LST ABIOCQ
Réalisé par :
• Kaouthar SADIK
• Salma HRAKET
• Chaimaa EL BAZINI
Introduction de la chromatographie : La chromatographie est un procédé de
séparation des constituants d'un mélange. Elle est devenue une méthode analytique de tout premier
plan pour identifier et quantifier les composés d'une phase liquide ou gazeuse homogène.
CCM :
• Principe : La chromatographie sur couche mince (CCM) est une technique de séparation et
d'analyse des mélanges homogènes. Elle utilise le principe de la migration par capillarité d'une
espèce sur un support, grâce à sa solubilité dans le solvant choisi.
• Manipulation :
1-preparation de la cuve :
La cuve à élution est un bêcher haut contenant un liquide appelé éluant (10% d’acétate
d’ethyle+90% d’hexane.
La cuve doit être fermée afin d’éviter l’évaporation des solvants.
2-préparation de la plaque :
On va prendre une petite plaque de chromatographie recouverte de gel de silice qu’on a coupé à
l’aide d’un ciseau.
À l’aide d’un crayon on va tracer un trait toute en bas qui représente la ligne de dépôt.
On va placer sur cette ligne des marques régulièrement espacées.
3-dépot des échantillons :
À l’aide d’un capillaire, on va déposer les échantillons sur leur marques respectives
A : Caféine
B : benzophénone
C : A+B
La tâche de dépôt ne doit pas dépasser 3mm.
4-Elution :
On va introduire la plaque verticalement dans la cuve :la ligne de dépôt doit être au-dessus de
niveau de solvant.
Le solvant contenu dans le cube monte le long de la plaque : c’est l’étape d’élution.
On v attendre que l’éluant arrive à environ1 cm du haut de la plaque, puis on retire la plaque et on
repère par un trait la hauteur maximale atteinte par l’éluant (c’est la ligne de front) puis on sèche la
plaque.
5-revelation de la chromatographie :
Pour les composés incolores il est nécessaire de faire apparaître les tâches : c’est l’étape de
révélation pour cela on va utiliser une lampe à ultraviolet. Les espèces absorbant les rayon UV feront
apparaître une tâche sombre.
• Conclusion : Une espèce chimique très soluble dans l'éluant migre beaucoup plus vite qu'une
substance peu soluble le Caféine a moins d'affinité c'est la raison pour laquelle son Rf est faible alors
que la benzophénone a une forte affinité c'est pourquoi il a migré plus vite. Puisque le mélange
contient la benzophénone qui est soluble dans l'éluant donc il va migrer Et donc son Rf est grand
Calcul de Rf :
•h=3,3cm
•h1=0,3cm
•h2=3cm
•h3=3,1cm
•Rf1=h1/h=0,09
•Rf2=h2/h=0,91
•Rf3=h3/h=0,94
• HPLC :
• Principe : Les composés à séparer (solutés) sont mis en solution dans un solvant. Ce mélange
est introduit dans la phase mobile liquide (éluant). Suivant la nature des molécules, elles
interagissent plus ou moins avec la phase stationnaire dans un tube appelé colonne
chromatographique.
La phase mobile poussée par une pompe sous haute pression, parcourt le système
chromatographique.
Le mélange à analyser est injecté puis transporté au travers du système chromatographique. Les
composés en solution se répartissent alors suivant leur affinité entre la phase mobile et la phase
stationnaire. En sortie de colonne grâce à un détecteur approprié les différents solutés sont
caractérisés par un pic. L'ensemble des pics enregistrés est appelé chromatogramme.
