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Introduction : La Chromatographie est une méthode
physique de séparation basée sur les différences d’affinité
des substances à analyser à l’égard des deux phases, l’une
stationnaire ou fixe, l’autre mobile.
La Chromatographie Sur Couche Mince (CCM) : est une
technique de chromatographie fréquemment utilisée pour
séparer des composants dans un but d’analyse ou de
purification.
Elle comprend une phase stationnaire « une couche mince
de matériel absorbant (habituellement du gel de silice, de
l’oxyde d’aluminium ou de la cellulose). Une phase mobile
(un solvant ou un mélange de solvants qui va entrainer les
composes à séparer le long de la phase stationnaire.
La CCM est effectuée surtout en vue d’une analyse de
mélange.
La Chromatographie Sur Colonne : est une chromatographie
l’adsorption consiste en la formation de liaisons entre les
molécules d’un composé et celles de la substance
absorbante.
La phase stationnaire : est un solide, le plus souvent Silice ou
alumine remplissant une colonne.
L’échantillon est déposé en haut de la colonne. La séparation
des espèces chimiques est obtenue par l’écoulement continu
d’une phase mobile, à travers la colonne.
L’objectif : Séparer et identifier des colorants alimentaires
(Jaune de tartrazine, Amaranth, bleu brillant et rouge congo)
et connaitre les constituants d’un mélange a partir les deux
techniques de chromatographie (sur CM et sur une Colonne).
Matériels
Pour CCM Pour C Sur Colonne
Plaque de CCM Colonne
Cuve de chromatographie Coton
Entonnoir Pipette pasteur
Pipette pasteur en verre Tube a essai
Pipteur de sécurité 50 ml Bécher de 50 ml
Produits
Propanol 100% Gel silice
Méthanol 100% Eau distillé
Amoniaque Grape violet colour
Jaune de tartrazine,
Amaranth, Bleu brillant,
Rouge congo
Principe de la Chromatographie :
La chromatographie permet de séparer les espèces
chimiques présentes dans un mélange homogène.
Elle est basée sur la différence de solubilité d’une
substance dans deux phases non miscibles :
La phase stationnaire et la phase mobile.
La phase stationnaire :
_ Dans la chromatographie sur papier, la phase fixe est
constituée par de la cellulose ou par une fine couche de silice
hydratée
La phase mobile ou éluant :
_C’est un solvant dans lequel les constituants du mélange
sont plus ou moins solubles.
_ L’éluant migre le long de la phase fixe par capillarité en
entrainant plus ou moine fortement les constituants d’un
mélange à analyser.
_ C’est le phénomène d’élution.
_ Remarque.
_ L’éluant ne doit pas réagir avec les constituants à
analyser.
_ Il est choisi en fonction de son attitude à dissoudre
différemment les constituants du mélange à analyser.
La Chromatographie Sur Colonne : est une chromatographie
l’adsorption consiste en la formation de liaisons entre les
molécules d’un composé et celles de la substance
absorbante.
Dans cette expérience :
La phase stationnaire : est un solide, Gel Silice avec sable
remplissant la colonne.
La phase mobile : est un liquide, Propanol + Méthanol +
Amoniaque
L’échantillon est déposé en haut de la colonne. La séparation
des espèces chimiques est obtenue par l’écoulement continu
d’une phase mobile, à travers la colonne.
La séparation est basée sur les différences de vitesses
d’entrainement, vers le bas de la colonne, des substances
contenant l’échantillon. Ces vitesses dépendent de la capacité
d’adsorption de l’espèce par la phase stationnaire, et de la
solubilité de cette espèce dans l’éluant. La séparation est
basée sur les différences de vitesses d’entrainement, vers le
bas de la colonne, des substances contenant l’échantillon. Ces
vitesses dépendent de la capacité d’adsorption de l’espèce
par la phase stationnaire, et de la solubilité de cette espèce
dans l’éluant.
Chromatographie Sur Couche Mince : dans cette
expérience on a trois étapes, dans chaque étapes en utilisons
une plaque et une phase mobile différente sur les deux
autres étapes, et utilisons quatre colorants pour étudier les
divers changements dans chaque étapes, et nous calculons le
rapport frontal de chaque étape à partir de cette relation :
La Phase Mobile : Propanol 100%, Méthanol 100%,
Amoniaque.
La Phase Stationnaire : Couche Mince (Plaque)
Le Rapport Frontale :
Etape 01 :
Les couleurs Jaune Bleu Rouge Vert
Rf 0.90 0.93 0.98 0.94
Etape 02 :
Les couleurs Jaune Bleu Rouge Vert (tache
1/tache 2)
Rf 0.26 0.72 0.56 (0.26/0.70)
Etape 03 :
Les couleurs Jaune Bleu Rouge Vert (tache 1
et tache 2)
Rf 0.62 0.72 0.81 (0.62 et 0.72)
_La séparation des composants, entrainés par la phase
mobile résulte de leur différence de solubilité entre les deux
phases.
_Les composés dissous déposés se fixent sur la phase fixe
pour s’en arracher et monter avec la phase mobile.
Résultats d’expériences :
Etape 01 :
Etape 02 :
Etape 03 :
Remarque : Sur la base des résultats des expériences,
nous notons que l’expérience qui a donné les meilleurs
résultats pour la Séparation est l’expérience de l’étape
02.
Les Principales causes de la déformation des taches en
CCM :
Lorsque plaque sur laquelle on a déposé l’échantillon
est placée dans la cuve, l’éluant monte à travers la
phase stationnaire, essentiellement par capillarité. En
outre, chaque composant de l’échantillon se déplace à
sa propre vitesse derrière le front du solvant. Cette
vitesse dépend d’une part, des forces électrostatiques
retenant le composant sur la plaque stationnaire ,et
d’autre part, de sa solubilité dans la phase mobile. Les
composés se déplacent donc alternativement de la
phase stationnaire à la phase mobile, l’action de
rétention de la phase stationnaire étant
principalement contrôlée par des phénomènes
d’adsorptions.
Généralement, en CCM les substances de faible
polarité migrent plus rapidement que les composants
polaires.
_La nature de phase mobile et stationnaire.
_La concentration de phase mobile.
_La polarité de phase stationnaire.
Conclusion :
_ La chromatographie permet la séparation des
constituants d’un mélange.
_ Pour un éluant et un support donnés, une
espèce chimique migre de la meme façon qu’elle
soit pure ou dans un mélange.
_ Une espèce chimique très soluble dans l’éluant
migre beaucoup plus vite qu’une substance peu
soluble.
_Les espèce chimique étant entrainées à des
vitesses différentes prouvent être séparées.
_ La chromatographie est aussi une technique
d’analyse.
_ Elle permet d’identifier les espèces chimiques
présentes dans un mélange.
_ Des espèces chimiques identiques migrent à des
hauteurs identiques sur une meme plaque de
chromatographie.
