Introduction

Les protides sont des molécules composées d’un assemblage complexe d’acide aminé. Elle est
dite peptide (oligopeptide, polypeptide) si elle contient un nombre peu élevé, et protéine si
celui-ci est important (holoprotéine, poly protéine). Notre manipulation porte sur l’étude des
protéines dans laquelle nous ferons une caractérisation des protides à travers ces réaction et un
dosage des protéinées par la méthode de GORNALL

Caractérisation des protides

1.Réaction de Biuret

Le biuret est un composé organique obtenu par condensation de 2 molécules d’urée et

l’élimination de l’ammoniac

Protocole expérimental

Dans un tube à essai mettre 3 ml de blanc d’œuf dilué avec 6 fois son volume d’eau et ajouté
1ml de soude à 40. Puis mélangé en ajoutant gout à goute une solution de sulfate de cuivre à
1.

Résultat

Il apparait une coloration variant du rouge au violet plus ou moins foncé.

Interprétation

Cela est dû à la présence des ions cuivreux et la liaison peptidique. Les ions Cu2+ sont
complexés par 2 groupes carbonyles situé de part et d’autre d’une liaison peptidique

2.Réaction de la ninhyndrine

Elle consiste en une réaction chimique qui détermine si un échantillon composé contient des
amines ou acides −aminé.

Protocole

Avec 1 ml du blanc l’œuf on ajoute 1ml de solution fraiche de ninhyndrine à 0 ,2 dans l’eau
et porté à ébullition.
Résultat

Il apparait une coloration bleue qui se développe.

Interprétation

La coloration observé s’explique par la réaction de la ninhyndrine à des fonctions

carboxylique et amine libre contenues dans la protéine ; elle réagit avec les fonctions
carboxyle et amine en les décarboxylant et les désaminant pour donner un aldé[Link]
molécule de la ninhyndrine et de la ninhyndrine réduite donne alors la coloration bleu intense.

3.Réaction xanthoproteique

Elle permet de mettre en évidence certain groupement aromatique des acides aminés des
protides.

Protocole

À 3ml de blanc de l’œuf on ajoute 1ml de solution d’acide nitrique concentré on observe une
précipité blanc

Après avoir bouillir pendant une minute on obtient une coloration jaune. Après
refroidissement sous le robinet puis on ajoute gout à goute une solution de soude à 40 .

Interprétation

La réaction entre l’acide nitrique et le groupement aromatique en présence de la soude et de

l’ammoniac est à l’origine de la coloration orangé.

4.Réaction de Million

Elle est une réaction calorimétrique qui consiste à mettre en évidence de la phénolique dans
une protéine.

Protocole

Avec 3ml de blanc d’œuf on ajoute 1ml de réactif de Million puis on chauffe le tube avec
précaution.

Résultat
Après chauffage le précipité devient rouge brique ou se dissout en donnant une solution
rouge.

Interprétation

Le précipité blanc observé dans un premier temps est dû à la réaction de l’acide mercurique
contenu dans le réactif de million avec le groupement phénolique produisant un dérivé nitré.
Ce dérivé nitré par la réaction avec l’acide nitrique du réactif de million et à chaud conduit à
la coloration rouge.

5.Réaction du soufre

Elle permet de mettre en évidence de l’acide aminé soufré.

Protocole

Avec 2ml de blanc d’œuf dilué 1ml de soude 40, bien hominisé et le faire bouillir 2 minute
et on ajoute 1 à 2 goutte d’acétate de plomb neutre) 0,2molL.

Résultat

La solution devient noir dense et on observe la formation d’un précipité noir.

Interprétation

Le soufre contenu dans les protéinées est libéré par ébullition en présence de la Na avec
l’acétate de plomb pour former le précipité noir de sulfate de plomb.

6.Réaction de molish

Avec 5ml de blanc de l’œuf dilué on ajoute 1ml d’une solution d’−naphtol à 1 dans
l’alcool, après avoir mélangé on le verse dans un tube contenant 5ml d’acide sulfurique
concentré en le faisant coulé le long de la parois.

Résultat

Apparait un anneau violet à la surface de séparations. Séparant les deux phases ; cette anneau
est dû à la glucosamine.
7.Réaction d’adamkiewicz

Avec 2ml de blanc de l’œuf, on ajoute 4ml d’acide acétique concentré et le mélanger .après
avoir mélangé, on verse le avec précaution le long des parois maintenu incliné sur 2ml d’acide
sulfurique concentré et agité légèrement.

Résultat

Il se forme alors un anneau brun plus ou moins foncé à la surface de séparation des deux
phases.

II- Etude quantitative : dosage des protéines par la méthode de gornall

1- Principe

L’étude quantitative des Protéines est un dosage colorimétrique, en ajoutant dans les
conditions bien déterminées du sulfate de cuivre et de la soude à une solution de protéines, la
réaction aboutit à la formation d’un complexe coloré et l’intensité de la coloration est
proportionnelle à la concentration en protéines, on se propose alors de déterminer la
concentration en protéines d’une solution inconnue en la comparant a une solution de
référence de titre connu.

2- Matériel et solutions

• Neuf tubes à essai

• Pipettes graduées
• Béchers
• Spectrophotomètre
• Solution de protéine à 67,4g/l
• NaCl à 9g/l
• Une solutions inconnue X1

3- Protocol expérimental

A partir d’une solution de protéines 67,4g/l, nous avons préparé une gamme de 9 solutions
dans des tubes à essai selon le tableau ci-dessous :
 Tube T 110 115 120 130 140 150 180 1100
Vsérum 0 0.1 0.07 0.05 0.035 0.03 0.02 0.015 0.01
NaCl 1 0.99 0.93 0.95 0.965 0.97 0.98 0.985 0.99
ml
Vf ml 1 1 1 1 1 1 1 1 1

Après avoir préparé la gamme d’étalonnage, dans chaque tube on ajoute 4ml de GORNALL
et on le laisse reposé pendant 30 minute entre20°C et 25°C .la solution inconnues X1 sera
diluer avec du NaCl pour obtenir une solution x(X1/10) après les 30 minutes Enfin nous
sommes passés à la lecture des densités optiques à 540nm

4- Résultats

a- Les densités optiques et concentration en protéines des différentes solutions

Sur la base du principe de dilution CiVi = CfVf et connaissant les volumes finaux et initiaux
et la concentration initiale en protéines nous avons pu calculer les concentrations finales en
protéines es tubes 1/100, 1/80, 1/50, 1/40, 1/30,1/20,1/15 et 1/10.

Ci= Concentration initiale de la solution de protéines : 67,4 g/l

Vi= Volume initial de la solution de protéines dans chaque tube
Vf= Volume final après dilution : 1 ml
Cf= Concentration finale
CiVi=CfVf → Cf = CiVi/Vf

Les densités optiques et les concentrations des différents tubes sont consigné dans le tableau
ci-dessous

Tube T 1/10 1/15 1/20 1/30 1/40 1/50 1/80 1/100

g/l 6.74 4.718 3.37 2.359 2.022 1.348 1.1011 0.674
mg/ 0 674 471.8 337 235.9 202.2 134.8 110.11 67.74
DO 0 0.316 0.201 0.150 0.083 0.078 0.052 0.039 0.027

Courbe d’étalonnage (Cf dernière page)

Nous avons déterminé graphiquement les concentrations de la solutions X1,

Par projection : [X1/10] = 1,80 g/l ꞊> [X1]= [X1/10] × 10 donc [J]= 18 g/l
Solution X1
DO 0.072
Concentration g/l 18

Aspect des tubes

Après l’ajout du réactif de GORNALL sur chaque tube on observe une coloration violette
qui passe de moins coloré dans les tube1/100 à 1/50 et au niveau du 1/40 une coloration
violette foncé se fait voir. Le tube X est très foncé.

5- Interprétation

Quand on passe du tube 1/100 au tube 1/10, on observe une augmentation de la valeur des
densités optiques(Do). Cette augmentation est fonction de la coloration des différents tubes
qui passe progressivement de peu violette (tube 1/100) au violette foncé (tube1/5) quand on
passe d’une solution moins concentrée en protéines en une solution plus concentrée. Ainsi
plus la solution est concentrée en protéines plus la coloration est intense et plus la valeur de sa
densité optique est importante. niveau de la tube X1 on note une concentration en protéines
de 18g/l se qui explique sa forte coloration violette et la valeur de la densité optique de
X1/10.

Conclusion

En définitive cet manipulation nous à permis de mettre en évidence toutes les réactions de
mise en évidence des protides en observant les différentes coloration avec ces réactifs , nous
avons de même appris à réalisé le dosage des protides par de la méthode de GORNALL en
observant les différentes coloration en fonction de la concentration en protéines.