PROCEDURE OPERATIONNELLE Unité de Bactériologie
STANDARD
N° de contrôle
ANALYSE DU LIQUIDE CEPHALO Version : 01
RACHIDIEN Date d’application :
AVRIL 2020
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Redige par :ADELA Valide par : Dr Ndoumba
SOURATOU Annick
Introduction :
L’examen du LCR est une urgence, car la méningite reste toujours une
maladie d’actualité. Le caractère foudroyant de cette maladie fait que le taux de
mortalité ne diminue pas.
1- Prélèvement
Le LCR est prélevé idéalement avant toute ATB, par ponction lombaire,
après une asepsie rigoureuse de la peau entre les vertèbres lombaires L3-L4 ou
L4-L5. On recueille au minimum 3 tubes stériles numérotés 1, 2, 3 avec un
volume total de 2 à 5 ml.
Tube 1 : pour analyse biochimique
Tube 2 : pour la cytologique
Tube 3 : la mise en culture. Le transport du LCR au laboratoire doit se
faire rapidement (moins de 30 min).
NB : Le minimum de renseignement ci-dessous doit être transmis au
laboratoire c’est-à-dire :
Traitement ATB en cours
L’âge
Le statut immunitaire
Le contexte clinique et épidémiologique
2- Etape pré-analytique
Lorsque l’on a un LCR rouge, il faut le centrifuger 5 min à 4000 tr/min pour
connaître l’origine de cette couleur rouge. Un LCR hémorragique, après
centrifugation reste sans changement de couleur rouge. Par contre, en cas de
lésion d’un vaisseau, après centrifugation, on obtient un culot rouge.
Les analyses biochimiques ne seront pratiquées qu’après centrifugation en
cas de LCR rouge.
NB : en cas de LCR hémorragique, la valeur de la protéinorrachie est
faussée par la présence de l’hémoglobine et de protéine plasmatique. Donc
l’analyse de la proteinorrachie est inutile.
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3- Etapes analytiques
3-1- Macroscopie
Examiner le tube pour l’aspect du LCR on distingue :
LCR limpide, eau de roche
LCR hémorragique, xanthochromique
LCR légèrement trouble, à eau de riz
LCR purulent
3-2- Ensemencement
Respecter les conditions rigoureuses d’asepsie (travail à proximité de la
flamme)
Utiliser les géloses préchauffées à 37°C
Les géloses utilisées sont : CHOC + PV ; GS ; SAB
Faire un ensemencement par inondation sur chaque gélose
Mettre à l’étuve à 37°C pendant 24 heures
3-3- Examen cytologique
a) Numération cellulaire (sur LCR non centrifugé)
Après agitation douce du LCR, on réalise la numération en cellule de
comptage tel que :
La cellule de kova par exemple :
Déposer 1 mm3 de LCR dans la cellule
Laisser sédimenter 5 min
Compter les éléments sur l’ensemble de la cellule à l’objectif 10 puis 40
Etablir ainsi le nombre d’hématies, de leucocytes présents par mm3
En cas de doute pour différentier les hématies des leucocytes, on peut
ajouter une goutte d’acide acétique 0,1 N sur un bord de la cellule de
kova. On obtient des hématies à bords irréguliers plus facile à
différencier des leucocytes.
NB : Un LCR normal contient
Moins de 5 leucocytes/mm3 chez l’adulte et l’enfant
10-30 mm3 chez le nouveau- né.
b) Recherche particulière
1- Recherche de cryptocoque
Cette recherche n’est justifiée que pour un patient immunodéprimé. Elle est
systématique dans le cas d’un malade VIH positif.
* Technique d’identification à l’encre de chine
Après avoir centrifugé le LCR dans un tube,
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Mettre 20 µl de culot et 20 µl d’encre de chine sur une lame puis
mélanger
Recouvrir la lame d’une lamelle
Lire à l’objectif 10 puis 40
*Mise en évidence d’Ag cryptocoque
Permet de rechercher les antigènes du cryptocoque à l’aide d’antisérum
connus.
2- Cultures de mycobactéries
A conserver au réfrigérateur à 4 à 8° C pour transmettre au laboratoire de
culture des mycobactéries.
3- Cultures des virus
Congeler le LCR à 80° C pour transmettre au laboratoire de virologie.
3-4- Analyse des premiers résultats
Les premiers résultats (macroscopie, cytologie, gram) doivent être communiqués
sans délai au médecin prescripteur.
Conduite à tenir en fonction du nombre de leucocytes/mm 3
1er cas : si N <20/ mm3
Communiquer aspect microscopique, le nombre de leucocytes/mm 3 et
attendre la culture pour les résultats ultérieurs.
2ème cas : si N >20/ mm3
Préparer 3 lames pour examens microscopiques
Fixer et sécher rapidement les lames
Colorer les 3 frottis : 1 gram, 1 May Grunwald Giemsa, 1 Ziehl Neelsen
3-5 Examen microscopique des colorations
MGG : en comptant au moins 100 leucocytes.
Gram : recherche éventuelle de bactéries sur l’ensemble du frottis.
Ziehl Neelsen : recherche du bacille acido-alcoolo-résistant (BAAR)
4- Identification et antibiogramme
L’identification sera fonction du germe retrouvé. Le choix des antibiotiques
tiendra compte du germe retrouvé, de l’âge du patient et du passage des
antibiotiques à travers la barrière méningée.
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Type LCR Eau de riz
Normal Purulent Hémorragique
Caractéristiques (légèrement trouble)
Aspect Clair, eau de roche Trouble Clair/trouble Trouble rosé
Comme dans le sang soit
<5
Leucocytes (/mm3) > 200 100 à 500 environ 1 leuco pour 700
10-30 chez le NN
hématies
Normal
Environ 0,01 g/l pour 1000
Protéine (g/L) 0,15 – 0,45 Augmenté Augmenté Ou
hématies/ mm3
Peu augmenté
½ a 2/3 de la
Glucose (g/L) Bas Bas Normal Augmenté
glycémie
Méningite Ponction traumatique
Méningite Méningite
Orientation Pas d’infection Bactérienne éclaircissement sur 3 tubes
Tuberculeuse virale
ou hémorragie méningé
Interprétation
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Schéma diagnostic PRELEVEMENTS
JOUR I
CULTURE SUR MILIEUX
CARACTERISATION
STANDARD : Recherche des antigènes
CARACTERISATION MICROSCOPIQUE
Choc + poly vitex (comptage cellulaire, Gram) solubles si nécessaire
MACROSCOPIQUE Gélose au sang, sabouraud
GRAM et Ziehl si
leucocytes >20/mm3 Coloration à l’encre de chine
JOUR II si immunodéprimé
Macroscopie des colonies
Identification
- Gram de contrôle ANTIBIOGRAMME
- Tests biochimiques
JOUR III
Suite d’identification du
germe
LECTURE ET INTERPRETATION
DE L’ANTIBIOGRAMME
RENDU DU RESULTAT
COMPLET
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ANALYSE DU LIQUIDE CEPHALO RACHIDIEN
REDACTEUR APPROBATEUR DESTINATAIRE
Dr NDOUMBA ANNICK
Adela Souratou
Médecin Biologiste
Personnel du laboratoire
Date :
Date : Avril 2020 Nombre d’exemplaire : 01
Visa :
Cette procédure a été lue et comprise par :
Noms Titre Signature Date
