LYMPHOCYTES NK

Cellules cytotoxiques naturelles

DJIDJIK Réda

Université d’Alger I Benyoucef Benkhedda

Faculté de Pharmacie d’Alger
Laboratoire d’immunologie
 Plan:
▪ Introduction
▪ Définition
▪ Ontogénie
▪ Localisation
▪ Phénotype
▪ Sous populations
▪ Reconnaissance de la cellule cible
▪ Activation
▪ Conséquences de l’activation
▪ Mécanismes d’échappement
▪ Exploration au laboratoire
▪ Conclusion
 Introduction
• Les cellules NK (naturelles-tueuses) sont des lymphocytes de
grande taille et possédant de nombreuses granules : Elles
constituent le troisième type de lymphocytes.

• Elle proviennent de la moelle osseuse : Précurseur médullaire

commun aux lymphocytes T et B

• Elles font partie du système immunitaire inné.

• Les cellules NK n’expriment pas le récepteur des lymphocytes T ni

d’anticorps de surface comme les lymphocytes B.

• Représentent 5 à 15 % des lymphocytes sanguins et retrouvées

aussi dans les vaisseaux lymphatiques.

• Essentiellement circulantes mais peuvent se localiser dans les

organes lymphoïdes secondaires et les tissus périphériques.
 Introduction
• Ces cellules reconnaissent et tuent des cellules
anormales (infectées par des virus, malades ou
cancéreuses) = cellules cytotoxiques (Immunité innée de
type cellulaire).

• Contrairement aux lymphocytes T cytotoxiques qui ont

besoin de temps pour être activés, les cellules NK sont
prêtes à protéger le corps avec une réponse immunitaire
rapide en attendant le développement de la réponse
immunitaire acquise.
 Introduction CD7

CD2
CD16
NK
• Origine hématopoïétique
CD56
• 5-15% des cellules mononuclées du sang circulant

• Expriment CD7, CD2, CD56, CD16

• Immunité innée = capables sans immunisation préalable et de façon très rapide :

• de cytotoxicité (d’où leur nom de NK)

• de prod° de cytokines/chimiokines recrutant /activant cellules non spécifiques
(PN, MΦ) et les LT.

• Trois grands rôles, réponse aux :

– Cellules infectées par virus

– Tumeurs
– Allogreffes
 Définition
Les lymphocytes NK sont définis par des critères
morphologiques phénotypiques et fonctionnels.
1. Morphologie
❑ Grands lymphocytes contenant des granules riches en perforines et
granzymes (LGL), libérées lors de la phase effectrice de la cytotoxicité.

LT ou LB Cellule NK

2. Phénotype
❑Ils n’expriment ni le récepteur spécifique de l’antigène des lymphocytes T
(TCR/CD3), ni les immunoglobulines membranaires des lymphocytes B
(BCR/ Igα Igβ).

❑Ils sont définis phénotypiquement par une combinaison de marqueurs

présents à leur surface dont les deux plus caractéristiques mais non
spécifiques sont : le CD16 et le CD56.
 Définition
3. Fonction
❑ Cellule cytotoxique : Cytotoxicité naturelle, capacité de tuer des
cellules tumorales ou infectées par un virus en l'absence de stimulation
préalable : Dégranulation de molécules cytotoxiques (perforine,
granzymes, etc.).

Cette activité cytotoxique n'est pas restreinte par le CMH; les cellules NK
sont au contraire inhibées par les molécules HLA de classe I.

Autre activité cytotoxique des cellules NK: cytotoxicité cellulaire

dépendante des anticorps (ADCC) et induction de l'apoptose (voie
Fas /Fas-ligand).

❑ Les cellules NK possèdent également une importante fonction de

sécrétion de cytokines, interféron g (IFNg) et (TNF-alpha) en particulier .
 Ontogénie
= Développement des cellules NK
❖ La différenciation des cellules NK n'est pas encore
clairement définie.

❖ Leur différenciation s'effectuerait dans la moelle osseuse

à partir d’un progéniteur hématopoïétique lymphoïde
commun aux LT et LB, au contact du microenvironnement
médullaire.

❖ Plusieurs cytokines sont impliquées:

- Flt3-ligand et c-kit ligand à un stade précoce.

- IL-15, et plus accessoirement l’IL-21, pendant le
développement et la différenciation du compartiment NK.
Flt3: fms like tyrosine kinase 3
 Développement des cellules NK

IL-15
c Kit L
Flt3 L

NKR
NKR
HSC = cellule souche hématopoïétique
CLP = Progéniteur lymphoïde commun
NKP = Progéniteur NK
CD117 = c Kit
CD122 = IL15Rβ
CD127 = IL7Rα
CD244 = NKR
 Maturation des cellules NK

IL-15 cytokine primordiale pour la maturation et le maintien vie

en périphérie.
NKP: NK cells progenitor
HSC: Hematopooetic stem cell
ELP: Early lymphoïd progenitor
 Localisation des cellules NK

• Sang
• Organes lymphoïdes secondaires
• Tissus périphériques non lymphoïdes
 Phénotype
– TCRneg, BCRneg,CD3neg, CD19neg,CD2pos,CD7pos

– Récepteurs de reconnaissance de la cible.

– Récepteurs de cytokines et chimiokines.

– Deux sous-groupes :

• CD16low/neg CD56hi

- 10% dans sang, 75% dans ganglions lymphatiques (CCR7pos)

- Faiblement/Non cytotoxiques
- Produisent cytokines

• CD16hi CD56low

- 90% dans sang (CXCR1pos)

- Cytotoxiques (perforinepos dans les granules préformées)
- Récepteurs aux chimiokines inflammatoires =˃ Tissus périphériques
 Sous populations NK
NK CD56 dim CD16 bright NK CD56 bright CD16 dim
CD56bright

CD16neg/di CD56dim CD16bright

m
CD56bright NKG2D CD56dim NKG2D

CCR7 CXCR1
KIR
KIR

CD56bright CD56dim
CD94/ NCR CD94/ NCR
NKG2A NKG2A

Cytotoxicité Faible production Cytotoxicité

basse de cytokines élevée
Forte
production de
cytrokine
 Maturation des cellules NK

CD94 NKG2A + CD94 NKG2A +/-

CD56hi CD56 low
C-kit +/- C-kit -
KIR +/- KIR +
CD16- CD16+
 Sous populations NK
NK Utérins:

• 70-80 % des lymphocytes de la decidua

(1er trimestre).
CD56++++
KIR

• CD56 bright CD16 négatif. inhibiteurs++++

• Expression plus forte de CD56 par rapport

aux NK sanguins CD56bright.

• Expriment fortement les récepteurs CD94/NKG2A++

inhibiteurs : KIR et CD94-NKG2A.

• Nettement moins cytotoxiques.

• Rôle dans la tolérance fœto-maternelle.

 Reconnaissance de la cible

❖ Pas de récepteur spécifique de l’antigène.

❖ Les NK expriment de façon constitutive et simultanée des

récepteurs activateurs et inhibiteurs qui régulent leur activation.

❖ La combinaison de ces récepteurs constitue le répertoire des

NK: chaque cellule possède sa propre combinaison chez le

même individu.
 Cellules
T8 tueuses NK
Reconnaissance de la cible
R act R inh
CMH-I CMH-I

cible cible

• Non restreinte à un complexe CMH-peptide

• Balance entre :

• Récepteurs inhibiteurs (tolérance au soi) ligand = CMH-I

• Récepteurs activateurs (lyse cible) ligand = non soi / soi altéré NK

• Répertoire NK :

• Chaque individu diffère dans nb et type de récepteurs exprimés par ses NK

• Chaque NK a une combi ≠ de R inh et R act, la plupart des NK a au moins 1 R inh
• Existence d’une tolérance au soi = « nos propres NK ne nous attaquent pas »
Activation ou inhibition de la cellule NK: balance
de signaux

NK NK
Activatory Inhibitory
signals signals

Inhibitory signals Activatory signals

NO LYSE LYSE
Production
TARGETS of cytokines

Tumor cells Virus infected cells

 Activation ou inhibition de la cellule NK: balance
de signaux
Récepteurs activateurs Récepteurs
inhibiteurs

- Signal activateur : motifs ITAM et des kinases (immune receptor tyrosine-based activation motif)
- Signal inhibiteur recrute des phosphatases via les ITIM (immune receptor tyrosine-based inhibitory motif)
 Récepteurs de reconnaissance
de la cellule cible

Récepteurs
NK

Inhibiteurs Activateurs

KIR CD94/NKG2A KIR

activateurs
CD94/NKG2C NKG2D NCR CD16
inhibiteurs CD94/NKG2B
 Les récepteurs NK inhibiteurs
Les principaux récepteurs inhibiteurs des cellules NK ont pour ligands des
molécules HLA de classe I. Ce sont essentiellement :

❑ Les Killer Immunoglobulin-like Receptors (KIR) inhibiteurs

❑ Le récepteur CD94/NKG2A et B.
 Human NK Inhibitory Receptors for MHC Class I
HLA-A,B,C
E,F,G
HLA-C
Ligands (S77N80)
HLA-G ? HLA-Bw4 HLA-A ? HLA-E

EC
TM +
IC

KIR2DL1 KIR2DL2/3 KIR2DL4 KIR2DL5A KIR3DL1 KIR3DL2 KIR3DL3

CD158a CD158b CD158d KIR2DL5B CD158e1 CD158k CD94/NKG2A
allele of CD94/NKG2AB
KIR3DS1

ITIM Ig- C-l ectin + K/R

doma in doma in
LILRB1
CD85j
 Certains KIR (Récepteurs inhibiteurs)
reconnaissent certains CMH-I

NK

R act R inh = Toutes les

KIR Spécificité HLA KIR combinaisons ne
sont pas possibles
Classe I !!!
KIR2DL1 HLA-C groupe 2
cible
KIR2DL2/3 HLA-C groupe 1

KIR3DL1 HLA-Bw4

KIR3DL2 HLA-A3, HLA-A11

 Les récepteurs NK activateurs
KIR activateurs
❑ Homologues des KIR inhibiteurs.
❑ Ligands: CMH classe I.
❑ Partie intracytoplasmique courte « short »: Association à une protéine
adaptatrice (DAP 12) possédant des motifs ITAM pour la transduction du signal.

CD94/NKG2C
❑ De la même façon qu'il existe pour les KIR des couples de récepteurs
homologues inhibiteurs et activateurs, les récepteurs inhibiteurs CD94/NKG2A et B
possèdent un homologue activateur : CD94/NKG2C. Tout comme les récepteurs
CD94/NKG2A et B, il a pour ligand la molécule HLA-E.

NKG2D
❑ NKG2D est également un récepteur activateur important des cellules NK.

❑ Les ligands de NKG2D sont les molécules MHC class I-related Chain A
(MICA) et MICB, et les UL16-binding proteins (ULBP).

❑ Ces ligands sont surexprimés en cas de stress cellulaire, en particulier lors d'une
infection virale ou d'une transformation tumorale.
 Human NK Activatory Receptors

HLA-C ? ?
HLA-C ? ? HLA-A,B,C MICA, MICB
Ligands HLA-E
(Weak) (Weak) E,F,G ULBP

EC
TM K D D K D D K D D K D D K D D K D D D D R R D D K D D

IC
Y Y Y Y
x x x x
x x x x
M M M M

KIR2DS1 KIR2DS2 KIR2DS3 KIR2DS4 KIR2DS5 KIR3DS1 CD160 NKG2D CD94/NKG2C, E

CD158h CD158j CD158i CD158g CD158c DAP12 CD2? DAP10 DAP12
DAP12 DAP12 DAP12 DAP12 DAP12

Y Bi nding
ITAM x doma in to Ig- C-l ectin
x doma in GPI
M p85 PI3K doma in
 Les récepteurs NK activateurs
Les récepteurs de la cytotoxicité naturelle (NCR)

❑ Une autre famille importante de récepteurs activateurs est constituée par les
récepteurs de la cytotoxicité naturelle (NCR) : NKp30 (NCR3), NKp44 (NCR2) et
NKp46 (NCR1).

❑ Ces récepteurs, qui appartiennent à la superfamille des immunoglobulines.

Le récepteur NKp44 est exprimé sur les cellules NK activées.

❑ Les NCR sont capables d'enclencher la cytotoxicité ou la production de

cytokines en l'absence d'autre stimulation.

❑ Ligands décrits à ce jour: molécules d’origine virales (Hémagglutinines de

l’Influenza Virus ligands des récepteurs NKp44 et NKp46) ou exprimées par les
cellules transformées (MLL5 ligand du NKp44 ou B7-H6 ligand du NKp30).

MLL5: Mixed-Lineage Leukemia-5

 Natural Cytotoxicity Receptors (NCR)
Récepteurs spécifiques des cellules NK humaines
Toutes les NK Cellules NK activées Toutes les NK
Chromo 19 Chromo 6 Chromo 6
 Récapitulatif: Récepteurs de surface des cellules NK et leurs
ligands
Les Récepteurs Les Récepteurs
inhibiteurs activateurs
Ligands

Molécules Complexes Ag exprimés par

HLA I HLA E HLA I HLA E du stress: immuns la cellule
tumorale ou
MICA,
infectée par un
MICB, ULBP virus
KIR
IgG NCR
NKG2D
NKG2A CD94 NKG2C CD94
Récepteurs

ITAM CD16
ITIM
CD3 ζ DAP-12
DAP-12 DAP-12 DAP-12 RFcε γ ou CD3 ζ

KIR NK Protéines
adaptatrices
 Activation des cellules NK
Signaling through KIRs in NK lymphocytes

KIR-L KIR-S

DAP12 P Lck/Fyn
P ITIM (ITAM)

SHP1 P
ITIM
Syk/ZAP-70

Substrat

Inactivation Activation
P Substrat

Co-engagment of KIR-L and KIR-S resulted in an inhibitory signaling

 Activation des cellules NK

Une cellule du soi est protégée de la lyse NK car le signal

inhibiteur (CMH-I) l’emporte toujours sur l’activateur !

Education des cellules NK

au niveau Une
médullaire
cellule « suspecte » (qui n’exprime pas de CMH-I)
est lysée car aucun signal inhibiteur ne vient
= Licencing contrebalancer l’activateur

Une cellule allogénique est lysée car le CMH-I du non-soi

ne déclenche pas de signal inhibiteur
 Le « Missing-self » : la perte d’expression du CMH-I est
reconnue par les NK
- La réponse cytotoxique par les LTCD8 est restreinte par le CMH-I.
- Les cellules tumorales / infectées peuvent down-réguler l’expression du CMH-I pour
éviter d’être reconnues par les T8 cytotoxiques: Echappement aux LTCD8 mais ne
peuvent échapper aux cellules NK !

T8

T8 NK NK

DOES
KILLS KILLS NOT
KILL

cible cible cible

NK = stratégie complémentaire aux LT CD8 cytotoxiques pour lutter

contre les cellules du non-soi ou le soi altéré
 Activation des cellules NK
« Ce n'est pas l'absence de molécules du CMH de classe I qui
déclenche l'activation des lymphocytes NK mais la présence de
ligands activateurs non compensée par des signaux inhibiteurs
suffisants »

Notion d’équilibre / balance des signaux act et inh

Ainsi, la faible expression des molécules du CMH-I ne suffit pas à rendre certaines
cellules sensibles à la lyse NK, par exemple :

- Globules rouges
- Neurones
- Hépatocytes NK
Conséquences de l’activation des cellules NK :
Mécanismes effecteurs

- Lyse de la cible selon 3 systèmes :

-Perforine-granzyme
- Récepteurs de mort: Fas/FasL , TRAIL/TRAIL-R et TNF/TNFRI
- ADCC

- Synthèse de cytokines : TNF-a, IFN-g, GM-CSF :

- Orientation Th1
- Activation MΦ et des DC

- Synthèse de chimiokines inflammatoires : CCL3, CCL4, CCL5 :

- Recrutement MΦ
- DC immatures
- T activés
 Conséquences de l’activation des cellules NK :
Mécanismes effecteurs

Voie NK
perforine/granzyme Voie des
TNF
FasL TRAIL récepteurs de mort

Perforine

Granzyme B Fas DR4/5 TNFRI

Apoptose de la cible
 L’ADCC : cytotoxicité cellulaire dépendante
des Ac
- La cible est reconnue par l’Ac (IgG)
- Complexe cellule cible / Ac reconnu via partie Fc par un Fc-R à la surface du NK (FcgR-
III=CD16)
- Déclenchement de la lyse / dégranulation
 Mécanismes d’échappement

• Tumeurs :

- Synthèse de TGFb qui diminue l’expression de NKG2D (R activateur).

- Production de MICA/B solubles.

MIC soluble empêche la

liaison a MIC
membranaire qui est le
seul capable de
pleinement activer le R
NK act = pas d’activation
NK
 Mécanismes d’échappement

• Virus:
- UL16 virale séquestre ULBP dans cytoplasme = empêche expression membranaire.
- Expression de MICA/B solubles n’activant pas NKG2D (R activateur).

MICA/B, ULBP : ligands activateurs

exprimées par C/ séquestrés dans la
stressées (infectées cellule
par virus ou
tumorales) et
reconnues par les R
activateurs !
« Plus de ligands
activateurs = pas de NK
NK lyse »
La cellule NK n’est donc pas seulement un “ tueur ” du système immunitaire, mais
une cellule potentiellement capable par sa production de cytokines d’orienter
la réponse immunitaire adaptative.

NK
GMCSF, MIP1a,MIP1b

TNFa 2
T CD4+ IL-12, IL-15, IL-18, TNFb,
INFg IL1-b

1
Macrophage
Th1
Infection
Les cellules NK sont régulées par les cytokines et produisent des cytokines
 Cinétique de la réponse
immunitaire anti virale

T8 cytotoxiques Ac
IFN de type I
NK
T gd
 Exploration des cellules NK au laboratoire
Prélèvement sanguin:

• Frottis sanguin.

• Quantitative: Immunophénotypage
lymphocytaire par cytomètrie en flux (CMF):
Marquage CD16 et CD56.

• Fonctionnelle: cytotoxicité des NK

(Exemple: Expression de la perforine par CMF).
 CONCLUSION
Les cellules NK sont des lymphocytes ayant d’importantes propriétés
cytotoxiques et sécrétoires.

Leur exploration (phénotype et fonctions) est possible à partir d’un

simple prélèvement sanguin.

 L’activité cytotoxique de ces cellules, ne nécessitant ni immunisation

préalable ni présentation antigénique par le CMH-1, les rend
complémentaires des lymphocytes T cytotoxiques.

Les cellules NK participent à la défense anti-infectieuse et anti-

tumorale de l’organisme, en première ligne, mais aussi après
l’élaboration de la réponse immunitaire spécifique de l’antigène.

Elles sont régulées par un équilibre délicat entre des signaux

activateurs et inhibiteurs venant de leurs récepteurs membranaires.

L’utilisation de cytokines (IL-2, IL-15 et interféron-alpha) modulant

l’activité des cellules NK pourrait avoir des applications intéressantes en
thérapeutique anti-infectieuse et antitumorale.