Introduction :
La microbiologie s'intéresse à l'étude des microorganismes, qu’il s’agisse des bactéries, des champignons,
des protozoaires ou des virus, Les micro-organismes exigent pour leur croissance des aliments. Ces aliments leur
sont fournis au laboratoire par des milieux nutritifs ou milieux de culture.
Plan de travail :
Dans cet TP, nous apprendrons à préparer un milieu de culture en utilisant les composants et les matériels et les
appareils disponibles au laboratoire.
- Partie matériel :
Légendes figures Utilise/function
- elle sert à contenir un mi-
lieu de culture afin de per-
-Boites de petri mettre le développement
des micro-organismes.
- milieu de culture permettre
-Tube a essai la croissance de micro-orga-
nisme
- lame transparente sur la-
quelle les micro-organismes
- lame en verre sont étudiés sous micro-
scope optique.
- Ecouvillon - milieu de transport pour
prélever des échantillant
- crée une zone de travail
stérile
-Bec bunsen - permettre de stériliser des
objets par flambage
- pour pouvoir à prélève et
déplaces les micro-orga-
-Anse de platine nismes dans un milieu de
culture
- Partie appareil:
Légendes figures Utilise/function
Microscope optique
-permet d’observer des lames qui
ne sont pas visible à l’œil nu
- stérilisé la verrerie
Outoclave
Métallique
- utilisé Our la stérilisation de la
Four pasteur verrerie vide
Incubateur - pour maintenir les cultures micro-
biologique et cellulaires
- mesure l’activité des ions hydro-
PH-mètre géné dans les solutions à base
d’eau
-partie milieux de culture :
Milieux de culture : est un support nutritif qui permet le développement de microorganisme.
- Les différentes étapes de la préparation de ces milieux consistaient en :
- La pesée :
Ingrédients Quantité Fonctions
Extrait de viande 1 g -source de protéine, glucide, sel
minéraux, vitamines
Extrait de levure 5 g -source d’acide amine et vitamines
Peptone 2 g -source d’acide amine et oligopep-
tides
Chlorure de sodium na cl 5 g -équilibre osmotique et équilibre
électrique
Agar-agar 15 à 20 g -solidification des milieux de
culture
Eau distillée : compléter jusqu'à 1000 ml
- La dissolution des ingrédients :
Rq : Nous n'utiliserons pas les quantités indiquées, en diluant la solution « 100 ml d’eau distillée – Peptone 0.2 g -
Extrait de levure 0.05 g - Extrait de viande 0.1 g - Chlorure de sodium na cl 0.5 g - Agar-agar 2 g ».
On utilise une spatule, on met les ingrédients dans une Bécher, après les avoir pesés sur un agitateur magnétique
Rq : Pour chaque ingrédient, nous utilisons une spatule différente.
- La mesure du pH : On pose la solution constitutive sur PH mètre
PH = 7.4 ± 0.2 (Après avoir mesuré PH de la solution diluée Nous avons trouvé « PH = 7.3 » )
Rq : Le PH est ajusté à l’aide d’une base comme na cl ou d’un acide comme H cl
- La stérilisation des milieux :
Le milieu est ensuite préparé dans des flacons puis stérilises à l’aide d’un (autoclave 121°C pendant 20 min).
Rq : L’agar étant un composé insoluble à froid, il sera incorporé après la dissolution des ingrédients et la mesure
du pH.
