Corrigé type d’examen de: Méthodes d’extraction, conservation et d’analyses des

molécules bioactives
Master 1 : Biochimie (2019/2020)
Q1 : Extraction des huiles essentielles.
a- L’hydrodistillation est la méthode la plus utilisée pour extraire les huiles essentielles,
car la vapeur d’eau permet l’entrainement des molécules odorantes après éclatement
des cellules végétales. En effet, l'eau est une molécule polaire, et les huiles
essentielles sont peu polaires, c'est pourquoi l'huile essentielle est peu soluble dans
l'eau, ce qui facilite la séparation des deux phases. (1pts)
b- Montage expérimental de l’hydrodistillation (4pts)

Appareil d’hydrodistillation type CLEVENGER

c- Principe d’extraction et de séparation en hydrodistillation (2pts)

La vapeur d’eau produite va entraîner avec elle un composé donné selon un phénomène
physique particulier: la création d’un azéotrope (mélange de deux liquides qui bout à
température fixe et ne se distille pas en bouillant). Il s’agit en fait d’un mélange de
composés, non miscibles, (l’eau et une molécule odorante). La vapeur d’eau chargée en
molécules organiques est condensée puis récupérée. Le liquide obtenu est appelé distillat. Il y
a donc séparation de deux phases: l’une aqueuse et l’autre organique, cette dernière contenant
le composé à extraire Pour récupérer l’huile essentielle, il faut procéder à une extraction
liquide-liquide (séparation par différence de densité).
Q2 : Extraction liquide-liquide (6pts)
L’extraction liquide-liquide est basée sur l’affinité de la molécule à extraire vis-à-vis du
solvant d’extraction. En effet durant l’extraction, il s’établie un équilibre de partage suivant
un coefficient appelé coefficient de partage K. Les molécules à extraire migrent donc de la
phase d’origine vers la phase organique (solvant).
La séparation de la molécule recherchée du solvant d’extraction se fait suivant le degré de
volatilité. Etant donné que les solvants organique s’évaporent rapidement, ce qui permet de
séparer la molécule recherchée du solvant d’extraction (on utilise généralement le rotavapeur
dans un souci de protéger le manipulateur contre les vapeurs toxiques, et de pouvoir réutiliser
le solvant pour d’autres extractions.
Schéma des ampoules à décanter et la position des deux phases ainsi que les espèces
dissoutes pour une extraction liquide-liquide.
Deux cas de figures peuvent se présenter :
- Lorsque la densité de la phase organique > densité de la phase échantillon : lorsque
l’équilibre s’établie après une agitation vigoureuse, la molécule recherchée se trouvera
donc dissoute dans la phase organique qui sera en dessous de la phase échantillon.
- Dans le cas contraire, la molécule recherchée est toujours dissoute dans la phase
organique, qui sera en dessus de la phase échantillon. Cette dernière doit être éliminée
en premier pour pouvoir récupérer la phase organique+ molécule recherchée (extrait
brute).
(schéma des ampoule à décanter : voir polycopie de cours)

Q3 : La spectrophotométrie UV-Visible
La lecture des absorbances en spectrophotométrie UV-visible s’effectue à une longueur
d’onde appelée la longueur d’onde maximale ou l’absorbance est maximale.
La détermination expérimentale de cette longueur d’onde s’effectue grâce à la fonction
balayage du spectrophotomètre ABS=f(λ). (2.5pts)
La courbe en spectrophotométrie est un outil permettant de déterminer la relation reliant
l’absorbance à la concentration pour la molécule considérée, qui nous permettra de déterminer
la concentration de n’importe quel échantillon par une simple mesure de l’absorbance ou la
transmitance. (2.5pts)
Q4. Les fonctions d’un solvant d’extraction (2pts)
Un solvant est une substance qui a le pouvoir de former avec d’autres substances une solution
homogène. Les solvants sont ainsi utilisés pour extraire (industrie chimique, pétrochimique,
pharmaceutique et alimentaire), dissoudre (dégraissage) et suspendre (peintures) des
substances généralement insolubles dans l’eau ou pour modifier les propriétés physiques d’un
matériau (exp. Diluant).
Un solvant est un liquide qui a la propriété de dissoudre et de diluer d’autres substances sans
les modifier chimiquement et sans lui-même se modifier. C’est un liquide qui permet, après
ajouts des réactifs, d’obtenir une phase liquide homogène.