ECOLE NATIONALE POLYTECHNIQUE

D’ALGER

GENIE DE
L’ENVIRONNEMENT

TRAVAUX PRATIQUES OPU BIOLOGIQUE

TP N°1 :

Pollution azotée : Nitrates

REALISE PAR: FETTAKA FAYCAL

Année Universitaire : 2016/17

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 Introduction :

Le nitrate (NO3-) est un ion produit au cours du cycle de l’azote, particulièrement soluble dans
l’eau et responsable d’une pollution des eaux. La principale source d’azote réside dans l’atmosphère
sous forme de diazote (N2) qui représente un peu moins de 80% de la composition de l’air. Des ions
nitrates sont formés au terme d’un processus complexe de transformation de l’azote par des bactéries.
Ils sont ensuite assimilés par les plantes. La consommation de légumes et de  végétaux constitue ainsi,
pour les animaux, dont l’homme, la base de l’alimentation en azote.
Le nitrate se prête à de nombreuses utilisations industrielles sous forme de nitrate de potassium, de
sodium ou d’ammoniac notamment.
Le nitrate est dangereux par sa capacité à se transformer en nitrite aux effets toxiques reconnus.

BUT du TP :

Le but de ce TP est d’établir la courbe d’étalonnage des ions nitratesNO 3-.

Etude Théorique :

L’azote peut se trouver dans les eaux résiduaires sous quatre formes:

 L’azote organique (R-NH2): pouvant avoir comme origine :

- La décomposition des déchets organiques (protéines, polypeptides, acides
aminés etc...)
- Les rejets organiques d’origine humaine ou animale (urée), (excréments,
lisiers, ...)
- Les rejets industriels et notamment ceux dc l’industrie des engrais azotés.
- Les adjuvants de certains détergents.
 L’azote ammoniacal : selon les conditions du pH, il peut se trouver dans les eaux sous forme
ionisée (NH4+) peu néfaste vis-à-vis de la faune aquatique ou sous forme hydratée (NH40H)
qui, en revanche, peut entrainer de graves conséquences pour les ’ milieux récepteurs du fait
de sa toxicité. L’ammoniaque provoque, même à de faibles concentrations, des lésions
branchiales chez les poissons ce qui limite les échanges entre le sang de ces demies et le
milieu extérieur.

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  L’azote des nitrites ou azote nitreux NO 2- : Les nitrites sont toxiques particulièrement pour
les nourrissons et les jeunes enfants car ils peuvent réduire l'hémoglobine en méthémoglobine
la rendant ainsi impropre au transport de l'oxygène cc qui provoque la maladie bleue du
nourrisson. En effet les nourrissons ne possèdent pas l’enzyme qui réduit la méthémoglobine
en hémoglobine. Les nitrosamines, issues de la combinaison des nitrites et des protéines dans
le tube digestif, sont soupçonnées d’être cancérigènes.

 Les nitrates (NO3-) : Les nitrates sont une des principales sources d'azote pour les végétaux.
La recherche de rendement maximum dans l'agriculture a poussé é 1'utilisation excessive
d'engrais azotés chimiques. Cependant les nitrates étant trés solubles, ils sont entrainés dans
les eaux de ruissellement et polluent les cours d'eau, et les nappes phréatiques,
particulièrement dans les zones d'agriculture intensive. Les nitrates ne sont pas toxiques
directement mais ils favorisent la prolifération des algues ou phénomène d’eutrophisation
ayant pour conséquence une baisse de la teneur en dioxygène de l'eau et donc une action
défavorable ou nuisible pour la vie aquatique.

 La nitrification:

: La nitrification est le processus biologique par lequel les nitrates sont produits dans l'environnement.

Celle-ci se fait en deux étapes distinctes, chacune sous l'action de micro-organismes différents. Étape
1 : l'ammoniac est oxydé en nitrite, c'est la nitritation, appelée également nitrosation. Étape 2 : le
nitrite est oxydé en nitrate, c'est la nitratation.
Dans les écosystèmes qui perdent des nitrates vers les nappes phréatiques, la nitrification est une
source d'acidité pour le sol. Première phase de l'élimination biologique de l'azote au sein du cycle de
l'azote, elle est notamment réalisée dans les stations d'épuration avec des bassins d'aération par des
séquences d'aération et de repos de la liqueur mixte.

Les réactions sont les suivantes. L’ammoniac est oxydé en nitrite par nirosomonas :

2NH4+ + 3O2 2 NO2- + 2H2O + 4H+ + bactéries.

D’autres organismes oxydent également l’ammoniac en nitrite, Nitrosoccus, nitrosospima, nitrosocytis

et nitrosoglaea ; ceux –ci jouent probablement un rôle secondaire dans les procédés de traitement
biologique.

Les nitrites sont ensuite oxydés en nitrates par nitrobacter :

2NO2- +O2 2NO3- + bactéries.

Les germes nitrifiants sont des autotrophes et utilisent le CO 2 et le HCO3- comme source de carbone.
les germes nitrifiants peuvent survivre à des périodes d’anaérobiose ne dépassant pas quatre heures.

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  Cycle d’azote :

 Utilisation du nitrate :

Il est principalement utilisé sous trois formes :

1. Le nitrate de potassium (autrefois appelé salpêtre). Il est principalement utilisé pour les engrais

(apport des éléments potassium et azote), les moteurs de fusées et les feux d'artifice. Il était utilisé
dans la fabrication de poudre noire.
2. Le nitrate de sodium, autrefois appelé salpêtre du Chili pour le distinguer du nitrate de potassium.
Il est utilisé dans la production d'engrais, pour la pyrotechnie, les bombes à fumée, le verre et les
émaux, etc.
3. Le nitrate d'ammonium. Il est essentiellement utilisé comme engrais. Mélangé à un réducteur
comme le fioul, il constitue un explosif7. Ce composé est stable ; il doit être amorcé ou être
mélangé à un autre corps pour exploser. C'est ce qui s'est passé lors de l'accident
d'AZF à Toulouse.

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  Propriétés Chimiques :

L'ion nitrate est un oxydant assez fort, surtout en milieu acide ; c'est la forme de l'azote ayant
le nombre d'oxydation le plus élevé (V). Il oxyde par exemple des métaux comme le cuivre et même
l'argent qui ne sont pas attaqués par les acides dits « non-oxydants », par exemple l'acide
chlorhydrique.
Le couple redox mis en jeu est souvent NO3−/NO, plus rarement le couple NO3−/NO2−.
L'ion nitrate est également impliqué dans la nitration des composés organiques. En milieu acide
nitrique fumant (acide très concentré), l'ion nitrate se déshydrate en ion NO 2+capable de réagir avec
les noyaux aromatiques. La substitution électrophile aromatique qui en résulte produit des produits qui
peuvent être explosifs comme le trinitrotoluène.
Avec les alcools, il réagit pour donner des esters nitriques. C'est le cas avec le glycérol, ce qui conduit
à la trinitroglycérine, Un explosif puissant très utilisé, en particulier pour préparer la dynamite.

 Propriétés Biologiques :

L'azote est un élément vital pour la plupart des organismes (comme le potassium et le magnésium),
mais les plantes ne savent pas le capter directement dans l'air. Sous forme de nitrate, il est très soluble
dans l'eau et alors « bio-disponible » pour les racines.
Les nitrates sont en outre des sels qui en tant que tels facilitent ou « forcent » l'entrée d'eau dans les
racines et dans la plante (rééquilibrage osmotique).

 Le Nitrate dans l’atmosphère :

Le cycle de l'azote est en grande partie atmosphérique. Des nitrates se forment dans la stratosphère et
la troposphère à partir du NO2 et d'ozone. Ils peuvent ensuite se combiner avec du NO 2 pour produire
du NO5 ou encore interagir avec les brouillards... selon des processus encore mal compris (il semble
exister un puits de Nitrates dans l'atmosphère, c'est-à-dire une réaction qui fait disparaître les nitrates
de l'air).
Les NOx participent d'ailleurs à la pollution photochimique, l'ion nitrate dans l'air peut se combiner à
des composés organiques11 et les nitrates exposés aux UV solaires sont photosensibles, ce qui explique
une variation jour/nuit du taux de nitrates dans l'environnement et une chimie des nitrates différente la
nuit que le jour, notamment au-dessus de la mer

 L’effet du Nitrate :

Effets sur l’environnement ?

La présence de nitrate et de phosphore dans les eaux est à l’origine du phénomène dit
d’eutrophisation : des algues et des microorganismes se développent et consomment une grande part
de l’oxygène qui se trouve dans l’eau.
En eau douce, le phénomène d’eutrophisation provient plutôt d’une forte teneur en phosphore alors
qu’il tient plutôt à la présence de nitrates en eau de mer, où la formation d’organismes toxiques -
bactéries, phytoplanctons et algues vertes responsables, en Bretagne notamment, des fameuses
« marées vertes »- peut avoir des effets nocifs et asphyxiants pour les poissons et les crustacés.
En particulier, la disparition d’une espèce de moules perlières en France serait due aux nitrates.

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Quels effets sur la santé ?

La toxicité des nitrates est discutée. Elle résiderait dans la production de nitrites qu’ils
favorisent. Environ 20% des nitrates sont transformés par la flore buccale en nitrites qui sont
alors facilement absorbés par l’intestin et l’estomac. Plus le PH de l’estomac est élevé, moins
l’acidité y est forte, comme c’est le cas chez le nourrisson par exemple, plus la prolifération
de bactéries réductrices des nitrates en nitrites est favorisée.
Les nitrites provoqueraient des cas de méthémoglobinémie : résultant d’une oxydation de
l’hémoglobine, la formation de méthémoglobine en grande quantité réduit l’oxygénation des
cellules, peut se manifester par une cyanose, coloration bleutée de la peau et des muqueuses,
et provoquer l’asphyxie et la mort. Les nourrissons de moins de trois mois sont les plus
exposés à ce risque en raison de la faible acidité de leurs estomacs, de leur tendance à
développer des infections gastro-intestinales et de leur faible capacité à régénérer
l’hémoglobine à partir de la méthémoglobine. Les cas mortels demeurent cependant très rares.
Du fait des interactions entre le nitrite et les amides et amines susceptibles de former des
composés azotés cancérogènes, des soupçons de cancérogénicité pèsent sur le nitrate. Il n’y a
toutefois aucune certitude à ce sujet à ce jour. Certains avancent par ailleurs les effets
bénéfiques des nitrates, notamment contre les infections, les carcinomes et les maladies
cardio-vasculaires.

Etude expérimentale :

 Appareillage  Reactifs :
- Dissoudre 12 g de phénol dans 144 ml
- Verrerie courante de laboratoire d'acide sulfurique, H2SO4 pour (d =1.84)
- Spectrophotomètre UV Visible. et mettre le mélange au bain marie
- Balance analytique. pendant 2 heures pour que la réaction soit
- Cellule de dosage. totale.
- Ammoniaque (NH4OH).
- Nitrate de potassium KNO3 en poudre.

 Mode opératoire :

les solutions étalons et les échantillons sont traités de la même façon.

 A partir de la solution étalon de 1g/l en NO 3- on prépare une série de solutions à la

concentration suivante : 20, 40, 60, 80 et 90 mg/l de NO3-.
Par exemple pour préparer celle de 20 mg/l on met 2 ml de solution étalon de nitrates dans une
fiole de 100 ml et la remplir jusqu’au trait de jauge par de l’eau distillé.

Les dilutions se font comme suit :

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Concentrations de NO3- 20 40 60 80 90
mg/L
Volume injecté dans la 2 4 6 8 9
fiole de 100 mL

o On prélève à l'aide d'une pipette 5 ml d'échantillon et l'introduire dans un bécher.

o Evaporer à sec.
o On laisse refroidir et ajouter 2 ml de réactif sulfophénique.
o On attendre 10 min, ajoutant ensuite 15 l d'eau distillée et 10 à 15 ml d'ammoniaque
qui dévoile la couleur jaune.
o On complète à 50 ml avec de l'eau distillée.
o On effectuer un essai à blanc en remplaçant l'échantillon à analyser par de l'eau
distillée.
o On effectue la lecteur sur le spectrophotomètre à la longueur d'onde λ=440 nm.

 Préparation de la solution KNO3 de 1g/L :

Pour préparer la solution mère de KNO 3 il faut tenir compte les masses molaires :

M (K) = 39 g/mol ; M(N) = 14 g/mol ; M(O) = 16 g/mol

On a: M (NO3-) = 62 g 101 g de KNO 3

Pour 1g m (g)

Donc : m = (101×1)/62

m = 1,63 g

On dissout 1,63g de KNO3 dans une fiole de 1L et on complète avec l’eau distillé pour obtenir une
solution à 1 g/l de NO3-.

Tableau de résultats:

Concentration 20 40 60 80 90
s de NO3- mg/L
DO 0,07 0,152 0,229 0,351 0,358

On trace la courbe d’étalonnage de nitrate : la densité optique en fonction de la concentration de NO 3- ;

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 DO = f(C)
0.4
0.35
0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Concentration de NO3- mg/L

On remarque que la courbe d’étalonnage est une droite qui passe par l’origine. Donc suivant la loi de Beer
Lambert, on peut l’écrire la DO en fonction de la concentration : DO= K×C

Les points expérimentaux sont alignés. L'absorbance et la concentration sont proportionnes. La loi de Beer-
Lambert est vérifiée.

Conclusion :

Les valeurs des DO pour les différentes concentrations n’a pas été précises par raison d’erreur lors de
la manipulation.

D’après cette méthode d’étalonnage on peut trouver des concentrations des échantillons inconnues
ou d’une manière générale la quantification des substances inconnue présente dans une solution.

Pour déterminer les concentrations de sortie et l’entrée :

D’après l’équation de beer lambert on tire la concentration :

DO
[NO3-] = (mg/L)
a

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Ressources :

http://sante.lefigaro.fr/mieux-etre/environnement/nitrates/effets-sur-lenvironnement

http://sante.lefigaro.fr/mieux-etre/environnement/nitrates/quels-effets-sur-sante

Wikipidia.com

http://www2.ggl.ulaval.ca/personnel/bourque/s3/cycle.azote.html

https://fr.wikipedia.org/wiki/Nitrification

Cours : Cylce Azote ( Microbiologie 2 )