BIOLABO

www.biolabo.fr AST TGO-ALT TGP

FABRICANT : Méthode colorimétrique
BIOLABO SA,
Les Hautes Rives Réactif pour le dosage quantitatif de l’activité Alanine amino transferase (ALT) [EC 2.6.1.2]
02160, Maizy, France et Aspartate amino transferase (AST) [EC 2.6.1.1]
dans le sérum ou le plasma humains
TGO REF 92025 R1 1 x 100 mL R3 1 x 100 mL R4 1 x 10 mL
TGP REF 92027 R2 1 x 100 mL R3 1 x 100 mL R4 1 x 10 mL
REF 92026 Solution NaOH 0,4 N R1 1 x 500 mL (Vente au détail)

SUPPORT TECHNIQUE ET COMMANDES

Tel : (33) 03 23 25 15 50 | CODE SFBC : DX
IVD USAGE IN VITRO
Fax : (33) 03 23 256 256

INTERET CLINIQUE (1) (2) PRECAUTIONS

L’ALT est très largement répandue dans les tissus hépatiques et rénaux, et Les réactifs BIOLABO sont destinés à du personnel qualifié, pour un
dans une moindre mesure dans le muscle squelettique et cardiaque. Bien usage in vitro.
que l’activité ALT et AST augmentent dans le sérum quelque soit l’atteinte • Vérifier l’intégrité des réactifs avant utilisation.
des cellules hépatiques, l’ALT est l’enzyme la plus spécifique. Une • Utiliser des équipements de protection (blouse, gants, lunettes). Ne
augmentation importante de l’activité ALT dans le sérum ou le plasma est pas pipeter avec la bouche.
rarement observée dans d’autres conditions qu’une atteinte hépatique • En cas de contact avec la peau ou les yeux, rincer abondamment à
(cirrhose, carcinome, hépatite, ictère par obstruction biliaire ou congestion l’eau et consulter un médecin.
hépatique). De plus l’élévation de l’activité ALT persiste plus longtemps que • Les réactifs contiennent de l’azide de sodium (concentration < 0,1%)
celle de l’AST. La mesure conjointe de l’activité ALT et AST présente un qui peut réagir avec les métaux tels que le cuivre ou le plomb des
intérêt pour différencier une hépatite d’autres lésions parenchymateuses. canalisations.
• La fiche de données de sécurité peut être obtenue sur demande.
L’AST est répandue dans tous les tissus du corps, mais la plus forte activité • Elimination des déchets : respecter la législation en vigueur.
est mesurée dans le foie, le cœur, les muscles squelettiques et dans les
Par mesure de sécurité, traiter tout spécimen comme potentiellement
érythrocytes. Dans la peau, les reins et le pancréas, on mesure une activité infectieux. Respecter la législation en vigueur.
plus faible. Bien que l’activité de l’AST et de l’ALT dans le sérum soient
augmentées dans tous les cas où l’intégrité des cellules hépatiques est PREPARATION DES REACTIFS
atteinte (hépatite virale, nécrose hépatique, cirrhose), une augmentation de
Les réactifs sont prêts à l'emploi.
l’activité AST dans le sérum ou le plasma apparaît après un infarctus du
myocarde dans 97% des cas. Une activité AST élevée (et
occasionnellement ALT) peut être rencontrée dans des cas de dystrophie STABILITE ET CONSERVATION
musculaire progressive, embolie pulmonaire, pancréatite aïgue… Stocker à 2-8°C, bien rebouché dans le flacon d’origine à l’abri de
la lumière.
PRINCIPE (4) • Stockés et utilisés dans les conditions préconisées, en l’absence de
contamination, les réactifs sont stables jusqu'à la date de péremption
Méthode colorimétrique développée par Tonhazy, White, et Umbreit et
indiquée sur l’étiquette.
adaptée au dosage dans le sérum par Reitman et Frankel.
• Solution Standard (flacon R4) : transvaser la quantité nécessaire,
Le schéma réactionnel est le suivant :
bien reboucher et stocker à 2-8°C.
ALT Ne pas utiliser les réactifs s’ils sont troubles ou si le blanc réactif
L-Alanine + 2-Oxoglutarate Pyruvate + L-Glutamate
mesuré à 505 nm > 0,400.
AST Ne pas utiliser les réactifs au-delà de la date de péremption indiquée
L-Aspartate + 2-Oxoglutarate Oxaloacétate + L-Glutamate
sur l’étiquette du coffret.
Le Pyruvate ou l'Oxaloacétate formés réagissent avec le 2, 4 DNPH
pour former leur dérivé 2, 4 Dinitrophénylhydrazone, qui donne en PRELEVEMENT ET PREPARATION DU SPECIMEN (2)
milieu alcalin une coloration lisible à 505 nm et proportionnelle à Sérum ou plasma hépariné, non hémolysés.
l’activité AST ou ALT dans le milieu réactionnel. L’activité ALT est stable dans le spécimen :
• 24 heures à température ambiante.
REACTIFS • 7 jours à 2-8°C.
L’activité AST est stable dans le spécimen :
Flacon R1 SUBSTRAT TGO • 24 heures à température ambiante.
Tampon Phosphate pH 7,5 85 mmol/L 2-oxoglutarate 2 mmol/L • 28 jours à 2-8°C.
L-aspartate 200 mmol/L Conservateur • au moins un an à –20°C.
L’ajout de pyridoxal phosphate (0.1 mM) permet d’augmenter la
Flacon R2 SUBSTRAT TGP stabilité de l’AST à température ambiante à 7 jours.
Tampon Phosphate pH 7,5 100 mmol/L 2-oxoglutarate 2 mmol/L
L-alanine 200 mmol/L Conservateur
INTERFERENCES (3)
Flacon R3 REACTIF COLORANT Hémolyse : Interférence positive en raison du contenu en AST et ALT
2,4-dinitrophenyl-hydrazine (DNPH) 1 mmol/L des érythrocytes.
HCl 1 mol/L Young D.S. a publié une liste des substances interférant avec le
Xi, R36/38 : Irritant pour les yeux et la peau dosages.
S37/39 : Porter des gants appropriés et un appareil de protection des yeux/visage

Flacon R4 SOLUTION STANDARD

Pyruvate de sodium 2 mmol/L Sodium merthiolate 0,1 %
Tampon phosphate pH 7,5 100 mmol/L Conservateur
Xn, R20/21/22 : Nocif par inhalation, contact avec la peau et en cas d’ingestion
S37/38 : Porter des gants appropriés. En cas de ventilation insuffisante, porter un
appareil respiratoire approprié.

Made in France Dernière version : www.biolabo.fr Version : 01/08/2011

 REACTIFS ET MATERIEL COMPLEMENTAIRES LIMITE DE LINEARITE
1. Equipement de base du laboratoire d’analyses médicales. Au-delà de 225 UI/L, diluer le spécimen (1 + 9) avec NaCl 9 g/L et
2. Sérums de contrôle normaux et pathologiques. refaire le dosage en multipliant par 10 le résultat final lu sur la courbe
3. REF 92026 : Solution NaOH 0,4 N (Xi, R36/38; S37/39, voir § REACTIFS) (facteur de dilution). La limite de linéarité dépend du rapport de dilution
spécimen/réactif.
CALIBRATION
La validité des résultats dépend de l’exactitude de la calibration de MODE OPERATOIRE (TECHNIQUE MANUELLE)
l’instrument, du juste décompte du temps, du respect du rapport Tableau 1 : Etablissement des Courbes Standards.
volume réactif / volume spécimen et du contrôle de la température. Porter les réactifs et échantillons à température ambiante.
Il est recommandé d’établir une nouvelle Courbe Standard à chaque Pipetter dans des tubes (mL) :
nouveau lot de réactif (§ CALCUL) ou de se référer à la Courbe Tube numéro 1 2 3 4 5 6
Standard fournie, spécifique du lot. La valeur du Standard a été
déterminée sous contrôle métrologique, par pesée sur balance de Eau 0.200 0.200 0.200 0.200 0.200 0.200
précision. déminéralisée
R1 ou R2 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5
CONTRÔLE DE QUALITE CODE SFBC : DX R4 (Standard) -- 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
• BIOLABO EXATROL-N (taux I) REF 95010. R3 (Colorant) 1 1 1 1 1 1
• BIOLABO EXATROL-P (taux II) REF 95011.
Mélanger. Laisser 20 minutes à température ambiante. Ajouter :
• Tout autre sérum de contrôle titré pour cette méthode.
• Programme externe de contrôle de la qualité. NaOH 0,4 N 10 10 10 10 10 10
Il est recommandé de contrôler dans les cas suivants : Mélanger. Attendre 5 minutes et lire les absorbances à 505 nm contre de
• Au moins un contrôle par série. l’eau.
• Au moins un contrôle par 24 heures.
• Changement de flacon de réactif. Unités TGO 0 30 70 135 225 350
• Après opérations de maintenance sur l’analyseur. Unités TGP 0 40 80 140 225 325
Lorsqu’une valeur de contrôle se trouve en dehors des limites de
Il n'est pas nécessaire de refaire ces courbes à chaque essai.
confiance, appliquer les actions suivantes :
1. Répéter l’opération en utilisant le même contrôle. Tableau 2 : ESSAIS.
2. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, préparer un
sérum de contrôle fraîchement reconstitué et répéter le test. Porter les réactifs et échantillons à température ambiante.
3. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, vérifier les
Pipetter dans des tubes : TGO TGP
paramètres de l’analyse : longueur d’onde, température, volume
spécimen/volume réactif, temps de mesure et facteur de Réactif R1 1 mL
calibration. Réactif R2 1 mL
4. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, utiliser un autre
flacon de réactif et répéter le test. Incuber 5 minutes à 37°C. Ajouter :
5. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, contacter le Sérum 200 µl 200 µl
service technique BIOLABO ou le revendeur local.
Mélanger et incuber à 37°C pendant : Exactement Exactement

INTERVALLES DE REFERENCE (2) 1 heure 30 minutes

ALT (UI/L) à 30°C à 37°C Réactif R3 1 mL 1 mL

Nouveau nés, enfants 9-32 13-45 Mélanger et laisser 20 minutes à température ambiante. Ajouter :

Hommes 7-28 10-40 NaOH 0.4 N 10 mL 10 mL

Femmes 5-25 7-35 Mélanger. Attendre 5 min. Lire l'absorbance à 505 nm contre de l’eau.

AST (UI/L) à 30°C à 37°C Remarque : les volumes peuvent être réduit de façon proportionnelle
Nouveau né 25-75 39-117 sans modifier les résultats.
Enfant 15-60 23-94
Adulte 8-20 13-31 CALCUL
Il est recommandé à chaque laboratoire de définir ses propres Se référer à la Courbe Standard fournie, spécifique du lot
intervalles de références pour la population concernée. ou
PERFORMANCES Dresser les Courbes Standards sur papier millimétré
(Absorbances) ou semi-log (% transmission) en procédant
Intra-série N = 20 Inter-série N = 20
comme décrit dans le tableau 1.
TGO Color. Taux normal Taux élevé Taux normal Taux élevé Abscisse : Unités en UI/L
Moyenne UI/L 37,7 167 38 144
S.D. UI/L 1,1 9,4 3,75 13,5 Ordonnée : Absorbances (ou pourcentages de transmission)
C.V. %
Reporter les absorbances des essais ou pourcentages de
2,9 5,6 9,9 9,3
transmission sur la Courbe Standard correspondante et
TGP Color. Taux normal Taux élevé Taux normal Taux élevé
calculer les activités TGO ou TGP en UI/L.
Moyenne UI/L 51,6 90,6 29,7 92
S.D. UI/L 2,2 2,5 1,71 8,2 REFERENCES
rd
C.V. % 4,2 2,8 5,8 8,9 (1) TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3 Ed. C.A. Burtis, E.R.
Ashwood, W.B. Saunders (1999) p. 652-657
Limite de détection : environ 7,2 UI/L (2) Clinical Guide to Laboratory Test, 4th Ed., N.W. TIETZ (2006) p. 64-67 et
Sensibilité pour 100 UI/L : environ 0,200 Abs à 505nm. p.154-157
(3) YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995) p.
Comparaison avec réactif de la concurrence : 3-6 à 3-17 et p.3-68 à 3-79.
92025 : TGO : y = 0,8984 x + 3,6 r = 0,9729 (4) A colorimetric method for the determination of serum GOT and GPT,
REITMAN S. and FRANKEL S., Amer. J. Clin. Path., 1957; 28,p.56-63
92027 : TGP : y = 1,0477 x - 2,3 r = 0,9737

IVD REF LOT →

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