D’où viennent-ils ?
Il existe plus de 200
Les enzymes de restriction sont issus enzymes de restriction !
À quoi de bactéries. Leur rôle est de couper
l’ADN étranger des virus qui infectent
les bactéries, les bactériophages. Ainsi,
Chacun porte un nom.
Les différentes étapes pour analyser l’ADN
servent-
les enzymes de restriction empêchent
les virus de se multiplier et permettent
aux bactéries de survivre. échantillon d’ADN Cellules
1 (sang, salive, bulbe prélevées
ils ? Bac
t ér i o p
hage
de cheveux, sperme…) à partir de
l’échantillon
L’ADN doit être
Bactérie : organisme extrait du noyau
vivant constitué des cellules
d’une seule cellule.
Enzymes :
2 Mélange des
échantillons
protéines qui permettent ADN
des réactions biochimiques. +
Enzymes enzymes :
de restriction : Pst 1
protéines particulières ie
tér
ayant la capacité de Bac Hind III
couper les molécules d’ADN
au niveau de séquences Pst 1 + Hind III +
spécifiques constituées de 4 Eau purifiée pour diluer
à 8 paires de bases, les sites Des ciseaux chimiques et ajuster la concentration
de restriction. de tous les mélanges
Les enzymes de restriction
pour découper l’ADN +
Solution tampon pour
sont des outils très utilisés
en génie génétique et dans Les “ sites de reconnaissance ” faire agir les enzymes dans
les laboratoires de biologie des enzymes de restriction des conditions optimales
=>
moléculaire pour analyser sont des palindromes, ce qui GAATTC Les microtubes sont mis au
et manipuler l’ADN. signifie qu’ils peuvent se lire
dans les deux sens selon CTTAAG 3 bain-marie, afin de laisser agir
le brin considéré. <= les enzymes. La température
du bain-marie varie selon les
lecture de gauche à droite enzymes utilisés.
G A A T T C
financée grâce aux dons du Téléthon
C T T A A G Les enzymes
lecture de droite à gauche
“ digèrent ” l’ADN.
Les enzymes de restriction permettent Compte tenu de la taille des génomes, les enzymes de restriction permettent
de découper l’ADN en des sites précis. de couper l’ADN en petits morceaux plus faciles à manipuler et à étudier.
ADN d’un individu
Dépôt des échantillons analyser
1 d’ADN dans les puits 2 Migration des fragments
l’ADN
fragment A d’un gel d’agarose
- +
coupure
de l’enzyme
-
les enzymes
de restriction
100 V
100 V Les fragments se déplacent dans
fragment B le gel en fonction de leur taille vers
le pôle positif, car l’ADN est chargé
négativement. Plus le fragment est
+ petit, plus il migre vite (et donc
loin), car il est moins encombrant.
Empreinte
génétique :
école Estienne, école de l’ADN, 2008
fragment C mesure de certaines
portion d’ADN spécifiques
Révélation de la migration
3 sur table UV ou lumière bleue
à chaque individu à l’aide
d’une électrophorèse.
Un produit spécifique
fragment D se fixe à l’ADN et le rend à l’exception des vrais
La position de chaque bande est fluorescent sous les rayons jumeaux, la probabilité
spécifique à chaque échantillon UV ou la lumière bleue. pour que deux êtres aient la
et permet de caractériser leur même empreinte génétique
contenu en ADN. B est quasiment nulle
Indicateurs de taille ;
(1 sur 3 milliards).
la longueur est donnée
La longueur d’un
en paire de bases (pb). D électrophorèse :
séparation des molécules
Illustrations :
[email protected] fragment particulier
(ARN, protéines ou ADN),
peut varier d’un Puits de A
10 000 sous l’effet d’un champs
individu à l’autre. départ C Tous les fragments électrique, en fonction de
6 000 d’une même taille leur taille et/ou de leur
4 000 forment une ligne charge électrique
repérable sur le gel.
2 000
1 000
Les enzymes de restrictions peuvent
500
être utilisés pour : • Isoler un gène
afin de comprendre sa fonction
• Detecter une mutation à l’origine
Front de migration
d’une maladie génétique, déterminer
le type de mutation et son importance
Criminalistique Dans quels domaines utilise-t-on Recherche ecole-adn @ genethon.fr
les enzymes de restriction? Biotechnologies 01.69.47.11.70
