Rekik hiba Tp2
: influence de PH sur l’activité de l’invertase
I. But :
Le but de cette manipulation est l’etude de l’effet du pH sur
l’activité d’enzyme .
II. Principe :
On se base sur la présence des groupements ionisable dans
les protéines, dans notre cas l’enzyme d’invertase. L’état
d’ionisation de ces protéines peut être modifier par l’effet de
variation du pH.
III. Mode opératoire:
- Préparation des tampons :
Solution A : Acide citrique (0.1M)
Solution B : Phosphate disodique (0.2M)
Pour obtenir le tampon désiré à un pH donné on mélange :
pH X(ml) Y(ml)
Xml2.6
des solutions A avec
44.6 Y ml de la solution
5.4 B
3.4 35.9 14.1
4.2 29.4 20.6
5 24.3 25.7
5.8 19.7 30.3
6.6 13.6 36.4
- Mélange de l’extrait d’enzyme avec le saccharose en
présence des solution tampon à pH diffèrent :
Tube 1 2 3 4 5 6
Saccharose à 8% 3ml dans chaque tube
Valeur de pH 2.6 3.4 4.2 5 5.8 6.6
4ml de chaque tampon
Préincubation 5 mn à 56°C
Extrait 0.5 ml dans chaque tube
enzymatique dilué
(ml)
Agitation puis incubation 10 min à 56°C
NaOH (0.1N) 2.5 ml dans chaque tube
-Puis agitation des tubes suivit de dosage du sucre réducteur
par la liqueur de Fehling.
I. résultat:
Tube 1 2 3 4 5 6
V de liqueur de 0.5 1 1 1.5 1.5 3
Fehling
II. II. Conclusion :
L’activité de l’enzyme varie lors de changement de du pH.
L’augmentation de ph qui passe de l’acidité à une état presque
neutre provoque l’amélioration de l’activité de l’enzyme .