No.

Doc: CHB/SOP/TL/025
No. de version : 01
PROCEDURE OPERATOIRE Nombre de Révision. : 01
STANDARDISE Page 1 sur 10

REALISATION DU TEST DE SERVICE DE

CENTRE DIAGNOSTIC RAPIDE LABORATOIRE
HOSPITALIER (TDR) Abboth DETERMINE
BOMOI TB LAM Ag
KINSHASA/ N’DJILI

Rédigé/Préparé par : Corrigé/ Contrôlé par : Approuvé par : Autorisé par

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3) PTME
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TB LAM Ag
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1.0. TITRE

REALISATION DU TEST DE DIAGNOSTIC Abboth DETERMINE TB LAM Ag

2.0 OBJECTIF

Le but de cette procédure est de décrire toutes les étapes nécessaires à la réalisation du TDR
abboth Determine TB LAM Ag.

2.1 Glossaire
1. Document : Information et le support qui la contient, digital ou physique.
2. POS : Procédure(s) opératoire(s) standardisée(s)
3. TDR : test de diagnostic rapide.
4. LAM Ag : antigène lipoarabinomannane
5. MTB : Mycobacterium tuberculosis.

3.0 Application

Cette procédure est applicable au laboratoire de Centre Hospitalier BOMOI.

4.0 CONTEXTE

La tuberculose est la première cause de mortalité humaine dans le monde due à un

seul agent infectieux, MTB, et se classe avant le VIH/SIDA. On estime qu’environ
2 milliards de personnes, soit 25 % de la population mondiale, sont infectées par MTB,
et que 5 à 10 % des personnes infectées courent à vie un risque de voir l’infection
tuberculeuse évoluer vers la maladie.
Les tests conventionnels par examen microscopique des frottis d’expectoration pour
le diagnostic de la TB ont une sensibilité réduite chez les personnes séropositives au
VIH, surtout si elles sont gravement malades. 1 Chez les personnes séropositives au
VIH, la TB ne produit généralement pas de lésions pulmonaires cavitaires et les
expectorations peuvent présenter une faible concentration bacillaire, ce qui fait
qu’une proportion significative de personnes obtiennent des frottis négatifs ou sont
incapables de produire des expectorations. En outre, d’autres défis rendent le
diagnostic de la TB difficile, notamment la présentation clinique atypique de la
tuberculose, car il existe une forte prévalence des formes extrapulmonaires et
disséminées de la tuberculose chez les personnes présentant une immunosuppression
avancée. Avec l’arrivée des technologies moléculaires rapides, un diagnostic plus
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précis de la TB est devenu plus accessible à tous les patients, y compris les patients
présentant des frottis négatifs et ceux atteints de TB associée au VIH. Une variété de
tests d’amplification nucléique, tels que la réaction en chaîne par polymérase (PCR), la
PCR en temps réel et l’amplification isotherme médiée par les boucles (LAMP), sont
disponibles pour diagnostiquer la TB. Toutefois, les performances d’autres diagnostics
rapides recommandés par l’OMS, tels que TB-LAM,

TruenatTM MTB et TruenatTM MTB Plus (Molbio Diagnostics, Goa, Inde), n’ont pas été
entièrement évaluées chez les adultes et les enfants vivant avec le VIH. D’autres
technologies, telles que le test Xpert® MTB/RIF (Cepheid, Sunnyvale, CA, États-Unis)
et, plus récemment, le test Xpert® MTB/RIF Ultra, sont recommandées par l’OMS
comme test de diagnostic initial de la TB chez les adultes et les enfants, y compris ceux
suspects de TB associée au VIH. Alors que le test Xpert® MTB/RIF atteint une sensibilité
globale de 85 % chez tous les adultes atteints de tuberculose pulmonaire, sa sensibilité
est réduite à 81 % chez les personnes vivant avec le VIH et à 67 % chez les personnes
atteintes de TB avec des frottis négatifs mais des cultures positives. Cependant, le test
Xpert MTB/RIF Ultra offre une augmentation de 10 % de la sensibilité chez les patients
avec des frottis négatifs mais des cultures positives et une augmentation de 7 % chez
les personnes séropositives au VIH.

5.0 PRINCIPE
Determine TB LAM Ag est un test immunochromatographie qui permet la détection
qualitative de l’antigène lipoarabinomannane (LAM) des mycobactéries dans l’urine
humaine. Determine TB LAM Ag repose sur des anticorps hautement purifiés,
spécifiques au principal antigène polysaccaridique du genre Mycobactéries :
lipoarabinomannane (LAM). Ces anticorps sont utilisés à la fois pour la capture et la
détection. Les anticorps de capture sont absorbés sur la membrane en nitrocellulose
de la bandelette. L’anticorps de détection est marqué (conjugué) à des particules
colloïdales.

Lorsqu’un échantillon urinaire est ajouté au tampon échantillon, les anticorps

conjugués à l’or colloïdal se fixent sur l’antigène LAM et sont libérés par l’échantillon
du tampon conjugué. Ce complexe immunologique est ensuite capturé par les
anticorps anti-LAM fixés sur la membrane en nitrocellulose et mis en évidence par le
marquage à l’or colloïdal. Un résultat positif (signifié par la bande gris / pourpre)
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indique que l’antigène LAM mycobactérien est présent dans l’échantillon en quantité
égale ou supérieur à la limité de détection du test, tandis qu’un test négatif (signifié
par l’absence de bande gris/pourpre) indique que l’antigène est absent ou en quantité
inférieure à la limité de détection. Pour garantir la validité de l’analyse, une barre de
contrôle de la procédure est incorporée au dispositif de l’analyse.

Ligne de contrôle Tampon

Analyte Marqueurs conjugués à des Ligne de test (anticorps (Anticorps de détection) capillaire
de detection)

Tampon destiné à l’échantillon Membrane nitrocellulose

Ligne de Ligne
tests positif valide
6.0 RESPONSABILITE :
Le responsable de qualité est chargée d’élaborer, de la modifier et de la réviser le cas échéant.
Le Médecin biologiste valide et approuver l’application cette procédure au laboratoire. Le
technicien de laboratoire a pour responsabilité d’appliquer cette procédure au poste de travail.

7.0 MATERIELS ET REACTIFS

7.1 Réactifs

Le Kit de test Abbott Carte-test détermine TB LAM Ag, 5 cartes (5 tests / cartes)
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7.2 Instrument et Matériels

✓ EPI (Equipement de protection individuelle)
✓ Une notice comportant des instructions
✓ Un gobelet stérile de prélèvement d’urine ;
✓ Une pipette ou un autre dispositif capable de délivrer avec précision 60 µl d’urine (il
peut s’agir d’une micropipette calibrée de 100 µl avec embout filtrant, d’une
micropipette de 60 µl à double bulbe ou d’une pipette Pasteur) ;
✓ Un minuteur.

10 cartes (10 tests/carte) Gobelet pour le prélèvement

d’urine

Micropipette à double bulbe

de 60 µl
Micropipette de 100 µl Minuteur
avec embouts

8.0 PRELEVEMENT ET CONSERVATIONS

8.1 PRELEVEMENT ET CONSERVATIONS DES ECHANTILLONS
Il est fortement recommandé de nettoyer les zones urogénitales avec une lingette nettoyante
avant de prélever l’échantillon d’urine. L’urine doit être recueillie en milieu de jet dans un
gobelet d’urine standard stérile. Si possible et dans l’idéal, les échantillons frais doivent être
testés immédiatement après leur prélèvement. Si un test immédiat n’est pas possible, l’urine
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peut être conservée à température ambiante pendant 8 heures au maximum ou entre 2 et 8 °C

pendant 3 jours au maximum. S’ils sont conservés entre 2 et 8 °C, il faut laisser les échantillons
revenir à température ambiante avant de réaliser le test. À des fins de recherche, les échantillons
peuvent être congelés à -20 °C. Cependant, la congélation peut entraîner la formation de
précipités non caractérisés. Ainsi, les échantillons non décongelés doivent être centrifugés à 10
000 g pendant 5 minutes à température ambiante, puis une aliquote de 60 µl peut être prélevée
dans le surnageant limpide pour le test. Il faut éviter les cycles de congélation-décongélation
multiples (c’est-à-dire n’en permettre que trois au maximum), car l’antigène LAM peut se
détériorer. Remarque : certaines études ont indiqué que la réactivité des LAM dans l’urine
disparaît dans les échantillons conservés pendant 3 ans à -20 °C. À ce jour, la stabilité des
échantillons d’urine congelés n’a pas été comparée à l’utilisation d’échantillons frais pour le
test Abboth LAM.

8.2 CONSERVATIONS DES REACTIFS

Les cartes de test Determine TB LAM Ag doivent être conservées à une température comprise
entre 2 et 30 °C jusqu’à la date de péremption.
✓ Les composants du Kit sont stables jusqu’à la date de péremption lorsqu’ils sont
manipulés et conservés conformément aux instructions. Ne pas utiliser les composants
du Kit trousses au-delà de la date de péremption ;
✓ Refermer immédiatement la pochette hermétique en aluminium contenant le
dessiccateur dans laquelle se trouvent tous les tests inutilisés en appuyant fermement
d’un bout ç l’autre de l’ouverture ;
✓ Ne pas utiliser les dispositifs ou dont l’emballage est endommagé.

9.0 METHODOLOGIE

1. Retirer le couvercle en aluminium de chaque bandelette d’analyse nécessaire et s’assurer

qu’elle est correctement étiquetée pour l’échantillon de chaque patient ;
2. Appliquer un échantillon de 60 µl (à l’aide d’une pipette de précision ou d’un autre
dispositif) sur le tampon blanc marqué d’une flèche ;
3. Attendre 25 minutes avant de lire le résultat. Visualiser la bandelette dans des conditions
d’éclairage intérieur standard ou à l’ombre. Ne pas visualiser la bandelette à la lumière
directe du soleil. Les résultats sont stables pendant 35 minutes après l’application de
l’échantillon. Ne pas lire le résultat au-delà de 35 minutes.
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Preparer le test Appliquer un échantillon de 60 µl (à

Retirer le couvercle en l’aide d’une pipette de précision ou d’un
aluminium de chaque autre dispositif) sur le tampon blanc
bandelette marqué d’une flèche chaque bandelette

Ligne Non valide

25

mi
n
10.0 INTERPRETATION DES RESULTATS
Pour faciliter la lecture et l’interprétation des résultats, utiliser la carte d’échelle de référence
(fournie dans le Kit) en la plaçant le long de la fenêtre patiente.
✓ Si la ligne de résultat est difficile à définir, consulter la section
EQUIVOQUE/INCERTAIN ci-après.
✓ Conserver la carte dans la pochette du Kit, à l’abri de la lumière et de la chaleur.
✓ Ne pas utiliser la carte au-delà de la date de péremption.
Antigène LAM : POSITIF (deux barres : barre de contrôle et barre patient) deux
barres/gris/pourpre apparaissent sur la bandelette : l’une dans la fenêtre de contrôle (annotée
« control ») et l’autre dans la fenêtre patient (annotée « Patient »). L’intensité de la couleur de
la barre « Patient » doit être égale ou plus marquée que toutes les autres barres colorées dans
la plage « POSITIF » de la carte d’échelle de référence.
NEGATIF (une barre)
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Une barre gris/pourpre apparait dans la fenêtre de contrôle de la bandelette (annotée « control ».
Aucune barre n’apparait dans la fenêtre patiente de la bandelette (annotée « Patient »).
INVALIDE (aucune barre)
Lorsqu’aucune barre gri/pourpre n’apparait dans la fenêtre de contrôle de la bandelette, le
résultat est invalide et le test doit être répété, même lorsqu’une barre gri/pourpre apparait dans
la fenêtre patiente de la bandelette.
EQUIVOQUE/ INCERTAIN
Une barre gri/pourpre apparait dans la fenêtre de contrôle de la bandelette (annotée « control »,
mais la barre qui apparait dans la fenêtre patient (annotée « Patient ») est estompée ou
incomplète ou : si l’intensité de la couleur de la barre dans la fenêtre « Patient » est moins
marquée que toutes les autres barres colorées dans la plage « POSITIF » de la carte d’échelle
de référence. Répéter le test pour garantir une meilleure décision clinique. Sinon, collecter un
nouvel échantillon dans les jours qui suivent et répéter le test. Il est recommandé d’utiliser les
premières urines de matin.

11.0 CONTROLE QUALITE

Pour garantir la validité de l’analyse, un contrôle de la procédure (annoté « control ») est
incorporé au dispositif. Si la barre de contrôle ne devient pas gris pourpre d’ici à la fin de
l’analyse, le résultat du test est invalide et le test doit être répété.

12.0 LIMITES DE LA METHODE

✓ Determine TB LAM Ag est conçu pour détecter l’antigène LAM mycobactérien dans
l’urine humaine. Il est déconseillé d’utiliser d’autres types d’échantillons (notamment
les expectorations, le sérum, le plasma, le LCR ou les autres liquides corporels), y
compris des échantillons combinés d’urine.
✓ Determine TB LAM Ag ne permet pas de faire la distinction entre les différentes
espèces de Mycobacterium, telles que M. tuberculosis, M. Leprae, et M. avium. Dans
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TB LAM Ag
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une zone endémique de tuberculose, lorsqu‘un antigène LAM est détecté dans un
échantillon clinique, il est susceptible d’être attribué à la M. tuberculosis.
✓ Aucun test ne fournit l’assurance absolue qu’un échantillon ne contient pas de faibles
quantités d’antigène LAM comme c’est le cas à un stade précoce de l’infection. Un
résultat négatif n’exclut pas la possibilité d’une infection à M. tuberculosis.
✓ Aucun test n’est spécifique à 100%. Les résultats positifs doivent être interprétés à la
lumière de l’évaluation clinique globale avant de poser un diagnostic.
✓ Si possible, Determine TB LAM Ag doit être suivi d’un test de confirmation, tel qu’une
culture bactérienne, et d’un test de sensibilité aux médicaments.
✓ L’intensité de la barre patiente n’est pas nécessairement corrélée à la charge bactérienne
✓ L’utilisation de diurétiques est susceptible d’affecter la capacité du test à détecter
l’antigène LAM dans l’urine des patients tuberculeux.
✓ L’excrétion de l’antigène LAM dans l’urine peut varier selon l’état de santé
individuelle du patient, sa maladie sous-jacente ou son traitement.
✓ L’effet d’un traitement antibiotique à large spectre sur la performance du test Determine
TB LAM Ag n’a pas été établi
✓ Des résultats non valides ne sont pas révélateurs d’un résultat de test positif ou négatif.
Si le résultat est non valide, le test doit être effectue à nouveau. Si des résultats non
valides sont obtenus à plusieurs reprises, le patient doit être testé de nouveau selon une
autre méthode. Le diagnostic final du patient doit être poser à la lumière de l’évaluation
clinique globale.

13.0 DOCUMENT DE REFERENCE

1. Référence catalogue Abboth Determine TB LAM Ag REF 7D2741 Juine 2020

2. Mise en œuvre pratique du dosage urinaire du lipoarabinomannane à flux latéral (LF-

LAM) pour la détection de la tuberculose active chez les personnes vivant avec le VIH
3. Global tuberculosis report 2020. Geneva : World Heath Organization ; 2020
([Link] bitstream/handle/10665/336069/[Link]
?ua=1, accessed 26 October 2020).
4. Gupta, RK, Lucas SB, Fielding KL, Lawn SD. Prevalence of tuberculosis in post-
mortem studies of HIV infected adults and children in resource-limited settings : a
systematic review and meta-analysis. AIDS. 2015 ; 29 :1987–2002. doi
:10.1097/QAD.0000000000000802.
5. WHO End TB Strategy. In : Tuberculosis (TB), World Health Organization [website].
Geneva : World Health Organization ; 2020
([Link] accessed 28 August 2020).
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ATTESTATION DE LECTURE

J’atteste avoir lu et compris la procédure de la réalisation de TDR abboth Determine TB LAM

Ag

N° Noms et Prénoms Signatures Date

01

02

03

04

05

06

07

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