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Génes rapporteurs
Dr A.ABBAS X.5. Genes rapporteurs :
X.5.1. Introduction :
Par les techniques de transformation génétique classique, les cellules transformées. sont
sélectionnées sur un milieu sélectif inhibant la croissance des cellules non transformées. Les
cellules, tissus ou plantes ainsi obtenus sont ensuite analysés_ sur expression du ou des genes
induits. mais les procédures d’obtention de ces organismes sont souvent longues, voir
difficiles pour certaines espces.
expression transitoire permet I'analyse rapide de l'expres
cellules transformées.
ion d'un gene sans s
X.5.2. Définition :
Un gene rapporteur est un géne dont le produit (protéine) posséde une caractéristique lui
permettant d'tre observé en Laboratoire (fluorescence, activité enzymatique détectable). Les
genes rapporteurs sont utilisés pour permettre de visualiser ou mesurer l'expression d'un gene
dintérét, pour cela le gene rapporteur peut étre fusionné au gene étudié, ou mis sous le contrdle
du promoteur de ce dernier.
X.5.3. Caractéristiques et types des genes rapporteurs:
Le produit du géne rapporteur doit étre absent des cellules soumises & la transformation, rendant
son niveau d’expression ainsi aisément quantifiable. La protéine codée par le gene rapporteur
doit étre facilement détectable.
Les gtnes rapporteurs codent done pour des enzymes dont l"expression est visualisable par
simple coloration ou mesurable par test d'activité enzymatique.
Les genes rapporteurs les plus utilisés sont :
-Protéines fluorescentes (riches en acides aminés phénoliques).
-Luciférase: protéine fluorescente du ver luisant (capable de cataboliser certains substrats en
émettant de la lumiére).
-GFP (green fluorescent protéine) issue de la méduse.
-Gene de la chloramphénicol acétyl transférase (CAT). L'activité de la CAT , catalysant le
transfert d’un groupement acéty! sur la chloramphénicol est simple & mesurer en présence de
la chloramphénicol ou d’acétyl coenzyme A marqué au C14
-Géne Lac Z codant pour le B-galactosidase et le géne gus de la B-glucuconidase. L’expression
de ces genes est détectable par coloration bleue des cellules en présence respectivement de X-
Gal ou de X-Glue. X.5.4, Applications de la technique
V/- Localisation d’une protéine d'intérét (fusion traductionnelle)
La localisation d’une protéine d'intérét dans une cellule par la liaison de son géne A un gene
rapporteur dont l'expression est facilement repérable, permet une visuslisation rapide et précise
du produit du gene, La construction génétique est 1a suivante: promoteur du géne dintérét-
séquence codante du géne d'interet -séquence codante du gene rapporteur.
La fusion traductionnelle consiste, donc, en la fabrication d'une protéine hybride formée
d'une protéine d'intérét plus la protéine codée par le gene rapporteur, comme la GFP qui donne
de la fluorescence.
‘Protéine de fusion détectable
-nleroscope a Muorescence
Figure 01 : Localisation d’une protéine d’intérét par un gene rapporteur
2/- Mesure de 'activité initiale du promoteur du gene d'intérét (fusion transcriptionnelle) :
La quantificetion de I'activité dun promoteur donné se fait par la constitution génétique
promoteur dun gene dintérét-séquence—codante d'un gene rapporteur
Plus le promoteur sera actif dans la cellule, plus le gne rapporteur sera transcrit et plus sa
protéine sera présente (Exemple la béta glucuronidase, plus il ya l'enzyme plus le précipité est
bleu).
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Figure 02 : Mesure de I'activité du promoteur du gene d’intérét par un gene rapporteur
