HBA1c
Introduction :
L’hémoglobine A1c, fraction de l’hémoglobine totale identifiée après séparation par chromatographie
d’échanges de cations, est une hémoglobine résultant d’un processus de fixation non enzymatique du glucose
sur l’aminoacide valine (extrémité N-terminale) de l’une des 2 (parfois des deux) chaînes polypeptidiques ß de
la molécule.
Sa fraction prépondérante, l’hémoglobine A1c (HbA1c), représente chez le sujet sain de 4 % à 6 % de
l’hémoglobine totale environ. La formation de l’hémoglobine glyquée est augmentée chez le patient diabétique
mal équilibré. Le taux d’HbA1c représente un index rétrospectif cumulatif de l’équilibre glycémique des deux
mois qui précèdent le prélèvement, et est corrélé à l’apparition des complications dégénératives à long terme
de la maladie.
Les indications de dosage :
L’HbA1c est le paramètre biologique majeur du suivi de l’équilibre glycémique des patients
diabétiques.
Les recommandations pour la pratique clinique de l’ANAES précisent que : « Le suivi du contrôle
glycémique du patient diabétique de type 2 doit reposer sur le dosage de l’HbA1c tous les 3 ou 4 mois.
Pour un patient donné, le dosage de l’HbA1c doit être pratiqué dans le même laboratoire, pour
permettre de comparer les résultats successifs.
Les changements de thérapeutique ou les diabètes instables peuvent transitoirement motiver des
prescriptions de glycémie dans l’intervalle.
Étape pré-analytique :
Le jeûne n’a pas d’influence.
Le prélèvement est le plus souvent réalisé dans une veine du pli du coude, Il est également possible
d’utiliser un prélèvement capillaire (prélevé en micro capillaire contenant de l’EDTA ou sur papier
filtre).
Le prélèvement doit être effectué sur en tube contenant de l’EDTA, à défaut, d’autres anticoagulants
(sels d’héparine, mélange ACD) peuvent être utilisés, dans des conditions variables selon les
méthodes.
Le dosage doit être réalisé le plus rapidement possible, de façon à éviter la dégradation de
l’hémoglobine ou la poursuite artéfactuelle de la réaction de glycation dans les tubes.
Les formes de dégradation provoquent l’apparition d’épaulements sur les chromatogrammes,
correspondant à des fractions vieillies de l’hémoglobine.
Conservation du sang recueilli sur EDTA ou ACD 8 jours à +4°C (cette conservation ne concerne que
l’HbA1c qui ne varie pas; l’HbA1a+b augmente en fonction du temps et de la température).
Sur héparine, le délai ne doit pas excéder 3 jours à +4°C avant l’analyse. Si le délai doit être supérieur il
faut prétraiter le prélèvement qui est alors stable plusieurs mois à –80°C.
Le dosage de l’HbA1c nécessite une hémolyse préalable des globules rouges. L’hémolyse est réalisée
automatiquement dans la plupart des méthodes actuelles.
Le réactif hémolysant assure le cas échéant l’élimination des formes instables d’HbA1c (HbA1c labile
ou Hb pré-A1c), non corrélées à l’équilibre glycémique.
Différents procédés sont utilisés (réactifs contenant du semicarbazide- aniline ou de l’acide borique
par exemple).
Etape analytique :
Le dosage de l’HbA1c a fait l’objet d’une standardisation internationale. La méthode de référence,
validée par l’International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (IFCC), associe
une chromatographie liquide haute performance (CLHP) en phase inverse couplée à une
électrophorèse capillaire ou à une spectrométrie de masse.
Le paramètre mesuré est l’hexapeptide N-terminal glyqué de la chaîne b de l’hémoglobine,
caractéristique de l’HbA1c, libéré après hydrolyse enzymatique.
Recommandations en vigueur de la Société française de biologie clinique (SFBC) et de l’Association de
langue française pour l’étude du diabète et des maladies métaboliques (ALFEDIAM) pour le dosage de
l’HbA1c :
Tous les résultats d’hémoglobine glyquée doivent être rendus sous forme de taux d’HbA1c
exprimé en pourcentage de l’hémoglobine totale, à l’exclusion de tout autre mode d’expression.
Les méthodes utilisées doivent soit doser directement l’HbA1c, soit pouvoir être corrélées à une
méthode de référence dosant l’HbA1c afin de corriger les valeurs brutes.
Les techniques utilisées dans les laboratoires doivent être reliées à une méthode de référence
recommandée par les sociétés scientifiques internationales : NGSP/DCCT ou IFCC.
Les variations physiologiques :
Chez les sujets normo glycémiques, le taux d’HbA1c varie entre 4 % et 6 % de l’hémoglobine totale,
lorsqu’il est exprimé
La valeur de l’hémoglobine glyquée est indépendante des variations journalières de la glycémie et
n’est pas affectée par l’exercice ni par l’ingestion récente de sucre.
La variabilité intra-individuelle des taux d’HbA1c est faible, de l’ordre de 3 % chez le sujet sain. Il
semble exister une variation saisonnière, avec des pics au printemps et en automne.
Des résultats discordants ont été rapportés chez des patients diabétiques.
L’HbA1c ne varie pas en fonction du sexe. Les valeurs augmentent modérément avec l’âge (majoration
d’environ 0,6 % de l’Hb totale entre 20 et 70 ans).
Le jeûne et l’exercice physique n’ont pas d’effet. Le régime alimentaire et l’hygiène de vie peuvent
cependant modifier légèrement les valeurs.
L’alcool, ou les médicaments comme l’aspirine peuvent se fixer sur l’hémoglobine, mais les
interférences potentielles restent très faibles in vivo.
Les variations pathologiques :
VARIATIONS DE L’HBA1C AU COURS DU DIABÈTE SUCRÉ :
L’HbA1c est considérée comme le paramètre de référence pour l’évaluation de l’équilibre glycémique
au cours du diabète sucré.
L’objectif de la prise en charge est de ramener l’HbA1c à la valeur la plus proche possible de la
normale. En France, la valeur de 6,5 % a été fixée comme objectif thérapeutique pour les diabètes de
type 1 et 2. Une adaptation des objectifs doit être réalisée pour chaque patient (risque
d’hypoglycémie, âge, état général, possibilité d’éducation thérapeutique). Un taux supérieur à 8 %
indique un diabète mal équilibré.
Les différentes études montrent que toute diminution de l’HbA1c s’accompagne d’une réduction de la
morbidité, quel que soit le taux initial. Il ne paraît donc pas exister de valeur seuil. Certaines études
récentes incitent cependant à la prudence, une trop forte diminution des valeurs de glycémie, reflétée
par une baisse de l’HbA1c, paraissant augmenter la mortalité dans le diabète de type 2.
VARIATIONS AU COURS D’AUTRES AFFECTIONS :
Hémolyse et troubles du métabolisme de l’hémoglobine
La durée de vie normale des globules rouges est de l’ordre de 120 jours. Le taux d’HbA 1c est plus élevé dans les
hématies les plus vieilles. Toute modification de la durée de vie des hématies modifie le taux d’HbA 1c et rend
son utilisation incertaine. C’est le cas des hémolyses intravasculaires.
Une situation comparable est notée en cas d’anémie, ou après des hémorragies importantes, un traitement
stimulant l’érythropoïèse, ou des transfusions récentes : l’âge moyen de la population érythrocytaire est
modifié, le taux d’HbA1c est affecté.
Hémoglobinopathies
Une anomalie de l’hémoglobine entraîne deux conséquences :
• des anomalies métaboliques : hémolyse, stimulation inappropriée de la synthèse, différence de cinétique de
glycation, formation de dérivés glyqués inhabituels ;
• des difficultés méthodologiques : la présence de variants peut provoquer des interférences, surtout avec les
techniques utilisant la séparation selon la charge.
En pratique, l’interprétation des dosages est très difficile. Les seuils thérapeutiques habituels sont souvent
inutilisables.
L’utilisation du dosage des fructosamines constitue une alternative intéressante.
Insuffisance rénale
Au cours de l’insuffisance rénale, les dérivés de l’urée (cyanate) se fixent sur l’hémoglobine, génèrent de
l’hémoglobine carbamylée, qui peut interférer avec diverses techniques de dosage de l’HbA 1c, notamment
celles qui utilisent la séparation selon la charge.
D’autres composés, comme les produits avancés de glycation, qui s’accumulent dans le sang au cours de
l’insuffisance rénale, peuvent se fixer à l’hémoglobine. Leur interférence est encore mal connue.
Il se surajoute souvent une anémie chronique. L’interprétation des résultats d’HbA 1c doit être très prudente. Le
dosage des fructosamines peut être utilement associé.
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Gillery P. Hémoglobine glyquée. EMC (Elsevier Masson SAS, Paris), Biologie clinique, 90-10-0510, 2009.
