Chapitre III

III.1. Synthèse et caractérisation spectroscopique des bases de Schiff

III.1.1. Synthèse de ligand et leurs complexes de coordination
Avant de procéder à la synthèse des composés cibles, il est nécessaire de disposer des réactifs
et solvants suivants :
III.1.1.1. Produits et solvants
A. Les réactifs
 4,4’-diaminophényl sulfide (C12H12N2S)
 2-hydroxy-1-naphtaldéhyde (OHC10H6CHO)
 Le 3,3',4,4'-tétra [2-hydroxy-1-naphtaldéhyde imino] diphényle (C34H24N2O2S)
B. Les sels
 Chlorure de Cuivre bi-Hydraté (CuCl2, 2H2O)
 Chlorure de Nickel hexa-Hydraté (NiCl2,6H2O)
 Chlorure de Coblet hexa-Hydraté (CoCl2,6H2O)
C. Les solvants
 Ethanol (C2H5OH)
 Chloroforme (CHCl3)
III.3.1. Protocol Expérimental
Dans un ballon de 250 ml, on dissout (0,3006g) de (4,4’-diaminodiphényl sulfide) dans 10
ml d’éthanol (CH3-CH2-OH) à reflux et sous agitation pendent 10 min, après solubilité totale,
on ajoute goutte à goutte (0,4750g) de (2- hydroxy-1-naphtaldéhyde) dissoutes dans 15 ml
d’éthanol. Le mélange réactionnel est laissé sous agitation thermique et à reflux pendant trois
heures (3h). La pureté des bases de Schiff formées a été contrôlée par chromatographie sur
couche mince (CCM), l’éluant étant le dichlorométhane (CH2Cl2).
Le produit obtenu sous forme d’un précipité solide de couleur jaune sont récupérés par
filtration, lavés deux fois avec l’éthanol chaud, séchés sous vide. On récupère le produit avec
un rendement de 80%
La procédure expérimentale appliquée pour la synthèse du ligand a été reproduit de
manière similaire comme décrit dans la littérature [1]. Le protocole de synthèse du ligand L
est illustré dans le Schéma ci-dessous

Schéma Synthèse de Ligand base de Schiff(C35H24N2O2S).

 Chapitre III

III.3.2. Mécanisme Réactionnel

Schéma Mécanisme réactionnel pour la synthèse du Ligand L (C35H24N2O2S)

 Chapitre III

III.3. 3. Caractérisations spectroscopiques

Parmi les caractérisations utilisées, la spectroscopie infrarouge (IR), UV-visible.
C34H24N2O2S

Figure Structures des composés.

II.3.4. Infrarouge (IR)
Le tableau suivant résume les bandes caractéristiques d’absorption des spectres infrarouge
des composés
Tableau Valeurs des bandes d’absorption en cm-1 des spectres infrarouges.
Composé υ (OH) υ (C=N) υ (C=C) υ (C-S-C) υ (C-H
aliph)
Ligand 3440 1629 1483 817 2918

Figure Spectre d’absorption infrarouge de ligand C34H24N2O2S.

 Chapitre III

III.1.3. Interprétation
Les spectres d’absorption infrarouge de composé synthétisé L ont été
enregistré dans le domaine de (4000 à 500 cm-1). L’apparition des bandes
d’absorption caractéristiques du groupement imine N=C se manifestent à 1622-
1626 cm-1 [5,6] on note la présence d’une bande d’absorption de 3440 jusqu’à
3450 cm-1 caractéristique du groupement OH phénolique et la disparition de la
bande d’absorption de la fonction (N-H) située entre 3200 et 3500 cm-1. Les
bandes de vibrations de valence des liaisons (C-H) aromatiques, (C-H) aliphatiques
et (C-N) sont observées respectivement à 3010-3045 cm-1, 2920-2924 cm-1 et à
1248-1310 cm-1. Le pic de la liaison (C-S-C) apparait à 830 cm-1 [7]
[5] R. Ramesh, S. Maheswaran, J. Inorg. Biochem. 96 (4) (2003) 457.
[6] M. Hanif, Z.H. Chohan, Spectrochim. Acta Part A: Mol. and Biomol Spectros.
104 (2013) 468.
[7] P. Tyagi, S. Chandra, B.S. Saraswat, Spectroc. Acta. A: Mol and Biomol
Spectros. 134 (2015) 200.
III. Spectroscopie UV-visible

Figure Spectre d’absorption UV-Visible de Ligand L.

 Le spectre du ligand dans le DMF est caractérisé par une bande d’absorption
maximale située à 322,73 nm correspond à la transition π-π* et une autre bande
d’absorption bien défini situées à 399,35 nm pour la transition n-π*.
IV. Synthèse des complexes de base de Schiff (Complexation)
IV.2. Protocol Expérimental
 Chapitre III

La synthèse des complexes consiste à ajouter goutte à goutte une solution d'une mmole
de sel de métal hydraté sous forme de chlorures (MCl2.nH2O) avec (M = Cu et Co et Ni)
dissoute dans 10 ml d'éthanol à une solution d'une mmole (0,1g) de ligand L (le 3,3',4,4'-tétra
[2-hydroxy-1-naphtaldéhyde imino] diphényle) (C34H12N2O2S) dissout dans 20 ml de
chloroforme (CHCl3). Le mélange réactionnel est laissé sous agitation magnétique et à reflux
pendant huit heures. Après refroidissement, le précipité formé est récupéré par filtration, lavé
plusieurs fois par l'éthanol chaud, séché sous vide. Le complexe de Cu(II) est de couleur
marron noir avec un rendement de 81,06 % tandis que le complexe de Co(II) est rouge brique
avec un rendement de 39,88%, le complexe de Ni(II) est jaune orangé avec un rendement de
56,38% .
Les résultats obtenir résumer dans ce tableau suivant :
Tableau
Les Complexes m exp Rendement La couleur
Ni (II)L 0,1272 g 56,38 % Jaune orangé
Co (II)L 0,1347 g 39,88 % Rouge brique
Cu (II)L 0,1832 g 81,06 % Maron noir

 Le Schéma réactionnel de la synthèse des complexes Cu (II)L, Ni (II)L et

Co (II)L est représenté ci-dessous

Schéma Protocole de synthèse des complexes Cu (II)L, Ni (II)L et Co (II)L.

Spectroscopie infrarouge
 Chapitre III

Figure Spectre d’absorption infrarouge de Complexe de Cuivre.

Figure Spectre d’absorption infrarouge de Complexe de Cobalt.

Figure Spectre d’absorption infrarouge de Complexe de Nickel.

 Chapitre III

IV.1. Discussion des résultats

Les spectres IR des complexes de Cu(II),de Co(II) et de Ni(II)
montrent un déplacement bathochrome de la bande d’absorption de
vibration du groupement phénolique située entre 3410-3590 cm-1 après
complexation [6,7],ce qui indique la coordination de ce groupe à l'ion
métallique sans déprotonation [8]. L'apparition d'une bande intense
située à (1600-1616) cm-1 assignée à la fonction imine (C=N) [9,10],
subit un déplacement hypsochrome dans le cas des complexes. Ceci
confirme la coordination des cations métalliques avec les sites donneurs
des ligands qui se fait à travers l’oxygène et l’azote des groupements
phénoliques et imine respectivement [11]. La bande (C=O) observée à
(1244- 1400) cm-1 subit un déplacement vers des valeurs positives pour
les complexes par rapport aux ligands. La coordination des ions
métalliques avec les sites donneurs des ligands est confirmée par
l'apparition des bandes d'absorption de faible intensité entre 400-760 cm-
1
attribuées aux fréquences de (M-N) et (M-O) respectivement. [12, 13,
14]

[6]. S. Djebbar-Sid, O. Benali-Baitich et J.P. Deloume. J. Mol. Struct.

569 (2001) 121.

[7].R.C. Felicio, G.A. Silva, L.F. Ceridorio, E.R. Dockal, Synth. React.
Inorg. Met. Org. Chem. 29(2) (1999) 171.

[8]. I.C. Santos, M. Vilas-Buas, M.F. M piieade, C. Freire, M.T. Duarte

et B. Castro, Polyhedron. 19 (2000) 655.

[9].F. Karipcin, H. IsmetUcan et I. Karatas, Trans. Met. Chem. 19 (2002)

813. M. Joseph, V. Suni, M.R.P. Kurup, M. Nethaji,

[10]. A. Kishore, S.G. Bhat, Polyhedron. 23 (2004) 3069.

[11]. M. El-Behery, H. El-Twigry, Spectrochim. Acta. Part A. 66 (2007)

28.

[12]. B. Murukan et K. Mohanan, Trans. Met. Chem. 31 (2006) 441.

 Chapitre III

[13]. A. Pui, C. Policar, J-P Mahy, Inorg. Chim. Acta. 360 (2007) 2139.

[14] U.L. Kala, S. Suma, M.R.P. Kurup, S. Krishnan, R.P. John,

Polyhedron. 26 (2007) 1427.

Les principales fréquences d’absorption infrarouge (IR) des

complexes selon leurs assignements sont illustrées dans le tableau ci-
dessous :
Tableau valeurs des bandes d’absorption en Cm-1 des spectres infrarouges.
(C=N) (C=O) (O-H) (M-N) (M-O)
Ni (II)L 1615 1545 3433 744 494
Co (II)L 1615 1483 3440 737 494
Cu (II)L 1615 1483 3419 502 732

III. Spectroscopie UV-visible

a. Spectre

Figure Spectre d’absorption UV-Visible de ligand avec ce complexe de

Cobalt dans DMF .
 Chapitre III

Figure Spectre d’absorption UV-Visible de ligand avec ce Complexe de

cuivre dans DMF .

Figure Spectre d’absorption UV-Visible de ligand avec ce Complexe de

Nickel dans DMF .

b. Interprétation

 Le spectre du Complexe de Cu (II)L dans le DMF est caractérisé par une bande
d’absorption maximale située à 420,8 nm correspond à la transition π-π* et une autre
bande d’absorption bien défini situées à 315 nm pour la transition n-π*.
 Le spectre du Complexe de Co (II)L dans le DMF est caractérisé par une bande
d’absorption maximale située à 410 nm correspond à la transition π-π* et une autre
bande d’absorption bien défini situées à 318 nm pour la transition n-π*.
 Chapitre III

 Le spectre du Complexe de Ni (II)L dans le DMF est caractérisé par une bande
d’absorption maximale située à 399,35nm correspond à la transition π-π* et une autre
bande d’absorption bien défini situées à 322,73 nm pour la transition n-π*.
Tableau Données spectrales (UV- Visible) pour les Complexes de Cu(II)L et Co(II)L et
Ni(II)L.

Spectre UV-vis de Cu(II) L

λ1=420,8 nm λ2=315 nm

Spectre UV-vis de Co(II) L

λ1=410nm λ2= 318 nm

Spectre UV-vis de Ni(II) L

λ1=399,35 nm λ2=322,73 n

II. 3. Les propriétés physico-chimiques

Les différents résultats obtenus avec ce ligand et sa série des complexes sont consignés dans
le tableau suivant
Tableau Propriétés Chimiques de ligand et sa série des complexes.
Formule Abréviation Morphologi Masse Point Solubilité Rf
général e moléculaire de
fusion
C34H12N2O2S Poudre 524,6366 224°C Chloroforme 0,8
Ligand L Jaune 1,4-dioxane
DMSO,chaud
DMF
Complexe C34H12N2O2SNi Poudre 583,3296 > DMSO 0,89
Ni(II)L Jaune orangé 260°C DMF
Complexe C34H12N2O2SCo Poudre 583,5696 > DMSO 0,21
Co(II)L Jaune 260°C DMF
orangé
Complexe C34H12N2O2SCu Poudre 588,1826 > DMSO 0,775
Cu(II)L Rouge 260°C DMF
brique

Activité Anti Bactérienne

L’évaluation de l’activité antibactérienne du ligand et leurs complexes est réalisée par la
méthode de diffusion en milieu gélosé
 Chapitre III

a. Préparation des solutions

La base de Schiff et leur complexes de coordination (Cu(II)L, Co(II)L , Ni(II)L )ont été
solubilisés dans le même solvant (DMSO) à une concentration finale de 9mg/ ml pour le
Ligand et 20 mg/ml pour les trois complexes.

Figure Préparation des solutions.

b. Préparation de milieu de culture
On a procédé à une stérilisation et une surfusion de milieu de gélose glucosée biliée au
cristal violet et au rouge neutre (VRBG) à l'aide d'autoclave pendant 15 min à 121°C, puis
on le verse dans des boites de Pétri à 4 mm de hauteur et on à laisse quelques minutes
jusqu'à la solidification.

Figure La préparation du milieu de culture VRBG

c. Préparation de la suspension bactérienne
A partir d'une culture pure des bactéries à tester sur un milieu d'isolement on a préparé
des souches bactériennes : deux souches à Gram + (Staphylococcus, Bacillus) et deux
souches Gram- (Escherichia Coli, Pseudomonas), après on a racle par une anse de platine,
quelques colonies sont bien isolées. Décharger l'anse dans 5 ml d'eau physiologique stérile
à 0.9 % (milieu d’enrichissement), et bien homogénéiser la suspension bactérienne.
Sachant que toutes les cultures microbiennes ont été ajustées à 0,5 standards Macfarlane,
qui sont visuellement comparables à une suspension microbienne.
d. L'ensemencement
 Chapitre III

Les inocula obtenus sont standardisés à 0.5 Macfarlane correspondant à 1-2 ×108
UFC/ml (0,08 - 0,1 mesurée à 630 nm). A l’aide d’écouvillon, un ensemencement a été
pratiqué sur une surface de milieu gélose glucosée biliée au cristal violet et au rouge
neutre (VBRG) coulé préalablement dans des boites de Pétri de 60° à chaque fois.

Figure L'ensemencement des suspensions bactériennes.

e. Test de diffusion de disque
Des disques de 6 mm de diamètre qui sont disposés sur la surface de la gélose à l'aide
d'une pince stérilisée et chargé par 2,5µl / 5µl / 10 µl / 20µl de chaque produit testé.

f. L'incubation
Les boites de Pétri sont incubées pendant 24 heures dans l’étuve à température
T=37°C

Figure L’incubation des boites pétri.

La lecture
Des résultats se fait par la mesure du diamètre des halos clairs autour des disques à
l’aide d’une règle en millimètre comme illustré à la Figure
 Chapitre III

Figure La méthode de diffusion à partir des disques

Tableau Listes des Matériels et leurs rôles.

Matériel Rôle
Milieu de culture (Muller Hinton) Pour cultiver les bactéries
Des Boites pétri Pour remplir le milieu de culture et cultive les bactéries
Des pinces Pour la fixation des disques
Des tubes à vis Pour la préparation des dilutions
Des disques neutres Utilisée pour absorber les produits et testé
Une étuve réglable Utilisée pour l’incubation des souches bactériennes
Un réfrigérateur Utilisée pour la conservation des produits et réactifs
Un pied de coulisse Pour la mesure de la zone d’inhibition
Autoclave Utilisée pour la stérilisation du matériel

Resultat

Evaluation de l’activité antibactérienne
Dans cette section, notre objectif principal est d'évaluer l'effet antibactérien de nos produits
synthétisés sur des micro-organismes pathogènes par la méthode de diffusion en milieu solide.
Nous avons évalué l'activité antibactérienne contre des bacéries Gram+ positives :
Staphylococcus (ATCC 25923), Bacillus cereus (ATCC 11778) et des bactéries
Gramnégatives : E.Coli (ATCC 25922), pseudomenas (ATCC 27853) analysés de manière
qualitative et quantitative en observant la présence ou l'absence des zones d'inhibition et en
mesurant le diamètre de ces zones. Ces évaluations ont été comparées à celles d’un
Céfotaxime, qui est utilisée comme antibiotique standard. Les résultats obtenus sont regroupés
dans les tableaux
 Chapitre III

Figure

Les résultats de l'activité antibactérienne (Tableau III.8) indiquent que les ligands base
de Schiff et leurs complexes de Nickel et de Cuivre sont inactif contre les bactéries Gram
positif et Gram négatif
 Chapitre III

Activité Anti Oxydant

Test de DPPH
Définition
Le DPPH (2,2-diphényl-1-picrylhydrazyle) est un radical libre couramment utilisé
comme sonde chimique pour évaluer l'activité antioxydante des composés. Lorsqu'il est réduit
par un antioxydant, le DPPH change de couleur de violet foncé à jaune pâle.
Brand-Williams W., Cuvelier M.E., Berset C. Use of a free radical method to evaluate
antioxidant activity. LWT - Food Science and Technology. 1995; 28(1):25-30. doi:
10.1016/S0023-6438(95)80008-5.

Figure Structure Chimique de radical libre DPPH.

Tableau Liste des produits et des matériels.
Matériels Produits
 Balance  DPPH
 Spatule  Méthanol
 Tubes à essaye avec leur support  Eau distille
 Ballon Bicol de 1000 ml  DMSO
 Micropipette de 250µl et 1000µl  Ligand (C34H24N2O2S)
 Vortex  Complexe de Ni (II)L
  Complexe de Co (II)L
  Complexe de Cu (II)L

Protocol Expérimental
Pour étudier l’activité anti-radicalaire des produits synthétisés, nous avons choisi la
méthode colorimétrique qui utilise le DPPH• comme un radical libre relativement stable selon
le protocole suivant décrit par M.S.Blois [40].
20
[40] M.S.Blois, J . Food .Nutrit.Res. 181 (1958) 1199

a. Préparation de la DPPH
Pour réaliser ce test, La solution de DPPH est préparée par solubilisation de 4 mg de
DPPH dans 100ml de méthanol puis agité 20min (son absorbance après doit être entre 7 et 9).
 Chapitre III

L’évaluation de la capacité antioxydante est réalisée comme suit : un volume de 1250 µl

de la solution de DPPH (0,004%) déjà préparé est ajouté à 50µl de chacune de différentes
concentrations de l’extrait ou le BHT comme standard. Le mélange réactionnel est agité sur
vortex, ensuite incubé à l’abri de la lumière et à température ambiante pendant 30min, puis
l’absorption est lue à 517 nm par un spectrophotomètre UV-visible. Le control contient
(1250µl DPPH 0,004% + 50µl eau distillé).
Le pourcentage d’inhibition (1%) du radical DPPH pour les extraits et le BHT ont été
calculé comme suit : Effet de piégeage de DPPH% :
DPPH% = (Abs contrôle- Abs échantillon) / Ab control *100
La concentration inhibition à 50% de DPPH (IC50) est définie étant la concentration du
substrat qui cause la dégradation de 50% de DPPH (c’est-à-dire les concentrations
d’échantillons nécessaire pour piéger 50% des radicaux libres). Elle a été calculée par
régression linéaire à partir des graphes des taux d’inhibition et elle est exprimée en µg/ml et
comparé avec celle de standard BHT.
b. Préparation des produits
La concentration choisie = 8.10-3M dissoute dans 1ml de DMSO, Les masses utilisées des
échantillons sont indiqués dans le tableau suivant :
Tableau Masses calculées des échantillons.
Les Composés La masse(g)
Ligand L 0,0217
Ni (II)L 0,0053
Co (II)L 0,0053
Cu (II)L 0,01139

On prépare 7 dilutions pour chaque produit (1, 1/2, 1/4, 1/16, 1/32,1/64 et 1/128)
(la quantité des produits doit être suffisante pour 4 essais).

Figure Test de DPPH.

c. Procédure du remplissage de micro plaque
 Chapitre III

160 µl (DPPH) + 40 µl (produit) puis lecture à 517 nm.[6].

[6] Blois M.S.,. Antioxidantdeterminations by the use of a stable Free Radical. Nature, 4617
(181): 1119-1200. (1958)
Résultants

Activité de piégeage du radical libre (DPPH)
Le DPPH est généralement le substrat le plus utilisé pour une évaluation rapide et
directe de l’activité antioxydante en raison de sa stabilité en forme radicale libre et la
simplicité de l’analyse [2]

[2] I. A. El-Haci et F. A. Bekkara, Estimation du pouvoir antioxydant des differents

extraits organiques d’ecballium elaterium (l.), 2016.

MOYENNE
70
60 f(x) = 40.9960575139147 x − 60.2904684601115
50 R² = 0.964957386722376
40
MOYENNE
I%

30
Linear (MOYENNE)
20
10
0
1.5 1.7 1.9 2.1 2.3 2.5 2.7 2.9
Concentration mg/ml

MOYENNE
80
70 f(x) = 165.44237012987 x − 35.5384199134199
60 R² = 0.92857466251874
50
40 MOYENNE
I%

30 Linear (MOYENNE)
20
10
0
0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7
Concentration mg/ml
 Chapitre III

MOYENNE
120
100 f(x) = 218.323863636363 x − 39.7253787878786
R² = 0.940848992972613
80
60 MOYENNE
I%

Linear (MOYENNE)
40
20
0
0.3 0.4 0.5 0.6 0.7
Concentration mg/ml

MOYENNE
90
80
70 f(x) = 47.4025974025975 x + 3.96599927849917
60 R² = 0.964978630600437
50 MOYENNE
40
I%

Linear (MOYENNE)
30
20
10
0
0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5
Concentration mg/mL

Figure Pourcentage d’inhibition des composés en fonction de la concentration des composés

synthétisés.
 Chapitre III

Le pourcentage d'inhibition correspond à une consommation de 50 % du radical DPPH est

estimé afin de déterminer la puissance significative de chaque composé. A cet effet des
produits testés ont montré un important résultat comparé au standard BHT, dont le meilleur
est Complexe de Co (II). (Figure )

Figure Concentrations responsables à 50% d’inhibition du DPPH.

Le tableau présente les valeurs calculées de IC50 (concentration nécessaire pour que le
produit fait l’inhibition de 50% des radicaux libres).
Tableau les valeurs calculées de IC50 pour le test DPPH
Les produits IC50µg /ml
Ligand L 2,7038
Complexe de Ni 0,5168
Complexe de Co 0,9647
Complexe de Cu 0,4015
BHT 0,05
 Chapitre III

IV. Test de Blanchement de β-Carotène

Le bêta-carotène est un pigment naturel appartenant à la famille des caroténoïdes. Il est
largement présent dans de nombreux fruits et légumes colorés, tels que les carottes, les
épinards, les patates douces et les poivrons rouges. Le bêta-carotène est également
responsable de la couleur orange caractéristique des carottes.
Le bêta-carotène est considéré comme un précurseur de la vitamine A dans l'organisme.
Une fois ingéré, il est converti en vitamine A, qui joue un rôle essentiel dans de nombreuses
fonctions biologiques, notamment la vision, la croissance, le développement et la santé
immunitaire . [ ]
Palozza P., Serini S., Torsello A., et al. Beta-carotene regulates NF-kappaB DNA-binding
activity by a redox mechanism in human leukemia and colon adenocarcinoma cells. J Nutr.
2003;133(12):3812-20. doi: 10.1093/jn/133.12.3812.

Figure Structure Chimique de B-Carotène.

Tableau Liste des matériels et des produits.
Matériels Produits
 Balance  B-carotène
 Spatule  Chloroforme
 Tubes à essaye avec leur support  Eau distille
 Ballon Bicol de 1000 ml  DMSO
 Micropipette de 250µl et 1000µl  Ligand (C34H12N2O2S )
 Vortex  Complexe de Co (II)L

Protocol Expérimental
a. Préparation de B-Carotène
Selon la procédure décrite par une émulsion a été préparée en dissolvant 1mg de B-
carotène, 1ml chloroforme, 50µl d’acide linoléique et 400µg de Tween 40. le solvant a été
éliminé en soumettant l’émulsion à une pression réduite dans un évaporateur rotatif. Par la
suite, 200ml de H2O2 ont été ajoutés à l’émulsion, et l’absorbance a été ajustée à 0.9 – 0.7 à
490nm
Annika S. Dronge, MD; Melissa F. Perkal, MD; Sue Kancir, RN, ; John Concato, MD,
MPH; Michaela Aslan, PhD; Ronnie A. Rosenthal, MS, MD ,
Long-term Glycemic Control and Postoperative Infectious Complications (2006)
b. Préparation des Solutions
 Chapitre III

On a préparé les Quartes solution de 20 mg/ml de Ligand et les trois Complexes

Cu(II)L , Co(II)L et Ni(II)L
Puis 1250µl de l’émulsion ont été mélangés à 175µl de chacun des extraits.
Une première lecture est effectuée immédiatement, il s’en suite une cinétique de
décoloration de l’émulsion à différents intervalles de temps : 1h, 2h, 4h, 6h et 24h
d’incubation, à l’obscurité et à température ambiante.
Résultat et discussion

Test de Blanchissement de β-Carotène
Dans le système acide linoléique/β-carotène, l’oxydation de l’acide linoléique génère des
radicaux peroxydes, qui vont par la suite oxyder le β-carotène entrainant ainsi son oxydation
et la disparition de son couleur orange. Cependant l’addition d’un antioxydant pure [8] ou
sous forme d’extrait végétal [9] pourrait neutraliser les radicaux peroxydes et donc prévenir
l’oxydation et le blanchissement du β-carotène. Cela induit un retard de la cinétique de
décoloration du β-carotène au cours du temps. Pour évaluer la puissance de nos produits
synthétisés à ralentir ou inhiber l’oxydation de β-carotène, un suivi de la réaction d’oxydation
a été réalisé en mesurant tout abaissement d’absorbance à 490 nm en fonction du temps. Les
résultats obtenus, exprimés en pourcentage d’inhibition du blanchissement de β-carotène, sont
représentés dans la Figure 9. À partir des courbes de blanchissement du β-carotène, il est clair
que le pourcentage d’inhibition des composés synthétisés diminue progressivement en
fonction de temps pour atteindre des valeurs plus ou moins basses. En présence du contrôle
positif (BHT), les absorbances de la solution de β-carotène restent presque stables durant
toute la période d’incubation. Alors que les contrôles négatifs ne montrent qu’une très faible
activité antioxydante qui ne dépasse pas 20.66 % et 3.49 % pour l'eau et le méthanol,
respectivement, après 48 heures d’incubation.
La Figure 9 montre également que l’oxydation couplée de l’acide linoléique et de β-carotène
est efficacement inhibée par H2L, mais moyennement inhibée par et Cu(II)L Mn(II)L et
Ni(II)L. La structure chimique des composés chimiques synthétisés c’est un facteur important
gouvernant l’efficacité des antioxydants. Donc, la capacité antioxydante d’une substance ne
peut pas être seulement expliquée par sa richesse en composés phénolique mais aussi par la
nature et la structure de ces biomolécules. En outre, dans le système β-carotène/acide
linoléique, la capacité antioxydante d’un composé est en relation avec son degré
d’hydrophobicité et par conséquent avec sa solubilité [10] ont constaté que les antioxydants
apolaires (hydrophobes) sont plus actif dans les systèmes émulsionnés lipide-eau. Ceci est en
accord avec nos résultats qui montrent que le composé le moins polaire a présenté la plus
grande capacité antioxydante. Les composés apolaires montrent un important effet
antioxydant dans ce système car ils se concentrent à l’interface lipide-eau en prévenir
l’oxydation de l’acide linoléique [11] et par conséquent l’inhibition de la formation des
radicaux peroxydes et l’oxydation de β-carotène. Donc, dans le système β-carotène/acide
linoléique, l’activité antioxydante d’un composé est liée à leur propriété de se partitionner
entre la phase lipidique et la phase aqueuse
 Chapitre III

[8] Von Gadow A., Joubert E., Hanssmann C.F. 1997. Comparison of the antioxidant activity of
aspalathin with that of other plant phenols of rooibos tea and furochromones. Phytochemistry, 18:
139-143.

[9] Koleva I.I., Van Beek T.A., Linssen J.P.H., de Groot A., Evstatieva L.N. 2002 , Screening of plant
extracts for antioxidant activity : a comparative study on three testing methods. Phytochemical
Analysis, 13: 8-17.

[10] Frankel E N and Meyer A S. 2002, The problems of using one-dimensional methods to evaluate
multifunctional food and biological antioxidants. Journal of the Science of Food and Agriculture. 80:
1925-1941.

[11] Frankel E N, Huang S W, Kanner J, German J B. 1994, Interfacial phenomena in the evaluation of
antioxidants: Bulk oils vs. emulsions. Journal of Agriculture and Food Chemistry. 42: 1054-1059.

BHT L L Cu L Co L Ni
100
90
80
Inihibition (%)

70
60
50
40
30
20
10
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
Temps (h)

Figure 9. Pourcentage d’inhibition du blanchissement de β-carotène après 24 heures par les

différents produits synthétisés, le BHT et les contrôles négatifs.
 Les Résultats Obtenir : changement de couleur après et avant le test :

Tableau Les Résultat de test Blanchissement de β-Carotène

Les produits La couleur avant La couleur Après
Ligand Jaune Orange
Complexe de Ni (II)L Jaune Orange
Complexe de Co (II)L Jaune Orange
Complexe de Cu (II)L Maron noir Orange
 Chapitre III

Figure le test de Blanchement de β-Carotène.

Référence
[1] A. Ourari, K. Ouari, W. Moumeni, L. Sibous, G. Bouet, M. Khan, Unsymmetrical
tetradentateschiff base complexes derived from 2,3-diaminophenol and salicylaldehyde or 5-
bromosalicylaldehyde, Transit. Met. Chem. 31 (2006) 169-175.