TP : isolement des micro-organismes à partir des biofilms
Introduction
Le biofilm est composé d’agrégats De microorganismes, séparés par des espaces libres,
dépourvus de bactéries et parcourus par des courants aqueux ; véritables « canaux », ceux-ci y
assurent la circulation de fluides et permettent à la fois l’apport de nutriments aux bactéries
Et l’élimination de leurs produits de dégradation N’est-il pas un milieu homogène, mais un
environnement structuré qui Présente souvent une architecture complexe, très variable d’un
Bio film à l’autre selon les microorganismes qui le composent Et les conditions
environnementales
But
Isolement des microorganismes à partir des biofilm prélavé de cils de blé
Matériel utilise
Echantillon de blé cils 4 (produit fine farine et les produit grain et bio film
écouvillon)
Eau physiologie
Tube aussi
Bac banse
Les boites de pétri
pipettes pasteur
Mode opératoire :
Préparer solution mère (produit fine les produit grain)
Prélever 10 g échantillon de blé grain et 10 g de produite fine Dun flacon stérile et
ajouté 9 ml eau physiologie Homogénéisé
Solution mère 1 : produit fine
10-1 A partir de la dilution solution mère
10-2 A partir de la dilution 10-1 prélevé Aseptiquement à l’aide d’une pipette en verre
graduée et stérile 1ml de la dilution mère Et déposer dans un tube contenant au
préalable 9ml d’eau physiologie
10-3 A partir de la dilution 10-2, prélever 1ml et déposer dans
Un tube contenant au préalable 9ml d’Eau physiologie
10-4 A partir de la dilution 10-3 prélever 1ml et déposer dans Un tube contenant au
préalable 9ml d’Eau physiologie
Solution mère 2 : produite grain
La même étape 4 tube aussi Suspension (10-1/10-2/10-3/10-4)
Solution 3 : biofilm écouvillon
10-1 Ajouter l’écouvillon à un tube contenant 9 ml d’eau physiologique
10-2 A partir de la dilution 10-1 prélevé Aseptiquement à l’aide d’une pipette en verre
graduée et stérile 1ml de la dilution mère Et déposer dans un tube contenant au
préalable 9ml d’eau physiologie
Produite grain
Manipulation
1. milieu GN
coule le milieu GN dans une boîte de Pétri stérile est prélevé ensuite 1 ml de dilution
10-4 et ensemencement en surface
Les boîtes sont ensuite incubées à l’étuve 37°C pendant 24 h
2. milieu TSA
coule le milieu TSA dans une boîte de Pétri stérile est prélevé ensuite 1 ml de dilution
10-4 et ensemencement en surface
Les boîtes sont ensuite incubées à l’étuve 37°C pendant 24 h
3. milieu PDA
coule le milieu TSA dans une boîte de Pétri stérile est prélevé ensuite 1 ml de dilution
10-4 et ensemencement en surface
Les boîtes sont ensuite incubées à l’étuve 25°C pendant 5-7 jours
4. milieu PCA
1 ml de dilution 10-4 est prélevé puis introduit dans une boîte de Pétri stérile. On y
Coule ensuite 10 à 15 ml de PCA préalablement préparé
L’inoculum et le PCA sont alors homogénéisés par des mouvements d’huit de la boîte
Pétri puis séchés et solidification
Les boîtes sont ensuite incubées à l’étuve 30°C pendant 24 h
Lecture
Milieu Produit grain De blé cils 4 photo
Nombre de colonie
GN indénombrable
La forme cercle
Nombre de colonie
TSA indénombrable
Forme ronde ondulée
Surface lisse une seule colonie
PDA plus grande coloured vert halo
blanche
10 colonie Blanc jaunâtre
forme cercle ronde ondulée
PCA
Purification
Milieu PDA
Purification
dan le
milieu PDA
