REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE

Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique

ECOLE SUPERIEURE NATIONALE POLYTECHNIQUE

Département de Génie de l’Environnement
Laboratoire des Sciences et Techniques de l’Environnement

PROJET DE FIN D’ETUDES

Présenté par :

GARMI LEILA
Pour l’obtention du diplôme
d’Ingénieur en Génie de l’Environnement

THEME

THEME
ETUDE DE LA BIODEGRADATION DES PLASTIFIANTS
DI OCTYL PHTALATE ET DI ISONONYL ADIPATE

Soutenu le 23 juin 2009 devant le jury composé de :

Président : Mr NAKIB, Chargé de cours, ENSP.

Promotrice : Melle N.LARDJANE, Maitre Assistante, Université de Tizi Ouzou.
Co- Promotrice : Mme N.BELHANECHE, Professeur, ENSP.
Examinateurs : Mr Y.KERCHICHE, Chargé de cours, Université de Médéa.
Melle D. Hank, Doctorante, ENSP.

PROMOTION JUIN 2009

ENSP.10, Avenue Hassen-Badi, El Harrach, Alger
 REMERCIEMENTS

Je tiens à remercier ma promotrice Mlle N.LARDJANE qui a bien voulu donner de

son temps pour superviser mon projet de fin d’études.

Mes remerciements vont également à ma co-promotrice Mme N.BELHANECHE qui

a eu l’amabilité de diriger mon travail.

Enfin, je remercie les personnes suivantes qui m’ont aidée de près ou de loin.

Les membres du jury.

Messieurs ALILECHE- AIT IHADADENE- AROUSS et MOUSSI de l’USTHB.

Mme Amara Anissa de l’Institut Pasteur.

Mlles HANK Dalila et TEBBOUCHE Latifa de L’ENSP.

Mr GHRIB et Mr KERBACHI de l’ENSP.

Mme NAFA et Mlle BENSERAI du CHUA MUSTAPHA.

Messieurs MAHFOUD – BOUSSOUM et Ami SALAH de l’ENSP.

Mes amis.

Ma famille.

I
Liste des figures et schémas :

Schéma I. 1: Mode d’action d’un plastifiant . ......................................................................................... 7

Schéma I. 2 : Structure chimique des sébacates . .................................................................................... 9
Schéma I. 3 : Structure chimique des azélates . ...................................................................................... 9
Schéma I. 4 : Structure chimique des adipates . ...................................................................................... 9
Schéma I. 5: Structure chimique des polyesters ..................................................................................... 9
Schéma I. 6 : Structure chimique des phosphates . ............................................................................... 10
Schéma I. 7 : Structure chimique des phtalates .................................................................................... 10
Schéma II. 1: Changement mineur . ...................................................................................................... 14
Schéma II. 2: Fragmentation . ............................................................................................................... 14
Schéma II. 3 : Minéralisation . .............................................................................................................. 14
Figure II. 1 : Equation de la courbe de croissance . .............................................................................. 18
Figure II. 2:Courbe de croissance en milieu non renouvelé . ................................................................ 19
Figure II. 3 : P.aeruginosa au microscope électronique à balayage ..................................................... 20
Figure III. 1 : Domaine du spectre électromagnétique . ........................................................................ 22
Figure III. 2: Loi de Beer Lambert ........................................................................................................ 23
Figure III. 3: Schéma de principe du spectrophotomètre UV-visible mono faisceau . ......................... 23
Figure III. 4 : Modes de vibration : exemple des vibrations localisées du groupement CH2 d’une
molécule ........................................................................................................................... 24
Figure III. 5 : Passage de l’interférogramme au spectre IR par transformation de Fourier .................. 25
Figure III. 6: Schéma d’un interférometre de Michelson . .................................................................... 26
Figure III. 7: Schéma de fonctionnement d'un spectrophotomètre à transformée de Fourier . ............. 26
Figure IV. 1: Schéma du dispositif expérimental.................................................................................. 31
Figure IV. 2 : Courbe d’étalonnage de la croissance bactérienne. ........................................................ 33
Figure V. 1:Spectre infrarouge de di- octyl phtalate (DOP) ................................................................ 35
Figure V. 2: Spectre infrarouge de di- iso nonyle adipate (DINA) . ................................................... 36
Figure V. 3:Spectres infra rouges des échantillons témoins.................................................................. 37
Figure V. 4:Evolution de l'absorbance de la bande caractéristique de la fonction ester des deux
plastifiants en fonction du temps de biodégradation. .......................................................... 38
Figure V. 5:Evolution de l'absorbance de la bande caractéristique du groupement CH2 des
deux plastifiants................................................................................................................... 39
Figure V. 6 : Evolution de l’absorbance des bandes caractéristiques en fonction du temps pour le
DOP .................................................................................................................................. 40
Figure V. 7 : Evolution de l’absorbanc des bandes caractéristiques en fonction du temps pour le
DINA ................................................................................................................................ 41
Figure V. 8: Courbes de croissance dans les milieux 1 et 2. ................................................................. 41
Figure V. 9: Graphe représentant la phase exponentielle...................................................................... 42

II
Liste des tableaux

Tableau IV. 1 : Matériel utilisé ............................................................................................................. 29

Tableau IV. 2 : Propriétés physico-chimiques du DOP ........................................................................ 30
Tableau IV. 3 : Propriétés physico chimiques du DINA ...................................................................... 30
Tableau V. 1: Groupements fonctionnels caractéristiques du di- octyle phtalate (DOP) ..................... 35
Tableau V. 2: Groupements fonctionnels caractéristiques du di- iso nonyle adipate (DINA) . ........... 36

Liste des abréviations

PVC : poly chlorure de vinyle.

DOP : di octyl phtalate.

DINA : di isononyle adipate

D.O : densité optique.

III
REMERCIEMENTS ................................................................................................................................ I
Liste des figures et schémas : ..................................................................................................................II
Liste des tableaux .................................................................................................................................. III
Liste des abréviations ............................................................................................................................ III

Table des matières

Introduction ............................................................................................................................................. 1
Chapitre I : Généralités sur les matières plastiques et les plastifiants ..................................................... 4
I.1- Définition d’une matière plastique ............................................................................................... 5
I.2- Les étapes de fabrication .............................................................................................................. 5
I.2.1- Du pétrole au monomère........................................................................................................ 5
I.2.2- Du monomère au polymère (Polymérisation)........................................................................ 6
I.2.3- Du polymère à la matière plastique ....................................................................................... 6
I.3- Les plastifiants.............................................................................................................................. 7
I.3.1- Définition............................................................................................................................... 7
I.3.2- Propriétés exigées de l’association polymère-plastifiant...................................................... 7
I.3.3- Principaux types de plastifiants ............................................................................................. 8
I.4- Les impacts environnementaux des phtalates :........................................................................... 11
Chapitre II : Généralités sur la biodégradation..................................................................................... 13
II.1- La biodégradation :.................................................................................................................... 14
II.2- La culture en « batch » .............................................................................................................. 15
II.3- La croissance bactérienne.......................................................................................................... 17
II.4-Généralités sur les pseudomonas................................................................................................ 19
Chapitre III : Description des techniques d’analyses utilisées ........................................................... 21
III.1-Spectroscopie UV-VIS.............................................................................................................. 22
III.2-Spectroscopie infra rouge.......................................................................................................... 24
Chapitre IV : Matériels et modes opératoires........................................................................................ 27
IV.1- Matériels .................................................................................................................................. 28
IV.1.1- Matériel biologique........................................................................................................... 28
IV.1.2- Milieu de culture............................................................................................................... 28
IV.1.3- Appareillages : ................................................................................................................. 29
IV
 IV.2- Produits utilisés :...................................................................................................................... 29
IV.2 .1- Di octyl phtalate :............................................................................................................. 29
IV.2 .2- Di isononyle adipate ........................................................................................................ 30
IV.3- Dispositif expérimental :.......................................................................................................... 31
IV.3.1- Préparation de la pré culture ............................................................................................. 32
IV.3.2 Préparation du batch.......................................................................................................... 32
IV.4 –Mode opératoire ...................................................................................................................... 32
IV.4.1- Mesure de la croissance microbienne ............................................................................... 32
IV.4.2 Mesure de la biodégradation des plastifiants ..................................................................... 33
Chapitre V : Résultats et discussion ...................................................................................................... 34
V.1- Caractérisation préliminaire des plastifiants par la spectroscopie infra rouge à transformée de
Fourier 35
V.1.1- Le dioctyl phtalate (DOP) : ................................................................................................ 35
V.1.2 : Le di isononyle adipate (DINA) : ...................................................................................... 36
V .2- Spectres infra rouge des échantillons témoins : ....................................................................... 37
V.3- Evolution de l’absorbance des groupements fonctionnels des plastifiants : ............................. 38
V.4-Courbes de croissance ................................................................................................................ 41
Conclusion............................................................................................................................................. 44
Bibliographie......................................................................................................................................... 46
Annexes................................................................................................................................................. 47

V
Introduction
 La demande mondiale en polychlorure de vinyle (PVC) est estimée à des dizaines de
millions de tonnes. En 2000, la production mondiale de ce polymère représentait plus de 20
millions de tonnes par an, alors qu’elle n’était que de 3 millions de tonnes en 1965, ce qui
correspond à environ un cinquième de la production totale de matières plastiques [1]. Ses
applications d’usage s’étendent du domaine médical à l’industrie automobile en passant par la
construction du bâtiment. [2]

Les plastifiants sont incorporés aux polymères dans le but de [3] :

 faciliter leur mise en œuvre,

 de modifier leurs propriétés
 de développer de nouvelles propriétés absentes dans le cas de la résine elle-même

Le PVC est la matière plastique qui utilise la plus grande quantité de plastifiants ,
environ 35% d’autres polymères se partagent l’utilisation d’un peu plus de 10% des
plastifiants [4].

La proportion de plastifiants ajoutée à la résine de PVC est comprise entre 15 et 50 % [5].

L’augmentation importante de l’utilisation du PVC, induit une augmentation de

l’utilisation des plastifiants et génère donc la pollution de l’air, du sol et de l’eau.

En effets les plastifiants sont des substances persistantes, bioaccumulables et toxiques

(PBT).

Il s’agit de substances chimiques bioaccumulables (accumulation dans les tissus vivants et

la chaîne alimentaire), peu biodégradables (persistantes) et potentiellement toxiques.

De manière générale, les plastifiants sont considérés comme des substances très nocives,
bien que le niveau et le type de toxicité varient d’un composé à l’autre [6].

Des recherches ont montré que les phthalates qui sont les plastifiants les plus utilisés sont
cancérigènes et contribuent à provoquer certaines malformations génétiques [7].

Considérant leur haute toxicité, leur élimination ou leur substitution s’avère

nécessaire et urgente. Cette opération d’élimination peut se faire par méthode biologique ; la
biodégradation étant une décomposition des matières organiques par des micro-organismes.

2
 Ces derniers contribuent à détruire ou à neutraliser ces substances toxiques. Tous les
êtres vivants participent à des degrés divers au recyclage des déchets et ce par leur aptitude à
coloniser tous les milieux [8].

En ce qui concerne la substitution, il s’agit de remplacer les plastifiants phtalates

toxiques par d’autres plastifiants moins nocifs pour l’environnement. C’est dans ce cadre que
s’inscrit le présent travail qui a pour objectif :

 De substituer l’un des plastifiants les plus utilisés, le di octyl phtalate (DOP), par un
plastifiant de la famille des adipates, le di isononyl adipate (DINA).
 De comparer leur biodégradabilité.

Pour cela, la biodégradabilité en batch des deux plastifiants a été analysée par
spectroscopie infrarouge.

Le présent mémoire comporte cinq chapitres. Les deux premiers concernent des
généralités sur les matières plastiques et les plastifiants ainsi que sur la biodégradation. Le
troisième traite des techniques d’analyses utilisées. Le quatrième décrit les matériels et modes
opératoires tandis que le cinquième et dernier chapitre présente les résultats et discussion.

Enfin, une conclusion est donnée.

3
Chapitre I : Généralités sur les
matières plastiques et les
plastifiants
CHAPITRE I Généralités sur les matières plastiques et les plastifiants

I.1- Définition d’une matière plastique

Dans un sens général, on dit qu’un matériau est plastique lorsqu’il peut se déformer
sous l’action d’une force sans perdre sa cohésion, tout en conservant sa nouvelle forme
lorsque la force a cessé d’agir. Le terme « plastique » est utilisé dans l’industrie pour designer
les substances et les matériaux (matières premières ou produits finis) à base de polymères
organiques synthétiques qui peuvent devenir fluides et se prêter au moulage.

La définition actuelle se limite, en outre, aux matières plastiques à base de polymères

organiques, à l’exclusion des élastomères et des fibres. Dans le domaine de la technologie, on
appelle matière plastique, un mélange comportant un polymère et divers ingrédients (par
exemple, des plastifiants, des stabilisants, des charges, etc.), transformé en produit fini.

Chaque matière plastique possède un ensemble de propriétés, de procédés de

fabrication et de considérations d’ordre économique qui la rend idéale pour certaines
application et impropre à d’autres. Par conséquent, il est important que les usagers
connaissent la nature de ces matériaux afin d’être en mesure de s’en servir avantageusement
dans des applications appropriées [5].

I.2- Les étapes de fabrication

I.2.1- Du pétrole au monomère

Le pétrole est un liquide visqueux constitué d’un mélange de produits appelés
hydrocarbures qui sont plus ou moins lourds. De ce fait, ils ont des points d’ébullition
relativement différents les uns des autres. C’est sur ce point qu’est basée la séparation des
constituants du pétrole qui est une distillation fractionnée.

Cette distillation s’effectue dans une haute colonne en acier dite colonne de
fractionnement. Cette colonne est compartimentée intérieurement par un certain nombre de
plateaux horizontaux.

Le pétrole est préalablement chauffé dans un four à environ 400°C. A cette

température, la plupart des fractions constituant le pétrole sont sous forme de gaz.
Lorsqu’elles pénètrent dans la colonne, elles s’élèvent à l’intérieur en se refroidissant au fur et
à mesure de leur ascension. Chacune des fractions obtenues lors de la distillation fractionnée
ne peut être utilisée directement car il ne s’agit pas de produits purs. Ce sont encore des

5
CHAPITRE I Généralités sur les matières plastiques et les plastifiants

mélanges qu’il faudra traiter pour obtenir les hydrocarbures utilisés dans différents secteurs
(gas-oil, essence, produits de base de la pétrochimie).

En particulier, l’une des coupes obtenues est le naphta qui va être à la base de
plusieurs polymères.

En sortie de raffinage, le naphta va donc subir plusieurs transformations jusqu’à

l’obtention de monomères.

I.2.2- Du monomère au polymère (Polymérisation)

Sous l’action de la chaleur, des radiations, ou plus généralement, d’un catalyseur , des
molécules activées prennent naissance. Cette phase est assez lente.

Par additions successives de molécules activées, la macromolécule se forme. Cette

étape est très rapide ; l’écart entre la vitesse d’apparition des molécules activées et la vitesse
de croissance des macromolécules fait que certaines ont déjà atteint leur taille définitive alors
que d’autres commencent tout juste a croitre. C’est pourquoi le polymère recueilli sera un
mélange de macromolécules de poids moléculaires différents 55°.

La polycondensation fait intervenir des réactions élémentaires classiques en chimie

organique : amidification , anhydrisation , estérification , par exemple , avec élimination d’un
résidu généralement simple : eau , gaz carbonique ou ammoniac , le plus souvent. Si les corps
en présence comportent deux fonctions susceptibles de réagir , il se forme une macromolécule
linéaire , s’il y a trois groupes fonctionnels la molécule obtenue sera tridimensionnelle [5].

I.2.3- Du polymère à la matière plastique

Afin d’améliorer les propriétés physiques (mécaniques, thermiques…), chimiques
ainsi que la mise en œuvre, on incorpore des additifs aux polymères.

Le mélange physique de polymères et d’adjuvants (additifs) est appelé premix ou

compound. La nature précise et la proportion des substances à ajouter dépend du polymère, de
la méthode de traitement utilisée pour convertir le plastique et des propriétés exigées pour la
pièce finie. Le choix des adjuvants et l’opération de mélange de ces derniers avec le polymère
constituent la préparation du compound (ou compoundage). Les proportions des divers
ingrédients d’un plastique constituent sa formulation. La résine de base d’un plastique peut
être un homopolymère ou un mélange des deux [5].

6
CHAPITRE I Généralités sur les matières plastiques et les plastifiants

Le terme adjuvant (ou additifs) peut servir à designer toute substance incorporée
généralement en faible concentration (il y a quelques
quelques exceptions) aux polymères
polymères, soit pour
modifier les
es propriétés de la résine, soit pour faciliter la mise en forme(ou mise ne œuvre),
soit pour changer les propriétés physiques, chimiques ou électriques du produit fini [5].

Les principales classes des divers adjuvants utilisés dans la fabrication des matières
plastiques sont : les lubrifiants, les stabilisants, les charges, les plastifiants, les pigments….

Dans cette étude l’accent est mis sur les plastifiants.

I.3- Les plastifiants

I.3.1- Définition
Un plastifiant est une substance incorporée à un plastique afin d’abaisser son intervalle
de ramollissement, de faciliter sa mise en œuvre et d’augmenter sa flexibilité.

Un plastifiant peut aussi être défini comme étant un solvant lourd qui, incorporé au
polymère, détruit partiellement les interactions entre chaines responsable
responsables de la cohésion
mécanique (schéma.1) et transforme un matériau initialement rigide en matériau souple,
flexible .Toutes les interactions ne sont pas détruites, celles qui restent confèrent
confèrent au polymère
une structure de réseau tridimensionnel évitant le glissement des chaines les unes par rapport
aux autres [9].

Schéma I. 1: Mode d’action d’un plastifiant [9].

I.3.2- Propriétés exigées de l’association polymère-plastifiant

Un plastifiant est jugé à ses qualités, essentiellement en fonction de l’usage que l’on
veut faire du plastique dans lequel il est incorporé.

7
CHAPITRE I Généralités sur les matières plastiques et les plastifiants

Dans tous les cas, les propriétés suivantes sont indispensables :

 excellente compatibilité plastifiant-polymère.

 action plastifiante efficace.
 permanence raisonnable de façon à maintenir les propriétés désirées pendant la
durée de vie du produit.
 stabilité suffisante (thermique, oxydative, UV, etc.) pour assurer, d’une part,
une mise en œuvre sans décomposition notable du plastifiant et, d’autre part, la
longévité souhaitée pour le produit plastifié.

D’autres propriétés peuvent être appréciées ou même exigées selon l’utilisation [10] :

 performances électriques (résistance d’isolement).

 tenue thermique aux hautes ou aux basses températures.
 résistance à l’extraction par les solvants et par l’eau, résistances aux salissures
et à la migration.
 bonne tenue au feu.
 faible odeur, non-toxicité.
 facilité de mise en œuvre.

I.3.3- Principaux types de plastifiants

I.3.3.1- Époxydes
Ce sont, le plus souvent, les dérivés époxydés d’acides gras dont les plus connus sont
l’huile de soja époxydée, les époxy-stéarates et époxy-tallates d’octyle (Tallate : sel ou ester
des acides gras du tallöl, résine liquide obtenue comme sous-produit de la pâte à papier.).

Ils sont en effet d’excellents plastifiants par eux-mêmes, mais leur prix très élevé,
limite en général, leur utilisation comme plastifiants à des cas exceptionnels [10].

I.3.3.2- Esters d’acides aliphatiques dicarboxyliques : adipates, sébaçates, azélates, etc.

La linéarité d’une partie de la chaîne carbonée de ces esters se traduit par une
amélioration des caractéristiques aux basses températures des produits plastifiés. L’utilisation
de ces types de plastifiants est limitée à cause de leur coût [10].

Dans la présente étude le plastifiant utilisé appartient à la famille des adipates, il s’agit
du di isononyle adipate (DINA).
8
CHAPITRE I Généralités sur les matières plastiques et les plastifiants

Ce dernier résiste aux basses températures et à la lumière, il est uutilisé dans le PVC
et ses copolymères et caoutchouc. Grace à sa faible viscosité, il est utilisé pour la fabrication
de polymères et d’esters de cellulose. On le retrouve dans les déodorants, films plastiques et
les emballages [5].

Schéma I. 2 : Structure chimique des sébacates [5].

Schéma I. 3 : Structure chimique des azélates [5].

Schéma I. 4 : Structure chimique des adipates [5].

I.3.3.3- Polyesters ou plastifiants polymériques

Ce sont les produits de la réaction d’un diacide aliphatique sur un diol. Les plus
courants sont les polyadipates de glycol de masses moléculaires variées (de 800 à 10 000).

Ces plastifiants, souvent difficiles à mettre en œuvre, ne sont utilisés que dans les
applications pour températures élevées,
élevées, où ils confèrent une longévité convenable aux objets
plastifiés. Leur excellente résistance à l’extraction par les solvants et l’e
l’eau savonneuse
augmente avec leur masse moléculaire [10].
[10

Schéma I. 5: Structure chimique des polyesters [5].

9
CHAPITRE I Généralités sur les matières plastiques et les plastifiants

I.3.3.4- Phosphates
Ils sont très utilisées dans les anciennes formulations du PVC, les orthophosphates
d’alkyle ou (et)
et) d’aryle sont souvent mixtes.. Le plus ancien est le phosphate de tricrésyle mais
les phosphates de diphényl-octyle
octyle (ou de diphényl-isodécyle)
diphényl décyle) sont, en général, préférés car ils
confèrent aux polyméres de bonnes performances à froid [10].
[

Schéma I. 6 : Structure chimique des phosphates [10].

I.3.3.5- Phtalates
Les phtalates constituent une famille composée de nombreuses
nombreuses substances. Ce sont des
esters dérivés de l'acide phtalique et d'alcools à chaînes plus ou moins ramifié
ramifiées, pouvant aller
de C1 à C2. Ils peuvent être considérés comme les plus courants des plastifiants du PVC car ils
présentent le plus souvent un ensemble des propriétés requises acceptables [2].

Schéma I. 7 : Structure chimique des phtalates [10].

Les moins coûteux : le phtalate de dioctyle (DOP),, ou la gamme des isophtalates,

phtalate de diisooctyle (DIOP
DIOP) phtalate de diisononyle (DINP),, phtalate de di
diisodécyle
(DIDP),, sont les plus courants [10].
[

Les phtalates sont présents dans de nombreux produits de consommation courante :

revêtements de sol (phtalate de butylbenzyle [BBP] ; phtalate de di-isononyle
isononyle [DINP] ;
phtalate de di-(2-éthylhexyle)
éthylhexyle) [DEHP]), câbles (exemple : électriques), matériel médical
([DEHP] dans les poches et les tubulures), emballages alimentaires, garnitures de voiture,
papeterie et matériaux de construction. Ils ont des applications plus limitées comme
plastifiants de résines et polymères autres que le PVC, et peuvent être incorporés dans des

10
CHAPITRE I Généralités sur les matières plastiques et les plastifiants

encres, des pigments, des peintures, (les laques, et des adhésifs (phtalate de di-n-butyle
[DBI>]). Le DBP est également utilisé en cosmétologie et en parfumerie (exemple : laques
pour les cheveux, vernis à ongles) [4].

Le plastifiant phtalate utilisé au cours de cette étude est le di octyl phtalate (DOP) de
formule moléculaire brute C24H38O4 .C’est un ester de l'acide phtalique. C’est l’isomère non
ramifié du DEHP [3,11].

I.4- Les impacts environnementaux des phtalates :

Les phtalates sont quasi présents dans notre quotidien, cela est du à leur vaste champ
d’application : ils sont utilisés comme plastifiants pour le PVC et comme additifs dans les
cosmétiques (parfums et lotions) [12].

Le secteur des emballages alimentaires est la source prédominante d’exposition des

populations (films plastiques, joints pour les bocaux) [13,14]. On peut y être aussi exposé à
travers certains traitements médicaux comme l’hémodialyse et les transfusions [15].

Comme les liaisons entre plastifiants et PVC ne sont pas covalentes, le plastifiant peut
donc migrer, se lessiver ou s’évaporer dans l’atmosphère, la terre, et dans la nourriture, ce qui
les rend ubiquitaires [16].

Donc les humains sont exposés à ces produits toxiques par ingestion buccale,
inhalation et par la peau [17].

En effet des études ont détecté la présence de ces produits, dans le sang, le liquide
amniotique et les urines [18].

Les phtalates entrent également dans la composition des peintures pour bateaux. La
concentration dans ce cas est de 0.1–300 mg/l dans les surfaces marines et les eaux douces.
Le taux est de 0.1 mg/g–100 mg/g de concentration pour les sédiments au fond des rivières
[19].

Il y a lieu de souligner également que des chercheurs ont mis en évidence que certains
invertébrés marins plus précisément des gastropodes, présentaient des modifications
sexuelles, avec comme résultat par exemple le développement d’organes males chez les
femelles [20]. Approximativement 150 espèces de gastropodes présentant ces mêmes
symptômes ont été recensées dans le monde [21].

11
CHAPITRE I Généralités sur les matières plastiques et les plastifiants

On trouve aussi les phtalates dans les habitations, surtout dans les matériaux de
finition et de décoration : papiers peints (30–40%), laques et vernis (20–40%), tuiles (5.0–
15%) et revêtements du sol (30–50%) [22].

Un récent rapport a déterminé qu’il y avait une liaison entre l’asthme infantile, les

allergies et la poussière ambiante qui contenait, entre autres le DEHP [23].

12
Chapitre II : Généralités sur
la biodégradation
CHAPITRE II Généralités sur la biodégradation

II.1- La biodégradation :
Un matériau est dit « biodégradable » s’il est dégradé par les microorganismes.

Le résultat de cette dégradation est la formation d’eau, du CO2 et /ou CH4 et

éventuellement, des sous produits [24].

La biodégradation peut se décliner en trois types principaux de changements dans une

molécule [25] :

1. Un changement mineur dans une molécule organique, laissant presque intacte la

structure principale.

Schéma II. 1: Changement mineur [25].

2. Une fragmentation d’une molécule organique complexe, de telle façon que les
fragments puissent être réassemblés pour revenir à la structure initiale.

Schéma II. 2: Fragmentation [25].

3. Une minéralisation complète aboutit à la transformation de la molécule organique en

forme minérale.

Schéma II. 3 : Minéralisation [25].

14
CHAPITRE II Généralités sur la biodégradation

Souvent, les communautés microbiennes naturelles ne sont pas capables d’effectuer la

biodégradation à la vitesse désirée, à cause de facteurs physiques ou nutritionnels limitants.

Par exemple, les faibles teneurs en oxygène limiteront souvent la biodégradation pour
les bactéries aérobies, l’azote le phosphore et d’autres nutriments nécessaires peuvent aussi
manquer ou n’être fournis que lentement, limitant ainsi les vitesses de dégradation.

En modifiant le milieu pour accélérer la biodégradation, on met en place un nouveau

processus appelé « bioremediation » [25].

Les facteurs affectant la biodégradation concernent la molécule, l'environnement et la

population microbienne.

Dans la molécule, interviennent :

 Le poids moléculaire
 Le degré de polymérisation
 Le degré de substitution (nature, nombre, position des substituants)
 La charge et l’encombrement stérique
 L’équilibre solide –liquide- vapeur
 La solubilité.

Dans l'environnement, les facteurs suivants interviennent dans la biodégradation [26] :

 La température, le pH, l’activité de l'eau, la force ionique, le potentiel redox

 La présence d'une interface liquide/solide, liquide/gaz
 Les concentrations en substrats et co-substrats.

Dans la population microbienne interviennent :

 La présence ou non d'une flore adaptée à l’environnement.

 La présence ou non d'une flore capable de dégrader les substrats considérés.

II.2- La culture en « batch »

Batch est un mot anglais qui désigne une opération où tous les ingrédients sont mis
ensemble au même moment en amont du réacteur et où tous les produits sont récupérés à la
fin de la procédure [27].

15
CHAPITRE II Généralités sur la biodégradation

La différence qui existe entre le bioréacteur en batch décrit précédemment et celui

utilisé au laboratoire est que tous les ingrédients sont mis ensemble au départ mais des
soutirages se font au fur et à mesure que la biodégradation s’opère, ces soutirages qui se font
en fonction du temps sont nécessaires pour observer la croissance microbienne et la
biodégradation du substrat.

Un bioréacteur comprend en général:

 L’enceinte de culture, encore appelée cuve ou réacteur.
 L’électronique de commande, qui est en effet essentielle pour maintenir
dans le réacteur des conditions de culture optimales, spécifiques pour les
micro-organismes considérés.
Il est aussi équipé d'un certain nombre de capteurs physico-chimiques pour
mesurer par exemple:
 La température (du milieu de culture).
 La vitesse d’agitation.
 Le pH.
 Le taux d'oxygène dissous.
 Le potentiel RedOx
 La nature et les débits de gaz à l'entrée et/ou en sortie de réacteur.

Ces capteurs transmettent les données mesurées à l'unité de commande, le plus

souvent, celle-ci comporte pour le paramètre étudié une électronique de régulation, c'est-
à-dire un système "intelligent" qui va agir pour maintenir la variable à une valeur
prédéfinie [28].
Quel que soit le type de micro-organismes, le bioréacteur doit permettre un
contact aussi bon que possible entre les deux phases, biotique et abiotique du système.
Le bon déroulement du procédé, selon l'allure cinétique optimale, est lié aux
phénomènes de transfert entre les cellules et le milieu de culture. Il s'agit tout d'abord de
transfert de matières, du milieu extérieur vers la cellule pour ce qui est du substrat et des
composés du milieu de culture nécessaires à la croissance cellulaire, en sens inverse
pour les produits du métabolisme. Pour que les transferts puissent s'effectuer
correctement, la répartition des cellules dans le milieu de culture doit être la meilleure
possible.

16
CHAPITRE II Généralités sur la biodégradation

Une caractéristique très importante du bioréacteur, dans le cas de processus

aérobies, est sa capacité de transférer, à la biomasse microbienne qu'il contient, la
quantité d'oxygène dont elle a besoin.
Le bioréacteur doit faciliter les transferts de chaleur, du milieu vers les cellules,
tout d'abord, puis à l'inverse au fur et à mesure que la croissance cellulaire se produit. La
répartition homogène des cellules dans le milieu évite alors tout phénomène de
surchauffe locale dangereuse étant donné la sensibilité à la chaleur du processus

 Préparation d’une culture et pré culture :

Un ensemencement dans un bouillon nutritif est effectué, il est mis en incubation
durant 48h à 37°C, c’est la pré culture, ensuite on introduit le bouillon riche en bactéries dans
un milieu liquide adéquat qui est alors maintenu à la température optimale de croissance de
l'espèce. A intervalles réguliers, on prélève un petit volume du milieu et on fait le
dénombrement des cellules qu'il contient. De cette façon, on peut suivre le développement
d'une population, c'est-à-dire l'augmentation du nombre de cellules avec le temps.
En portant le nombre de cellules en fonction du temps, on obtient une courbe de
croissance qui, pour une espèce donnée, mise dans des conditions données, prend une forme
caractéristique.
En faisant croître des bactéries dans un milieu, on réalise une culture. Une culture est
donc un milieu liquide contenant les bactéries qui s’y sont développées (ou qui s’y
développent encore) [29].

II.3- La croissance bactérienne

Dans une population bactérienne, toutes les cellules ne se divisent pas de manière
synchrone et la croissance s'effectue de façon continue. Dans un milieu non renouvelé, la
croissance des bactéries est limitée par l'épuisement du milieu en nutriments. La cinétique de
la croissance peut être établie expérimentalement en mesurant les variations de la masse
bactérienne (X) en fonction du temps (t) (Figure II-1). La vitesse de croissance par unité de
temps est proportionnelle à la masse bactérienne présente au temps t. Le coefficient de
proportionnalité, désigné par µ, est nommé taux de croissance [30].

La croissance d'une bactérie s'étudie en milieu liquide pour plus de simplicité. Il

existe six phases dont l'ensemble constitue la courbe de croissance [31]:

17
CHAPITRE II Généralités sur la biodégr
biodégradation

a) La phase de latence : elle correspond à une période d'adaptation de la

bactérie au milieu nutritif proposé.
prop osé. Le taux de croissance est nul (µ = 0). La durée
de cette phase dépend de l'espèce bactérienne, de la quantité
quantité d'inoculum introduit
dans le milieu, de l'état physiologique des bactéries et de la composition du
milieu. C'est le temps nécessaire à la bactérie pour synthétiser les enzymes
nécessaires pour l'utilisation du substrat.
subst . Il n'y a pas de division cellulaire :
µ=0
b) La phase d'accélération : les divisions cellulaires commencent et il se produit
une augmentation de la vitesse de croissance.
c) La phase exponentielle : les bactéries se multiplient sans entrave. La mortalité
est faible, voire nulle. C'est la croissance
oissance exponentielle : le taux de croissance atteint
un maximum µ= µ max. La masse cellulaire
ulaire est représentée par des cellules
viables
les (mortalité nulle). µmax, est constant et maximal. La valeur de µmax varie
selon les microorganismes et les conditions de milieu (composition milieu,
pH, température,
ure, activité de l'eau...).

Figure II. 1 : Equation de la courbe de croissance [23].

d) La phase de ralentissement : la vitesse de croissance régresse. Il y a un

épuisement du milieu de culture et une accumulation de produits d'excrétion
du métabolisme, déchets dont certains peuvent être inhibit
inhibiteurs. Il existe un
début d'autolyse des bactéries. µ diminue.
diminue
e) La phase stationnaire
tionnaire : le taux de croissance devient nul (µ = 0), les bactéries
qui se multiplient compensent celles qui disparaissent par lyse cellulaire. La
capacité limite du milieu est atteinte. Le taux de mortalité annule le taux de
croissance. La croissance apparaît nulle.
f) La phase de déclin : elle correspond à une période où les bactéries ne se divisent plus.
Le taux de mortalité augmente. Toutes les ressources nutritives
nutritives sont épuisées. Il y a
accumulation de métabolites toxiques. Il se produit une diminution d'organismes
viables et une lyse cellulaire.

18
CHAPITRE II Généralités sur la biodégradation

Figure II. 2:Courbe de croissance en milieu non renouvelé [30].

a : phase de latence

b : phase d’accélération

c : phase exponentielle

d : phase de ralentissement

e : phase stationnaire

f : phase de déclin

II.4-Généralités sur les pseudomonas

Les bactéries du genre Pseudomonas peuvent être définies par [32]:

 Bâtonnets droits ou incurvés, de 0,5 µm à 1µm sur 1,5 µm à 4 µm

 Mobiles grâce à des flagelles polaires.
 Chimioorganotrophe.
 Aérobies strictes.
 Espèce type : pseudomonas aeruginosa.

Pseudomonas aeruginosa est une bactérie gram négatif sous forme de bâtonnet mesurant
0,5 à 0,8 µm par 1,5 à 3,0 µ m. Elle est mobile grâce à des flagelles. Son métabolisme
respiratoire est aérobie strict jamais fermentatif.

19
CHAPITRE II Généralités sur la biodégr
biodégradation

C’estt une bactérie vivant librement que l’on trouve communément dans le sol et l'eau.

Elle a des exigences nutritives très simples. Dans le laboratoire, le moyen d'expression
le plus simple pour la croissance de Pseudomonas aeruginosa se compose de l'acétate comme
une source de carbone et de sulfate d'ammonium
d'ammonium comme une source d'azote [33
[33].

L’une des caractéristiques de l’espèce P. aeruginosa est la production d’

d’un pigment
bleu ou pyocynine [34].

P .aeruginosa
aeruginosa est une bactérie pathogène opportuniste majeure responsable
essentiellement d’infections acquises à l’hôpital et en général de traitement difficile que sont
les pneumonies, et les infections urinaires [35].
[35

Figure II. 3 : P.aeruginosa au microscope électronique à balayage [50].

20
 Chapitre III : Description des
techniques d’analyses utilisées
CHAPITRE III Description des techniques d’analyses

III.1-Spectroscopie UV-VIS
L’absorption d’un rayonnement dans le domaine spectral UV-VISIBLE
UV VISIBLE (180
(180-800 nm)
correspond à une excitation des électrons c.-à-d.
c. une transition d’un état stable à un état
moins stable, d’énergie plus élevée qu’à l’état fondamental et les spectres qui en résultent
sont appelés
pelés spectres électroniques [36].
[36

La figure III-11 illustre le domaine du spectre électromagnétique.

Figure III. 1 : Domaine du spectre électromagnétique [37].

].

C’est une technique de spectroscopie dont le domaine spectral est divisé en trois
plages appelées proche UV (185-400 nm), visible : (400-700
700 nm) et très proche
infrarouge (700-1 100 nm), cette technique apporte peu d'informations structurales, mais en
revanche, elle permet beaucoup d'applications en analyse quantitative. Les calculs de
concentration dans ce domaine, par application
ap de la loi de Beer - Lambert, constituent la base
de la méthode connue sous le terme général de colorimétrie [38].

La loi de Beer et Lambert relie dans certaines conditions, l'absorption de la lumière

à la concentration d'un composé en solution ; son principe est expliqué ci--dessous :

Soit un rayon lumineux traversant une solution absorbante de concentration C et de

trajet optique égal à l. Si I0 est l'intensité du rayon lumineux à l'entrée de la solution et I son
intensité à la sortie, alors [39]] :

22
CHAPITRE III Description des techniques d’analyses

A = D.O = log (I0 / I) = ε l C

Figure III. 2: Loi de Beer Lambert

A : l’absorbance.

D.O : la densité optique.

I0 : l’intensité lumineuse incidente.

incidente

I : l’intensité lumineuse transmise.

ε: le coefficient d'extinction molaire caractéristique de la substance étudiée a une longueur

d'onde donnée en L mol-1 cm-1.

l : l’épaisseur traversée en cm.

C : la concentration en mol.L-1
-
.

Cette loi n’est valable quee pour les solutions diluées [36].
[36

La figure III-22 illustre le schéma de principe d’un spectrophotomètre uv

uv-visible mono
faisceau.

Figure III. 3:: Schéma de principe du spectrophotomètre UV-visible

visible mono faiscea
faisceau [40].

23
CHAPITRE III Description des techniques d’analyses

III.2-Spectroscopie
pectroscopie infra rouge
Une molécule n’est pas un ensemble rigide d’atomes mais ressemble à un ensemble
de boules reliées par des ressorts qui représentent les liaisons chimiques, ces ressorts ne sont
pas rigides mais occupent des positions d’équilibre autour desquels des vibrations sont
possible.

Au cours de ces vibrations, les liaisons connaissent un faible allongement ou bien se

déforment. (Figure III .4)

Figure III. 4 : Modes

odes de vibration : exemple des vibrations localisées du groupement CH2 d’une
molécule [48].

Si une molécule reçoit une lumière infra rouge, elle absorbe de l’énergie et l’amplitude
de ces vibrations est amplifiée, le retour à l’état fondamental libère de l’énergie sous forme
de chaleur (ce mécanisme n’a lieu que si la molécule possède un moment dipolaire.

De nombreux groupements fonctionnels de molécules organiques présentent ainsi des

vibrations caractéristiques, qui
q correspondent aux bandes d’absorption
sorption dans les régions
définies du spectre IR [41].

Ces vibrations moléculaires sont essentiellement localisées dans les groupements

fonctionnels mais n’atteignent pas le reste de la molécule, de tels groupements fonctionn
fonctionnels
peuvent ainsi être identifiés par leurs bandes d’adsorption [42].
[42

24
CHAPITRE III Description des techniques d’analyses

Le principe de base du spectromètre infrarouge à transformée de Fourier est la

saisie simultanée de toutes les fréquences du spectre IR dans le détecteur qui rend superflu le
scan dess longueurs d’onde qui nécessitait du temps. Cela est possible en transformant, grâce à
un interféromètre, le rayonnement de la source lumineuse multifréquencielle et d'intensité
égale dans le temps en un interférogramme, qui n'est pas une fonction de la fréquence mais du
temps (ce qui signifie une transformation du domaine des fréquences en domaine des temps).
Après traversée par le rayonnement ainsi « préparé » de l'échantillon, l'interférogramme est à
nouveau traduit en un spectre (donc dans le domaine des fréquences) par une opération
mathématique appelée transformée de Fourier [42].

Figure III. 5 : Passage

assage de l’interférogramme au spectre IR par transformation de Fourier [42
[42].

Les spectromètres infrarouges à transformée de Fourier correspondent à un

montage simple faisceau qui comporte comme pièce essentielle un interféromètre —
souvent de type Michelson — placé entre la source et l’échantillon. (Figure
Figure III.
III.5)

25
CHAPITRE III Description des techniques d’analyses

Figure III. 6: Schéma d’un interférometre de Michelson [48].

Les radiations émanant de la source viennent frapper une séparatrice. Ce

dispositif permet de générer deux faisceaux dont l'un se dirige vers un miroir fixe et
l'autre vers un miroir mobile dont on fait varier la distance.

Ces deux faisceaux, recombinés ensuite sur le même trajet, traversent l'échantillon
avant de venir frapper le détecteur qui mesure l'intensité lumineuse globalement reçue
[43].

Figure III. 7: Schéma de fonctionnement d'un spectrophotomètre à transformée de Fourier [44].

26
Chapitre IV : Matériels et
modes opératoires
CHAPITRE IV Matériels et mode opératoire

IV.1- Matériels

IV.1.1- Matériel biologique

La bactérie utilisée dans ce travail est la Pseudomonas aeruginosa fournie par
l’Institut PASTEUR d’Alger, elle est conservée au réfrigérateur à une température de 4°C.

IV.1.2- Milieu de culture

Le milieu de culture utilisé est un milieu minéral liquide contenant le di octyl phtalate
et le di isononyle adipate comme unique source de carbone et des éléments minéraux
indispensables à la croissance des Pseudomonas aeruginosa.
La composition de ce milieu pour 1l d’eau distillée est la suivante [45]
 5.8 g KH2PO4,
 4.5 g K2HPO4,
 2g (NH4 )2 SO4,
 0.16 g MgCl2 ,
 20 mg CaCl2,
 2.4mg Na2MoO4 .2 H2O,
 1.8mg FeSO4.7H2O,
 1.5 mg MnCl2.4H2O

Le milieu de culture contenant le DOP comme substrat sera noté par milieu 1 et celui
contenant le DINA par milieu 2.

28
CHAPITRE IV Matériels et mode opératoire

IV.1.3- Appareillages :
Tableau IV. 1 : Matériel utilisé

Matériels Type
Agitateur IKA labortechnik
Yellow line
Balance KERN de precision 0,0001g

Spectroscope infrarouge JASCO-V-530

Spectrophotomètre Uv--Visible Anthelie light , SECOMAM
Autoclave HiClave , HV 25l
Filtre stérilisant (0,45µm) Sartorius, Minisart

Etuve MEMMERT

Centrifugeuse MIKRO 22R HETTICH

Pompe à air Shark RS-510

IV.2- Produits utilisés :

IV.2 .1- Di octyl phtalate :

C’est un produit fourni par la Société Générale des Plastifiants ––SGP (Tunisie), sa
formule chimique est donnée dans le schéma IV.2 et ses propriétés physico
physico-chimiques sont
regroupées dans le tableau IV.3

Schéma IV. 1: Structure chimique du DOP [11].

29
CHAPITRE IV Matériels et mode opératoire

Tableau IV. 2 : Propriétés physico-chimiques du DOP [5]].

Apparence Liquide huileux et visqueux, incolore,

inodore

Masse moléculaire 390,56

Densité : 0,9861 g/ml à 20 °C
Solubilité dans l'eau : 0,0003 g/l à 20 °C
Point de fusion : -46,00 °C
Point d'ébullition : 385,00 °C

IV.2 .2- Di isononyle adipate

C’est un produit de la société générale des plastifiants (Tunisie)
(Tunisie), sa formule est
donnée dans le schéma IV-22 et ses propriétés physico-chimiques
physico chimiques sont regroupées dans le
tableau IV-3.

Schéma IV. 2: Structure chimique du DINA [48].

Tableau IV. 3 : Propriétés physico chimiques du DINA [488].

Apparence Liquide clair

Formule chimique C9H19OOC(CH2)4COOC9H19
Masse moléculaire 398,63 g/mole
Densité 0,922 g/ml à 20°C
Solubilité dans l’eau Insoluble
Point de fusion -65 °C
Point d’ébullition 235 °C

30
CHAPITRE IV Matériels et mode opératoire

IV.3- Dispositif expérimental :

Le dispositif expérimental est constitué de :
 Un erlenmeyer
meyer de 1l en guise de cuve.
 Un agitateur magnétique muni d’un thermocouple pour maintenir et réguler si
nécessaire la température et l’agitation.
 Une seringue avec cathéter pour les prélèvements.
 Une pompe d’injection d’air.
 Un bain marie dans lequel est placé l’erlenmeyer contenant
contenant le milieu de culture

Figure IV. 1: Schéma du dispositif expérimental.

1. Thermocouple
2. Diffuseur d’air
3. Bain marie
4. Agitateur
5. Seringue avec cathéter
6. Bioréacteur
7. Barreau magnétique

31
CHAPITRE IV Matériels et mode opératoire

IV.3.1- Préparation de la pré culture

 Prélever des colonies de P.aeruginosa d’un tube de conservation à l’aide d’une
pipette pasteur stérile.
 Ensemencer dans deux tubes de bouillon nutritif de 10 ml.
 Incuber 48h à 37°C, l’apparition d’un trouble indique la présence de croissance
bactérienne.
 Un tube du bouillon servira d’inoculum et l’autre servira à lire la densité optique
à 600 nm.

IV.3.2 Préparation du batch

 stériliser 2 erlenmeyers de 1l contenant chacun 1 litre du milieu de culture et le
plastifiant (L’un de 0,11 g de DOP et l’autre de 0,10 g de DINA).
 Ajouter l’inoculum qui est de 1%.
 fixer les conditions opératoires : température de 37°C, faible agitation. aération de
0,1 l/mn d’O2.

IV.4 –Mode opératoire

IV.4.1- Mesure de la croissance microbienne

La mesure de la biomasse cellulaire la plus simple, la rapide et donc la plus utilisée au
laboratoire est la turbidimétrie [25]. Cette méthode nécessite l’emploi d’un spectrophotomètre
UV-VISIBLE réglé à une longueur d’onde de 600 nm.

Il y a lieu de procéder à des prélèvements à des intervalles réguliers après

homogénéisation du milieu et de mesurer la D.O.

La valeur de la DO est ensuite convertie en poids cellulaire sec par le biais d’une
courbe d’étalonnage présentée dans la figure IV2 [36].

32
CHAPITRE IV Matériels et mode opératoire

Figure IV. 2 : Courbe d’étalonnage de la croissance bactérienne [36].

IV.4.2 Mesure de la biodégradation des plastifiants

L’échantillon servant à mesurer la croissance bactérienne est centrifugé durant 20 mn

à une vitesse de 6000 tours /mn puis analysé avec un spectrophotomètre infrarouge à
transformée de Fourier avec une résolution de 4 cm-1
cm 1 et un nombre de balayage
balayages égal à 120
grâce à la technique du KBR.

33
Chapitre V : Résultats et
discussion
CHAPITRE V Résultats et discussion

V.1- Caractérisation préliminaire des plastifiants par la spectroscopie infra rouge à

transformée de Fourier

V.1.1- Le dioctyl phtalate (DOP) :

La figure V.1 représente le spectre infra rouge du plastifiant DOP et le tableau V.1
regroupe les principales bandes caractéristiques de ce dernier [42 ,49].

3.2
2 5
3.0 1 4

3
Absorbance

2.8 7

2.6

2.4 6

2.2

2.0

4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500

Nombre d'onde cm-1

Figure V. 1:Spectre infrarouge de di- octyl phtalate (DOP) [42,49]

Tableau V. 1: Groupements fonctionnels caractéristiques du di- octyle phtalate (DOP) [42,49].

N° Nombre d’onde ( cm-1 ) Mode de vibration et attribution

1 2937 – 2863 Elongation de C-H

2 1722 COO (ester)
3 1468 – 1384 Déformation –C-H (CH3, CH2)
4 1271 Elongation –C-O
5 1121 Elongation –C-O
6 960 Déformation –CH=CH-
7 742 Déformation (CH2)n, n > 4

35
CHAPITRE V Résultats et discussion

V.1.2 : Le di isononyle adipate (DINA) :

Le spectre infra rouge du DINA est représentée par la figure V.2. Le tableau V.2
résume les principaux groupements caractéristiques du plastifiant.

10
9
8
7 2
Absorbance

6 1

5
4 5
3
3 4
2
6
1
0
4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500

Nombre d'onde cm-1

Figure V. 2: Spectre infrarouge de di- iso nonyle adipate (DINA) [42 ,49].

Tableau V. 2: Groupements fonctionnels caractéristiques du di- iso nonyle adipate (DINA)

[42,49].

N° Nombre d’onde (cm-1) Mode de vibration et attribution

1 2937 – 2863 Elongation de C-H

2 1722 COO (ester)
3 1468 – 1384 Déformation –C-H (CH3, CH2)
4 1379 -CH3 (méthylène)
5 1172 -C-O (ester), -CH2-
6 989 Déformation des CH2

36
CHAPITRE V Résultats et discussion

V .2- Spectres infra rouge des échantillons témoins :

La figure ci-dessous représente les spectres infra rouges des échantillons témoins du
milieu 1 et 2.

Absorbance DOP
3
DINA
0,8

0,7

0,6 2

0,5 1
0,4

0,3

0,2

0,1

0,0

-0,1
4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500

Nombre d'onde (cm-1)

Figure V. 3:Spectres infra rouges des échantillons témoins.

Nous remarquons l’existence de trois pics :

1. La bande n°1 est observé aux environs de 640 cm-1 et représente la déformation
(CH2)n, n > 4 des plastifiants .
2. La bande n°2 est observée aux environs de 1650 cm-1 et représente la fonction ester
COO liée aux plastifiants.
3. La bande n°3 est observée aux environs 3500 cm-1 représente la fonction OH.

On remarque aisément la différence entre ces spectres et ceux des plastifiants bruts.

En effet les spectres infrarouge représentés par les figures V.1 et V.2, ne présentent pas
les même bandes caractéristiques :

La bande de déformation de la fonction (CH2)n, n>4 se situe à 742 cm-1 [49].

37
CHAPITRE V Résultats et discussion

Le pic représentant la fonction ester se situe à 1722 cm-1 [49].

Et entre 2937 et 2863 cm-1 on trouve une bande qui représente l’élongation de C-H [49].
Nous observons que les deux bandes représentant la fonction ester et la déformation
CH2 sont décalées dans les spectres des échantillons par rapport aux spectres des produits
purs.

La bande d’élongation C-H n’apparait pas car elle a été masquée par une large bande
du à la présence de la fonction OH.

Ces modifications sont dues à la présence du groupement OH de l’eau qui crée des
interactions de type liaisons hydrogènes avec les groupes carbonyles des plastifiants.

Il est connu que la liaison hydrogène diminue la fréquence d’adsorption [49].

V.3- Evolution de l’absorbance des groupements fonctionnels des plastifiants :

Les figures V.4 et V.5 représentent respectivement l’évolution de l’absorbance des
groupements ester et CH2 liés aux plastifiants en fonction du temps de biodégradation.

Absorbance COO DOP

1,4 DINA

1,2

1,0

0,8

0,6

0,4
0 20 40 60 80 100 120 140
Temps (h)

Figure V. 4:Evolution de l'absorbance de la bande caractéristique de la fonction ester des deux

plastifiants en fonction du temps de biodégradation.

38
CHAPITRE V Résultats et discussion

Absorbance CH2 DOP

0,9 DINA

0,8

0,7

0,6

0,5

0,4

0,3
0 20 40 60 80 100 120 140

Temps (h)

Figure V. 5:Evolution de l'absorbance de la bande caractéristique du groupement CH2 des deux

plastifiants.

On constate que les absorbances des bandes caractéristiques augmentent et diminue en

fonction du temps

L’augmentation de ces absorbances est plus importantes durant les 50 premières

heures pour les échantillons contenant le DINA, cette augmentation est due a la formation des
nouveaux métabolites liés à la biodégradation des plastifiants

Cette augmentation est plus élevé après 50h, pour les échantillons contenant le DOP,
ce qui nous permet de dire que la biodégradation du DOP est plus lente par rapport à la
biodégradation du DINA.

Cette différence est liée directement à la structure chimique des deux plastifiants.

En effet, les phtalates à chaines longues et qui contiennent un noyau aromatiques ne

sont que partiellement biodégradable.

En revanche le DINA possède une structure linéaire, il est biodégradable par rapport
aux phtalates [1] par la suite on constate une diminution et augmentation des absorbances qui

39
CHAPITRE V Résultats et discussion

peut être expliquée par la biodégradation des métabolites eux même et la formation d’autre
nouveau métabolites.

Les figures V.6 et V.7 illustrent les variations des bandes caractéristiques des deux
plastifiants en fonction du temps.
L’allure globale des courbes est similaire et les mêmes fluctuations sont observées, ce
qui peut s’expliquer par la présence des métabolites liés à la biodégradation des deux
plastifiants. Deux plus, les deux courbes sont similaires, ce qui veut dire que les deux bandes
caractéristique évoluent de la même manière.

Absorbance CH2
COO
1,3

1,2

1,1

1,0

0,9

0,8

0,7

0,6

0,5

0,4

0,3
0 20 40 60 80 100 120 140
Temps (h)

Figure V. 6 : Evolution de l’absorbance des bandes caractéristiques en fonction du temps pour le

DOP

40
CHAPITRE V Résultats et discussion

Absorbance CH2
1,3 COO
1,2

1,1

1,0

0,9

0,8

0,7

0,6

0,5

0,4

0,3
0 20 40 60 80 100 120 140
Temps (h)

Figure V. 7 : Evolution de l’absorbanc des bandes caractéristiques en fonction du temps pour le

DINA

V.4-Courbes de croissance
Le graphe ci-dessous représente les courbes de croissance de P .aeruginosa dans les milieux
1 et 2.

Concentration en matière sèche (mg/l) DINA

DOP
100

90

80

70

60

50

40

30

20
0 20 40 60 80 100 120 140
Temps (h)

Figure V. 8: Courbes de croissance dans les milieux 1 et 2.

41
CHAPITRE V Résultats et discussion

Nous remarquons que les courbes ne correspondent pas parfaitement à la courbe de

croissance bactérienne évoquée précédemment.

On observe trois phases distinctes :

La phase exponentielle, la phase de ralentissement et la phase stationnaire

La phase de latence n’a pas pu être déterminée en raison de l’absence de prélèvements

nécessaires.

Durant la phase exponentielle, les bactéries se multiplient sans entrave, cette phase
est plus longue dans le milieu 1 que dans le milieu 2. En effet, pour le milieu 1, elle dure 22h
et pour le milieu 2 elle dure 9h, cette phase correspond à l’étape de dégradation des
plastifiants la plus active, elle dure tant que le substrat et les éléments nutritifs sont présent.

Le taux de croissance calculé a partir des pentes de la figure V.9 est de 0,034 mg/l*h
pour le milieu 1 et de 0,031 mg/l*h pour le milieu 2.

ln X (mg/l)
4,4

4,2 DINA
DOP
4,0

3,8

3,6

3,4

3,2
0 5 10 15 20 25 30
Temps (h)

Figure V. 9: Graphe représentant la phase exponentielle

Ensuite les bactéries entrent dans la phase de ralentissement où la vitesse de

croissance régresse à cause de l’épuisement des substrats et l’accumulation de

42
CHAPITRE V Résultats et discussion

déchets , la concentration en biomasse atteint les 86mg /l pour le milieu 1 et

63mg/l pour le milieu 2 après une incubation qui dure 52h et 24h respectivement.

Au delà de 24 h pour le milieu 2 et 52 h pour le milieu 1, on a apparition d’un

palier qui caractérise la phase stationnaire dans laquelle la capacité limite des milieux
est atteinte, Les bactéries qui se multiplient compensent celles qui disparaissent par
lyse cellulaire donc le taux de mortalité annule le taux de croissance. La croissance
apparaît nulle.
Dans cette phase les concentrations bactérienne atteignent leurs valeurs
maximales, elles sont de 89,5 mg/l pour le milieu 1 et de 68 mg/l pour le milieu 2.
La finalité des traitements biologiques est d’éliminer la pollution organique au moyen
de micro-organisme, des bactéries principalement.
Les micro-organismes hétérotrophes, utilisent la matière organique comme
source de carbone et d’énergie, matière qui est en partie éliminée sous forme gazeuse
lors de minéralisation du carbone avec production de CO 2 dans les procédés aérobies
et de biogaz (CO2 +CH4 ) dans les procèdes anaérobies.

43
Conclusion
 Cette étude a montré qu’il y a eu effectivement une biodégradation des deux
plastifiants considérés mise en évidence par les variations des absorbances des bandes
caractéristiques en fonction du temps. Ces variations sont liées aux métabolites des deux
plastifiants.

Ainsi, les deux plastifiants sont biodégradable et le DINA peut être utilisée
remplacement du DOP.

Comme perspectives, ce travail peut être approfondi en :

 Utilisant d’autre techniques d’analyses, en complément à la spectroscopie infrarouge,

afin d’identifier les métabolites par couplage chromatographie en phase gazeuse/
spectrométrie de masse.

 Il y a lieu également d’utiliser différentes concentrations de plastifiants qui pourraient

s’avérer très utiles et cela pour suivre les différentes valeurs de l’absorbance des
groupements fonctionnels, si la spectroscopie infra rouge est utilisée comme méthode
d’analyse .

 De porter la durée de l’expérience à plus de sept jours en augmentant le volume du

réacteur, ce qui pourrait être très utile pour obtenir la cinétique complète de
biodégradation.

45
Bibliographie

[1] LIVRE VERT « Problèmes environnementaux du PVC », Commission des

communautés européennes COM (2000) , 469, (26 juillet 2000).

[2] G.M.Vinhas, R.M.Souto- Maior, Y. M.B de Aimeida, B.B.Neto, « Radiolitic

dégradation of poly (vinyl chloride) systemsPolym ». Degr.  Stab., n° 86, pp 431-436
,(2004).

[3] J.Stepek H.Daoust, « Additives for plastics», Springer Verlag , New York, pp 7-33
,(1983).

[4] A-M. Saillenfet, A. Laudet-Hesbert, « Phtalates », EMC Toxicologie et Pathologie,

(2005).

[5] N.Lardjene « caractérisation et étude d’impacts de nouvelles formulations à base de

polychlorure de vinyle », Mémoire de magister, ENP, Alger (2005).

[6]Green Peace « greenpeace-briefing-basf».

[7] O. Ogunfowokan, N. Torto, A. A.Adenuga and E. K. Okoh « Survey of level of

phthalate ester plasticizers in a sewage lagoon effluent and a receiving stream »,
Environmental Monitoring and Assessment, pp 457-480 , ( 2005).

[8] J.Pelmont « Biodégradation et métabolismes » EDP Sciences, 1ère édition, Paris,

(2005).

[9] A. Dobraczynski, « les matières plastique », l’usine nouvelle, tome1, Paris (1982).

[10] P.Verrier, « Plastifiants », Techniques de l’ingénieur, A3231, (1992).

[11] « Lois canadienne sur la protection de l’environnement : Liste des substances

d’intérêt prioritaire, Rapport d’évaluation : Phtalate de Di-octyle », (1993).

[12] R .Hauser, S .Duty, L .Godfrey-Bailey, AM .Calafat. « Medications as a source of

human exposure to phthalates», Environl Health Perspect Environl Health Perspect, n°112,
pp 751–3,(2004).

46
[13] M. Biedermann, K. Grob «GC Method for Determining Polyadipate Plasticizers in
Foods: Transesterification to Dibutyl Adipate, Conversion to Migrating Polyadipate » , n° 19
,pp 159–178, September (2006).

[14] WW.Huber, B .Grasl-Kraupp, R .Schulte-Hermann. « Hepatocarcinogenic potential

of di (2-ethylhexyl) phthalate in rodents and its implications on human risk » Crit Rev
Toxicol, n°26, pp 365–481, (1996).

[15] J .Doull, R .Cattley, C.Elcombe, BG .Lake, J .Swenberg, C.Wilkinson, et al. « A

cancer risk assessment of di(2-ethylhexyl)phthalate » Regul Toxicol Pharmacol, n°29, pp
327–357, (1999).

[16] U.Heudorf, H.S .Volker, J. Angerer « Phthalate toxicology and exposure ».

Hyg.Environ. Health. n°210,pp 623–634,(2007).

[17] JJ .Adibi, FP.Perera, W.Jedrychowski , DE .Camann, D.Barr, R.Jacek, et al.

Prenatal « exposures to phthalates among women in New York city and Krakow, Poland. »
Environ Health Perspect. N°111, pp 1719–22, (2003).

[18] N.Pant, M.Shukla, D.Kumar, Y.Shukla , N.Mathur , Y.Kumar, D.Krishna.

« Correlation of phthalate exposures with semen quality ». n° 231, pp 112-116, (2008).

[19] F.L. Mayer, D.L.Stalling, J.L.Johnson, « Phthalate esters as environmental

contaminants». n° 238, pp 411–413,(1972).

[20] GW.Bryan, PE.Gibbs, GR.Burt « A comparison of the effectiveness of tri-n-butyltin

chloride and five other organotin compounds in promoting the development of imposex in the
dog whelk». J Mar Biol Assoc UK, n° 68,pp 733–744 ,(1988).

[21] K .Fent « Ecotoxicology of organotin compounds». Crit Rev Toxicol, n° 26, pp 1-117 ,
(1996).

[22] J .Spengler, J.Semet, , J.McCarthy, « Indoor Air Quality Handbook». McGraw-

Hill,New York (2001).

47
[23] C-G. Bornehag, J.Sundell, CJ.Weschler, T.Sigsgaard, B.Lundgren, et al.
« The association between asthma and allergic symptoms in children and phthalates in house
dust: a nested case control study». Environmental Health Perspectives, n° 112(14), pp 1393–7
, (2004).

[24] ADEME « Biodégradabilité et matériaux polymères biodégradables Note de synthèse I,

(2005).

[25] Prescott, Harley, Klein « Microbiologie » 2 éme édition française, De boeck, Paris, pp
1009-1012, (2003).

[26] R.Scriban , « Biotechnologie » , 5 éme édition .TEC et DOC, Paris, pp 835-836 (1999).

[27] N.Abdi ,cours :« opérations unitaire biologique » ,ENSP ,Alger (2009).

[28] La gazette du laboratoire n°12 novembre,(1996).

www.gazettelabo.com

[29] P.Singleton « bactériologie, pour la médecine, la biologie et les biotechnologies »

6 éme Dunod, Paris, pp 243 (2005).

[30] J.P. Euzéby « Abrégé de Bactériologie Générale et Médicale » à l'usage des étudiants
de l'Ecole Nationale Vétérinaire de Toulouse,(2007).

[31] A.Branger, M.M.Richer « microbiochimie et alimentation » Educagri, Dijon, pp 111-

113 (2007).

[32] J.Michael, Jr.Pelczar « éléments de microbiologie » HRW, Montréal, (1982).

[33] K.Todar « courses of microbiology»,University of Wisconsin Department of

Bacteriology, (2004).

[34] P.courvalin « antibiogramme » Eska, Paris, (2006).

[35] J.L.Fauchére, J.L.Avril « Bactériologie générale et médicale » Ellipse, Paris, (2002).

48
[36] O.Ali , Etude de l’influence des paramètres opératoires sur la dégradation du
phénol par Pseudomonas aeruginosa en fermenteur. Mémoire de Magister,
ENP.Alger,(2005).

[37] J.M.Hollas « spectroscopie cours et exercices », DUNOD, Paris, pp 35,(1998).

[38] F.Rouessac, A.Rouessac « analyse chimique, méthodes et technique instrumentale
modernes » DUNOD, 5 éme édition, Paris, pp 139, 149-150, (2000).

[39] Spectrophotométrie dans l’UV-visible

http://jflemen.iutlan.univ-rennes1.fr/CHIMIE/SPECTRO/berlam.htm

[40] Spectrophotométrie

http://fr.wikipedia.org/wiki/Spectrophotom%C3%A9trie

[41] R.Kerbachi cours « spectroscopie infrarouge », ENSP ,Alger (2007).

[42]M.Hesse,H.Meier,B.Zeeh, « Méthodes spectroscopiques pour la chimie

organique »Masson, Paris ,(1997).

[43] J.P.MERCIER, « Chimie des polymères : synthèse, réactions et dégradation », Presses

Polytechniques et Universitaires, Romandes, Lausanne (1996).

[44] Spectroscopie infra rouge à transformée de Fourier ,Université d’ ULM

http://www.uni-ulm.de/index.php?id=3973
[45] W.L.Chao, C.M.Lin, I.I. Shiung, Y.L. Kuo « Degradation of di-butyl-phtalate by soil
bacteria» n° 63, pp 1377-1383, (2005).

[46] J.J.Perry, J.T.Staley, S.Lory « microbiologie, cours te questions de révision » Dunod, ,

Paris, (2002).

[47] D.L.Servant « Spectroscopie dans l’infrarouge » Techniques de l’ingénieur.pp 2845

[48] DIISONONYL ADIPATE

http://chemicalland21.com/industrialchem/plasticizer/DIISONONYL%20ADIPATE.htm

[49] G.SOCRATES, « Infrared charactéristic group frequencies»,John wiley and Sons,New

York, n° 22, pp 2719-2726 ,( 2002).

49
[50] Pseudomonas aeruginosa

www.deniskunkel.com

50
Annexes

51
A.1-biodégradation du DOP
A.1.1-Evolution de la croissance microbienne

JOUR HEURE Lecture à 600 nm X ( mg/l)

1 0 0.065 28.26
4.33 0.099 43.0435
2 22.5 0.161 70
28.33 0.191 83..435
3 46.83 0.186 80.869
52.16 0.199 86.521
4 69.83 0.175 76.087
76.5 0.214 93.043
5 92.91 0.214 93.043
99.30 0.224 97.391
6 117.91 0.204 88.695
122.25 0.205 89.1304

A.2- biodégradation de DINA

A.2.1-Evolution de la croissance microbienne

JOUR HEURE Lecture à 600 nm X ( mg/l)

1 0 0.065 28.26
4.33 0.089 38.695
2 22.5 0.154 66.956
28.33 0.164 71.304
3 46.83 0.150 65.217
52.16 0.130 56.521
4 69.83 0.135 58.695
76.5 0.134 58.260
5 92.91 0.151 65.652
99.30 0.152 66.087
6 117.91 0.171 74.347
122.25 0.170 73.913

52
 ‫ﻣﻠﺨﺺ‬

‫ﯾﺘﻤﺜﻞ ﻣﻀﻤﻮن ھﺬا اﻟﺒﺤﺚ ﻓﻰ دراﺳﺔ اﻟﺘﺤﻠﻞ اﻟﺒﯿﻮﻟﻮﺟﻲ ﻟﻠﻤﻠﯿﯿﻦ و ذﻟﻚ ﻓﻲ ﻣﻔﺎﻋﻞ ﺑﯿﻮﻟﻮﺟﻲ ﺑﺎﺳﺘﻌﻤﺎل ﺑﻜﺘﺮﯾﺎ ﺑﺴﻮدوﻣﻮﻧﺎس‬
‫ارﯾﻮﺟﯿﻨﻮزا‬

‫ﻣﺘﺎﺑﻌﺔ اﻟﺘﺤﻠﻞ اﻟﺒﯿﻮﻟﻮﺟﻲ ﻛﺎن ﺑﺎﺳﺘﻌﻤﺎل ﺟﮭﺎزي اﻟﺘﺤﻠﻞ اﻟﻄﯿﻔﻲ ﻟﻸﺷﻌﺔ ﻣﺎ ﺗﺤﺖ اﻟﺤﻤﺮاء و ﻣﺎ ﻓﻮق اﻟﺒﻨﻔﺴﺠﯿﺔ‬

DINA ‫ اﻛﺒﺮ ﻣﻦ ﺳﺮﻋﺔ اﻟﺘﺤﻠﻞ اﻟﺒﯿﻮﻟﻮﺟﻲ‬DOP ‫اﻟﻨﺘﺎﺋﺞ أﺛﺒﺘﺖ أن ﺳﺮﻋﺔ اﻟﺘﺤﻠﻞ اﻟﺒﯿﻮﻟﻮﺟﻲ‬

DOP, DINA‫ ﻣﻔﺎﻋﻞ ﺑﯿﻮﻟﻮﺟﻲ‬,, ‫اﻟﺘﺤﻠﻞ اﻟﺒﯿﻮﻟﻮﺟﻲ‬: ‫ﻣﻔﺎﺗﯿﺢ‬

RESUME

Le PVC est l’un des matériaux plastiques les plus utilisés au monde, leur mise en
œuvre nécessite une proportion de plastifiants comprise entre 15 et 50%.

Ce projet de fin d’études a pour but d’étudier la biodégradation de deux plastifiants

qui sont le di octyl phtalate (DOP) et le di isononyle adipate (DINA) dans un bioréacteur, la
bactérie utilisée est la P.aeruginosa

La biodégradation est suivie pas à pas grâce au spectrophotomètre UV-visible afin

d’établir une cinétique bactérienne, et spectrophotomètre infra rouge à transformée de Fourier
(IRTF) pour suivre l’évolution des absorbances des groupements fonctionnels caractérisant
les plastifiants.

Les résultats obtenus démontrent que la bactérie P.aeruginosa dégrade plus

rapidement le DOP que le DINA .

Mots clés : di octyl phtalate(DOP), di isononyl adipate(DINA), biodégradation, bioréacteur.

ABSTRACT

The PVC is the most used plastic material in the world, their implementation requires
a proportion of plasticizers between 15 and 50 %.

The aim of this work is the evaluation of the biodegradation of di octyl phtalate (DOP)
and di isononyl adipate (DINA) in a bioreactor with the use of the bacteria P.aeruginosa.

The biodegradation is studied with the technical analysis: infrared Fourier Transform
(IRTF) and UV visible spectroscopy.
The results showed that DOP was more quickly biodegrable than DINA

Keywords: DOP, DINA, biodegradation, bioreactor,