxique en grande quantité. Les précautions doivent donc être prises pour éviter une
exposition excessive à cette substance 'United States Pharmacopée (USP), une autorité
réglementaire américaine qui établit des normes de qualité pour les substances
médicamenteuses utilisées aux États-Unis, définit des limites pour la quantité de 4-
aminophénol autorisée en tant qu'impureté dans le paracétamol. La limite maximale de 4-
aminophénol comme impureté dans le paracétamol est de 0,15 %

Cela signifie que la quantité de 4-aminophénol présent dans le paracétamol doit être
inférieure à 0,15 % en poids par rapport à la quantité totale de paracétamol. Cette limite est
établie pour garantir que le paracétamol est sûr et efficace lorsqu'il est utilisé
conformément aux instructions. En plus de la norme de pureté, l'USP définit également des
limites pour les impuretés potentiellement dangereuses qui peuvent être présentes dans le
4-aminophénol pur, telles que la 4-chloroaniline et la N-acétyl-p-benzoquinone imine
(NAPQI). Les limites d'impuretés sont établies pour garantir la sécurité et l'efficacité du
médicament.

Les fabricants de médicaments doivent se conformer aux normes de l'USP pour être
approuvés par (FDA) des États-Unis pour la commercialisation de leurs produits aux États-
Unis. Les professionnels de la santé et les patients peuvent également consulter les normes
de l'USP pour s'assurer que les médicaments qu'ils utilisent répondent aux normes de
qualité requises.

a) Les isomères :
Les impuretés organiques dans le paracétamol peuvent inclure des
isomères, qui sont des molécules ayant la même formule chimique mais une
structure différente. Les isomères peuvent avoir des propriétés physiques et
chimiques différentes, et peuvent donc avoir des effets différents sur la
santé.
b) Les impuretés inorganiques : ce sont des impuretés qui sont des composés
inorganiques, tels que les sels, les métaux lourds, les oxydes, les carbonates,
etc.
 c) Les impuretés microbiologiques : ce sont des impuretés qui sont des
micro-organismes, tels que les bactéries, les virus, les champignons, etc.

4. Processus d’analyses des impuretés :

Le processus d'analyse des substances apparentées commence par l'identification

des substances qui peuvent être présentes dans le médicament. Cela peut être
réalisé en utilisant des techniques analytiques telles que la chromatographie en
phase liquide (HPLC) ou la chromatographie en phase gazeuse (GC), combinées à
la spectrométrie de masse. Les échantillons du médicament sont traités avec des
réactifs chimiques spécifiques pour révéler les impuretés et les métabolites qui
peuvent être présents.

Une fois que les substances apparentées ont été identifiées, leur quantité doit être
déterminée. Cela peut être réalisé en utilisant des techniques de quantification telles
que la HPLC avec détection UV ou la spectrométrie de masse. Les résultats de ces
analyses sont ensuite comparés aux limites acceptables établies par les autorités
réglementaires pour s'assurer que les substances apparentées sont présentes en
dessous des niveaux de sécurité et d'efficacité requis.

5. Les effets des substances apparentés :

Les effets des impuretés dans les médicaments peuvent varier en fonction de la
nature de l'impureté et de la quantité présente. Les impuretés peuvent affecter la
qualité, la stabilité et la sécurité des médicaments. Les effets peuvent inclure

 Réduction de l'efficacité du médicament :

Les impuretés peuvent réduire l'efficacité du médicament en altérant la
structure chimique ou en diminuant la concentration de l'ingrédient actif.
 Effets toxiques :
Certaines impuretés peuvent être toxiques et avoir des effets nocifs sur la
santé des patients, tels que des réactions allergiques, des irritations, des
nausées, des vomissements et des douleurs abdominales.
 Altération de la stabilité :
 Les impuretés peuvent altérer la stabilité des médicaments, ce qui peut
réduire leur durée de conservation ou leur efficacité.
 Risque pour la santé publique :
Les impuretés dans les médicaments peuvent présenter un risque pour la
santé publique s'ils sont présents en quantités suffisamment importantes
pour provoquer des effets toxiques sur un grand nombre de personnes.

V. Validation d’une méthode analytique :

1. Définition :

Selon la norme ICH (the International Conférence on Harmonisation), la validation d’une

méthode est définie comme étant l’ensemble des opérations nécessaires pour prouver que
le protocole est suffisamment exacte et fiable pour avoir confiance dans les résultats
fournis et ceci pour un usage déterminé.

2. Objectif :

L’objectif de la validation d’une méthode analytique est de démontrer que chaque mesure
réalisée ultérieurement en routine sera suffisamment proche de la valeur varie ou dans les
limites acceptables selon le besoin de l’analyse. Les critères de la validation sont fixes en
fonction de la finalité de la procédure analytique.

3. Intérêt de la validation analytique :

La validation analytique est une étape cruciale dans la mise en place d'une
méthode analytique pour mesurer une substance dans un échantillon. Voici les
principaux intérêts de la validation analytique :

 Assurer la qualité des résultats : La validation analytique permet de s'assurer que

la méthode analytique est fiable, précise et cohérente, ce qui garantit la qualité des
résultats obtenus. Les résultats de la méthode analytique validée peuvent être
utilisés en toute confiance pour prendre des décisions critiques, telles que la
conformité à des normes réglementaires ou la prise de décisions sur le traitement
médical.

 Garantir la sécurité des patients: La validation analytique est particulièrement

importante dans le domaine de la santé, où les résultats des analyses peuvent avoir
 un impact direct sur la santé et la sécurité des patients. La validation analytique
permet de s'assurer que les tests de diagnostic et les analyses de laboratoire sont
fiables et précis, ce qui garantit la sécurité des patients.

 Économiser du temps et de l'argent : La validation analytique peut permettre de

réduire les coûts et les délais associés à la mise en place de la méthode analytique.
En identifiant les limites de la méthode analytique dès le début, les coûts et le
temps nécessaires pour effectuer des tests supplémentaires et ajuster la méthode
peuvent être réduits.

4. Les pré-requis à la validation

 La définition claire des paramètres analytiques : Les paramètres analytiques tels

que la linéarité, la limite de détection, la limite de quantification, la précision et
l'exactitude doivent être clairement définis et compris avant de commencer la
validation.

 La sélection de l'équipement et des réactifs : L'équipement et les réactifs utilisés

pour la méthode analytique doivent être sélectionnés et qualifiés avant la validation. Il
est important de s'assurer que l'équipement et les réactifs sont conformes aux normes
appropriées et sont compatibles avec la méthode analytique.

 La réalisation de l'étude de stabilité : Une étude de stabilité doit être réalisée pour
s'assurer que les échantillons restent stables pendant la période de stockage et les
conditions d'analyse.

 La réalisation d'une analyse préliminaire : Avant la validation, une analyse

préliminaire doit être effectuée pour déterminer les conditions optimales pour l'analyse,
telles que les réglages de l'instrumentation, les paramètres du système et les conditions
d'analyse.

5. Critères de la validation d’une méthode de dosage :

La validation d'une méthode d'analyse implique l'évaluation de plusieurs critères
pour s'assurer que la méthode est adaptée à son utilisation prévue. Les principaux
critères de validation d'une méthode d'analyse sont les suivants :
 Spécificité : L’étude de la spécificité consiste à démontrer l’absence
d’interférences entre les excipients et le principe actif lors de l’absorption. Elle est
réalisée sur le placebo, le standard et la forme pharmaceutique reconstituée suivant
le même protocole

 Linéarité Il s’agit de la capacité, à l’intérieur d’un certain intervalle, d’obtenir des

résultats directement proportionnels à la concentration en traceur à examiner dans
l’échantillon. L’intervalle de concentrations à valider est couvert par une série de 5
concentrations au minimum régulièrement espacées contenant le 100% .

 Exactitude : Elle exprime l’étroitesse de l’accord entre la valeur qui est acceptée
soit comme une valeur conventionnellement vraie, soit comme une valeur de
référence acceptée, et la valeur trouvée (valeur moyenne) obtenue en appliquant la
procédure d’analyse sur un certain nombre de fois.

 Fidélité :

La fidélité de la procédure exprime le degré de dispersion entre une série provenant de

multiples prises d’un même échantillon homogène dans des conditions prescrites : les
essais effectués sur des produits identiques dans des circonstances présumées
identiques, ne conduisent généralement pas à des résultats identiques. Cela est dû à
l’existence d’erreurs aléatoires, inhérentes à toute méthode d’essai. Les facteurs
contribuant à la variabilité d’une méthode analytique comprennent :

- L’opérateur
- L’équipement utilisé
- L’étalonnage de l’équipement
- L’environnement (température, humidité, pollution de l’air,…)
- Les réactifs
 La répétabilité : se rapporte à des essais de la même grandeur, réalisés dans des
conditions aussi stables que possible, dans de courts intervalles de temps, dans un
même laboratoire, par le même opérateur employant le même équipement.

 Limite de quantification et de détection: La limite de détection (LD) est la plus

petite quantité de la substance ciblée qui peut être détectée, mais pas exactement
quantifiée dans un échantillon. La limite de quantification (LQ) est la plus petite
 quantité de la substance ciblée dans un échantillon qui peut être déterminée dans
des conditions expérimentales prescrites avec une exactitude bien définie.

En résumé, les critères de validation d'une méthode d'analyse incluent la spécificité, la

linéarité, l'exactitude, , la limite de détection, la limite de quantification et la. L'évaluation
de ces critères permet de garantir que la méthode est adaptée à son utilisation prévue et
qu'elle fournit des résultats fiables et reproductibles.

VI. Chromatographie liquide à haute performance (HPLC) :

1. Définition :
La chromatographie liquide à haute performance (HPLC) est une technique de séparation
de molécules largement utilisée en chimie analytique. Elle permet de séparer, d'identifier et
de quantifier les différents composants d'un mélange en utilisant une phase mobile liquide
qui transporte l'échantillon à travers une colonne remplie d'une phase stationnaire solide.

2. Principe :

Le principe de la HPLC est basé sur la différence de comportement des molécules dans la
phase stationnaire en fonction de leurs propriétés physico-chimiques. Les molécules sont
séparées en fonction de leur polarité, de leur taille, de leur forme et de leur charge, en
fonction de la nature de la phase stationnaire et de la phase mobile. La colonne de
chromatographie est souvent maintenue à une température constante et sous pression pour
obtenir une séparation rapide et efficace des différents composants de l'échantillon.

3. Appareillage :

En chromatographie liquide à haute performance (HPLC), il existe plusieurs équipements

et composants nécessaires pour effectuer une analyse. Voici les équipements couramment
utilisés en HPLC:

La pompe : C'est l'un des composants les plus importants d'un système HPLC, car elle
fournit la pression nécessaire pour déplacer la phase mobile à travers la colonne de
chromatographie. La pompe doit fournir une pression constante et précise pour une
séparation optimale.
La colonne : C'est le composant principal de la chromatographie liquide et elle contient la
phase stationnaire. Les colonnes sont disponibles dans une variété de tailles et de
matériaux et sont choisies en fonction des propriétés de l'échantillon.

Le détecteur : Il s'agit d'un dispositif qui détecte les différents composants de l'échantillon
qui sortent de la colonne. Les détecteurs les plus couramment utilisés en HPLC sont les
détecteurs UV-Vis, les détecteurs à fluorescence, les détecteurs de conductivité et les
détecteurs de masse.

Le système d'injection : Il s'agit du dispositif utilisé pour injecter l'échantillon dans la

colonne de chromatographie. Les systèmes d'injection automatiques sont couramment
utilisés en HPLC pour garantir une injection précise et reproductible.

Le four : Il s'agit d'un élément optionnel qui peut être utilisé pour contrôler la température
de la colonne de chromatographie et de la phase mobile. Les fours peuvent être utilisés
pour optimiser les conditions de séparation des composants de l'échantillon.
Le logiciel de contrôle et d'acquisition de données : Il s'agit d'un logiciel qui est utilisé
pour contrôler le système HPLC et acquérir les données de sortie du détecteur.

4. Paramètres fondamentales de la chromatographie :

 Phase mobile :

En chromatographie liquide à haute performance (HPLC), la phase mobile est le solvant

ou le mélange de solvants utilisé pour transporter l'échantillon à travers la colonne de
chromatographie. La phase mobile est une composante essentielle de la technique HPLC
car elle joue un rôle important dans la séparation des composés dans un échantillon.

La composition de la phase mobile peut varier en fonction des objectifs de l'analyse et de

la nature des échantillons. Elle peut être choisie pour obtenir une meilleure séparation
entre les composants de l'échantillon ou pour minimiser les interactions avec la phase
stationnaire. Les solvants couramment utilisés en chromatographie liquide comprennent
l'eau, les acides organiques, les sels, les alcools, les cétones, les esters, les éthers et les
acétonitriles.
Il est important de noter que la composition de la phase mobile peut affecter la sensibilité
et la spécificité de la méthode analytique, ainsi que la résolution des pics de la
chromatographie. Par conséquent, la composition de la phase mobile doit être
soigneusement optimisée pour obtenir des résultats précis et fiables.

 Phase stationnaire

En chromatographie liquide à haute performance (HPLC), la phase stationnaire est la

partie fixe de la colonne de chromatographie qui est conçue pour séparer les différents
composants de l'échantillon. La phase stationnaire peut être une matrice poreuse ou non
poreuse, contenant une substance chimique qui a une affinité spécifique pour certains
composants de l'échantillon.

La phase stationnaire peut être constituée d'une variété de matériaux, notamment des
résines, des gels, des silices, des polymères, des céramiques et des matériaux composites.
La surface de la phase stationnaire peut être modifiée chimiquement pour améliorer la
sélectivité de la séparation, en fonction des propriétés chimiques des composants de
l'échantillon. Par exemple, la phase stationnaire peut être modifiée pour avoir une charge
positive ou négative afin d'interagir spécifiquement avec des composants chargés opposé
ment.

Lorsqu'un échantillon est injecté dans la colonne de chromatographie, les différents

composants de l'échantillon interagissent différemment avec la phase stationnaire en
fonction de leur polarité, de leur taille, de leur charge, de leur affinité et de leur solubilité
dans la phase mobile. Les composants qui ont une affinité plus forte pour la phase
stationnaire prendront plus de temps pour traverser la colonne de chromatographie, tandis
que les composants qui ont une affinité plus faible pour la phase stationnaire traverseront
la colonne plus rapidement.

Temps mort : C'est le temps que prend la phase mobile pour traverser la colonne sans être
retenu par la phase stationnaire. Le temps mort est donc le temps que met un composant
non retenu à sortir de la colonne. Il est important de minimiser le temps mort pour obtenir
une séparation rapide et précise.
Temps de rétention : C'est le temps que prend un composant pour sortir de la colonne
après avoir été injecté. Le temps de rétention dépend de la nature du composant, des
propriétés de la phase stationnaire et de la composition de la phase mobile. Le temps de
rétention est souvent utilisé pour identifier un composant spécifique dans un mélange.

Facteur de capacité : C'est le rapport entre le temps de rétention d'un composant et le

temps mort de la colonne. Le facteur de capacité est une mesure de la rétention relative
d'un composant et dépend des propriétés de la phase stationnaire et de la composition de la
phase mobile. Il peut être utilisé pour optimiser la séparation en ajustant la composition de
la phase mobile.

Facteur de sélectivité : C'est le rapport entre les facteurs de capacité de deux composants
différents. Le facteur de sélectivité est une mesure de la séparation relative entre deux
composants et dépend également des propriétés de la phase stationnaire et de la
composition de la phase mobile.

Résolution : C'est la capacité de la colonne à séparer deux composants proches. La

résolution est influencée par plusieurs facteurs, tels que la taille des particules de la phase
stationnaire, la composition de la phase mobile, la température, la pression et la longueur
de la colonne. Une résolution élevée permet de distinguer les composants avec plus de
précision.

Efficacité : C'est la capacité de la colonne à séparer les composants avec une bonne
résolution et avec une perte minimale de pic. L'efficacité dépend de la taille des particules
de la phase stationnaire et de la longueur de la colonne. Une efficacité élevée se traduit par
une distribution de pics étroite et une bonne séparation des composants.

Nombre de plateaux : C'est une mesure de l'efficacité de la colonne et du nombre

d'équilibres entre les composants de l'échantillon et la phase stationnaire. Le nombre de
plateaux est influencé par plusieurs facteurs, tels que la taille des particules de la phase
stationnaire, la composition de la phase mobile et la longueur de la colonne. Un grand
nombre de plateaux se traduit par une meilleure séparation des composants.