FACULTY OF NATURE AND LIFE SCIENCES.
ORAN 1
TP n 1:Microbiologie de
l'environnement
Isolement des microorganismes du sol
Année académique: 2021 / 2022
Section : 01 / Groupe : 07 / Sg: 06
SPECIALTY : MICROBIOLOGY LICENSE
Présenté par:
Mahieddine fatima zohra
Mahi ahmed mouad
Louni malika
Plan de travail
Isolement des microorganismes qui se trouvent dans le sol 02 sable
(moisissures, actinomycètes, bactéries, levures…) par la méthode des
dilutions successives.
Ensemencement dans des boîtes de Petri contenant 3 milieu different :
1. GN (Gélose nutritive)
2. CZ ( Milieu de Czapek)
3. WE (Milieu water yeast extract agar )
Observation des résultats après incubation
Dénombrement des colonies et calculer
Introduction
La microbiologie des sols est la science dont l’objet est l’étude de l'édaphon
microscopique, c'est-à-dire des microorganismes unicellulaires doués de fonction
vitale, de types eucaryotes dont les cellules possèdent un vrai noyau et de type
procaryote sans noyau veritable
But
Isoler et dénombrer des microorganismes qui se trouvent dans un échantillon de
sable ( sol 2 ) par la méthode des dilutions tout en maintenant le plan de travail
aseptique.
Matériel
Bec Bunsen Boite de petri Tube a essai
Pipette Pasteur Point de micropipette Spatule
Pipette magnétique Balance Vortex
Sol 02 sable ( 01 g ) Milieu de Czapek Gélose nutritive
Milieu water yeast extract agar
Méthode
1 gramme de sable( sol 2 ) séché ( 5 min , 110 C° pour enlève la humidité ) et
tamisé après l'introduit dans un tube contenant 9 mL d’eau distillée stérile .
L'échantillon est homogénéisé par agitation au vortex pendant 30 s .
Prélever 1 ml de solution mère à l’aide d’une pipette magnétique
et déposer dans un tube à essai contenant 9 ml d’eau distillée stérile ou eau
physiologique
Agiter pendant au moins une minute.
Répéter les étapes 3 et 4 pour les quatre autres dilutions (10-2, 10-3, 10-4 ,10 -5 ).
En prend la dilution 10-4 pipeter 0,1 ml à l’aide d’une pipette pasteur
et deposer 3 gouttes dans chacune des 3 boites de Petri contenant les milieux
suivants :
o GN (Gélose nutritive): gélose ordinaire est un milieu d'isolement non
sélectif qui permet de tapoce un nombre de microorganism qui ne sont
pas exigeant .
o CZ ( Milieu de Czapek): milieu semi synthétique et le milieu de référence
pour la mise en culture des moisissures
o WE (Milieu water yeast extract agar ) : utilisé pour isolement des actinomycète .
étale le prélèvement (0,1ml) avec un râteau .
Incuber les boites de Petri solen leur milieux :
o GN (Gélose nutritive): 24h _ 72h / 30C°
o CZ ( Milieu de Czapek): 1 semaine / 20C° _ 25C°
o WE (Milieu water yeast extract agar ) : 3 semaine / 20C° _ 25C°
Observer les resultates
Résultats
Après incubation , pour une même dilution, on refait plusieurs essais, pour avoir un
nombre moyen et augmenter la précision du dénombrement.
Parmi les boites comptables on ne considèrera que la boite qui a donné un nombre
de colonies compris entre 30 et 300 colonies.
Si le nombre est inférieur à 30, il n’est pas statistiquement significatif.
Si le nombre est supérieur à 300, on risque de sous-estimer le nombre de bactéries
du fait qu’il peut y avoir une compétition entre ce grand nombre de bactéries vis à
vis des éléments nutritifs disponibles et vis à vis de l’espace et par la suite une
inhibition d’une bonne proportion de cellules au niveau de la boite
Une colonie représente un nombre de ufc .
Le calcul de la concentration des microorganismes du sol se fait selon la formule
suivante :
N = n x Fd / v
N : le nombre de UFC .
n : le nombre des colonies compté sur la boite .
Fd : facteur de dilution 10-4.
V : volume ensemencé 0,1ml .
GN (Gélose nutritive)
0,1 ml --------- colonie
104 ml --------- N
