RÉPUBLIQUE ALGÉRIENNE DÉMOCRATIQUE ET POPULAIRE

__________________

MINISTÈRE DU COMMERCE

DIRECTION GÉNÉRALE DU CONTRÔLE

ÉCONOMIQUE ET DE LA RÉPRESSION
DES FRAUDES

Direction des Laboratoires d’Essais

et d’Analyses de la Qualité

MÉTHODES OFFICIELLES D'ANALYSES

MICROBIOLOGIQUES RELATIVES AUX EAUX

MINÉRALES ET AUX EAUX DE SOURCE
 Sommaire

1. Arrêté du 24 juin 2012 rendant obligatoire la méthode de dénombrement des

01
micro-organismes revivifiables dans l’eau. (JO n° 21 - 2013)

2. Arrêté du 31 décembre 2012 rendant obligatoire la méthode de recherche et de

dénombrement des organismes coliformes, organismes coliformes 05
thermotolérants et des escherichia coli présumés dans l’eau. (JO n° 31 - 2013)

3. Arrêté du 13 juin 2012 rendant obligatoire la méthode de recherche et de

dénombrement des spores de micro-organismes anaérobies sulfito-éductrices 12
(Clostridia). (JO n° 36 - 2013)

4. Arrêté du 5 décembre 2012 rendant obligatoire la méthode de détection et de

dénombrement de Pseudomonas aeruginosa dans l’eau par filtration sur 15
membrane. (JO n° 51 - 2013)
 12 Joumada Ethania 1434
20 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N° 21 23 avril 2013

ARRETES, DECISIONS ET AVIS

MINISTERE DU COMMERCE

Arrêté du 4 Chaâbane 1433 correspondant au 24 juin

2012 rendant obligatoire la méthode de
dénombrement des micro-organismes
revivifiables dans l'eau.
————

Le ministre du commerce,

01
12 Joumada Ethania 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N° 21 21
23 avril 2013

Vu la loi n° 05-12 du 28 Joumada Ethania 1426 ANNEXE

correspondant au 4 août 2005, modifiée et complétée,
relative à l'eau ; METHODE DE DENOMBREMENT DES
MICRO-ORGANISMES REVIVIFIABLES
Vu le décret présidentiel n° 10-149 du 14 Joumada DANS L'EAU
Ethania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant
nomination des membres du Gouvernement ; La présente méthode spécifie une technique de
dénombrement des micro-organismes revivifiables
Vu le décret exécutif n° 90-39 du 30 janvier 1990, présents dans l'eau par comptage des colonies se formant
modifié et complété, relatif au contrôle de la qualité et à la dans un milieu de culture nutritif gélosé après incubation
répression des fraudes ; en aérobiose à 36 °C et 22 °C.

Vu le décret exécutif n° 02-453 du 17 Chaoual 1423 La méthode vise à mesurer l'efficacité de

correspondant au 21 décembre 2002 fixant les attributions fonctionnement du procédé de traitement des
du ministre du commerce ; alimentations publiques en eau potable et, plus
généralement de tous les types d'eau. Elle est plus
Vu le décret exécutif n° 05-465 du 4 Dhou EL Kaada particulièrement applicable à l'analyse des eaux
1426 correspondant au 6 décembre 2005 relatif à destinées à la consommation humaine, y compris
l'évaluation de la conformité ; des eaux en récipients fermés et des eaux minérales
naturelles.
Vu l'arrêté interministériel du 22 Dhou El Hidja 1426
correspondant au 22 janvier 2006, modifié et complété, 1. DÉFINITION
fixant les proportions d'éléments contenus dans les eaux
minérales naturelles et les eaux de source ainsi que Pour les besoins de la présente méthode, la définition
les conditions de leur traitement ou les adjonctions suivante s'applique :
autorisées ;
Micro-organismes revivifiables : Toute bactérie,
Vu l'arrêté du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet aérobie, levure ou moisissure, capable de former des
1994, modifié et complété, relatif aux spécifications colonies dans le milieu spécifié et dans les conditions
microbiologiques de certaines denrées alimentaires ; d'essai décrites ci-dessous.

2. PRINCIPE
Arrête :
Ensemencement, par mélange dans un milieu de culture
Article 1er. — En application des dispositions de
spécifié coulé dans des boîtes de pétri, de volumes
l'article 19 du décret exécutif n° 90-39 du 30 janvier 1990,
mesurés d'un échantillon ou de ses dilutions. Incubation
modifié et complété, susvisé, le présent arrêté a pour objet
d'un jeu de boîtes à 36 °C pendant 44 h et d'un autre jeu à
de rendre obligatoire la méthode de dénombrement des
22 °C pendant 68 h.
micro-organismes revivifiables dans l'eau.
Calcul du nombre d'unités formant des colonies par
Art. 2. — Pour le dénombrement des micro-organismes
millilitre (UFC/ml) d'échantillon à partir du nombre de
revivifiables dans l'eau, les laboratoires du contrôle de la
colonies formées dans le milieu.
qualité et de la répression des fraudes et les laboratoires
agréés à cet effet, doivent employer la méthode jointe en
annexe du présent arrêté. 3. APPAREILLAGE ET VERRERIE

Cette méthode doit être utilisée par le laboratoire Matériel courant de laboratoire de microbiologie et
lorsqu'une expertise est ordonnée. notamment :

Art. 3. — Le présent arrêté sera publié au Journal

3.1 Appareillage pour la stérilisation en chaleur
officiel de la République algérienne démocratique et
humide (autoclave) ;
populaire.
3.2 Étuve capable de maintenir une température de
Fait à Alger, le 4 Chaâbane 1433 correspondant au 24
(36 ± 2) °C ;
juin 2012.
3.3 Étuve capable de maintenir une température de
Mustapha BENBADA. (22 ± 2) °C ;

02
 12 Joumada Ethania 1434
22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N° 21 23 avril 2013

3.4 Boîtes de pétri en verre ou en matière plastique Ajouter les composants ou le milieu complet
de diamètre 90 mm ou 100 mm ; déshydraté, à l'eau et dissoudre par chauffage.Ajuster le
pH, si nécessaire, de façon qu'après stérilisation il soit de
3.5 Bain d'eau ou équipement similaire, capable de 7,2 ± 0,2 à 25 °C.
maintenir une température de (45± 1) °C ;
Répartir le milieu par volumes de 15 ml à 20 ml dans
3.6 Appareil pour le comptage des colonies muni d'un des tubes, flacons ou autres récipients. Pour conserver des
système d'éclairage sur fond noir. volumes plus importants, utiliser des récipients de
capacité allant jusqu'à 500 ml. Stériliser à l'autoclave (3.1)
4. ÉCHANTILLONNAGE à (121 ± 3) °C pendant (15 ± 1) min.

Prélever les échantillons d'eau conformément aux

Pour l'emploi, faire fondre le milieu, le laisser refroidir
instructions d'échantillonnage, de manipulation et de
et le maintenir à (45 ± 1) °C au moyen du bain d'eau (3.5).
conservation.
Il est recommandé de ne pas garder le milieu plus de 4 h à
Analyser l'eau fournie en récipients fermés, y compris
45 °C, après quoi le milieu doit être rejeté.
les eaux minérales naturelles, dans les 12 h suivant
l'embouteillage, et les maintenir à une température de
6. MODE OPÉRATOIRE
(5 ± 3) °C durant cette période.
6.1 Préparation et ensemencement
5. MILIEUX DE CULTURE ET DILUANTS
Préparer l'échantillon, procéder aux dilutions et
5.1 Composants de base ensemencer les milieux de cultures selon la méthode de
dénombrement des micro-organismes sur milieu de
Pour la préparation du milieu, utiliser des composants culture, lignes directrices générales.
de qualité uniforme et des produits chimiques de qualité
analytique, ou bien utiliser un milieu de culture Utiliser la méthode par incorporation (la méthode de
équivalent complet déshydraté et suivre les instructions dénombrement des micro-organismes sur milieu de
du fabricant. culture, lignes directrices générales).

Placer un volume de la prise d'essai (ou de ses dilutions)

Pour préparer le milieu, utiliser de l'eau distillée dans un n'excédant pas 2 ml dans la boîte de pétri, ajouter 15 ml à
appareil en verre et exempte de substances pouvant 20 ml de milieu fondu (5.3) et mélanger avec précaution
inhiber la croissance dans les conditions de l'essai. par rotation lente.

Laisser le milieu se solidifier. Le temps entre l'addition

Note : L'utilisation de produits chimiques d'autres
de la prise d'essai (ou ses dilutions) et l'addition du milieu
qualités est permise, sous réserve de démontrer qu'ils ont
fondu ne doit pas excéder 15 min. Ensemencer au moins
une performance égale pour l'essai.
une boîte par température d'incubation.

5.2 Diluant 6.2 Incubation et examen

Retourner les boîtes et incuber un jeu à (36 ± 2) °C
Pour les dilutions, utiliser le diluant à base de peptone pendant (44 ± 4) h. Incuber l'autre jeu à (22 ± 2) °C
indiqué dans la méthode de dénombrement des pendant (68 ± 4) h. Examiner les boîtes aussitôt qu'elles
micro-organismes sur milieu de culture, lignes directrices sont retirées des étuves. Si cela n'est pas possible, les
générales. conserver à (5 ± 3) °C et les examiner dans les 48 h.
Rejeter toute boîte présentant une croissance confluente.
5.3 Gélose à l'extrait de levure
6.3 Comptage des colonies
Tryptone (Peptone de caséine, pancr.).................... 6,0 g

Extrait de levure déshydraté.................................... 3,0 g Pour chaque température d'incubation, et selon les
procédures décrites dans la méthode de dénombrement
Gélose en poudre ou en paillettes................. 10 g à 20 g des micro-organismes sur milieu de culture, lignes
(en fonction du pouvoir gélifiant) directrices générales, compter les colonies présentes dans
chaque boîte et calculer le nombre estimé d'unités formant
Eau .................................................................... 1000 ml les colonies présentes dans 1 ml d'échantillon.

03
12 Joumada Ethania 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N° 21 23
23 avril 2013

7. EXPRESSION DES RÉSULTATS

Exprimer les résultats sous la forme du nombre d'unités

formant des colonies par millilitre (UFC/ml) d'échantillon
pour chaque température d'incubation.

En l'absence de colonie dans les boîtes ensemencées

avec les volumes d'essai de l'échantillon non dilué,
exprimer le résultat comme étant non détecté dans un
millilitre. Si les boîtes ensemencées avec les plus fortes
dilutions utilisées contiennent plus de 300 colonies,
exprimer les résultats sous la forme > 300 ou
uniquement en tant que valeurs approximatives.

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7 Chaâbane 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N° 31 17
16 juin 2013

Art. 3. — Le présent arrêté sera publié au Journal

MINISTERE DU COMMERCE officiel de la République algérienne démocratique et
populaire.

Arrêté du 18 Safar 1434 correspondant au Fait à Alger, le 18 Safar 1434 correspondant au 31

31 décembre 2012 rendant obligatoire la décembre 2012.
méthode de recherche et de dénombrement des
organismes coliformes, organismes coliformes Mustapha BENBADA.
thermotolérants et des escherichia coli présumés ————————
dans l'eau.
———— ANNEXE

Le ministre du commerce, METHODE DE RECHERCHE ET DE

DENOMBREMENT DES ORGANISMES
Vu la loi n° 05-12 du 28 Joumada Ethania 1426 COLIFORMES, ORGANISMES COLIFORMES
correspondant au 4 août 2005, modifiée et complétée, THERMOTOLERANTS ET DES ESCHERICHIA
relative à l'eau ; COLI PRESUMES.
Vu le décret présidentiel n° 12-326 du 17 Chaoual 1433 (Méthode du nombre le plus probable)
correspondant au 4 septembre 2012 portant nomination
des membres du Gouvernement ; La présente méthode prescrit une technique de
recherche et de dénombrement des organismes coliformes,
Vu le décret exécutif n° 90-39 du 30 janvier 1990, des organismes coliformes thermotolérants et des
modifié et complété, relatif au contrôle de la qualité et à la escherichia coli présumés par culture dans un milieu
répression des fraudes ; liquide dans des tubes multiples et calcul de leur nombre
le plus probable dans l'échantillon.
Vu le décret exécutif n° 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 décembre 2002 fixant les attributions Cette méthode peut être appliquée à tous les types d'eau,
du ministre du commerce ; même ceux contenant une quantité appréciable de
particules en suspension.
Vu le décret exécutif n° 05-465 du 4 Dhou EL Kaada
1426 correspondant au 6 décembre 2005 relatif à Le choix des essais utilisés pour la recherche et la
l'évaluation de la conformité ; confirmation des organismes du groupe coliforme, y
compris escherichia coli, peut être considéré comme
Vu l'arrêté interministériel du 22 Dhou El Hidja 1426 faisant partie d'une séquence continue. L'importance de la
correspondant au 22 janvier 2006, modifié et complété, confirmation pour un échantillon donné dépend en partie,
fixant les proportions d'éléments contenus dans les eaux de la nature de l'eau et en partiel des raisons ayant conduit
minérales naturelles et les eaux de source ainsi que les à cet examen. Dans la pratique, la recherche d'escherichia
conditions de leur traitement ou les adjonctions coli présumés dans l'eau comme indiqué en (1.3) fournit
autorisées ; généralement une indication sur la pollution fécale
récente.
Vu l'arrêté du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet
1994, modifié et complété, relatif aux spécifications 1. DÉFINITIONS
microbiologiques de certaines denrées alimentaires ;
Pour les besoins de la présente méthode, les définitions
Arrête : suivantes s'appliquent.

Article 1er. — En application des dispositions de 1.1 Organismes coliformes :

l'article 19 du décret exécutif n° 90-39 du 30 janvier 1990, Organismes capables de former des colonies en
modifié et complété, susvisé, le présent arrêté a pour objet aérobiose à 35 °C ± 0,5 °C ou à 37 °C ± 0,5 °C sur un
de rendre obligatoire la méthode de recherche et de milieu lactosé sélectif et différentiel, avec production
dénombrement des organismes coliformes, organismes d'acide (et d'aldéhyde) dans les 24 h.
coliformes thermotolérants et des escherichia coli
présumés dans l'eau. 1.2 Organismes coliformes thermotolérants :

Art. 2. — Pour la recherche et le dénombrement des Organismes coliformes répondant à la définition donnée
organismes coliformes, organismes coliformes en (1.1), présentant les mêmes propriétés de fermentation
thermotolérants et des escherichia coli présumés dans dans les 24 h, à 44 °C ± 0,25 °C ou à 44,5 °C ± 0,25 °C.
l'eau, les laboratoires du contrôle de la qualité et de la 1.3 Escherichia coli présumés :
répression des fraudes et les laboratoires agréés à cet effet
doivent employer la méthode jointe en annexe du présent Organismes coliformes thermotolérants répondant à la
arrêté. définition donnée en (1.1) qui produisent, en plus, du gaz
à partir du lactose (et du mannitol) ainsi que de l'indole à
Cette méthode doit être utilisée par le laboratoire partir du tryptophane dans les 24 h, soit à 44 °C ± 0,25 °C,
lorsqu'une expertise est ordonnée. soit à 44,5 °C ± 0,25 °C.

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18 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N° 31 16 juin 2013

2. PRINCIPE 3.4 Milieux de confirmation

Ensemencement d'une série de tubes à essai contenant Utiliser un ou plusieurs des milieux suivants :
un milieu de culture sélectif lactosé avec des prises d'essai
de l'échantillon dilué ou non. 3.4.1 Milieux pour la production de gaz
Examen des tubes à essai après une incubation de 24 h 3.4.1.1 Bouillon (bilié) lactosé au vert-brillant
et de 48 h à 35 °C ou 37 °C ; repiquage à partir de chaque
tube à essai montrant une turbidité avec une production de 3.4.1.2 Milieu (EC)
gaz dans un milieu de confirmation plus sélectif et, si l'on
recherche les escherichia coli présumés, sur un milieu sur 3.4.2 Milieu pour la production d'indole ( Eau
lequel peut être prouvée la formation d'indole. tryptonée.)
Incubation de ces milieux de confirmation pendant 48 h
au plus à 35 °C ou à 37 °C pour la recherche d'organismes 3.4.3 Milieu pour tube à essai unique pour
coliformes, et à 44 °C pendant 24 h au plus pour les production de gaz et d'indole
organismes coliformes thermotolérants et les escherichia
coli présumés. Bouillon tryptosé au mannitol, au laurylsulfate et au
tryptophane.
Au moyen de tables statistiques, calcul du nombre le
plus probable (NPP) d'organismes coliformes, 3.5 Réactifs
d'organismes coliformes thermotolérants et de escherichia
coli présumés, susceptibles d'être présents dans 100 ml de 3.5.1 Réactif de Kovacs pour la recherche de l'indole
l'échantillon, à partir du nombre de tubes donnant des
résultats de confirmation positifs. 3.5.2 Réactif à l'oxydase pour la recherche de
l'oxydase
3. DILUANTS, MILIEUX DE CULTURE ET
RÉACTIFS 4. APPAREILLAGE

3.1 Produits de base Matériel courant de laboratoire microbiologique,

y compris :
Pour la préparation des milieux de culture et des
réactifs, utiliser des ingrédients de qualité homogène et 4.1 Four à air chaud pour stérilisation en chaleur
des produits chimiques de qualité analytique ; suivre les sèche et autoclave
instructions données dans "le tableau B" ( Pour des
informations sur la conservation, voir la méthode de Outre l'appareillage livré stérile, la verrerie et tout autre
dénombrement des micro-organismes sur milieu de matériel doivent être stérilisés conformément aux
culture). Il est possible également d'utiliser des milieux instructions données dans la méthode de dénombrement
complets déshydratés, suivre alors à la lettre les des microorganismes sur milieu de culture.
instructions les concernant.
4.2 Incubateur ou bain d'eau, réglable à 35 °C ±
Pour la préparation des milieux, utiliser de l'eau distillée
0,5 °C ou à 37 °C ± 0,5 °C.
ou de l'eau désionisée, exempte de substances susceptibles
d'inhiber la croissance bactérienne dans les conditions de
4.3 Incubateur ou bain d'eau, réglable à 44 °C ±
l'essai.
0,25 °C ou à 44,5 °C ± 0,25 °C.
3.2 Diluant
4.4 pH-mètre.
Pour préparer les dilutions de l'échantillon, utiliser l'un
des diluants recommandés dans le "tableau "B." Préparer 5. ÉCHANTILLONNAGE
le diluant conformément aux instructions données dans" le
tableau «B». Prélever les échantillons et les transmettre au
laboratoire conformément à la méthode de dénombrement
3.3 Milieux d'isolement des micro-organismes sur milieu de culture.
Utiliser un ou plusieurs des milieux de culture suivants : 6. MODE OPÉRATOIRE
Les instructions pour la préparation sont données dans 6.1 Préparation de l'échantillon et ensemencement
"le tableau B". des milieux
3.3.1 Bouillon lactosé
Pour la préparation de l'échantillon et des dilutions et
3.3.2 Bouillon de Mac Conkey l'ensemencement des milieux d'isolement avec les prises
d'essai, suivre les instructions données dans la méthode de
3.3.3 Milieu lactosé amélioré au glutamate et au dénombrement des micro-organismes sur milieu de
formiate culture. Ensemencer des tubes à essai contenant un milieu
d'isolement double concentration avec des prises d'essai
3.3.4 Bouillon au lauryltryptose (lactose) de 5 ml ou plus.

06
7 Chaâbane 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N° 31 19
16 juin 2013

6.2 Incubation des tubes Note 2 : L'utilisation d'un bouillon tryptosé au

mannitol, au laurylsulfate et au tryptophane permet de
Faire incuber les tubes ensemencés à 35 °C ± 0,5 °C ou montrer la production de gaz et d'indole par les
à 37 °C ± 0,5 °C pendant 48 h. escherichia coli.

6.3 Examen des tubes à essai Note 3 : La détection d'escherichia coli présumés est
considérée comme une preuve suffisante de pollution
Examiner les cultures en tubes à essai après incubation fécale. Toutefois, des essais complémentaires des
pendant 18 h à 24 h et considérer comme réactions escherichia coli peuvent être effectués, si nécessaire (6.5).
positives, les tubes présentant une turbidité due à une
croissance bactérienne et à la formation de gaz dans les Note 4 : Lorsqu'on procède à des repiquages de
cloches de Durham, ainsi qu'une production d'acide si le colonies sur membranes dans des tubes de milieux de
milieu d'isolement contient un indicateur de pH. Faire confirmation, il est préférable de repiquer également sur
incuber à nouveau les tubes à essai qui ne présentent boîte de milieu nutritif gélosé pour l'essai à l'oxydase.
aucun de ces changements et les examiner à nouveau
après 48 h pour rechercher une réaction positive. 6.5 Essai à l'oxydase

6.4 Essais de confirmation Certaines bactéries présentes dans l'eau peuvent, à de

nombreux égards, être conformes à la définition des
Il convient de noter que les réactions positives dans les organismes coliformes, mais elles ne peuvent produire de
tubes à essai contenant un milieu d'isolement n'indiquent gaz à partir du lactose qu'à des températures inférieures à
que la présence d'organismes coliformes présumés. Il est 37 °C. Elles donnent donc des résultats négatifs lors des
donc important de procéder à des essais de confirmation. essais de confirmation normalisés pour les organismes
coliformes et leur présence dans l'eau n'est donc pas
considérée comme significative. Parce que les espèces
6.4.1 Repiquage, incubation et examen
d'aéromones qui se présentent naturellement dans l'eau
interfèrent seulement à une température de 37 °C et en
Faire un repiquage à partir de chaque tube de milieu dessous, il est seulement nécessaire d'effectuer l'essai à
d'isolement présentant un résultat positif dans un ou l'oxydase en déterminant des coliformes.
plusieurs tubes contenant des milieux de confirmation
(3.4) pour la production de gaz et d'indole.
6.5.1 Effectuer l'essai à l'oxydase avec des cultures
pures d'organismes en faisant fermenter le lactose,
Note 1 : Si on utilise le bouillon lactosé le moins cultivés sur un milieu nutritif à la gélose, comme suit :
inhibiteur pour l'isolement, il est recommandé de repiquer
sur l'un des deux milieux de confirmation les plus sélectifs — placer 2 ou 3 gouttes de réactif à l'oxydase
[bouillon (bilié) lactosé au vert-brillant ou bouillon EC] nouvellement préparé (3.5.2) sur un papier filtre dans une
pour confirmation. boite de pétri ;
— avec une tige de verre, un coton-tige ou une boucle
6.4.1.1 Organismes coliformes
en platine (non en nickel-chrome), étaler une partie de la
culture sur le papier filtre préparé (voir note 4) ;
Pour confirmer la présence d'organismes coliformes,
faire incuber un tube à essai de bouillon (bilié) lactosé au — considérer l'apparition d'une coloration bleu violet
vert-brillant (3.4,1.1) à 35 °C ou à 37 °C et rechercher la foncé dans les 10 s comme une réaction positive.
production de gaz dans les 48 h.
Note 5 : Chaque fois qu'est employé le réactif à
6.4.1.2 Organismes coliformes thermotolérants et l'oxydase, effectuer des essais de contrôle avec des
escherichia coli présumés cultures d'organismes connues pour donner une réaction
positive (Pseudomonas aeruginosa) ainsi qu'avec une
Pour confirmer la présence d'organismes coliformes culture donnant une réaction négative (escherichia coli).
thermotolérants, faire incuber un autre tube à essai de
milieu EC (3.4.1.2) à 44 °C pendant 24 h et rechercher la 7. EXPRESSION DES RÉSULTATS
production de gaz.
A partir du nombre de tubes de milieu d'isolement ayant
Pour confirmer la présence d'escherichia coli présumés, donné des réactions positives aux essais confirmatifs,
faire incuber un tube à essai d'eau tryptonée (3.4.2) pour calculer, par référence aux tables statistiques de la
la recherche d'indole à 44 °C pendant 24 h. Puis ajouter méthode de dénombrement des micro-organismes sur
0,2 ml à 0,3 ml de réactif de Kovacs (3.5.1) dans le tube milieu de culture, le nombre le plus probable d'organismes
contenant de l'eau tryptonée : l'apparition d'une coloration coliformes, d'organismes coliformes thermotolérants et
rouge après l'avoir mélangé avec précaution indique la d'escherichia coli présumés présents dans 100 ml
présence d'indole. d'échantillon.

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20 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N° 31 16 juin 2013

Tableau A Bouillon de MacConkey

Informations microbiologiques complémentaires Milieu double concentration.

liées à l'examen de l'eau et à la recherche d'organismes
du groupe coliforme Sels Biliés ............................................................... 10 g
Peptone ................................................................... 40 g
Pour l'examen de routine de l'eau, le groupe coliforme
peut être décrit généralement en termes microbiologiques Lactose .................................................................... 20 g
quoique non taxonomiques comme suit :
Chlorure de sodium ................................................ 10 g
les organismes coliformes sont des bactéries en forme Pourpre de bromocrésol [solution éthanolique à 1%
de bâtonnets, Gram négatif, ne formant pas de spores, (V/V)] ................................................................... 2 ml
présentant une réaction négative à l'oxydase, pouvant
croître en aérobiose, et éventuellement en anaérobiose en Eau distillée ...................................................... 1000 ml
présence de sels biliés (ou autre dérivé tensio-actif
présentant des propriétés d'inhibition de croissance — dissoudre la peptone, le chlorure de sodium et les
similaires), et également capables de faire fermenter le sels biliés dans l'eau en chauffant et conserver à 4 °C
lactose (et le mannitol) avec production d'acide, de gaz et pendant toute une nuit. Filtrer alors que le mélange est
d'aldéhyde dans les 48 h lorsqu'on les fait incuber à une froid, ajouter le lactose et dissoudre.
température comprise entre 35 °C et 37 °C.
— ajuster le pH à 7,4 ± 0,2 et ajouter le pourpre de
bromocréso1. Obligatoire
Les organismes coliformes thermotolérants sont des
organismes coliformes qui présentent les mêmes Milieu simple concentration
propriétés biologiques et de fermentation lorsqu'on les fait
— Préparer le milieu simple concentration par dilution
incuber à une température de 44 °C à 44,5 °C.
du milieu double concentration avec un volume égal d'eau
distillée ou le préparer directement en divisant par deux la
les escherichia coli présumés sont des organismes concentration des ingrédients.
coliformes thermotolérants qui sont également capables de
produire de l'indole à partir du tryptophane. — Répartir le milieu simple concentration par volumes
de 5 ml et le milieu double concentration par volumes de
On peut considérer comme un escherichia coli 10 ml ou 50 ml dans des tubes à essai ou des flacons
présumé, un escherichia coli qui donne également un contenant une cloche de Durham. Placer en autoclave à
résultat positif lors de l'essai au rouge de méthyle et peut 115 °C pendant 10 min.
décarboxyler de l'acide L-glutamique, mais qui n'est pas Milieu lactosé amélioré au glutamate et au formiate
capable de produire de l'acétylméthylcarbinol, d'utiliser le
citrate comme seule source de carbone ou de croître dans Milieu double concentration
un bouillon au cyanure de potassium (KCN).
Lactose .................................................................... 20 g
Tableau B
Sel de sodium de l'acide L( +) glutamique .......... 12,7 g
Milieux de culture, réactifs et diluants Monochlorhydrate de L(+) arginine .................. 0,048 g

MILIEU D'ISOLEMENT Acide L( -) aspartique .......................................... 0,04 g

L(-) Cystine ......................................................... 0,04 g
Bouillon lactosé
Formiate de sodium ............................................... 0,5 g
Milieu double concentration
Monohydrogénophosphate de potassium .............. 1,8 g

Peptone ................................................................... 10 g Chorure d'armmonium .............................................. 5 g

Sulfate de magnésium (MgS04, 7H20) ................ 0,02 g
Lactose .................................................................... 10 g
Chlorure de calcium (CaCI2, 2H20) .................... 0,02 g
Extrait de viande ....................................................... 6 g
Cristaux de citrate de fer (III) .............................. 0,02 g
Eau distillée ...................................................... 1000 ml Thiamine (hydrochlorure d'aneurine) ................ 0,002 g
Acide nicotinique ............................................... 0,002 g
— dissoudre les ingrédients dans de l'eau bouillante.
Acide pantothénique .......................................... 0,002 g
— ajuster le pH si nécessaire de sorte qu'après Pourpre de bromocrésol [ solution à 1 % (m/m) dans
stérilisation il soit de 6,9 ± 0,2. Préparer un milieu simple l'éthanol] ............................................................... 2 ml
concentration par dilution du milieu double concentration
Eau distillée, compléter à ................................. 1000 ml
avec un volume égal d'eau distillée.

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7 Chaâbane 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N° 31 21
16 juin 2013

Le milieu est préparé de préférence par quantités de Afin de préparer 10 l de milieu double concentration,
10 litres ou plus, s'il n'est pas réparti dans des tubes à essai dissoudre les quantités appropriées de sel de sodium,
immédiatement, il convient de ne pas incorporer le lactose acide L( +) glutamique, de formiate de sodium,
et la thiamine et de les ajouter uniquement avant monohydrogénophosphate de potassium, de chlorure
l'utilisation. Il est plus facile d'ajouter certains ingrédients d'ammonium et de sulfate de magnésium dans 9 l d'eau
sous forme de solutions séparées préparées comme suit : distillée chaude. Puis ajouter la totalité des solutions 1, 2,
3 et 4 et 4 ml de la solution 5. Ajuster le pH à 6,8 ou plus,
Solution 1 si nécessaire, de sorte que le pH final après stérilisation
soit de 6,7. Si le même matériel et les mêmes méthodes de
Monochlorate de L(+) arginine ............................ 0,4 g stérilisation sont utilisés, il devrait toujours se produire la
même variation de pH au cours de la stérilisation. Des
Acide L(-) aspartique .......................................... 0,48 g essais préliminaires peuvent être nécessaires pour établir
Eau distillée .......................................................... 50 ml le pH correct avant stérilisation.

Après ajustement du pH, ajouter 20 ml d'une solution

Chauffer pour dissoudre. éthanolique à 1% de pourpre de bromocrésol. Compléter
pour obtenir un volume final de 10 l. Ceci devrait
Solution 2 nécessiter environ 810 ml d'eau distillée. Si le milieu
entier n'est pas utilisé immédiatement, le mettre en
L(-) cystine ............................................................ 0,4 g bouteille de 500 ml et le placer à l'autoclave à 115 °C
hydroxyde de sodium (5 mol/l) ............................ 10 ml pendant 10 min. Pour l'emploi, ajouter si nécessaire, une
quantité de lactose et de solution de thiamine (solution 6),
Eau distillée .......................................................... 90 ml laisser dissoudre, puis répartir en prises de 10 ml et 50 ml.
Chaque tube à essai ou flacon doit contenir une cloche de
Durham. Il est important de s'assurer, qu'après passage à
Chauffer pour dissoudre. l'autoclave et avant l'emploi, la cloche de Durham soit
Solution 3 complètement remplie de milieu. Sinon, on risque
d'obtenir un résultat positif erroné pour la production de
gaz. Stériliser à 115 °C pendant 10 min ou placer dans
Acide nicotinique ................................................. 0,02 g
une étuve à 100 °C durant 30 min pendant trois jours
Acide pantothénique ............................................ 0,02 g consécutifs.
Eau distillée ............................................................ 5 ml Milieu simple concentration
— préparer un milieu simple concentration en diluant le
Chauffer à froid. milieu double concentration avec un égal volume d'eau
distillée et répartir, en volume de 5 ml, dans des tubes
Solution 4 contenant une cloche de Durham ;
Cristaux de citrate de fer ....................................... 0,2 g — stériliser à 115 °C pendant 10 min ou placer dans
une étuve à 100 °C durant 30 min pendant trois jours
Eau distillée .......................................................... 10 ml consécutifs

Chauffer pour dissoudre. Note 6 : L'addition d'hydrolysat de caséine à 0,1%

(m/m) exempt de vitamine peut donner des résultats plus
Solution 5 rapides.

Chlorure de calcium (CaCl2, 2H20) .......................... 5g Bouillon tryptosé au laurylsulfate

Eau distillée ........................................................ 100 ml
Milieu double concentration
Acide chlorhydrique concentré ........................... 0,1 ml
Tryptose .................................................................. 40 g
Dissoudre à froid et stériliser à 121 °C pendant 20 min.
Conserver comme solution mère. Lactose .................................................................... 10 g

Solution 6 Chlorure de sodium ................................................ 10 g

Solution de thiamine à 0,1 % stérile dans de l'eau Monohydrogénophosphate de potassium .............. 5,5 g
distillée.
Dihydrogénophosphate de potassium .................... 5,5 g
Il est préférable de préparer cette solution en ajoutant le
contenu d'une ampoule (100 mg) de façon aseptique à 99
Laurylsulfate de sodium de haute pureté ............... 0,2 g
ml d'eau distillée stérile. Cette solution doit être conservée
à 4 °C et ce qui reste de cette solution éliminé après un
Eau distillée ...................................................... 1000 ml
délai de 6 semaines.

09
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22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N° 31 16 juin 2013

— ajouter le tryptose, le chlorure de sodium, le lactose Eau tryptonée (pour réaction à l'indole)
et les phosphates à l'eau et chauffer pour dissoudre ;
— ajouter le laurylsulfate de sodium et mélanger Certaines peptones donnant des résultats satisfaisants
doucement pour éviter la formation de mousse ; dans les essais à 35 °C ou 37 °C ne sont pas satisfaisantes
pour l'essai à l'indole à 44 °C. La tryptone s'est avérée
— ajuster le pH à 6,8 ± 0,2 ; satisfaisante et est recommandée.
— préparer un milieu simple concentration en diluant le
milieu double concentration avec un volume égal d'eau Tryptone ................................................................. 20 g
distillée ;
— répartir le milieu simple concentration en volumes Chlorure de sodium .................................................. 5 g
de 5 ml et le milieu double concentration en volumes de
10 ml et de 50 ml. Chaque tube à essai ou flacon doit Eau distillée ...................................................... 1000 ml
contenir une cloche de Durham ;
— placer à l'autoclave à 115 °C pendant 10 min ; — dissoudre les ingrédients dans l'eau et ajuster le pH à
7,5 ;
MILIEUX DE CONFIRMATION
— Répartir en volume de 5 ml et placer à l'autoclave à
Bouillon (bilié) lactosé au vert-brillant (pour production 115 °C pendant 10 min ;
de gaz)
Note 7 : L'addition de tryptophane D ou DL à 0,1%
Peptone ................................................................... 10 g (m/m) peut améliorer la performance du milieu.

Lactose .................................................................... 10 g Bouillon tryptosé au mannitol, au laurylsulfate et au

tryptophane
Bile de bœuf déshydratée ....................................... 20 g
(Flacon unique pour production de gaz et d'indole)
Vert-brillant [solution à 0,1 %( m/m)] ................. 13 ml
Eau distillée, compléter à................................. 1000 ml Tryptose .................................................................. 20 g
Manitol ..................................................................... 5 g
— dissoudre la peptone dans 500 ml d'eau distillée ;
Chlorure de sodium .................................................. 5 g
— ajouter 20g de bile de bœuf déshydratée dissoute
dans 200 ml d'eau distillée. Cette solution devrait avoir un Monohydrogénophosphate de potassium ........... 2, 75 g
pH compris entre 7,0 et 7,5 ;
Dihydrogénophosphate de potassium .................. 2,75 g
— compléter avec de l'eau distillée à environ 975 ml ;
— ajouter le lactose et ajuster le pH à 7,4 ; Laurylsulfate de sodium ........................................ 0,1 g

— ajouter la solution de vert-brillant et compléter avec Tryptophane L(-) ................................................... 0,2 g

de l'eau distillée à 1000 ml ;
Eau distillée ...................................................... 1000 ml
— répartir en prises de 5 ml dans des tubes à essai
contenant des cloches de Durham renversées et placer à
l'autoclave à 115 °C pendant 10 min. — ajouter à l'eau le tryptose, le chlorure de sodium, le
mannitol, les phosphates et le tryptophane et chauffer pour
Milieu (EC) (pour production de gaz) dissoudre ;
— ajouter le laurylsulfate de sodium et mélanger
Tryptose ou trypticase ............................................ 20 g doucement pour éviter la formation de mousse ;
Lactose ...................................................................... 5 g — ajuster le pH à pH 6,8 ± 0,2 ;
Mélange de sels biliés ou sels biliés n° 3 .............. 1,5 g — répartir par volumes de 5 ml dans des tubes
Monohydrogénophosphate de potassium ................. 4 g contenant une cloche de Durham ;

Dihydrogénophosphate de potassium .................... 1,5 g — placer à l'autoclave à 115 °C pendant 10 min.

Chlorure de sodium .................................................. 5 g RÉACTIFS

Eau distillée ...................................................... 1000 ml Réactif de Kovacs pour l'indole

Avant stérilisation, répartir dans des tubes à essai de p-Diméthylaminobenzaldéhyde ................................ 5 g

sorte que le milieu recouvre au moins partiellement la
cloche de Durham après stérilisation. Alcool amylique ................................................... 75 ml

Acide chlorhydrique (p = 1,18 g/ml) .................... 25 ml

Le pH devrait être de 6,9 après stérilisation.

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16 juin 2013

— dissoudre l'aldéhyde dans l'alcool amylique ; — dissoudre les ingrédients et répartir en volumes
utilisables ;
— ajouter l'acide concentré avec soin. Mettre à l'abri de
la lumière et conserver à 4 °C. — stériliser à l'autoclave à 121 °C ± 1 °C pendant 15
min. Le pH final devrait être de 7,0 ± 0,1.
Note 8 : La coloration du réactif doit aller du jaune clair
au brun clair; certains échantillons d'alcool amylique Solution tampon au phosphate
s'avèrent insatisfaisants et donnent une coloration foncée
avec l'aldéhyde.
Dihydrogénophosphate de potassium ............... 42,5 mg
Réactif à l'oxydase
Chlorure de magnésium ..................................... 190 mg
Dichlorate de p-phénylène diamine ....................... 0,1 g
Eau distillée ...................................................... 1000 ml
Eau distillée .......................................................... 10 ml

Ce réactif ne se conserve pas et doit donc être préparé en Préparation

petites quantités avant chaque utilisation.
a) Solution de phosphate
DILUANTS
Diluant à la peptone (0,1 %) — dissoudre 34 g de phosphate dans 500 ml d'eau
distillée ;
Peptone ..................................................................... 1 g
— ajuster le pH à 7,2 ± 0,5 avec une solution
Eau distillée ...................................................... 1000 ml d'hydroxyde de sodium à 1 mol/l et compléter à 1000 ml
avec de l'eau distillée.
— dissoudre la peptone dans environ 950 ml d'eau ;
— ajuster le pH avec la solution d'hydroxyde de sodium b) Solution de chlorure de magnésium
ou une solution d'acide chlorhydrique (l mol/l) de sorte
qu'après stérilisation, il soit de 7,0 ± 0,1 ; dissoudre 38 g de chlorure de magnésium dans
1000 ml d'eau distillée.
— compléter avec de l'eau pour obtenir 1000 ml,
répartir en volumes utilisables et placer à l'autoclave à Solution finale
121 °C ± 1 °C pendant 15 min.
Solution saline peptonée Pour l'utilisation, ajouter 1,25 ml de la solution de
phosphate (a) et 5,0 ml de solution de chlorure de
Peptone ..................................................................... 1 g magnésium (b) à 1000 ml d'eau distillée. Répartir en
volumes utilisables et stériliser à l'autoclave à 121 °C ±
Chlorure de sodium ............................................... 8,5 g 1 °C pendant 15 min. Le pH final doit être de 7,0 ± 0,1.
Eau distillée ...................................................... 1000 ml
Gélose nutritive

— dissoudre les constituants dans environ 950 ml d'eau

portée à ébullition ; Extrait de viande .................................................... 1,0 g

— ajuster le pH avec l'hydroxyde de sodium ou la Peptone .................................................................. 1,0 g

solution d'acide chlorhydrique (l mol/l) de sorte qu'après
stérilisation il soit de 7,0 ± 0,1 ; Chlorure de sodium ................................................. 5 g

— compléter avec de l'eau pour obtenir 1000 ml, Gélose ..................................................................... 15 g

répartir en volumes utilisables et placer à l'autoclave à
121 °C ± 1 °C pendant 15 min.
— verser les ingrédients dans l'eau et chauffer pour
Solution de Ringer (diluée au quart) dissoudre ;

Chlorure de sodium ............................................. 2,25 g — ajuster le pH à environ 8,2 au moyen d'hydroxyde de

sodium (l mol/l) et faire bouillir pendant 10 min ;
Chlorure de potassium ..................................... 0, 1 05 g
Chlorure de calcium (anhydre) ............................ 0,12 g — clarifier par filtration et régler le pH à 7,2 ±7,4 ;

Hydrogénocarbonate de sodium ......................... 0,05 g — répartir dans des flacons de 100 ml de

Eau distillée ...................................................... 1000 ml capacité et passer à l'autoclave à 121 °C ± 1 °C
pendant 15 min.

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 9 Ramadhan 1434
22 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N° 36 18 juillet 2013

MINISTERE DU COMMERCE ANNEXE

MÉTHODE DE RECHERCHE ET DE
Arrêté du 23 Rajab 1433 correspondant au 13 juin DÉNOMBREMENT DES SPORES DE
2012 rendant obligatoire la méthode de recherche MICRO-ORGANISMES ANAÉROBIES
et de dénombrement des spores de SULFITO-RÉDUCTEURS (CLOSTRIDIA)
micro-organismes anaérobies sulfito-réductrices
(Clostridia). La présente méthode spécifie la recherche et le
———— dénombrement des spores de micro-organismes
anaérobies sulfito-réducteurs (clostridia) par
Le ministre du commerce, enrichissement dans un milieu liquide.
Vu la Loi n° 05-12 du 28 Joumada Ethania 1426 Le principe de la méthode est applicable à tous les types
correspondant au 4 août 2005, modifiée et complétée, d'eau, y compris les eaux troubles.
relative à l'eau ;
1- DEFINITION
Vu le décret présidentiel n° 10-149 du 14 Joumada
Ethania 1431 correspondant au 28 mai 2010 portant Pour les besoins de cette méthode, la définition suivante
nomination des membres du Gouvernement ; est applicable :
Vu le décret exécutif n° 90-39 du 30 janvier 1990,
modifié et complété, relatif au contrôle de la qualité et à la clostridia: micro-organismes anaérobies formant des
répression des fraudes ; spores et sulfito-réducteurs, appartenant à la famille des
Bacillacées et au genre Clostridium.
Vu le décret exécutif n° 02-453 du 17 Chaoual 1423
correspondant au 21 décembre 2002 fixant les attributions 2-PRINCIPE
du ministre du commerce ;
La recherche des spores de micro-organismes
Vu le décret exécutif n° 05-465 du 4 Dhou EL Kaada anaérobies sulfito-réducteurs (clostridia) dans un
1426 correspondant au 6 décembre 2005 relatif à échantillon d'eau de volume déterminé, passe par les
l'évaluation de la conformité ; étapes suivantes ;
Vu l'arrêté interministériel du 22 Dhou El Hidja
2.1 - Sélection des spores
1426 correspondant au 22 janvier 2006, modifié et
complété, fixant les proportions d'éléments contenus dans Sélection des spores dans l'échantillon, par chauffage
les eaux minérales naturelles et les eaux de source ainsi pendant une période de temps suffisante pour que les
que les conditions de leur traitement ou les adjonctions bactéries végétatives soient détruites.
autorisées ;
Vu l'arrêté du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet 2.2 - Culture par enrichissement
1994, modifié et complété, relatif aux spécifications
Recherche et énumération des spores des organismes
microbiologiques de certaines denrées alimentaires ; anaérobies sulfito-réducteurs par inoculation de volumes
de l'échantillon dans les milieux liquide d'enrichissement,
Arrête : suivie de l'incubation à 37 ± 1°C pendant 44 ± 4h dans des
conditions anaérobies.
Article 1er. — En application des dispositions de
l'article 19 du décret exécutif n° 90-39 du 30 janvier 1990, 3 - MILIEUX DE CULTURE ET REACTIFS
modifié et complété susvisé, le présent arrêté a pour objet
de rendre obligatoire la méthode de recherche et de 3.1 - Principaux matériaux
dénombrement des spores micro-organismes anaérobies
sulfito-réductrices. Pour améliorer la reproductibilité des résultats, il est
recommandé d'utiliser, pour la préparation des diluants et
Art. 2. — Pour la recherche et le dénombrement des des milieux de culture, des composants de base
spores micro-organismes anaérobies sulfito-réductrices, déshydratés ou des milieux complets déshydratés. De la
les laboratoires du contrôle de la qualité et de la répression même façon, des préparations commerciales de réactifs
des fraudes et les laboratoires agréés à cet effet doivent peuvent être utilisées. Les prescriptions du fabricant
employer la méthode jointe en annexe du présent arrêté. doivent être suivies scrupuleusement.

Les produits chimiques utilisés pour la préparation des

Cette méthode doit être utilisée par le laboratoire milieux de culture et des réactifs doivent être de qualité
lorsqu'une expertise est ordonnée. analytique reconnue.
Art. 3. — Le présent arrêté sera publié au Journal L'eau utilisée doit être de l'eau distillée ou
officiel de la République algérienne démocratique et déminéralisée, exempte de substances susceptibles
populaire. d'inhiber la croissance des micro-organismes dans les
Fait à Alger, le 23 Rajab 1433 correspondant au 13 juin conditions de l'essai.
2012. Les mesures du pH doivent être effectuées au pHmètre,
Mustapha BENBADA. et rapportées à la température de 25°C.

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9 Ramadhan 1434 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N° 36 23
18 juillet 2013

Si les milieux de culture préparés ne sont pas utilisés Transvaser des aliquotes, respectivement, de 10 ml et de
extemporanément, ils doivent, sauf spécification contraire, 50 ml du milieu, dans des flacons avec bouchons à vis, de
être conservés à l'obscurité à environ 4°C pendant 1 mois capacités respectivement de 25 ml et 100 ml.
au maximum. Stériliser à l'autoclave à 121 ± 1 °C pendant 15 mn.
3.2 - Milieux de culture et diluant 3.2.3 - sulfite de sodium ( Na2S203 ), solution à
4 % ( m/m).
3.2.1 - Diluant
Dissoudre 4 g de sulfite de sodium anhydre dans 100 ml
Utiliser un des diluants indiqués dans la méthode de d'eau. Stériliser par filtration. Conserver entre 2 et 5 °C.
dénombrement des micro-organismes dans le milieu de
culture. Il est conseillé de préparer une nouvelle solution tous
les 14 jours.
3.2.2 - Milieu renforcé spécial pour les clostridia 3.2.4 - Citrate de fer ( III ) ( C6H5O7Fe ) , solution à
(DRCM) 7% (m/m).
3.2.2.1 - Milieu de base simple concentration Dissoudre 7 g de citrate de fer (III) dans 100 ml d'eau,
stériliser par filtration.
Composition
Conserver entre 2 et 5 °C.
Viande digérée dans la peptone tryptique........... 10 g Il est conseillé de préparer une nouvelle solution tous
les 14 jours.
Extrait de viande................................................. 10 g
3.2.5 - Milieu complet
Extrait de levure.................................................. 1,5 g
3.2.5.1 - Le jour de l'analyse, mélanger des volumes
Amidon................................................................ 1 g égaux des solutions de sulfite de sodium (3.2.3) et de
citrate de fer (III) (3.2.4).
Acétate de sodium hydraté.................................. 5 g
3.2.5.2 - Ajouter 0,5 ml du mélange (3.2.5.1) dans
Glucose................................................................ 1 g chaque flacon de milieu de concentration simple (3.2.2.1)
qui vient d'être chauffé et refroidir.
Chlorhydrate de L - cystine................................. 0,5 g
3.2.5.3 - Ajouter 0,4 ml du mélange ( 3.2.5.1 ) à chaque
volume de 10 ml et 2 ml du mélange à chaque volume de
Eau..................................................................... 1000 ml 50 ml du milieu double concentration, ces volumes étant
traités de manière semblable.
Préparation
4- APPAREILLAGE ET VERRERIE DE
Mélanger la peptone, l'extrait de viande, l'acétate de LABORATOIRE
sodium ainsi que l'extrait de levure à 800 ml d'eau.
Verrerie et matériel de laboratoire couramment
Avec les 200 ml d'eau distillée qui restent, préparer une employés pour la bactériologie, sont :
solution d'amidon comme suit : mélanger l'amidon avec
un peu d'eau froide de manière à faire une pâte. Chauffer 4.1 - Flacons ou fioles avec bouchons à vis, en verre ou
le reste de l'eau jusqu'à ce qu'elle commence à bouillir et borosilicaté, de capacités 200 ; 100 et 25 ml.
l'introduire lentement dans la pâte, tout en agitant
constamment. 4.2 - Pipettes volumétriques, de capacités 10 et 1 ml.
4.3 - Bains d'eau, contrôles thermiquement.
Ajouter alors cette solution d'amidon au premier
mélange et chauffer jusqu'à ce que le point d'ébullition 4.4 - Tubes à essai, de 150 mm x 13 mm.
soit atteint et que le mélange se dissolve.
4.5 - Fil de fer.
A la fin, ajouter le glucose et le chlorhydrate de
L-cystine : dissoudre. 4.6 - Incubateurs, réglables à 37 ± 1°C.

Ajuster le pH en le faisant passer de 7, 1 à 7, 2 avec une 5- ECHANTILLONNAGE

solution d'hydroxyde de sodium à 1 mol / 1.
L'échantillonnage se fait dans des conditions
Transvaser une aliquote de 25 ml du milieu dans des appropriées.
flacons avec bouchons à vis de 25 ml de capacité.
6- MODE OPERATOIRE
Stériliser à l'autoclave à 121 ± 1 °C pendant 15 min.
6.1 - Traitement des échantillons
3.2.2.2 - Milieu de base double concentration
Se référer à la méthode de dénombrement des
Préparer le milieu de base double concentration comme micro-organismes sur milieu de culture en ce qui concerne
en 3.2.2.1, mais réduire le volume d'eau distillée de la méthode à suivre pour la conservation et le traitement
moitié. des échantillons.

13
 9 Ramadhan 1434
24 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N° 36 18 juillet 2013

6.2 - Sélection des spores (technique)

Avant qu'il soit procédé à l'essai, l'échantillon d'eau doit

être chauffé dans un bain d'eau à 75 ± 5°C pendant 15 mn
à partir du moment où cette température a été atteinte. Un
flacon similaire contenant le même volume d'eau que
celui de l'échantillon pour essai doit être utilisé
parallèlement comme témoin afin de vérifier le temps de
chauffage nécessaire. La température de l'eau dans le
flacon témoin peut être enregistrée de manière permanente
à l'aide d'un thermomètre.

6.3 - Inoculation et incubation

Ajouter 50 ml de l'échantillon (6.2) à un flacon à

capuchon à vis contenant 50 ml du milieu double
concentration (3.2.5.3) .

Ajouter 10 ml de l'échantillon (6.2) à une série de cinq

flacons à capuchon à vis de 25 ml contenant 25 ml du
milieu double concentration (3.2.5.3).

Ajouter 1 ml de l'échantillon (6.2) à une série de cinq

flacons à capuchon à vis de 25 ml contenant 25 ml du
milieu simple concentration (3.2.5.2).

Si nécessaire, ajouter 1 ml d'une dilution au 1/10 de

l'échantillon (6.2) à une série de cinq flacons à capuchon à
vis contenant 25 ml du milieu simple concentration
(3.2.5.2).

Afin de procéder à un examen qualitatif de 100 ml d'eau

potable ou d'eau en bouteille sans faire un comptage du
NPP, utiliser une fiole de 200 ml contenant un mélange de
100 ml du milieu double concentration (3.2.5.3 ) et de
100 ml de l'échantillon ( 6.2 ) .

Si nécessaire , remplir tous les flacons avec le milieu

simple concentration ( 3.2.5.2 ) de façon à amener le
liquide au niveau du col et s'assurer qu'il ne renferme
qu'un très petit volume d'air; fermer alors les flacons
hermétiquement ou incuber dans des conditions
anaérobies.

Incuber les flacons inoculés à 37 °C ± 1 °C pendant

44 ± 4 h.

Note : Des volumes contenant du bouillon de culture

dans des flacons en verre hermétiquement fermés peuvent
exploser en raison de la production de gaz . L'utilisation
d'un fil de fer chauffé au rouge et placé dans le milieu
avant incubation peuvent favoriser l'anaérobiose.

6.4 - Interprétation

Les flacons dans lesquels on observe un noircissement

résultant de la réduction de sulfite et de la précipitation du
sulfure de fer (II) doivent être considérés comme étant
positifs.

7- EXPRESSION DES RESULTATS

Exprimer les résultats en conformité avec la méthode de

dénombrement des micro-organismes sur milieu de
culture.

14
 JOURNAL OFFICIEL DE LA REPUBLIQUE ALGERIENNE N° 51 8 Dhou El Hidja 1434
22 13 octobre 2013

Arrêté du 21 Moharram 1434 correspondant au 5 membrane. Cette méthode peut également être
décembre 2012 rendant obligatoire la méthode appliquée à d'autres types d'eau présentant une faible
de détection et de dénombrement de flore interférente, par exemple les eaux de piscine et
Pseudomonas aeruginosa dans l'eau par filtration les eaux destinées à la consommation humaine.
sur membrane.
———— 1. DÉFINITION
Le ministre du commerce, Pour les besoins du présent document, la définition
Vu la loi n° 05-12 du 28 Joumada Ethania 1426 suivante s'applique.
correspondant au 4 août 2005, modifiée et complétée, 1.1 Pseudomonas aeruginosa
relative à l'eau ;
Micro-organismes se développant sur des milieux
Vu le décret présidentiel n° 12-326 du 17 Chaoual 1433 sélectifs contenant du cétrimide et produisant de la
correspondant au 4 septembre 2012 portant nomination pyocyanine ou micro-organismes se développant sur des
des membres du Gouvernement ; milieux sélectifs contenant du cétrimide, oxydase
Vu le décret exécutif n° 90-39 du 30 janvier 1990, positive, donnant lieu à une fluorescence sous
modifié et complété, relatif au contrôle de la qualité et à la rayonnement ultraviolet (360 ± 20) nm et également
répression des fraudes ; capables de produire de l'ammoniac à partir
Vu le décret exécutif n° 02-453 du 17 Chaoual 1423 d'acétamide.
correspondant au 21 décembre 2002 fixant les attributions 2. PRINCIPE
du ministre du commerce ;
2.1 Filtration
Vu le décret exécutif n° 05 - 465 du 4 Dhou El Kaada
1426 correspondant au 6 décembre 2005 relatif à Un volume mesuré de l'échantillon d'eau ou une dilution
l'évaluation de la conformité ; de l'échantillon est filtré sur une membrane filtrante de
porosité 0,45 µm. La membrane filtrante est placée sur le
Vu l'arrêté interministériel du 22 Dhou El Hidja 1426
milieu sélectif et incubée dans les conditions spécifiées
correspondant au 22 janvier 2006, modifié et complété,
pour le milieu.
fixant les proportions d'éléments contenus dans les eaux
2.2 Dénombrement
minérales naturelles et les eaux de source ainsi que les
conditions de leur traitement ou les adjonctions Le nombre de Pseudomonas aeruginosa présumés est
autorisées ; obtenu par comptage du nombre de colonies
Vu l'arrêté du 14 Safar 1415 correspondant au 23 juillet caractéristiques formées sur la membrane filtrante après
1994, modifié et complété, relatif aux spécifications micro incubation. Les colonies produisant de la pyocyanine sont
biologiques de certaines denrées alimentaires ; considérées comme Pseudomonas aeruginosa confirmés
mais les colonies qui produisent une fluorescence ou
Arrête : celles de couleur brun rougeâtre nécessitent une
Article 1er. — En application des dispositions de confirmation.
l'article 19 du décret exécutif n° 90-39 du 30 janvier
1990, modifié et complété, susvisé, le présent arrêté a 2.3 Confirmation
pour objet de rendre obligatoire la méthode de détection et
de dénombrement de Pseudomonas aeruginosa dans l'eau Repiquage des colonies à confirmer à partir de la
par filtration sur membrane. membrane sur des boîtes de gélose nutritive (mais voir
annexe B). Après incubation, les cultures qui ne
Art. 2. — Pour la détection et le dénombrement de présentaient initialement pas de fluorescence sont
Pseudomonas aeruginosa dans l'eau par filtration sur soumises au test de recherche de l'oxydase, puis les
membrane, les laboratoires du contrôle de la qualité et de cultures oxydase positive sont soumises au test de
la répression des fraudes et les laboratoires agréés à cet production de fluorescéine et examinées pour déceler leur
effet doivent employer la méthode jointe en annexe du aptitude éventuelle à produire de l'ammoniac à partir
présent arrêté. d'acétamide.
Cette méthode doit être utilisée par le laboratoire Les cultures qui présentaient initialement une
lorsqu'une expertise est ordonnée. fluorescence sont examinées pour déceler leur aptitude
Art. 3. — Le présent arrêté sera publié au Journal éventuelle à produire de l'ammoniac à partir d'acétamide.
officiel de la République algérienne démocratique et
populaire. 3. DILUANTS, MILIEUX DE CULTURE ET
RÉACTIFS
Fait à Alger, le 21 Moharram 1434 correspondant au
5 décembre 2012. Sauf spécifications contraires, utiliser des réactifs de
Mustapha BENBADA. qualité analytique pour la préparation des milieux de
——————— culture et des diluants. Préparer le milieu comme suit et
ANNEXE ajouter les agents sélectifs aux concentrations données ou
utiliser des milieux et réactifs disponibles dans le
Méthode de détection et de dénombrement de commerce, préparés conformément aux instructions du
Pseudomonas aeruginosa dans l'eau par filtration sur fabricant. Préparer les milieux et réactifs en utilisant de
membrane l'eau distillée ou de l'eau de pureté équivalente et exempte
La présente méthode spécifie une technique permettant de substances pouvant inhiber la croissance dans les
d'isoler et de dénombrer Pseudomonas aeruginosa dans conditions de l'essai.
des échantillons d'eau embouteillée, par filtration sur

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13 octobre 2013 23

3.1 Milieu de culture 3.2.1.2 Préparation

Pour déterminer Pseudomonas aeruginosa, utiliser le Dissoudre les composants dans l'eau par chauffage.
milieu suivant : Laisser refroidir à une température de (45 à 50) °C et
ajuster le pH à 7,2 ± 0,2 à 25 °C, en utilisant soit de l'acide
3.1.1 Base gélosée pour Pseudomonas gélose CN chlorhydrique, soit de l'hydroxyde de sodium. Répartir le
3.1.1.1 Composition milieu en aliquotes de 5 ml dans des tubes de culture
bouchés et autoclavés à (121 ± 3) °C pendant 15 min.
Peptone de gélatine................................................16,0 g Laisser les tubes refroidir et se solidifier en position
Hydrolysat de caséine............................................10,0 g inclinée.
Sulfate de potassium Conserver à l'abri de la lumière à (5 ± 3) °C et les
utiliser dans les trois (3) mois.
(Anhydre) (K2SO4)................................................10,0 g
Chlorure de magnésium 3.2.2 Bouillon d'acétamide

(Anhydre) (MgCl2)..................................................1,4 g 3.2.2.1 Composition

Glycérol..................................................................10 ml Solution A
Gélose.......................................................11,0 g à 18,0 g Dihydrogénophosphate de
Eau (distillée ou équivalent)..............................1 000 ml potassium (KH2PO4)................................................1,0 g
Note — La quantité de gélose requise dépend du Sulfate de magnésium (anhydre) (MgSO4).............0,2 g
pouvoir gélifiant. Respecter les instructions du fabricant Acétamide................................................................2,0 g
de la gélose utilisée. Chlorure de sodium (NaCI).....................................0,2 g
Supplément CN Eau (distillée ou équivalent, exempte
Bromure d'hexadécyltriméthyl ammonium d'ammoniac)..............................................................900 ml
(cétrimide)...................................................................0,2 g Dissoudre les composants dans l'eau et ajuster ensuite le
Acide nalidixique.................................................0,015 g pH à 7,0 ± 0,5, à 25 °C, en utilisant soit de l'acide
chlorhydrique, soit de l'hydroxyde de sodium.
3.1.1.2 Préparation
Mettre en suspension la peptone, l'hydrolysat de Attention - L'acétamide est cancérigène et irritant.
caséine, le sulfate de potassium, le chlorure de magnésium Des précautions particulières doivent donc être prises
lors de la pesée, de la préparation et de la mise au
et la gélose dans 1 000 ml d'eau distillée (ou l'équivalent).
rebut du milieu.
Ajouter 10 ml de glycérol. Porter à ébullition jusqu'à
dissolution complète et stériliser à l'autoclave à Solution B
(l21±3) °C pendant 15 min. Laisser le milieu refroidir à Molybdate de sodium
(45 à 50) °C.
(Na2MoO4, 2H2O)...................................................0,5 g
Ajouter le supplément CN réhydraté dans 2 ml d'eau
distillée stérile, bien mélanger et ajouter au milieu de base Sulfate de fer heptahydraté
stérile fondu. Mélanger de nouveau et verser dans des (FeSO4,7H2O)........................................................0,05 g
boîtes de Petri stériles de façon à obtenir une épaisseur Eau........................................................................100 ml
minimale de gélose de 5 mm. Il convient que le pH final
du milieu solidifié soit égal à 7,1 ± 0,2 à 25 °C. Conserver 3.2.2.2 Préparation
les boîtes ainsi préparées à l'abri de la lumière, en évitant Pour préparer le bouillon d'acétamide, ajouter 1 ml de la
toute dessiccation, à une température de (5 ± 3) °C et les solution (B) à 900 ml d'une solution (A) fraîchement
utiliser dans un délai d'un mois. Ne pas conserver la préparée (3.2.2.1). Ajouter de l'eau sous agitation
gélose fondue pendant plus de 4 h. Ne pas faire fondre de constante jusqu'à obtention d'un volume total de 1 litre.
nouveau le milieu.
Répartir ce mélange en aliquotes de 5 ml dans des tubes
3.2 Milieux de confirmation et réactifs de culture. Boucher les tubes et les stériliser à l'autoclave
3.2.1 Milieu de King B à (121 ± 3) °C pendant 15 min. Conserver à l'abri de la
lumière à (5 ± 3) °C et les utiliser dans les trois (3) mois.
3.2.1.1 Composition
Peptone...................................................................20,0 g 3.2.3 Gélose nutritive
Glycérol...................................................................10 ml 3.2.3.1 Composition
Hydrogénophosphate Peptone.....................................................................5,0 g
de potassium (K2HPO4)...........................................1,5 g Extrait de viande......................................................1,0 g
Sulfate de magnésium heptahydraté Extrait de levure.......................................................2,0 g
(MgSO4,7H2O).........................................................1,5 g Chlorure de sodium (NaCl)......................................5,0 g
Gélose.....................................................................15,0 g Gélose.....................................................................15,0 g
Eau (distillée ou équivalent)..............................1 000 ml Eau.....................................................................1 000 ml

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24 13 octobre 2013

3.2.3.2 Préparation 4.4 Membranes filtrantes stériles, ayant une porosité

nominale de 0,45 µm.
Dissoudre les composants dans l'eau par chauffage.
Stériliser à l'autoclave à (121 ± 3) °C pendant 15 min. Il 5. ECHANTILLONNAGE
convient que le pH du milieu ainsi préparé et solidifié soit
égal à 7,4 ± 0,2 à 25 °C. Sécher les boîtes pour éliminer
toute humidité excessive de la surface, avant utilisation. L'échantillonnage se fait dans les conditions
Conserver les boîtes ainsi préparées à l'abri de la appropriées.
lumière à (5 ± 3) °C et les utiliser dans un délai d'un
mois. 6. MODE OPÉRATOIRE
3.2.4 Réactif pour la recherche de l'oxydase 6.1 Généralités

3.2.4.1 Composition Appliquer la technique de filtration sur membrane

décrite dans la méthode de dénombrement des
Dichlorhydrate detétraméthyle-p- micro-organismes sur milieu de culture, lignes directrices
phénylènediamine.....................................................0,1 g générales.
Eau..........................................................................10 ml
6.2 Filtration sur membrane
3.2.4.2 Préparation Filtrer des volumes de l'échantillon d'eau ou des
portions d'une dilution sur une membrane filtrante stérile
Immédiatement avant utilisation, dissoudre le en esters de cellulose de diamètre de pore nominal de
dichlorhydrate de tétraméthyle-p-phénylènediamine dans 0,45 µm. Comme spécifié dans la méthode de
l'eau et mettre à l'abri de la lumière. Ce réactif n'étant pas dénombrement des micro-organismes sur milieu de
stable, le préparer en petites quantités juste avant de culture, lignes directrices générales, placer chaque
l'utiliser. membrane sur une boîte de Petri contenant de la gélose
avec supplément CN (3.1) en veillant à ne pas
Il est également possible d'utiliser des tests oxydase emprisonner d'air sous la membrane.
disponibles dans le commerce.
6.3 Incubation des boîtes
3.2.5 Réactif de Nessler
Incuber les boîtes de Petri à (36 ± 2) °C pendant
3.2.5.1 Composition
(44 ± 4) h dans des récipients et protéger contre toute
Chlorure mercurique (HgCi2)....................................10 g dessiccation.
Iodure de potassium (KI).............................................7 g 6.4 Examen des membranes
Hydroxyde de sodium (NaOH).................................16 g
Examiner les membranes pour vérifier la croissance des
Eau (exempte d'ammoniac).......................jusqu'à 100 ml cultures après (22 ± 2) h et (44 ± 4) h.
Dissoudre 10g de HgCi2 et 7 g de KI dans une petite Compter toutes les colonies produisant une
quantité d'eau, puis en agitant, ajouter ce mélange pigmentation bleu-vert (pyocyanine) comme
lentement à une solution d'eau froide de 16 g de NaOH Pseudomonas aeruginosa confirmés.
dissous dans 50 ml d'eau. Diluer à 100 ml. Conserver dans
de la verrerie borosilicatée fermée par un bouchon en Examiner les membranes sous rayonnement
caoutchouc à l'abri de la lumière du soleil, pendant une ultraviolet. Il convient d'éviter toute exposition
durée maximale d'un an. prolongée à l'éclairage UV car les colonies peuvent
être tuées et donc ne pas se développer sur les milieux
Note : Le chlorure mercurique (HgCl2) est toxique - de confirmation. Compter les colonies ne produisant
éviter toute ingestion. pas de pyocyanine et donnant lieu à une fluorescence
comme Pseudomonas aeruginosa présumés et
4. APPAREILLAGE ET VERRERIE confirmer leur identité en utilisant le bouillon d'acétamide
décrit ci-après.
Utiliser le matériel courant des laboratoires de
microbiologie. Compter toutes les autres colonies produisant une
pigmentation brune-rougeâtre et ne produisant pas de
4.1 Verrerie fluorescence comme Pseudomonas aeruginosa présumés
et confirmer leur identité en utilisant un test oxydase, le
Avant utilisation, stériliser toute la verrerie à bouillon d'acétamide et le milieu de King B décrit
(170 ± 5) °C pendant 1 h, au four ou à (121 ± 3) °C ci-après. La lecture après (22 ± 2) h est réalisée dans le
pendant 15 min, à l'autoclave. cas de colonies envahissantes, lesquelles peuvent
apparaître au bout de (44 ± 4) h. Il est recommandé de
4.2 Incubateur, réglable à (36 ± 2) °C. prendre en compte le dénombrement le plus élevé pour
calculer le nombre de « Pseudomonas aeruginosa » décrit
4.3 Lampe à rayonnement ultraviolet, pouvant en (7).
émettre un rayonnement d'une longueur d'onde de Le Tableau 1 récapitule la sélection des colonies et les
(360 ± 20) nm. étapes de confirmation.

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13 octobre 2013 25

Tableau 1 - Étapes requises pour la confirmation des colonies se développant sur la gélose CN

Description des colonies Ammoniac à partir Production Fluorescence sur Confirmés comme
sur gélose CN d’acétamide d’oxydase milieu King B Pseudomonas aeruginosa

Bleu-vert NTa NT NT OUI

Fluorescence + NT NT OUI

(pas bleu-vert)

Brun rougeâtre + + + OUI

Autres types NT NT NT NON

a NT : Non testé.

6.5 Confirmation 6.5.5 Dénombrement

6.5.1 Gélose nutritive Compter comme « Pseudomonas aeruginosa »
confirmés toutes les colonies produisant de la pyocyanine
Repiquer toutes les colonies nécessitant une (pigmentation bleu-vert) ou oxydase positive, donnant lieu
confirmation ou, si cela est irréalisable, autant de colonies à une fluorescence sous rayonnement UV (6.4) et
que possible (la méthode de dénombrement des (6.5.3.) et capables de produire de l'ammoniac à partir
micro-organismes sur milieu de culture, lignes directrices d'acétamide (6.5.4).
générales à partir de la membrane et incuber pendant
(22 ± 2) h à (36 ± 2) °C). Vérifier la pureté des Note — Les colonies qui présentent une fluorescence
repiquages et soumettre les colonies initialement sur la première membrane sont toujours oxydase positive
brunes-rougeâtres au test de recherche de l'oxydase et n'ont donc pas besoin d'être soumises au test oxydase
(6.5.2). (Tableau 1).
6.5.2 Test oxydase 7. EXPRESSION DES RESULTATS
Verser 2 ou 3 gouttes de réactif pour la recherche de A partir du nombre de colonies caractéristiques
l'oxydase (3.2.4) fraîchement préparé sur un morceau de dénombrées sur les membranes et en tenant compte du
papier-filtre placé dans une boîte de Petri. nombre d'essais de confirmation réalisés, calculer le
nombre de « Pseudomonas aeruginosa » confirmés
À l'aide d'une anse métallique en platine (pas en Nichle-
présents dans un volume d'eau déterminé. Pour l'eau
chrome) ou en plastique, d'une baguette ou d'une pipette
minérale, l'eau de source et les autres eaux en bouteille, le
en verre, étaler une partie de la culture sur le papier-filtre
préparé. La réaction est considérée comme positive volume est de 250ml. Pour les autres eaux, le volume est
lorsqu'une coloration bleu-pourpre foncé apparaît dans les généralement de 100 ml.
10 s. Il est également possible d'utiliser des tests oxydase Calculer le nombre de « Pseudomonas aeruginosa » par
disponibles dans le commerce en suivant les instructions volume d'échantillon d'eau étudié comme suit :
du fabricant.
P + F ( cF / nF ) + R ( cR / nR )
6.5.3 Milieu de King B
P : est le nombre de colonies bleu-vert, toutes ayant été
Repiquer les colonies brunes rougeâtres oxydase comptées comme cibles confirmées ;
positive obtenues en (6.5.1) sur un milieu de King B et
incuber cinq jours au plus, à une température de F : est le nombre de colonies fluorescentes ;
(36 ± 2) °C. Examiner quotidiennement la culture sous un
rayonnement UV et noter la présence d'une éventuelle R : est le nombre de colonies brun rougeâtre ;
fluorescence. Enregistrer comme positive toute
fluorescence apparue dans les cinq jours. nF : est le nombre de colonies fluorescentes ayant fait
l'objet d'une détection de production d'ammoniac ;
6.5.4 Bouillon d'acétamide
cF : est le nombre de colonies fluorescentes ayant
Ensemencer un tube à l'aide du repiquage obtenu en produit de l'ammoniac ;
(6.5.1) et incuber à (36 ± 2) °C pendant (22 ± 2) h.
Ajouter 1 ou 2 gouttes de réactif de Nessler (3.2.5) et nR : est le nombre de colonies brun rougeâtre ayant fait
examiner les tubes afin de déceler une production l'objet d'une détection de production d'ammoniac, d'une
éventuelle d'ammoniac se traduisant par une coloration recherche de l'oxydase et de fluorescence sur le milieu de
allant du jaune au rouge brique, selon la concentration. King B ;

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26 13 octobre 2013

cR : est le nombre de colonies brun rougeâtre ayant

produit de l'ammoniac, oxydase positive et fluorescentes
sur le milieu de King B.

Une autre solution consiste à exprimer les résultats

qualitativement en indiquant la présence ou l'absence de
« Pseudomonas aeruginosa » dans le volume d'eau étudié.

Note A

Informations complémentaires sur

« Pseudomonas aeruginos »

Pseudomonas aeruginosa est l'espèce type du genre

Pseudomonas.

C'est une bactérie Gram négative, non sporulée,

oxydase positive et catalase positive. Elle présente un
métabolisme oxydatif tel qu'indiqué par l'essai selon Hugh
et Leifson, réduit généralement les nitrates au-delà des
nitrites et produit de l'ammoniac à partir de la dégradation
de l'acétamide.

La plupart des souches (98 %) produisent un

pigment fluorescent soluble dans l'eau. La majorité
des souches sont capables de croître à 42 °C mais pas à
4 °C, ce qui différencie « Pseudomonas aeruginosa » de
« Pseudomonas fluorescens » qui croît à 4 °C et non à
42 °C. Elle liquéfie la gélatine et hydrolyse la caséine
mais pas l'amidon. Plus de 90 % des souches produisent le
pigment pyocyanine (bleu-vert).

Note B

Autres milieux

Il est possible d'utiliser d'autres milieux que la gélose

nutritive à condition qu'ils ne soient pas sélectifs et qu'ils
ne contiennent pas d'hydrate de carbone fermentescible.

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