TRAVAUX PRATIQUES 4ÈME ANNÉE PHARMACIE
Module hémobiologie
TP:
Test direct et indirect à
l’antiglobuline
Année universitaire 2019/2020
INTRODUCTION
* Les tests de Coombs direct et indirect sont les tests de
base de l’immuno-hématologie. Ils servent à mètre en
évidence la présence:
- d’anticorps anti-érythrocytaires ou de fractions du
complément fixés à la surface des hématies (Coombs direct),
- d’anticorps anti-érythrocytaires libres dans le plasma/sérum
(Coombs indirect).
- d’antigènes à la surface des hématies (Coombs indirect) (D
faible).
- La compatibilisation des unité de CGR à transfusées avec le
plasma du receveurs. (coombs indirect)
Test de coombs direct
1- Principe:
• c’est la mise en évidence de la sensibilisation des
hématies in vivo par des Ac (IgG) ou des fractions du
complément (C3d).
• Ceci en utilisant des anti-globulines humaines (AGH)
polyvalentes (anti-IgG + anti-C3d).
• Si réaction positive, recommencer le test avec les
réactifs monospécifiques (anti-IgG) et (anti-C3d).
• 2-Technique:
- Lavages des hématies à testées déjà sensibilisées
en eau physiologique (plusieurs lavages).
- GR du patient sont mis en suspension saline à 05 %.
- Adjonction d’antiglobuline humaine polyvalente (02
gouttes suspension hématies 05% + 02 gouttes AGH).
- Réaliser une centrifugation à faible vitesse (1000
tr/min) pendant 01 min.
Présence d’agglutination Coombs direct positif
Absence d’agglutination Coombs direct négatif
• Hématies sensibilisées AGH Agglutination
• La réalisation des témoins négatifs et positifs est
nécessaire pour la validation du test.
• Si test positif refaire avec des antiglobulines
humaines monospécifiques. (anti-IgG) et (anti-C3d).
• Si positif avec anti-IgG donc l’Ac fixé à la surface des
hématies est un IgG (hémolyse intra-tissulaire par
fagocytose au niveau du foie et la rate).
• Si positif avec anti-C3d donc l’Ac fixé à la surface des
hématies est un IgM qui c’est élué après fixation du
complément (hémolyse intravasculaire par le CAM)
• Une positivité mixte est possible (les deux
mécanisme à la fois).
3- Indication:
• Le test de Coombs direct est utilisé pour confirmer
l’origine immunologique d’une hémolyse, par
exemple dans les situations suivantes :
- Bilan d’une incompatibilité foeto-maternelle (sang de
foetus ou de nouveau-né, éventuellement sang de
cordon).
- Anémie hémolytique.
- Réaction transfusionnelle (hémolyse post-
transfusionelle).
- AHAI.
Test de coombs indirect
• 1- Principe c’est la mise en évidence de la
sensibilisation des hématies in vitro par des
Ac, en utilisant des anti-globulines humaines
(AGH) polyvalentes.
• 2-Technique:
- Lavages des hématies Par l’eau physiologique (plusieurs
lavages).
- Ces hématies peuvent être selon les cas:
* hématies test de groupe o utilisées pour la recherche
d’un Ac irrégulier dans la sérum du patient.
* hématies à testés pour la recherche d’un Ag faible (D
faible).
*hématies des unités à transfusées et nécessitant une
compatibilisation préalable avec le sérum du malade.
• Réalisation d’une suspension à 05%.
• Incubation à 37 °C avec selon les cas (sérum du malade
ou avec l’anti-D pour la recherche du D faible permettant
la fixation de l’Ac à son Ag spécifique) pendant 45 min (15
min en solution liss).
• Lavage des hématies.
• Ajout de l’AGH polyvalente.
• Centrifugation à faible vitesse.
Présence d’agglutination Coombs indirect positif
Absence d’agglutination Coombs indirect négatif
3- Indication:
• Le test de Coombs indirect se fait, entre autres, dans
les situations suivantes :
- Test de compatibilité majeur : plasma/sérum du
receveur et hématies du donneur.
- Recherche d’anticorps irréguliers : plasma/sérum du
patient et hématies d’un panel (antigènes connus). –
- Recherche d’un phénotype érythrocytaire :
érythrocytes du patient et antisérum connu
(anticorps connus).
