République Algérienne Démocratique et populaire
institut National Industrie Agro-alimentaire Sidi Abdelkader Blida
Compte rendu
Tp n°1 : Recherche et dénombrement des coliformes totaux et fécaux
établi le: /11/2022
objectif :
se familiariser avec les méthodes de procédures de rechercher et dénombrement les
coliformes fécaux et totaux dans l’eau et de répondre à l’un des critère microbiologique
relatif à l’eau de distribution traitée .
plan :
*Introduction
*Matériels et méthode
*Interprétation
*conclusion
Réaliser par :
*SAID ABDESSAMED Yasmina
*TOUHAMI Yousra
Encadré par : Mme HENDI
Introduction :
l’eau est l’élément le plus demandé et le plus essentiel dans la vie .On l’utilise
quotidiennement pour différentes application ,par exemple l’alimentation et le lavage des
aliments ou de matériel … .Et pour ces buts ou d’autre l’eau doit représente des qualités
microbiologique et physico-chimique satisfaisantes.
Dans ce tp nous somme plus intéressant par la recherche dans l’échelle microbiologique,
l’orientation de tp été vers réaliser des analyses sur l’eau et la recherche de coliformes fécaux
et totaux ce qui permet de signaler une contamination fécale d’origine animale, c’est-à-dire
une évaluation de risque de présence des germes pathogènes .
l’objectif de ce tp est de se familiariser avec les méthodes de procédures de rechercher et
dénombrement les coliformes fécaux et totaux dans l’eau et de répondre à l’un des critère
microbiologique relatif à l’eau de distribution traitée .
-coliformes totaux à 37 C° Absence/100ml
-coliforme fécaux à 44 C°Absence/100ml.
1.Définition de Coliformes :
Les coliformes se présentent sous forme de Baciles Gram négatifs( BGN) ,non
sporogènes ,oxydase négative ,aéro-anaérobies facultatifs ,capables de croitre en présence de
sels biliaires et capable de fermenter le lactose avec production d’acides et de gaz en 24 à 48
heures à 37C°.
les coliformes sont considérés comme indice de contamination fécale .
la recherche et le dénombrement des coliformes se fait :
soit en milieu liquide sur BCPL par la technique du NPP(Nombre le plus probable).
soit par filtration sur membrane à 0,45µ en milieu solide.
2.Technique en milieu liquide sur BCPL :
La technique en milieu liquide fait appel à deux tests consécutifs à savoir :
Le test de présomption :réserver à la recherche des Coliforme totaux
Le test de confirmation :encore appelé test Schubert et réserver à la recherche des
Coliforme fécaux à partir des tubes positifs du test de présomption.
2.1Test de présomption :
a partir de l’eau à analyser ,porter aseptiquement :
*50ml dans un flacon contenant 50ml de milieu BCPL D/C muni d’une cloche de
Durham.
*5 fois 10ml dans 5 tubes contenant 10ml de milieu BCPLD/C muni d’une cloche du
Durham.
*5 fois 1ml dans 5 tubes contenant 10ml de milieu BCPL S/C muni d’une
cloche du Durham.
Chassez le gaz présent éventuellement dans les cloches de Durham et bien mélanger le
milieu et l’inoculum.
Incubation :
L’incubation se fait à 37C° pendant 24à 48h.
Lecture :
sont considérés à la fois comme positifs les tubes présentant à la fois :
*un dégagement gazeux (supérieur au 1/10 de la hauteur de la cloche).
*un trouble microbien accompagné d’un virage du milieu au jaune ( ce qui constitue le
témoin de la fermentation du lactose présent dans le milieu).
la lecture finale se fait selon les prescription de la table du NPP en annexe .
2.2 Test de confirmation :
Le test de confirmation est basé sur la recherche de Coliformes thermo tolérants .
Les tubes de BCPL trouvés positifs lors du dénombrement des coliformes totaux feront
l’objet d’un repiquage à l’aide d’une pipette pasteur bouclée dans tube contenant le milieu
Schubert muni d’une cloche de Durham , comme l’indique le schéma :
Chasser le gaz présent éventuellement dans les cloches de Durham et bien mélanger le
milieu et l’inoculum.
Incubation :
l’incubation se fait cette fois-ci à 44C° pendant 24h.
Lecture :
Sont considérés comme positifs, les tubes présentant à la fois :
*un dégagement gazeux .
* un anneau rouge en surface ,témoin de la production d’indole par Coliformes fécaux
après adjonction 2à3 goutte de réactif Kowacs.
la lecture finale s’effectue également selon les prescription de la table du NPP en tenant
compte du fait que coliforme fécal est à la fois producteur de gaz d’indole à 44C°.
Illustration de test de présomption:
Incolum Test de présomption Nbre caractéristique
150ml + 1
510ml +
+
+ 4
+
-
51ml +
+
- 3
+
-
Tableau récapitulatif
Le nombre caractéristique est donc « 143 »,ce qui correspond sur la table de Mac Grady
au nombre 28.
On considère alors qu’il y a 28 coliformes par 100mld’eau à analyser.
Illustration de test de confirmation:
En reprenant l’exemple précédent relatif au dénombrement des coliformes totaux ,cela
suppose que nous avons 8 tubes à repiquer à savoir :
*le flacon BCPL D/C
* 4 tubes sur 5 de BCPL D/C .
*3 tubes sur 5 de BCPL S/C
Inoculum Test de Nbre Test de Nbre
présomption caractéristique confirmation caractéristique
Gaz Indole
150ml + 1 + + 1
510ml + 4 + +
+ - -
+ + + 2
+
-
51ml + 3 + +
+ - - 1
-
+
-
Tableau récapitulatif
Le nombre caractéristique relatif au dénombrement des Coliformes fécaux est donc
« 121 » , ce qui correspond sur la table du NPP au chiffre 7.
le résultat final sera donc de :
28 Coliformes totaux dans 100ml d’eau à analyser .
7 Coliformes fécaux dans 100ml d’eau à analyser .
Conclusion :
a partir des analyses qu’on les fait ,on peut évaluer la qualité de cette eau , les résultats
d’analyse de coliforme confirment la pollution et la contamination (d’origine animal) de
cette eau.
